高效液相色譜法測定丙泊酚注射液中丙泊酚的含量*

馬愛玲，張海峰，董玲芳，王漪檬，劉勝群

(河南省人民醫(yī)院 1.藥學(xué)部；2.內(nèi)鏡中心，鄭州 450003)

高效液相色譜法測定丙泊酚注射液中丙泊酚的含量*

馬愛玲1，張海峰1，董玲芳1，王漪檬1，劉勝群2

(河南省人民醫(yī)院 1.藥學(xué)部；2.內(nèi)鏡中心，鄭州 450003)

目的 建立測定丙泊酚注射液中丙泊酚含量的高效液相色譜法。方法色譜柱為Agilent TC-C18柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),流動相為甲醇-水(80∶20),檢測波長為271 nm,流速為1.0 mL·min-1。結(jié)果丙泊酚濃度在25～250 μg·mL-1范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系(r=0.999 8),平均回收率為97.26%(RSD=1.38%)。結(jié)論該方法操作簡便、靈敏、準(zhǔn)確,適用于丙泊酚注射液的含量測定。

丙泊酚注射液；色譜法,高效液相；含量測定

丙泊酚注射液是一種臨床常用靜脈麻醉藥,具有起效快、作用時間短的特點,常用于麻醉誘導(dǎo)與維持[1]。國內(nèi)已有少量文獻采用高效液相色譜(high performance liquid chromatography,HPLC)法測定丙泊酚注射液含量,色譜條件較為復(fù)雜[2-4]。筆者在本實驗中采用甲醇-水為流動相,建立了操作簡單、專屬性好、靈敏度高的高效液相色譜法,適用于丙泊酚注射液的含量測定。

1 儀器和試藥

1.1 儀器 戴安P680高效液相色譜儀(美國戴安公司),AUW120D電子天平(日本島津公司),WH-866旋渦混合器(太倉市華利達實驗設(shè)備有限公司),TGL-16A(B)高速離心機(常州諾基儀器有限公司), DS3120超聲波清洗機(廣州市默菲儀器有限公司)。

1.2 試藥 丙泊酚對照品(江蘇恩華藥業(yè)股份有限公司,批號:20110826,含量:100.06%)；丙泊酚注射液(阿斯利康醫(yī)藥有限公司,批號:JN240,JN276,JN277,規(guī)格:200 mg·20 mL-1)；中/長鏈脂肪乳注射液(C8～24)(遼寧海思科制藥有限公司,批號:121115,規(guī)格: 250 mL)；甲醇為色譜純；水為雙蒸水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱:Agilent TC-C18柱(250 mm× 4.6 mm,5 μm)；流動相:甲醇-水(80∶20),流速: 1.0 mL·min-1；檢測波長:271 nm；柱溫:25℃；進樣量:20 μL。

2.2 溶液的制備

2.2.1 供試品溶液 精密吸取丙泊酚注射液0.1 mL,加入甲醇溶液0.9 mL,渦旋混合1 min, 14 000 r·min-1離心10 min,精密吸取上清液0.1 mL,加甲醇稀釋至1 mL作為供試品溶液。

2.2.2 對照品溶液 精密吸取丙泊酚對照品26 μL (密度0.962 g·mL-1,25℃),置100 mL量瓶,用甲醇稀釋并定容,制備成濃度為250 μg·mL-1的丙泊酚對照品貯備液。

2.2.3 陰性對照溶液 以中/長鏈脂肪乳注射液(C8～24)替代丙泊酚注射液的背景溶液,按“2.2.1”項下方法操作,制備陰性對照溶液。

2.3 專屬性實驗 取陰性對照溶液、對照品溶液、供試品溶液各20 μL,按“2.1”項下色譜條件,進樣,記錄HPLC色譜圖。在該色譜條件下,丙泊酚峰形良好,保留時間約為7.5 min,陰性對照溶液無干擾。見圖1。

2.4 線性關(guān)系考察 依次精密吸取250 μg·mL-1的丙泊酚對照品貯備液適量,用甲醇稀釋成25,50,100, 150,200,250 μg·mL-1的標(biāo)準(zhǔn)系列溶液,按“2.1”項下色譜條件進行測定,以濃度(C)為橫坐標(biāo),以色譜峰面積(A)為縱坐標(biāo),經(jīng)回歸處理,得到回歸方程為A= 0.141 7C+0.106 6,r=0.999 8,結(jié)果表明,丙泊酚在25～250 μg·mL-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.5 精密度實驗 取濃度為100 μg·mL-1的丙泊酚對照品溶液,連續(xù)進樣6次,測定峰面積。計算峰面積的RSD為0.71%,表明儀器精密度良好。

A.陰性對照溶液;B.對照品溶液;C.供試品溶液;1.丙泊酚圖1 3種溶液的HPLC色譜圖A.negativesample；B.referencesubstance；C.thetest solution；1.propofolFig.1 HPLC chromatograms of three kinds of solution

2.6 重復(fù)性實驗 取同一批丙泊酚注射液6份,分別按“2.2.1”項方法操作,制備6份供試品溶液,進樣測定峰面積。結(jié)果RSD為1.2%,表明方法的重復(fù)性良好。

2.7 加樣回收率實驗 取已知含量的丙泊酚供試品溶液,分別精密加入丙泊酚低、中、高3個濃度的對照品溶液,每個濃度制備3份樣品,進樣測定,計算丙泊酚的加樣回收率,結(jié)果平均回收率為97.26%(RSD= 1.38%)。見表1。

2.8 穩(wěn)定性實驗 按“2.2.1”項方法,制備1份供試品溶液,室溫(25±1)℃下放置8 h,分別考察0,1,2,4, 6,8 h丙泊酚的含量變化,結(jié)果RSD為1.5%,表明供試品溶液8 h內(nèi)穩(wěn)定。

表1 丙泊酚加樣回收率測定結(jié)果Tab.1 Results of recovery experiment of propofol

2.9 樣品含量測定 取3批(批號:JN240,JN276, JN277)丙泊酚注射液,按“2.2.1”項方法制備供試品溶液,分別進樣測定丙泊酚含量。結(jié)果3批樣品中丙泊酚的含量分別為標(biāo)示量(標(biāo)示量為10 mg·mL-1)的99.6%,99.3%,100.2%。

3 討論

丙泊酚對照品在常溫下為油狀液體,制備對照品溶液時,在室溫(25±1)℃條件下,精密吸取一定體積的對照品溶液,用甲醇稀釋并定容,已知丙泊酚在25℃時,相對密度為0.962 g·mL-1,計算丙泊酚的質(zhì)量,可得出對照品溶液的準(zhǔn)確濃度。

目前臨床上使用的丙泊酚注射液為脂肪乳劑,在供試品溶液的制備時,加入甲醇可達到破乳的效果,渦旋、離心后取上清液用甲醇稀釋后可進樣分析。

本實驗在色譜條件建立時,選擇了甲醇-水(80∶20)作為流動相,丙泊酚的保留時間約為7.5 min,藥物的峰形良好。該方法操作簡單,重復(fù)性好,適用于丙泊酚注射液的含量測定。

[1] 胡惠靜,陳濤,王汝濤,等.丙泊酚注射疼痛及其預(yù)防措施研究進展[J].醫(yī)藥導(dǎo)報,2012,31(1):63-66.

[2] 楊蕾,張建華,周益芬,等.HPLC法測定丙泊酚注射液的含量及有關(guān)物質(zhì)[J].內(nèi)蒙古中醫(yī)藥,2012,31(19):87-89.

[3] 趙麗麗,麻軍法,潘云霞.丙泊酚注射液有關(guān)物質(zhì)檢查方法的研究[J].中國中醫(yī)藥咨訊,2010,2(11):78.

[4] 李桂玲,蘇德森.HPLC測定丙泊酚靜注乳劑的含量[J].中國藥學(xué)雜志,1999,34(4):272.

DOI 10.3870/yydb.2014.04.025

Content Determination of Propofol in Propofol Injection by HPLC

MA Ai-ling1,ZHANG Hai-feng1,DONG Ling-fang1,WANG Yi-meng1,LIU Sheng-qun2
(1.Department of Pharmacy;2.Endoscopy Center,Henan Provincial People's Hospital,Zhengzhou 450003,China)

Objective To establish an high performance liquid chromatography(HPLC)method for content determination of propofol in propofol injection.MethodsThe analysis was performed on an Agilent TC-C18(250 mm×4.6 mm,5 μm)column.The mobile phase consisted of methanol-water(80∶20),with a flow rate of 1.0 mL·min-1,and detection wavelength at 271 nm.ResultsThere was a good linear relationship for propofol in the range of 25-250 μg·mL-1.The average recovery rate was 97.26%and the RSD was 1.38%.ConclusionThis method is simple,sensitive and accurate,and it can be used for determination of propofol injection.

Propofol injection;Chromatography,high performance liquid;Content determination

R971.2;R927.2

A

1004-0781(2014)04-0496-02

2013-07-22

2013-09-03

*2013年度常州四藥臨床藥學(xué)科研基金資助項目(CZSYJJ13030)

馬愛玲(1981-),女,河南安陽人,主管藥師,碩士,從事臨床藥學(xué)工作。電話:(0)15093346337,E-mail：ma_ailing@126.com。

劉勝群(1970-),女,四川資中人,副主任醫(yī)師,碩士,從事臨床麻醉工作。電話:(0)13526882118,E-mail：13526882118@163.com。