遼寧省豬弓形蟲血清抗體檢測(cè)與分析

楊 娜，邢蒙恩，王大為，李紅魁，李德臣，吳元華*

(1.沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué)，遼寧沈陽(yáng) 110866；2.遼寧省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，遼寧沈陽(yáng) 110164；3.本溪市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，遼寧本溪 117000)

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遼寧省豬弓形蟲血清抗體檢測(cè)與分析

楊 娜1，邢蒙恩1，王大為1，李紅魁2，李德臣3，吳元華1*

(1.沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué)，遼寧沈陽(yáng) 110866；2.遼寧省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，遼寧沈陽(yáng) 110164；3.本溪市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，遼寧本溪 117000)

弓形蟲病是一種呈世界性流行的人獸共患寄生蟲病，可在人和動(dòng)物中相互傳播，全球約有50%的人感染，不僅給畜牧業(yè)生產(chǎn)帶來嚴(yán)重危害和重大經(jīng)濟(jì)損失，而且對(duì)食品安全構(gòu)成巨大威脅。采用改良凝集試驗(yàn)(MAT)定性檢測(cè)從遼寧省沈陽(yáng)、遼陽(yáng)、大連等14市采集的共計(jì)2 152份血清，結(jié)果共有368份陽(yáng)性血清，總陽(yáng)性率為17.1%(368/2 152)，遼陽(yáng)市和本溪市陽(yáng)性率最高和最低，分別為26.3%和6.12%；其中繁殖母豬為33.9%，普遍高于育肥豬的13.4%；成年豬為20.9%，普遍高于仔豬的7.59%。結(jié)果表明，遼寧省14市豬均有不同程度的弓形蟲感染，且各市感染率有差異。

弓形蟲；豬；血清抗體；檢測(cè)

弓形蟲病(Toxoplasmosis) 是由剛地弓形蟲(Toxoplasmagondii) 感染引起的一種重要的人獸共患寄生蟲病， 對(duì)孕婦和免疫力低下的人造成嚴(yán)重危害[1-2]。已經(jīng)確定弓形蟲的終末宿主是貓，所有的恒溫動(dòng)物都是其中間宿主。食用被貓糞便中卵囊污染的食物或者飲水會(huì)引起中間宿主的感染，食用含弓形蟲包囊的生肉或者未煮熟的肉類也會(huì)引起感染。弓形蟲病會(huì)給人類的健康和畜牧業(yè)發(fā)展帶來很大危害[3-5]。因此，本試驗(yàn)采用改良凝集試驗(yàn)(MAT)對(duì)采集遼寧省14市的豬血清樣品進(jìn)行檢測(cè)，得到其相應(yīng)的弓形蟲感染率，并結(jié)合飼養(yǎng)管理水平和地理環(huán)境、氣候等因素分析其感染原因，為動(dòng)物弓形蟲病的防控提供一定的理論依據(jù)，同時(shí)也對(duì)降低人類感染弓形蟲的風(fēng)險(xiǎn)具有一定意義。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 MAT檢測(cè)試劑和器械 弓形蟲全蟲抗原(貨號(hào)EH2001)，美國(guó)Kera FAST公司產(chǎn)品;96孔U型板，北京華康同創(chuàng)生物技術(shù)有限公司產(chǎn)品。

1.1.2 待檢血清 從遼寧省各市采集豬血清樣本2 152份，其中沈陽(yáng)市1 036份，遼陽(yáng)市76份，丹東市102份，葫蘆島市56份，錦州市266份，盤錦市95份，阜新市50份，鐵嶺市85份，撫順市40份，鞍山市82份，大連市120份，本溪市49份，營(yíng)口市25份，朝陽(yáng)市70份。2 000 r/min離心10 min分離血清，置-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 方法

①血清稀釋液38 μL/孔，待檢血清2 μL/孔，充分混勻，并設(shè)置陰性對(duì)照和陽(yáng)性對(duì)照。②第1孔加入血清稀釋液48 μL，第2～8孔分別加入血清稀釋液25 μL，吸取待檢血清2 μL至第1孔，充分混勻后吸出25 μL加到第2孔并混勻，依次加到第8孔，效價(jià)為1∶25～1∶3 200[6]。③吸取抗原稀釋液2.5 mL、 β巰基乙醇35 μL、臺(tái)盼藍(lán)50 μL和抗原液150 μL， 充分混勻后立即加到96孔U型板中，25 μL/孔，再吸取稀釋好的血清25 μL加到對(duì)應(yīng)的孔中，輕輕吹打混勻。④用封口膜封好96孔U型板，37℃過夜。⑤鏡下觀察，若底部透明，則為陽(yáng)性；若底部出現(xiàn)藍(lán)色沉淀，則為陰性[7]。

2 結(jié)果

2.1 各市豬血清抗體陽(yáng)性率檢測(cè)結(jié)果

遼寧省采集的2 152份豬血清總陽(yáng)性率為17.1%(368/2 152)，其中遼陽(yáng)市陽(yáng)性率最高為26.3%，本溪市陽(yáng)性率最低為6.12%(表1)。

2.2 繁殖母豬與育肥豬血清抗體陽(yáng)性率檢測(cè)結(jié)果

繁殖母豬檢測(cè)陽(yáng)性率為33.9%(131/386)，育肥豬陽(yáng)性率為13.4%(237/1 766)；其中育肥豬陽(yáng)性率最高的出現(xiàn)在撫順市為21.9%，本溪市最低為0.23%；朝陽(yáng)市繁殖母豬陽(yáng)性率最高為58.3%，錦州市最低為15.3%(表2)。

表1 遼寧省各市豬弓形蟲血清總體陽(yáng)性率

2.3 仔豬與成年豬血清抗體陽(yáng)性率檢測(cè)結(jié)果

仔豬陽(yáng)性率為7.59%(47/619)，成年豬陽(yáng)性率為20.9%(321/1 533)；其中仔豬陽(yáng)性率最高，出現(xiàn)在撫順市為22.2%，葫蘆島、阜新、鞍山、本溪、營(yíng)口則未檢出仔豬抗體陽(yáng)性；遼陽(yáng)市成年豬陽(yáng)性率最高(31.4%)，本溪市最低(7.69%)(表3)。

3 討論

3.1 繁殖母豬與育肥豬的比較

檢測(cè)結(jié)果顯示，遼寧省內(nèi)各市感染率差異明顯，其中朝陽(yáng)繁殖母豬感染率最高，錦州感染率最低；撫順育肥豬感染率最高，本溪感染率僅為0.23%，且各市繁殖母豬感染率都明顯高于育肥豬。

與育肥豬相比，繁殖母豬飼養(yǎng)周期更長(zhǎng)，導(dǎo)致其與弓形蟲卵囊的接觸幾率增加。氣候原因也會(huì)產(chǎn)生影響，遼寧省內(nèi)各市氣溫不同，若氣溫偏低，氣候干燥，則不利于弓形蟲的發(fā)育，其感染率也隨之降低。放養(yǎng)豬接觸野貓或卵囊的幾率要遠(yuǎn)高于圈養(yǎng)豬，其感染率也相對(duì)較高。另外，若場(chǎng)區(qū)周邊有流浪貓等流竄動(dòng)物頻繁活動(dòng)，則該養(yǎng)殖場(chǎng)的感染率會(huì)明顯高于其他場(chǎng)。同時(shí)，豬舍內(nèi)的環(huán)境衛(wèi)生，日常消毒工作、飼料存放環(huán)境等，都可能是影響其感染的原因[8]。

表2 遼寧省育肥豬和繁殖母豬弓形蟲血清抗體檢測(cè)結(jié)果

表3 遼寧省仔豬和成年豬血清抗體檢測(cè)結(jié)果

3.2 成年豬與仔豬的比較

檢測(cè)結(jié)果顯示，遼陽(yáng)成年豬感染率最高(31.4%)，本溪最低(7.69%)；撫順仔豬感染率最高(22.2%)，而本溪、葫蘆島、鞍山等地仔豬均未檢出陽(yáng)性。且各市成年豬感染率都明顯高于仔豬，其中葫蘆島市差異最大，鐵嶺市相差最??；飼養(yǎng)周期和飼養(yǎng)環(huán)境是影響其感染率的重要原因。此外，仔豬到成年豬的成長(zhǎng)過程中要多次換圈可能也是影響感染率的一個(gè)原因。

3.3 遼寧省各市間的比較

檢測(cè)結(jié)果顯示遼寧省各市豬弓形蟲感染率有明顯的差別，遼陽(yáng)市感染率最高(26.3%)，本溪市感染率最低(6.12%)。另外，本試驗(yàn)測(cè)得的遼寧省豬弓形蟲感染率與崔平等[9]所報(bào)道的河北省豬平均感染率35.69%相比較，要明顯低于其平均值；同時(shí)低于徐斌等[10]報(bào)道的重慶地區(qū)對(duì)豬血清檢測(cè)的陽(yáng)性率71.85%。但是卻遠(yuǎn)高于董永森[11]所報(bào)道的青海省豬弓形蟲感染率6.64%。綜合本試驗(yàn)中遼寧省各市豬弓形蟲感染率的高低，可推測(cè)影響弓形蟲感染率的因素中，氣候因素是極其重要的。青海省和遼寧省都屬于氣溫偏低、空氣干燥的氣候特點(diǎn)，顯然不利于弓形蟲的發(fā)育和傳播，其弓形蟲感染率也就遠(yuǎn)低于氣候適宜弓形蟲發(fā)育的河北、重慶等地。當(dāng)然也可能與檢測(cè)方法有關(guān)，崔平和徐斌等采用的是間接血凝試驗(yàn)(IHA)，而本研究采用的是改良凝集試驗(yàn)(MAT)，已有學(xué)者報(bào)道在檢測(cè)血清弓形蟲陽(yáng)性抗體時(shí)，MAT的敏感性要高于IHA，但由于MAT成本高，操作復(fù)雜，應(yīng)用受到一定限制[12]。

本研究對(duì)遼寧省14市豬弓形蟲感染的調(diào)查結(jié)果提示，豬感染弓形蟲情況十分嚴(yán)重，特別是繁殖母豬，弓形蟲病已對(duì)養(yǎng)豬業(yè)構(gòu)成了嚴(yán)重的威脅，這不僅造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失，還可能進(jìn)一步威脅到人類的健康，應(yīng)引起廣大市民和相關(guān)部門的高度重視，加強(qiáng)對(duì)弓形蟲病的防控。

[1] 張居作,陳漢忠,徐君飛.我國(guó)弓形蟲的感染現(xiàn)狀[J].動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展,2008,29(7):101-104.

[2] 劉 俠,闞松鶴,林 青.弓形蟲病研究進(jìn)展[J].動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展,2015,36(1):101-105.

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[6] 王貝貝,劉 帥,崔麗麗,等.改良凝集試驗(yàn)(MAT)檢測(cè)動(dòng)物弓形蟲血清抗體[J].中國(guó)獸醫(yī)雜志,2012,48(6):25-27.

[7] 王鳳陽(yáng).弓形蟲改良凝集試驗(yàn)的建立及我國(guó)部分地區(qū)犬、雞弓形蟲病流行病學(xué)調(diào)查[D].吉林長(zhǎng)春:吉林農(nóng)業(yè)大學(xué),2012.

[8] Wang M,Meng P,Ye Q,et al.Detection ofToxoplasmagondiioocysts in soils in Northwestern China using a new semi-nested PCR assay[J].BMC Vet Res,2014,10:238.

[9] 崔 平,方素芳,武治云,等.河北省家畜弓形蟲病的流行病學(xué)調(diào)查[J].中國(guó)獸醫(yī)科技,2004(11)35-36.

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[11] 董永森.青海省豬弓形蟲病血清流行病學(xué)調(diào)查[J].黑龍江畜牧獸醫(yī),2010(12):83.

[12] Gerald W,Esch.Toxoplasmosis of animals and humans[J].J Parasitol,2010,96(5):940.

Detection and Analysis ofToxoplasmagondiiAntibody from Pig Sera in Liaoning Province

YANG Na1，XING Meng-en1，WANG Da-wei1，LI Hong-kui2，LI De-chen3，WU Yuan-hua1

(1.ShenyangAgriculturalUniversity，Shenyang,Liaoning,110866，China；2.LiaoningCenterforAnimalDiseaseControlandPrevention，Shenyang,Liaoning,110164，China；3.BenxiCenterforAnimalDiseaseControlandPrevention，Benxi,Liaoning,117000，China)

Toxoplasmosis is a popular worldwide zoonotic parasitic disease.It is reported that about half of the world's population infected withT.gondiiand the disease can spread between human and animals.This disease brings serious harm and great economic losses not only for human and animals as well as livestock production,but also for a great threaten to food safety.2 152 serum samples collected from Shenyang,Liaoyang,Dalian and other 14 cities in Liaoning province were detected by modified agglutination test (MAT),and results showed that 368 serum samples are positive.Total positive rate is 17.1% (368/2 152),the highest rate is 26.3% in Liaoyang,and the lowest rate is 6.12% in Benxi.The positive rate of breeding sows is 33.9%,which is higher than 13.4% of fattening pigs.The positive rate of adult pigs(20.9%) is higher than that of piglets(7.59%).The results showed that all the 14 cities have positive sera againstToxoplasmagondiiand the positive rates are different in different cities of Liaoning province.

Toxoplasmagondii;pig;serum antibody;detection

2016-07-06

國(guó)家自然科學(xué)基金青年基金項(xiàng)目(31201894)；中國(guó)博士后科學(xué)基金面上項(xiàng)目(2014M561252)

楊 娜(1981-)，女，山東煙臺(tái)人，博士，主要從事弓形蟲病研究。

S852.729

B

1007-5038(2017)04-0125-04

*通訊作者