流產(chǎn)衣原體研究進(jìn)展

張志君，周繼章

(中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所/家畜疫病病原生物學(xué)國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室， 甘肅蘭州 730046)

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流產(chǎn)衣原體研究進(jìn)展

張志君，周繼章*

(中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所/家畜疫病病原生物學(xué)國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室， 甘肅蘭州 730046)

流產(chǎn)衣原體(Chlamydiaabortus)屬于衣原體科(Chlamydiaceae)、衣原體屬(Chlamydia)，系一類細(xì)胞內(nèi)寄生的革蘭陰性原核型微生物。流產(chǎn)衣原體導(dǎo)致羊的流產(chǎn)、死胎，嚴(yán)重威脅養(yǎng)羊業(yè)。流產(chǎn)衣原體不僅可以感染羊，還可以感染懷孕婦女。在病原的診斷方面，分子生物學(xué)技術(shù)因其快速與相對靈敏性的優(yōu)點(diǎn)得到快速發(fā)展，然而細(xì)胞分離培養(yǎng)仍然是鑒定流產(chǎn)衣原體的“金標(biāo)準(zhǔn)”。在防治方面，疫苗免疫是預(yù)防流產(chǎn)衣原體的理想措施，在我國流產(chǎn)衣原體滅活疫苗已獲得國家一類新獸藥證書并可以為羊提供有效地免疫保護(hù)。疫苗與抗菌藥物的合理使用可以為羊群提供很好的保護(hù)。

羊；流產(chǎn)衣原體； 診斷；防治

衣原體是一類感染宿主廣泛、致病表現(xiàn)復(fù)雜的革蘭陰性專性細(xì)胞內(nèi)寄生菌，直徑0.2 μm～0.5 μm，能夠通過0.45 μm的濾器。衣原體是一種重要的人畜共患病原體可以引起廣泛的家禽、哺乳動(dòng)物和人的衣原體病[1]。

衣原體目下設(shè)有8個(gè)科，其中的衣原體科有9個(gè)種，即沙眼衣原體(C.Trachomatis)、 豬衣原體(C.suis)、鼠衣原體(C.muridarum)、肺炎衣原體(C.pueumoniae)、流產(chǎn)衣原體(C.abortus)、鸚鵡熱衣原體(C.psittaci)、貓衣原體(C.felis)、豚鼠衣原體(C.caviae)、 反芻動(dòng)物衣原體(C.pecorum)[2]。2014年又新納入了2個(gè)衣原體種，即感染鴿子和鸚鵡鳥的鳥衣原體(C.avium)和感染雞和火雞的家禽衣原體(C.galinacea)[3]。但是有部分學(xué)者認(rèn)為，這2個(gè)種有別于其他9個(gè)種[4]。

衣原體有DNA和RNA兩種遺傳物質(zhì)，具有復(fù)雜的雙向發(fā)展階段，即代謝不活躍的原生小體(EB)和代謝活躍的網(wǎng)狀體(RB)兩個(gè)階段。衣原體感染過程發(fā)生在EB階段，EB吸附宿主細(xì)胞后，細(xì)胞將其攝入形成膜泡。內(nèi)化的EB有感染性無復(fù)制性，而RB有復(fù)制性無感染性。在宿主細(xì)胞裂解之前EB轉(zhuǎn)變成為RB[5]。在RB階段，衣原體和宿主細(xì)胞之間發(fā)生復(fù)雜的相互作用，衣原體可以產(chǎn)生一些物質(zhì)干擾宿主細(xì)胞的信號通路,以達(dá)到自我生存的目的[6]。

1 流產(chǎn)衣原體感染特征

羊衣原體病(Ovine chlamydisis)是由流產(chǎn)衣原體引起的羊傳染病。除了澳大利亞和新西蘭外，流產(chǎn)衣原體在全世界流行[7]。流產(chǎn)衣原體主要寄生于羊生殖道黏膜表面的上皮細(xì)胞內(nèi)[8]。不同年齡段的羊都可感染且臨床表現(xiàn)不同。新生羔羊主要以關(guān)節(jié)炎、腦炎癥狀為主；公羊主要以睪丸炎癥狀為主；母羊典型的臨床癥狀是妊娠后期流產(chǎn)，絕大多數(shù)發(fā)病是由于羊在懷孕前就已處于流產(chǎn)衣原體的持續(xù)感染狀態(tài)[9]。羊在懷孕前不會表現(xiàn)流產(chǎn)衣原體的感染癥狀，有研究指出是由于羊在感染流產(chǎn)衣原體后機(jī)體的IFN-γ快速分泌，抑制流產(chǎn)衣原體使其處于一種休眠狀態(tài)[10]。母羊在流產(chǎn)后會獲得免疫保護(hù)并且可以進(jìn)行成功的繁殖，但其仍成為衣原體的攜帶者，會在以后的發(fā)情期將大量的EB排出體外，成為重要的傳染源[8]。孕婦與感染的動(dòng)物直接接觸也會造成急性流產(chǎn)[11]。

2 流產(chǎn)衣原體的遺傳特性

流產(chǎn)衣原體具有緊湊性基因組，并且衣原體基因簇的大小可以滿足衣原體基因復(fù)制、轉(zhuǎn)錄和翻譯所需要的多基因最小串聯(lián)簇，且基因無冗余性(基因冗余為一條染色體上出現(xiàn)一個(gè)基因的很多復(fù)份)[12]。衣原體DNA具有很強(qiáng)的重組修復(fù)能力，有利于衣原體的生存。在代謝方面，大多數(shù)衣原體具有相似的編碼基因，編碼產(chǎn)物參與衣原體的有氧呼吸[12]。研究衣原體的基因組發(fā)現(xiàn)所有的衣原體都有一個(gè)發(fā)達(dá)的、完整的Ⅲ型分泌系統(tǒng)(type Ⅲ secretion system，TTSS)，介導(dǎo)衣原體與宿主細(xì)胞發(fā)生相互作用[12]。雖然TTSS的結(jié)構(gòu)成分在所有的衣原體中非常保守，但效應(yīng)分子具有多樣化性，且許多效應(yīng)分子的功能仍有待確定[13]。

3 流產(chǎn)衣原體的診斷

羊衣原體病和布魯菌病的臨床癥狀十分相似，感染后都有較長的潛伏期。僅依據(jù)臨床癥狀和剖檢病理變化觀察不能確診，需要借助一定的實(shí)驗(yàn)室診斷方法才能確診[14]。

3.1 衣原體病原學(xué)診斷

3.1.1 染色涂片 衣原體具有特殊的染色特性。涂片染色法包括碘染色法、Gimenez染色、熒光抗體染色等。

碘染色法是將衣原體感染的組織、雞胚卵黃囊膜、細(xì)胞培養(yǎng)物進(jìn)行涂片，酒精燈外焰烘干或自然干燥后。用碘液染色，碘染色液風(fēng)干后。用光學(xué)顯微鏡觀察包涵體。正常情況下，細(xì)胞漿中出現(xiàn)3個(gè)以上的紅褐色或暗褐色的糖原塊出現(xiàn)時(shí)，確定為衣原體陽性。碘染色法具有簡單快速的優(yōu)點(diǎn)，但是其靈敏度不高，假陽性高[15]。

Gimenez染色是將衣原體感染組織、雞胚卵黃囊膜、細(xì)胞培養(yǎng)物進(jìn)行涂片，酒精燈外焰烘干或自然干燥后。用甲醛固定3 min，甲醛自然干燥后。用吉姆薩染色液染色30 min，用無菌生理鹽水沖洗染色液后自然風(fēng)干，光學(xué)顯微鏡的油鏡觀察包涵體[16]。不同階段的衣原體染色不同，EB在細(xì)胞外吉姆薩染色呈紫色，RB較EB體積大二至數(shù)倍，染色呈藍(lán)色。吉姆薩染色具有特異性高，結(jié)果較可靠的優(yōu)點(diǎn)。但其靈敏度不及熒光抗體染色。

熒光抗體染色是利用抗體與熒光素結(jié)合后，即具有與相應(yīng)抗原結(jié)合的抗體特性，又具有在熒光顯微鏡下檢測的特性，故可以作為一種衣原體特異性檢測試劑。流產(chǎn)衣原體檢測使用的抗體多為鼠抗流產(chǎn)衣原體LPS單克隆抗體或鼠抗流產(chǎn)衣原體MOMP單克隆抗體[17]，生物素標(biāo)記的二抗多為羊抗鼠的IgG抗體[18-19]。本技術(shù)較其他鑒定細(xì)菌的血清學(xué)方法有速度快、操作簡單、敏感性高等特點(diǎn)，有研究報(bào)道同時(shí)用碘染色法、姬姆薩染色法，以及熒光抗體染色法對細(xì)胞培養(yǎng)物檢測沙眼衣原體。結(jié)果表明，免疫熒光法的敏感度最高(30.0%,48/160), Giemsa法次之(26.9%,43/160),碘染色法較低(24.4%,39/160)[20]。

3.1.2 電鏡觀察 電子顯微技術(shù)可以在檢測流產(chǎn)衣原體的同時(shí)研究衣原體的細(xì)胞結(jié)構(gòu)。繼而研究新發(fā)現(xiàn)的衣原體結(jié)構(gòu)和功能，為分析結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系提供新的視角。Wilkat等應(yīng)用掃描透射電子顯微成像技術(shù)、免疫電鏡技術(shù)、低溫掃描電子顯微鏡技術(shù)取代高壓冷凍技術(shù)來研究流產(chǎn)衣原體[21]。電鏡技術(shù)的發(fā)展為進(jìn)一步研究流產(chǎn)衣原體提供了技術(shù)支持。

3.1.3 病原分離培養(yǎng) 衣原體的分離培養(yǎng)分為雞胚分離培養(yǎng)法和細(xì)胞分離培養(yǎng)法。

1956年，我國學(xué)者湯飛凡等用雞胚卵黃囊接種法，在世界上首次成功分離出沙眼衣原體,此后,各國學(xué)者用該方法分離、培養(yǎng)了多種衣原體[22]。目前我國多利用雞胚接種病料的方法來分離培養(yǎng)衣原體。在雞胚接種病料培養(yǎng)流產(chǎn)衣原體的基礎(chǔ)上，收集雞胚卵黃囊膜和尿囊液，作為樣本。但是雞胚培養(yǎng)法費(fèi)時(shí)費(fèi)力，且雞胚的接種日齡、雞胚生產(chǎn)季節(jié)等缺陷都是本方法的極大局限。

1994年WHO推薦采用細(xì)胞培養(yǎng)法來培養(yǎng)衣原體，此方法結(jié)果可靠。被認(rèn)為是評價(jià)衣原體的“金標(biāo)準(zhǔn)”。目前衣原體敏感的細(xì)胞有Hela細(xì)胞、BHK細(xì)胞、L929細(xì)胞、McCoy[23]等。但是并不是所有的實(shí)驗(yàn)室都具有細(xì)胞培養(yǎng)的設(shè)施和專業(yè)知識，并且細(xì)胞培養(yǎng)有技術(shù)復(fù)雜、耗時(shí)等缺陷。

3.2 衣原體血清學(xué)診斷

3.2.1 補(bǔ)體結(jié)合實(shí)驗(yàn) 據(jù)世界動(dòng)物衛(wèi)生組織(OIE)陸生動(dòng)物疫病診斷手冊(2012)，動(dòng)物衣原體最常用的血清學(xué)檢測方法是補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)(complement fixation test,CFT)。然而，此技術(shù)需要大量的勞動(dòng)力，靈敏度差，而且容易受到衣原體種之間的交叉反應(yīng)干擾 。而且此方法不能確定衣原體潛伏期感染[24]。因此，當(dāng)把沒有任何臨床癥狀但處于潛伏期的羊引進(jìn)農(nóng)場，飼養(yǎng)到產(chǎn)羔時(shí)就會表現(xiàn)明顯的臨床癥狀，此時(shí)再采取有效的防治措施，經(jīng)濟(jì)損失也不可避免[25]。

3.2.2 酶免檢測 酶免檢測(enzyme-immune assay,EIA)技術(shù)是運(yùn)用抗衣原體LPS的單抗或多抗檢測衣原體[26]。Tanaka M等用PCR以及EIA對人的子宮頸拭子和尿液樣本進(jìn)行檢測沙眼衣原體，相對敏感性分別為100%和79.3%，可見PCR比EIA敏感性要高，但PCR需要培訓(xùn)專業(yè)操作人士。EIA的優(yōu)點(diǎn)是可應(yīng)用于大批量臨床病料的檢測,以及判斷實(shí)驗(yàn)結(jié)果無人為的主觀性。

3.2.3 間接血凝試驗(yàn) Benedict曾用衣原體抗原致敏鞣化的紅細(xì)胞做間接血凝試驗(yàn)(indirect hemagglutination assay,IHA)，但并沒有在其他實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行過可靠性和有效性的檢驗(yàn)。姜天童等[27]用IHA檢測22份人工感染的豬血清和18份高免血清，檢測結(jié)果100%陽性，血凝效價(jià)最高達(dá)1∶8 192，比CF和ICF分別敏感8倍～16倍和64倍～128倍。IHA重復(fù)性和特異性較好，但判定結(jié)果需要肉眼觀察，具有一定的主觀性。

3.2.4 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn) 20世紀(jì)80年代，我國農(nóng)業(yè)部將IHA和CFT納入動(dòng)物衣原體病檢疫規(guī)程。然而由于二者方法靈敏性低，特異性低，使其在實(shí)際應(yīng)用中受到一定的限制。因此，我國學(xué)者邱昌慶等[28]用建立的酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)成功地檢測了奶牛的流產(chǎn)衣原體。陳紅英等[29]用建立的Dot-ELISA對豬的衣原體進(jìn)行了成功的檢測，試驗(yàn)證明用Dot-ELISA檢測豬衣原體比ICF敏感,而且特異性好。但由于這些檢測方法成本相對較高，目前還難以大面積在基層推廣應(yīng)用。

3.2.5 免疫膠體金技術(shù) 在免疫組織化學(xué)方面及免疫分析中，免疫膠體金技術(shù)(immune colloidal gold technique)作為一種標(biāo)記物，可以對細(xì)胞或某些標(biāo)本中的生物大分子進(jìn)行定位及定性檢測。然而抗原和抗體之間的反應(yīng)是非常復(fù)雜的并不是單純的“鑰匙和鎖”的關(guān)系[30]。將膠體金制備成不同規(guī)格、不同標(biāo)記來檢測多種抗原是十分有限的[21]。為了克服這種局限性，2014年P(guān)hilimonenko V V等[31]開發(fā)了一組新型的形狀編碼的金屬納米顆粒，可以結(jié)合到抗體與其他生物大分子上。將這些形狀作為基礎(chǔ)的納米粒子，結(jié)合市售的黃金納米粒子，結(jié)果顯示,通過電子顯微鏡第一次可以同時(shí)檢測5個(gè)分子靶點(diǎn)。正是由于其具有操作快速而簡單，數(shù)分鐘即出結(jié)果,不需要儀器，操作人員不需要特殊訓(xùn)練，試劑穩(wěn)定等優(yōu)點(diǎn)。所以非常符合臨床應(yīng)用，得到了飛快的發(fā)展。目前，還沒有市場化檢測流產(chǎn)衣原體的免疫膠體金產(chǎn)品。

3.3 衣原體分子生物學(xué)診斷

隨著分子生物學(xué)不斷地發(fā)展以及人們對流產(chǎn)衣原體基因組研究的不斷深入。衣原體分子生物學(xué)診斷也因其特異性、準(zhǔn)確性和敏感性高，而被廣大學(xué)者所認(rèn)同。目前用于構(gòu)建衣原體分子生物學(xué)檢測技術(shù)的靶基因主要包括衣原體16 S-23 S rRNA 基因和主要外膜蛋白(MOMP)[32]。

3.3.1 基因探針檢測法 基因探針原理是利用DNA-RNA雜交技術(shù)檢測衣原體的RNA。已經(jīng)有上市的商品化試劑盒Gene-Probe，但由于其試劑造價(jià)昂貴，很少被國內(nèi)實(shí)驗(yàn)室所采用，僅在國外實(shí)驗(yàn)室應(yīng)用。基因探針的敏感性與操作良好的細(xì)胞培養(yǎng)法具有相同的敏感性[33]。但由于其操作步驟繁瑣,逐漸被核酸擴(kuò)增技術(shù)替代。

3.3.2 聚合酶鏈反應(yīng) 1985年，美國科學(xué)家Mullis K發(fā)明了聚合酶鏈反應(yīng)(ploymerase chain reaction，PCR)。從此，PCR得到了生命科學(xué)界的普遍認(rèn)同。國內(nèi)外學(xué)者對衣原體的PCR檢測技術(shù)進(jìn)行了許多探討。張莉等[34]根據(jù)羊流產(chǎn)衣原體16 S rRNA基因保守序列，擴(kuò)增出523 bp基因片段，而沙眼衣原體、大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌及健康雞胚的卵黃囊膜均未擴(kuò)增出相應(yīng)的片段。PCR已經(jīng)成為檢測衣原體的常見手段之一。

3.3.3 實(shí)時(shí)熒光定量PCR 實(shí)時(shí)熒光定量PCR ( real-time fluorescence quantitative PCR，RT-qPCR)是通過熒光染料或熒光標(biāo)記的特異性的探針，對PCR產(chǎn)物進(jìn)行標(biāo)記跟蹤，實(shí)時(shí)在線監(jiān)控反應(yīng)過程，結(jié)合相應(yīng)的軟件可以對產(chǎn)物進(jìn)行分析，計(jì)算待測樣品模板的初始濃度。Okuda H等[35]采用SYBR Green實(shí)時(shí)熒光PCR檢測鸚鵡熱衣原體，該文章的實(shí)時(shí)熒光定量PCR引物分析還適用于流產(chǎn)衣原體和貓衣原體。Jorge G等[36]采用雙重?zé)晒舛縋CR檢測流產(chǎn)衣原體，試驗(yàn)驗(yàn)證本方法是一種靈敏快速的檢測工具，具有用于綿羊流產(chǎn)常規(guī)診斷方法的價(jià)值。

3.3.4 環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增 環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增(loop-mediated isothermal amplification，LAMP)依賴的是一種具有鏈置換特性的BstDNA聚合酶(Bacillus stearothermophilus DNA polymerase)和4條能夠識別靶序列上6個(gè)特異區(qū)域的引物。靶序列的擴(kuò)增反應(yīng)需要在等溫條件下進(jìn)行約1 h。楊軍[37]針對衣原體共有保守特定區(qū)域設(shè)計(jì)通用的2對基因的內(nèi)、外引物和1對環(huán)引物，成功建立起了衣原體的通用LAMP。該方法具有易操作、準(zhǔn)確率高、設(shè)備要求低、結(jié)果易判斷等優(yōu)點(diǎn)。適用于大批量臨床標(biāo)本材料的大批量檢測。

3.3.5 DNA微陣列 DNA微陣列(DNA microarray),又稱基因芯片，該技術(shù)系指將大量的探針分子固定于載體上后與標(biāo)記的待測樣品分子進(jìn)行雜交，通過檢測每個(gè)探針分子的雜交信號強(qiáng)度從而獲得待測樣品分子的數(shù)量和序列信息[38]。現(xiàn)已經(jīng)有商品化檢測流產(chǎn)衣原體的DNA微陣列產(chǎn)品。Borel N等[39]應(yīng)用DNA微陣列技術(shù)對339份臨床樣本進(jìn)行了檢測，結(jié)果顯示，此技術(shù)適用于流產(chǎn)衣原體的臨床檢測。Pospischil A等按照Borel的描述檢測出塞倫蓋蒂平原的野生哺乳動(dòng)物存在流產(chǎn)衣原體的感染。現(xiàn)已經(jīng)有商品化檢測流產(chǎn)衣原體的DNA微陣列產(chǎn)品。Koschwanez M等應(yīng)用商品化DNA微陣列產(chǎn)品檢測豬流產(chǎn)胎兒，檢測出了流產(chǎn)衣原體的存在。但該技術(shù)可以高通量的檢測標(biāo)本材料，但不能對待檢測基因在多細(xì)胞類型組織中的精確定位進(jìn)行判斷。

3.3.6 限制性片段長度多態(tài)性分析法 作為第一代分子生物學(xué)標(biāo)記的限制性片段長度多態(tài)性分析(restricted fragment length polymorphisms，RFLP)是發(fā)展最早的DNA標(biāo)記技術(shù)。RFLP是指基因型之間限制性片段長度的差異，這種差異是由限制性酶切位點(diǎn)上堿基的插入、缺失、重排或點(diǎn)突變所引起的。Laroucau K等[40]應(yīng)用RFLP成功區(qū)分了鸚鵡熱衣原體1B疫苗株和野生株。Meijer A等[41]應(yīng)用RFLP對肺炎衣原體、沙眼衣原體、鸚鵡熱衣原體進(jìn)行了鑒定。該技術(shù)結(jié)果可靠，操作穩(wěn)定，但實(shí)驗(yàn)操作繁瑣，檢測周期長，成本高昂，不適于大規(guī)模的分子實(shí)驗(yàn)。

4 衣原體的防治

制定合理的飼養(yǎng)管理程序并嚴(yán)格執(zhí)行是預(yù)防流產(chǎn)衣原體的首選方案。預(yù)防手段可以為養(yǎng)殖業(yè)挽回巨大的經(jīng)濟(jì)損失。當(dāng)農(nóng)場發(fā)生羊衣原體病時(shí)，可用四環(huán)素族抗生素注射治療，也可將其混在飼料里。

4.1 衣原體預(yù)防

4.1.1 飼養(yǎng)管理 合理的飼養(yǎng)管理程序也是預(yù)防動(dòng)物衣原體的有效手段之一。有調(diào)查數(shù)據(jù)顯示,在對OEA農(nóng)場進(jìn)行的診斷中檢測出了其他的流產(chǎn)性的傳染源(弓形蟲、彎曲菌、沙門菌和李斯特菌)[42]。這體現(xiàn)了農(nóng)場飼養(yǎng)管理的漏洞與生物安全意識的薄弱。

農(nóng)場應(yīng)堅(jiān)持自繁自養(yǎng)的原則，不引進(jìn)發(fā)病地區(qū)的家畜，定期進(jìn)行疫苗接種。當(dāng)需要引種時(shí)，應(yīng)采取隔離飼養(yǎng)，觀察家畜無病理表現(xiàn)及衣原體檢測陰性后才可混飼。加強(qiáng)農(nóng)場檢疫，及時(shí)檢測并淘汰發(fā)病畜和陽性畜。病死畜、流產(chǎn)胎兒、污染物應(yīng)無害化處理，污染場地進(jìn)行徹底的消毒。

4.1.2 疫苗接種 20世紀(jì)70年代，我國學(xué)者楊學(xué)禮等研究羊衣原體病原特性和疫苗免疫機(jī)制。在青海從綿羊流產(chǎn)的病料中分離到衣原體，經(jīng)過12年的不懈努力，最后研制成功了羊流產(chǎn)衣原體滅活苗。為控制我國羊流產(chǎn)衣原體病發(fā)揮了重要的作用。隨后，中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所研究人員進(jìn)一步在抗原純化、乳化工藝、佐劑選擇等方面進(jìn)行了很大的改進(jìn)。在青海、甘肅、新疆等地推廣改進(jìn)后的疫苗，取得了很好的臨床效果[43]。注射懷孕綿羊和山羊,均很安全,最小有效免疫量為1 mL；免疫持續(xù)期和有效保存期均在2年以上[44]。在國外，動(dòng)物衣原體病的防控以弱毒疫苗為主。Rodolakis A等[45]利用物理誘變的方法獲得了2株溫度敏感型衣原體突變株，分別是耐受35℃的衣原體IB株和39.5℃的衣原體IH株。但弱毒疫苗可能在某些情況下會導(dǎo)致流產(chǎn)[10]。這是因?yàn)槿醵疽呙缭谀撤N情況下會發(fā)生毒力返強(qiáng)或變異。所以在使用預(yù)防OEA弱毒疫苗時(shí)要對疫苗進(jìn)行充分的預(yù)防效力檢測。流產(chǎn)衣原體感染的農(nóng)場接種弱毒疫苗后，疫苗呈現(xiàn)出治療的作用[46]。但該現(xiàn)象需要進(jìn)一步的研究才能明確疫苗的治療作用。

流產(chǎn)衣原體疫苗的免疫機(jī)制與人工感染處于恢復(fù)期的羊免疫機(jī)制相似[13]。 流產(chǎn)衣原體的體液免疫在接種疫苗羊和自然感染羊中均可被觀察到，從而無法區(qū)分接種疫苗羊和自然感染羊[11]。未來成功的抗OEA的疫苗應(yīng)該可以引發(fā)與保護(hù)性免疫相關(guān)的IFN -γ，并且可以區(qū)別于自然感染的抗體譜，不會引起疾病或過度的炎癥反應(yīng)。流產(chǎn)衣原體在綿羊細(xì)胞內(nèi)建立持續(xù)感染的能力反映了適應(yīng)宿主和病原體復(fù)雜相互作用。此階段的感染引起的免疫反應(yīng)顯然不是保護(hù)性的，而產(chǎn)生的流產(chǎn)后的免疫反應(yīng)是有保護(hù)性的。一個(gè)新的OEA疫苗的目標(biāo)是模仿或改進(jìn)這種保護(hù)性反應(yīng)。

4.2 衣原體病的治療

流產(chǎn)衣原體是OEA的病原且為革蘭陰性病原體，現(xiàn)歸屬細(xì)菌范疇，所以抗生素治療對其是有效的。如果感染發(fā)生在產(chǎn)羔季節(jié)早期，抗生素可以降低OEA的損失，尤其是在產(chǎn)羔季節(jié)特別有效的。但是由于獸藥殘留的問題，所以長期使用抗生素對OEA進(jìn)行防治并不是一個(gè)理想的方法[47]。有研究發(fā)現(xiàn)，抗生素不能應(yīng)用于接種活疫苗的羊群，否則會降低疫苗的免疫活性[47]。治療措施不同于預(yù)防措施。雖然抗生素可以通過降低衣原體在群內(nèi)的傳播來減少傳染，但是過度的依賴抗生素會產(chǎn)生耐藥性，而且不符合現(xiàn)在的健康潮流。并且抗生素治療的母羊在分娩期仍然會排出EB[7]。

現(xiàn)如今治療措施的風(fēng)險(xiǎn)性重點(diǎn)在于抗生素的耐藥性。雖然流產(chǎn)衣原體對四環(huán)素的耐藥性并沒有報(bào)道，但在豬體內(nèi)分離到的豬衣原體已對四環(huán)素產(chǎn)生抗藥性[48]。目前，流產(chǎn)衣原體在動(dòng)物體內(nèi)的耐藥性依然很低，但是有研究發(fā)現(xiàn)了耐藥性在選擇性抗生素壓力下點(diǎn)突變的積累進(jìn)化[49]?，F(xiàn)在公眾十分關(guān)注食品鏈中的藥品殘留問題，長期使用抗生素的牲畜對消費(fèi)者來說是巨大的健康問題。

抗生素治療周期很長。正如前面提到的，衣原體持續(xù)感染是其常見特征之一。在實(shí)驗(yàn)誘導(dǎo)的體外也觀察到復(fù)制緩慢的RB可以引起細(xì)胞內(nèi)持久性感染[50]?；旌闲愿腥就饧映掷m(xù)性慢性感染需要更長的治療時(shí)間，甚至可能對抗生素治療無效，這容易和遺傳獲得耐藥性基因發(fā)生混淆[44]?，F(xiàn)有研究稱抗生素可能會引發(fā)免疫抑制，理由是抗生素限制感染的進(jìn)展，降低免疫系統(tǒng)的防御能力，反過來會導(dǎo)致再次感染的機(jī)率上升[51]。 因此，應(yīng)合理使用抗生素，杜絕濫用抗生素，尋找對衣原體敏感性高的抗生素并結(jié)合合理的治療方案，延緩抗藥性的產(chǎn)生。

5 小結(jié)

動(dòng)物衣原體病近年來在我國流行較為嚴(yán)重，尤其是羊、奶牛、牦牛衣原體導(dǎo)致的流產(chǎn)，嚴(yán)重阻礙了養(yǎng)羊產(chǎn)業(yè)和養(yǎng)牛產(chǎn)業(yè)的進(jìn)一步發(fā)展。我國科學(xué)家在20世紀(jì)80年代制備出衣原體相應(yīng)的診斷試劑和滅活疫苗，為控制我國動(dòng)物衣原體病的蔓延發(fā)揮了非常重要的作用。試驗(yàn)證明流產(chǎn)衣原體滅活疫苗可以為動(dòng)物提供非常好的保護(hù)。但是雞胚或細(xì)胞生產(chǎn)的方式不符合現(xiàn)在疫苗生產(chǎn)的工藝要求，無法達(dá)到產(chǎn)業(yè)化、機(jī)械化。因此，流產(chǎn)衣原體滅活疫苗的生產(chǎn)工藝還需進(jìn)一步的改善。

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Progress onChlamydiaabortus

ZHANG Zhi-jun,ZHOU Ji-zhang

(StateKeyLaboratoryofVeterinaryEtiologicalBiology/LanzhouVeterinaryResearchInstitute,ChineseAcademyofAgriculturalScience,Lanzhou,Gansu,730046,China)

Chlamydiaceae,a family of obligate intracellular Gram negative bacteria that once included one genus,Chlamydia.TheChlamydiaabortusis one of the most common pathogens that can threat sheep industry seriously.Chlamydia abortion can not only infecte sheep,but also can cause of sheep abortion,stillbirth,even can infect human being.In the aspect of etiology,molecular biology technology with its rapid and relative sensitivity advantages has been developed rapidly,however,cell isolation and culture are the gold standard for the diagnosis ofChlamydiaabortus.In the area of prevention,vaccine is an ideal measure to preventChlamydiaabortion.Chlamydiaabortusinactivated vaccine has obtained a national new drug certificate and can provide effective immune protection for sheep.Rational use of antimicrobials and vaccines can provide good protection for the sheep.

sheep；Chlamydiaabortus；diagnosis；treatment

2016-09-21

甘肅省科技支撐計(jì)劃項(xiàng)目(1504NKCA054)

張志君(1993-)，女，河北衡水人，碩士研究生，主要從事動(dòng)物疫苗及分子免疫學(xué)研究。

S852.852.67

A

1007-5038(2017)04-0102-06

*通訊作者