基于高效液相色譜法的荔枝草中鼠尾草酚含量測定

宋 芹， 梁 立， 劉 嵬， 卿根玉， 尹海兵， 茍小軍

(成都大學 藥食同源植物資源開發(fā)四川省高校重點實驗室， 四川 成都 610106)

基于高效液相色譜法的荔枝草中鼠尾草酚含量測定

宋 芹， 梁 立， 劉 嵬， 卿根玉， 尹海兵， 茍小軍

(成都大學 藥食同源植物資源開發(fā)四川省高校重點實驗室， 四川 成都 610106)

利用高效液相色譜法建立測定荔枝草中鼠尾草酚含量的方法，色譜柱為Inertsil ODS-SP C18色譜柱，以乙腈—0.2%磷酸(50∶50)為流動相，25 ℃柱溫，檢測波長為285 nm.實驗顯示，鼠尾草酚在1.248～2.912 μg范圍內(nèi)線性關系良好(r=0.9997)，加樣回收率符合要求.結果表明，該方法簡便、準確，可作為荔枝草中鼠尾草酚含量測定的一種有效方法.

荔枝草；鼠尾草酚；RP-HPLC

0 引 言

荔枝草，又名蛤蟆草、雪見草，為唇形科鼠尾草屬植物，其性涼、味苦、辛，具有清熱解毒、涼血止血、利尿等功效[1].藥理研究表明，荔枝草具有止咳平喘、抗菌、抗病毒、抗腫瘤、抗氧化等作用[2-4].在民間，有將荔枝草作為藥食同源植物當菜食用的習慣，也有將荔枝草開發(fā)成為保健茶的報道[5-6].目前，在中藥行業(yè)中對荔枝草的質量控制多針對其黃酮類成分的含量進行測定，對其中具有抗菌、抗氧化、抗腫瘤等活性的二萜酚類成分的質量控制方法還未見報道.對此，本研究擬建立一種采用高效液相色譜法測定荔枝草中二萜酚類成分—鼠尾草酚含量的方法，為該植物的質量控制提供依據(jù)；同時，通過比較荔枝草中葉、莖、花萼等植物器官中鼠尾草酚的含量差異，為該植物的合理開發(fā)利用提供參考.

1 材料與儀器

1.1 材 料

實驗所用材料包括：鼠尾草酚對照品為實驗室自制，純度高于99.9%；荔枝草購于成都中藥材市場，經(jīng)鑒定為唇形科植物荔枝草的地上干燥部分.

1.2 儀 器

實驗所用儀器包括：SUMMIT高效液相色譜儀(美國戴安公司)；Sartorius BP211D型十萬分之一電子天平(德國賽多利斯公司)；Simplicity SIMS00000超純水器(美國密理博公司).

2 方法與結果

2.1 色譜條件

實驗的色譜條件為：色譜柱，Inertsil ODS-SP C18色譜柱(4.6 mm×250 mm,5 μm)；流動相，乙腈—0.2%磷酸水溶液(50∶50)；流速1.0 mL/min，檢測波長285 nm，進樣量10 μL.理論塔板數(shù)n大于6 000.

2.2 對照品溶液的配制

精密稱取鼠尾草酚對照品適量，加乙醇溶解，定容至25 mL量瓶中，其濃度為0.4160 mg/mL，作為對照品儲備液.

2.3 供試品溶液的制備

分別精密稱取干燥粉碎后的荔枝草花萼粉末5.0122 g、荔枝草葉5.0066 g，置于圓底燒瓶中，加乙醇50 mL.稱定質量，加熱回流1 h，冷卻，再稱定質量，用乙醇補足損失的質量，搖勻，抽濾，用0.45 μm微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液2 mL自然揮干后，加入1 mL乙醇溶解，作為供試品溶液.

2.4 線性關系考察

精密吸取上述對照品儲備液3.0、4.0、5.0、6.0、7.0 mL，分別加入乙醇定容至10 mL，各進樣10 μL，記錄色譜圖(見圖1)，以峰面積A為縱坐標，濃度C(mg/mL)為橫坐標，進行線性回歸，得鼠尾草酚的標準曲線方程，結果表明，在0.1248～0.2912 mg/mL范圍內(nèi)線性關系良好.

A=119.17C-2.2784，r=0.9997

A.對照品;B.荔枝草花萼;C.荔枝草葉

2.5 精密度

精密吸取同一對照品溶液，連續(xù)進樣6次，每次進樣量10 μL，記錄峰面積，其RSD為0.57%，表明儀器的精密度良好.

2.6 穩(wěn)定性

分別精密吸取荔枝草花萼、葉的同一供試品溶液，在制備后每間隔5 h進樣1次，進樣量10 μL，記錄峰面積，花萼樣品的RSD為3.58%，葉子樣品的RSD為2.88%，表明供試品溶液在25 h內(nèi)穩(wěn)定.

2.7 重復性

取同一批藥材粉末，精密稱定6份，按供試品溶液的制備方法制備和測定.花萼樣品的RSD為2.35%，葉子樣品的RSD為2.96%，表明方法的重現(xiàn)性良好.

2.8 加樣回收

取荔枝草花萼和葉子粉末各約0.25 g，精密稱定，分別精密加入對照品溶液適量，按供試品溶液的制備方法處理，測定、計算加樣回收率.荔枝草葉樣品加樣回收率為99.32%，花萼樣品加樣回收率為99.64%，RSD均小于5%.結果見表1、表2.

表1 荔枝草葉樣品的加樣回收率測定數(shù)據(jù)(n=6)

表2 荔枝草花萼樣品的加樣回收率測定數(shù)據(jù)(n=6)

2.9 樣品測定

按“2.1”項下的色譜條件測定5批樣品，進樣量為10 μL，由標準曲線計算含量，結果見表3.

表3 荔枝草不同部位中鼠尾草酚的含量

3 結 論

荔枝草為唇形科植物，該科植物大多含有二萜酚類成分，如鼠尾草酚、迷迭香酚、表迷迭香酚等，該類成分多具有抗菌、抗氧化、抗癌等活性，是一類與荔枝草功效密切相關的化學成分.為了解鼠尾草酚在荔枝草不同器官中的分布情況，本實驗分別對植物的花萼(花易脫落)、葉與莖等不同植物器官中鼠尾草酚的含量進行測定.由測定結果可知，荔枝草中鼠尾草酚的含量高低順序為：花萼>葉>莖，而荔枝草莖中鼠尾草酚幾乎未檢出.

實驗發(fā)現(xiàn)，鼠尾草酚在波長206、235、285 nm下有吸收，在波長206、235 nm附近檢測靈敏度較高，但干擾較大，故選用波長285 nm作為鼠尾草酚含量測定的檢測波長.由于荔枝草中鼠尾草酚的含量相對較少，并且在波長285 nm下吸收度系數(shù)較低，為了提高響應值，降低誤差，在樣品制備時將樣品濃縮一倍濃度后進樣，檢測.

此外，根據(jù)所測成分的溶解性，本實驗考察了用甲醇、乙醇、丙酮作為溶媒通過超聲和回流對荔枝草中鼠尾草酚進行提取.結果表明，以甲醇、乙醇回流1 h的提取方法，提取物中鼠尾草酚的提取率高，雜質少，考慮到甲醇毒性，故選用乙醇回流1 h的提取方式.在流動相的選擇上，乙腈—磷酸的分離效果優(yōu)于甲醇—磷酸，其中選用0.2%磷酸水溶液可有效解決拖尾的問題.

實驗表明，本研究所建立的高效液相色譜法測定荔枝草中鼠尾草酚含量的方法，具有精密度好、回收率符合要求、重復性好的特點，完全可用于荔枝草的質量控制.

[1]中華本草編委會.中華本草[M].上海:上?？茖W技術出版社,1999.

[2]盧汝梅,楊長水,韋建華.荔枝草化學成分研究[J].中草藥,2011,42(5):859-862.

[3]丁平,田友清.中藥荔枝草的研究進展[J].安徽農(nóng)業(yè)科學,2008,36(10):4133-4134.

[4]翁新楚,谷利偉,董新偉,等.荔枝草化學成分的分離和結構鑒定及其抗氧化性能的研究[J].煙臺大學學報(自然科學與工程版),1997,10(4):305-312.

[5]荔枝草保健茶的制作工藝研究[J].食品工業(yè)科技,2013,34(4):293-299.

[6]肖允貞.一種將蛤蟆草加工成飲用茶的方法:CN1977627A[P].2007-06-13.

Determination of Carnosol Content in Salvia Plebeia by HPLC

SONGQin,LIANGLi,LIUWei,QINGGenyu,YINHaibing,GOUXiaojun

(Key Lab of Medicinal and Edible Plants Resources Development of Sichuan Province, Chengdu University, Chengdu 610106, China)

The paper is going to find the way to determine the content of carnosol in Salvia plebeia.HPLC method is used. Inertsil ODS-SP C18column is used as the Chromatographic column.Acetonitrile-0.2% phosphoric acid(50∶50) is used as mobile phase.The column temperature is maintained at 25 ℃.The detection wavelength is set at 285 nm.The results demonstrate that carnosol shows a good linear relationship within 1.2480～2.9120 μg.The conclusion is drawn that this method is simple,accurate and can be considered as an effective method to determine the content of carnosol in Salvia plebeia．

Salvia plebeia;HPLC;carnosol;RP-HPLC

1004-5422(2017)01-0015-03

宋 芹(1982 — )， 女， 博士， 副教授， 從事藥食同源植物資源開發(fā)研究.

2016-12-05.

R284.1；O657.7+2

A