牛卵母細(xì)胞及著床前胚胎發(fā)育的蛋白質(zhì)組學(xué)研究進(jìn)展

濮黎萍 陳富美 趙秀玲 王煥景 候振 徐壯壯 張鵬飛 張明

（廣西大學(xué)動(dòng)物繁殖研究所 亞熱帶農(nóng)業(yè)生物資源保護(hù)與利用國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，南寧 530004）

牛卵母細(xì)胞及著床前胚胎發(fā)育的蛋白質(zhì)組學(xué)研究進(jìn)展

濮黎萍 陳富美 趙秀玲 王煥景 候振 徐壯壯 張鵬飛 張明

（廣西大學(xué)動(dòng)物繁殖研究所 亞熱帶農(nóng)業(yè)生物資源保護(hù)與利用國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，南寧 530004）

蛋白質(zhì)組學(xué)作為一種能夠全景式展示特定生物學(xué)過程的蛋白質(zhì)表達(dá)譜的高通量研究手段，正被應(yīng)用到越來越多的研究領(lǐng)域。牛的卵子發(fā)生以及著床前胚胎的生長發(fā)育都離不開蛋白質(zhì)的一系列變化，通過蛋白質(zhì)組學(xué)的研究手段可對牛卵母細(xì)胞成熟以及胚胎發(fā)育分子機(jī)制進(jìn)行研究。前人通過構(gòu)建成熟前后的卵母細(xì)胞或不同時(shí)期的著床前胚胎等的蛋白質(zhì)組表達(dá)譜，來獲得與卵母細(xì)胞成熟相關(guān)的標(biāo)志蛋白，并對這些標(biāo)志物進(jìn)行驗(yàn)證和分析，將有利于理解牛卵母細(xì)胞成熟、體外受精及著床前胚胎發(fā)育的分子機(jī)制，為提高牛卵母細(xì)胞的成熟率以及胚胎的發(fā)育率及提高牛繁殖率等奠定基礎(chǔ)。主要從雙向聚丙烯酰胺凝膠電泳、色譜技術(shù)以及質(zhì)譜技術(shù)等蛋白質(zhì)組學(xué)研究手段為切入點(diǎn)，對蛋白質(zhì)組學(xué)在牛卵母細(xì)胞和著床前胚胎發(fā)育過程中的研究進(jìn)展進(jìn)行綜述，為進(jìn)一步研究牛卵母細(xì)胞及附植前胚胎提供參考。

蛋白質(zhì)組；卵母細(xì)胞；著床前胚胎

哺乳動(dòng)物卵原細(xì)胞的增殖和卵母細(xì)胞的形成均是在胎兒娩出前或者娩出后不久完成的［1］。牛的卵原細(xì)胞增殖大多會在胎兒期的前半期完成。卵原細(xì)胞經(jīng)過最后一次有絲分裂得到一個(gè)初級卵母細(xì)胞（Primary oocyte），初級卵母細(xì)胞經(jīng)發(fā)育調(diào)控后進(jìn)行成熟分裂，并在初情期到來之前一直停留在第一次減數(shù)分裂的雙線期（MetaphaseI，MI）［2］。一般通過激素作用卵母細(xì)胞才能恢復(fù)分裂，經(jīng)排卵與減數(shù)第一次分裂后靜止在減數(shù)第二次分裂中期減數(shù)分裂中期（MetaphaseII，MII），直到精子、化學(xué)或者物理的刺激才能完成減數(shù)第二次分裂，同時(shí)在卵母細(xì)胞生長過程中已完成了對卵母細(xì)胞成熟、受精以及啟動(dòng)受精卵發(fā)育的相關(guān)RNA和蛋白質(zhì)的合成［3-7］。

研究人員往往從基因組水平、轉(zhuǎn)錄組水平以及某個(gè)特定的蛋白質(zhì)來對卵母細(xì)胞或者著床前胚胎進(jìn)行研究。然而有研究證明，卵母細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄水平和蛋白質(zhì)表達(dá)水平呈現(xiàn)非線性關(guān)系，而且蛋白質(zhì)的豐度較低時(shí)表現(xiàn)的更為明顯［8］。蛋白質(zhì)擔(dān)任著生命活動(dòng)主要承擔(dān)者以及體現(xiàn)者的角色，且具有種類多、功能與性質(zhì)各異等特點(diǎn)。因此在對卵母細(xì)胞以及著床前胚胎進(jìn)行研究時(shí)，有必要運(yùn)用蛋白質(zhì)組學(xué)對其進(jìn)行蛋白質(zhì)表達(dá)水平的研究。這一定程度的推動(dòng)了人們對卵子發(fā)生以及著床前胚胎發(fā)育機(jī)理的了解。

澳大利亞學(xué)者Wilkins等［9］于1994年首次定義了蛋白質(zhì)組（Proteome），它是指一個(gè)基因組、一個(gè)細(xì)胞或者組織表達(dá)的全部蛋白質(zhì)［9-10］。在21世紀(jì)這個(gè)蛋白質(zhì)組學(xué)時(shí)代，蛋白質(zhì)組學(xué)也成為了研究熱點(diǎn)。蛋白質(zhì)組學(xué)旨在大規(guī)模水平上對蛋白質(zhì)的特征進(jìn)行研究，其包括蛋白之間的相互作用、翻譯后修飾以及蛋白表達(dá)水平等，從而從蛋白質(zhì)組水平上了解細(xì)胞的各種生命活動(dòng)過程。本文簡單的綜述了一些常用的蛋白質(zhì)研究技術(shù)，以及目前牛卵母細(xì)胞和附植前胚胎蛋白質(zhì)組的研究進(jìn)展，旨為后續(xù)進(jìn)一步的研究提供參考［11-12］。

1 蛋白質(zhì)組學(xué)常用的研究技術(shù)

分析研究蛋白質(zhì)組必定會涉及到蛋白的分離、蛋白的純化、蛋白的定性和蛋白的定量等研究技術(shù)。蛋白質(zhì)組學(xué)研究的常用技術(shù)有如下幾個(gè)。

1.1 雙向聚丙烯酰胺凝膠電泳

O’farrell和Klose在1975年建立了雙向聚丙烯酰胺凝膠電泳（Two-dimensional polyacrylamide gel electrophoresis，2D-PAGE）。2D-PAGE是依據(jù)蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)和分子大小來將蛋白質(zhì)進(jìn)行分離的［13］。2D-PAGE的優(yōu)勢在于它可以一次性分離上千種蛋白質(zhì)，分辨率高，可更直觀的獲得蛋白質(zhì)等電點(diǎn)、表達(dá)豐度的相對量及相對分子量等這些結(jié)果，所以2D-PAGE也是蛋白組分析的主要手段之一［14］。但是2D-PAGE仍存在眾多的不足，包括上樣量要求較多，對極酸性的、極堿性的、低豐度蛋白以及高疏水性蛋白分離不理想等［15-17］。

1.2 色譜技術(shù)

色譜法是利用樣品中各組分溶于流動(dòng)相后，再與固定相發(fā)生離子、親和吸附等相互作用，從而使各組分從固定相中出來的時(shí)間不同，最終達(dá)到分離的目的。從流動(dòng)相的物理狀態(tài)分，色譜法主要包括液相色譜法（Liquid chromatography，LC）與氣相色譜法（Gas chromatography，GC）。LC又可分為液液、液固及超臨界流體色譜法，其中液液色譜法由于流動(dòng)相及固定相的極性不同又將其區(qū)分為正相與反相液相色譜法。正相主要是將極性較強(qiáng)與中等的化合物分離，而反相主要是將極性較弱與非極性化合物分離。GC不能用于分析大部分熱穩(wěn)定性差與金屬鹽類的物質(zhì)，因此常常借助LC尤其是高效液相色譜法進(jìn)行分析［18］。

高效液相色譜（High performance liquid chromatography，HPLC）是在液相色譜法上輔以靈敏度高的檢測器、高效固定相、高壓泵及計(jì)算機(jī)技術(shù)的運(yùn)用，具有高速、高效、高靈敏及高自動(dòng)化的優(yōu)勢，可用于分離分析熱穩(wěn)定性差、沸點(diǎn)高以及分子量大的部分無機(jī)物與大多有機(jī)物，也正可以填補(bǔ)氣相色譜法的弊端。但是在檢測器的檢查范圍、靈敏度與分離效率等方面，特別是在對易揮發(fā)物質(zhì)的分析及氣體的分析方面，GC更加優(yōu)于HPLC［18-20］。

多維液相分離系統(tǒng)是將幾種分離原理特性不同的液相分離方法優(yōu)化并結(jié)合在一起，具有分辨率高、高通量、重復(fù)性好、快速及自動(dòng)化高等優(yōu)勢［19］。多維液相分離系統(tǒng)常常與質(zhì)譜技術(shù)共同使用，達(dá)到更好的對蛋白質(zhì)組進(jìn)行分離、分析及鑒定［18-21］。

1.3 質(zhì)譜

1906年的諾貝爾物理學(xué)獎(jiǎng)得主Thomson打下了質(zhì)譜分析的基石［22-23］。質(zhì)譜是將離子化的蛋白分子經(jīng)過磁場或者電場后，依據(jù)其質(zhì)荷比不同來確定蛋白質(zhì)或者肽段的分子量［24］。質(zhì)譜的優(yōu)勢在于它自動(dòng)化高、快速、重復(fù)性好及靈敏等。因此，質(zhì)譜成為了鑒定蛋白質(zhì)的主要技術(shù)［25］。

比較常用的質(zhì)譜技術(shù)主要有電噴霧電離質(zhì)譜（Electrospray ionization mass spectrometry，ESI-MS）及電離飛行時(shí)間質(zhì)譜（Matrix-assisted laser desorption/ionization time of flight mass spectrometry，MALDI-TOF MS）等，這兩種技術(shù)均可以在離子化時(shí)基本避免樣品分子的離子碎片產(chǎn)生，使其本身的化學(xué)結(jié)構(gòu)得以保持［26］。液態(tài)樣品進(jìn)行分析時(shí)主要使用ESI-MS，且常將其與串聯(lián)質(zhì)譜一起使用［27］。串聯(lián)質(zhì)譜被用來測定氨基酸序列以及鑒定翻譯后蛋白質(zhì)的修飾位點(diǎn)［28］。MALDI-TOF MS主要可以同時(shí)分析成千上百的肽段質(zhì)量指紋圖譜，且自動(dòng)化高，不用純化蛋白質(zhì)，所以在目前鑒定分析蛋白方面最常用［28］。

質(zhì)譜多反應(yīng)檢測技術(shù)（Multiple reaction monitoring，MRM）是比較前沿的質(zhì)譜分析方法，是由單反應(yīng)監(jiān)測技術(shù)演變過來的，MRM技術(shù)是在假定或者已知的反應(yīng)離子信息的基礎(chǔ)上，將不符合規(guī)則的離子信號干擾去除并對符合規(guī)則的離子信號進(jìn)行記錄，達(dá)到有目的性地選擇數(shù)據(jù)進(jìn)行質(zhì)譜信號的采集，最后經(jīng)過對數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析，進(jìn)而得到質(zhì)譜的定量信息［29-30］。質(zhì)譜MRM技術(shù)具有高重復(fù)性、高靈敏度、高準(zhǔn)確度以及高特異性等優(yōu)點(diǎn)，成為了目標(biāo)蛋白進(jìn)行定量分析的重要技術(shù)手段［31］。

2 牛卵母細(xì)胞蛋白質(zhì)組在發(fā)育過程中的研究進(jìn)展

2004年，Coenen等［32］使用雙向凝膠電泳（Twodimensional electrophoresis，2-DE）技術(shù)研究牛卵母細(xì)胞體外成熟過程中的蛋白質(zhì)合成。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，牛卵母細(xì)胞在體外成熟的過程中，蛋白質(zhì)合成有3種主要模式：0-4 h的成熟初期，4-16 h的生發(fā)泡破裂（Germinal vesicle breakdown，GVBD）向MI轉(zhuǎn)變期，16-28 h的MI期結(jié)束后。在卵母細(xì)胞的成熟第4-8 h蛋白質(zhì)合成效率較高，并一直持續(xù)至MI期（8-12 h），然后合成率下降，最后保持相對穩(wěn)定。卵母細(xì)胞成熟初期有一半的蛋白質(zhì)開始合成，有許多與GVBD和MII期的維持相關(guān)的新蛋白分別在4-8 h和16-12 h出現(xiàn)。有一些蛋白與受精也相關(guān)，而且15%“管家蛋白”家族的蛋白在0-28 h這整個(gè)成熟過程中一直在合成，它們的作用主要是保持卵母細(xì)胞的功能及其結(jié)構(gòu)。

2006年，Massicotte等［33］利用2-DE、MALDITOF和MS/MS技術(shù)對牛卵母細(xì)胞進(jìn)行了相關(guān)的研究。實(shí)驗(yàn)結(jié)果獲得蛋白點(diǎn)共550個(gè)，并發(fā)現(xiàn)卵母細(xì)胞在成熟過程中發(fā)生磷酸化修飾的蛋白有30%-50%，其中在培養(yǎng)過程中有4種蛋白表達(dá)變化顯著，包括細(xì)胞周期蛋白E2、硫氧還蛋白過氧化物酶、微管蛋白β鏈以及蛋白二硫化合物異構(gòu)酶，且細(xì)胞周期蛋白E2表達(dá)下調(diào)，硫氧還蛋白過氧化物酶在磷酸化修飾后失活。而胞內(nèi)過氧化物水平的變化可能是由于這些蛋白表達(dá)的改變而引起的，因此細(xì)胞周期蛋白E2與硫氧還蛋白過氧化物酶可當(dāng)作卵母細(xì)胞減數(shù)分裂成熟的標(biāo)志分子。

2007年，Memili等［34］利用LC-MS/MS技術(shù)研究了牛的顆粒細(xì)胞與未成熟卵母細(xì)胞的蛋白質(zhì)組。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，顆粒細(xì)胞中鑒定得到4 395個(gè)蛋白，而未成熟卵母細(xì)胞中鑒定得到1 092個(gè)蛋白，而且有858個(gè)蛋白是顆粒細(xì)胞與未成熟卵母細(xì)胞所共有的，該研究使5 360個(gè)假設(shè)的蛋白質(zhì)得到了第一次驗(yàn)證，并第一次全面的分析了牛的顆粒細(xì)胞與未成熟卵母細(xì)胞的蛋白組。

2010年，Peddinti等［35］利用差異洗滌分餾和多維色譜-串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)對牛的顆粒細(xì)胞與未成熟卵母細(xì)胞進(jìn)行了蛋白質(zhì)組研究。研究結(jié)果顯示，顆粒細(xì)胞共鑒定得到1 247種蛋白，而未成熟卵母細(xì)胞共鑒定得到811種蛋白，兩者表達(dá)差異顯著的蛋白一共371種。經(jīng)過分析可知，顆粒細(xì)胞中的蛋白主要參與代謝、信號傳導(dǎo)以及分子運(yùn)輸?shù)冗^程。該實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明了顆粒細(xì)胞可為卵母細(xì)胞傳遞特異的信號用以維持卵母細(xì)胞的生長以及成熟。

2012年，劉振方等［36］利用2-DE研究了成熟前后的水牛卵母細(xì)胞差異蛋白質(zhì)組。實(shí)驗(yàn)結(jié)果檢測出300種蛋白以及差異蛋白質(zhì)共27種，并有8種蛋白被鑒定，其中RREB1、NMP2、HSC71、α-IgG以及HSP60在MII期表達(dá)上調(diào)，MVP、GEMIN8以及GCNT2則在MII期表達(dá)下調(diào)，為水牛卵母細(xì)胞成熟發(fā)育提供了潛在的標(biāo)記物。

2015年，陳富美等［37］利用LC-MS/MS研究了GV期和MII期的水牛卵母細(xì)胞蛋白表達(dá)譜。實(shí)驗(yàn)結(jié)果共檢測出574個(gè)蛋白，其中有476個(gè)蛋白組成細(xì)胞成分，487個(gè)蛋白有明確的分子功能，有490個(gè)蛋白跟生物學(xué)進(jìn)程有關(guān)，為此后研究水牛蛋白質(zhì)組學(xué)奠定了基礎(chǔ)。

2016年，陳凌聲等［38］利用2-DE與聚丙烯酰胺凝膠電泳聯(lián)合反相液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)對水牛GV期與MII期的卵母細(xì)胞蛋白質(zhì)組進(jìn)行了研究。實(shí)驗(yàn)結(jié)果分別鑒定得到647個(gè)蛋白（GV期）與570個(gè)蛋白（MII期），其中兩時(shí)期共有蛋白為414個(gè)。經(jīng)分析發(fā)現(xiàn)共有蛋白主要集中在能量代謝通路上，可能是為保證完成減數(shù)分裂的原因，而需要在成熟過程中具有一個(gè)較高的能量代謝水平。GV期階段特異性蛋白主要存在蛋白酶體、氧化磷酸化和核糖體等KEGG通路上，在細(xì)胞成熟過程中蛋白酶體發(fā)揮著舉足輕重的作用，且在GV期的細(xì)胞蛋白合成水平和氧化磷酸化都較高。MII期階段特異性蛋白主要參與氨基糖代謝與DNA復(fù)制等KEGG通路，可能是為后續(xù)生長發(fā)育做準(zhǔn)備。該實(shí)驗(yàn)為研究水牛卵母細(xì)胞奠定了基礎(chǔ)。

同年，Chen等［39］利用iTRAQ（Isobaric tags for relative and absolute quantitation）技術(shù)對GV期與MII期的水牛卵母細(xì)胞的蛋白質(zhì)譜進(jìn)行了研究。實(shí)驗(yàn)結(jié)果鑒定出3 763個(gè)蛋白，是目前得到的最大的水牛卵母細(xì)胞蛋白組。其中GV期卵母細(xì)胞與發(fā)育成熟的MII期的卵母細(xì)胞差異表達(dá)的蛋白有173個(gè)，發(fā)育成熟與沒能力成熟的卵母細(xì)胞差異表達(dá)的蛋白有146個(gè)。而且發(fā)育成熟的卵母細(xì)胞表達(dá)上調(diào)的蛋白同GV期和沒能力成熟的卵母細(xì)胞相比，主要參與染色體分配、蛋白運(yùn)輸以及氧化磷酸化等。此實(shí)驗(yàn)為后續(xù)了解水牛卵母細(xì)胞潛在的分子機(jī)理提供了有價(jià)值的數(shù)據(jù)，而且所得到的蛋白也可作為水牛卵母細(xì)胞體外成熟發(fā)展的潛在標(biāo)志。

3 牛著床前胚胎蛋白質(zhì)組在發(fā)育過程中的研究進(jìn)展

非常有限的牛著床前胚胎材料使得關(guān)于牛著床前胚胎蛋白組的研究結(jié)果屈指可數(shù)，但早在1989年就有人開始了牛著床前胚胎的研究。Frei等［40］利用1-DE技術(shù)與熒光顯影對牛的卵母細(xì)胞和著床前胚胎的蛋白質(zhì)合成進(jìn)行了分析。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)著床前胚胎在8-16細(xì)胞發(fā)育階段的蛋白質(zhì)合成模式變化顯著，且著床前胚胎的蛋白質(zhì)合成效率在卵母細(xì)胞到8-細(xì)胞期間平緩的下降，隨后再逐漸的上升至囊胚階段。研究人員后又利用放射性元素標(biāo)記尿苷來研究RNA的合成效率，結(jié)果證明蛋白質(zhì)合成受母源mRNA的調(diào)控直至8-細(xì)胞階段，后面的8-16細(xì)胞階段轉(zhuǎn)由合子基因調(diào)控蛋白質(zhì)合成，因此，該試驗(yàn)證實(shí)了8-16細(xì)胞階段合子基因轉(zhuǎn)錄被啟動(dòng)。

2006年，Massicotte等［33］利用2-DE技術(shù)對牛著床前胚胎蛋白質(zhì)表達(dá)模式進(jìn)行了研究。實(shí)驗(yàn)鑒定得到2-細(xì)胞期蛋白質(zhì)有291種，其中階段特異性蛋白70種；4-細(xì)胞期蛋白質(zhì)有373種，其中階段特異性蛋白83種；8-細(xì)胞期蛋白質(zhì)有252種，其中階段特異性蛋白28種。三時(shí)期共有蛋白質(zhì)有123種，且這123種蛋白質(zhì)被看作候選的母源性蛋白。后面研究者利用ALDI-TOF-MS技術(shù)鑒定出10種蛋白，其中大多數(shù)在卵巢或者卵子中已被研究過，但是存在卵母細(xì)胞中的E-FABP蛋白是新的候選母源性蛋白，且該蛋白是第一次被研究。此研究為母源-胚胎轉(zhuǎn)變過程中蛋白表達(dá)模式研究提供了有價(jià)值的研究數(shù)據(jù)，同時(shí)進(jìn)一步揭示了母源性蛋白質(zhì)的分子機(jī)理。

2012年，Demant［41］利用iTRAQ技術(shù)對不同發(fā)育階段牛胚胎的差異表達(dá)蛋白進(jìn)行了研究。實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，2-細(xì)胞與桑椹胚差異表達(dá)的蛋白有28種，且其中的胰島素生長因子2（Insulin growth factor 2，IGF2）mRNA結(jié)合蛋白與Y-box結(jié)合蛋白（Y-box binding protein 2，YBX2）等在2-細(xì)胞與桑葚胚中表達(dá)存在豐度差異，在桑椹胚和囊胚中跟翻譯與生物合成過程有關(guān)的蛋白質(zhì)表達(dá)差異顯著。該研究為胚胎基因組激活的分子機(jī)制奠定了基礎(chǔ)。

4 結(jié)語

牛為單胎動(dòng)物，繁殖周期長，自然繁殖力低。研究牛的繁殖性能以提高牛群的質(zhì)量及數(shù)量進(jìn)而滿足市場的需求，就必定會研究其卵母細(xì)胞。雖然國內(nèi)外許多研究者從重要基因、基因組及轉(zhuǎn)錄組等多個(gè)層面對牛的卵母細(xì)胞及著床前胚胎進(jìn)行了大量研究，但是對牛的卵母細(xì)胞與著床前胚胎的蛋白質(zhì)組進(jìn)行研究較少。

目前在研究牛卵母細(xì)胞和著床前胚胎的蛋白質(zhì)組方面仍存在許多的問題。首先，牛卵母細(xì)胞及胚胎材料有限，且收集細(xì)胞較困難。其次，目前牛的蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫尚不完善。第三，大量的低豐度蛋白質(zhì)不易被檢測到等。

隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，已實(shí)現(xiàn)微量甚至單個(gè)細(xì)胞蛋白質(zhì)組的研究，為牛的微量甚至單個(gè)卵母細(xì)胞或胚胎蛋白組研究奠定了基礎(chǔ)［42］。此外，利用先進(jìn)的技術(shù)研究成熟前后卵母細(xì)胞或不同時(shí)期著床前胚胎等的蛋白質(zhì)組，挑選跟卵母細(xì)胞成熟相關(guān)的標(biāo)志蛋白，將有利于理解牛卵母細(xì)胞成熟、體外受精以及著床前胚胎發(fā)育，進(jìn)而提高卵母細(xì)胞的成熟率以及胚胎的發(fā)育率等。

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Advances on the Proteomics of Bovine Oocyte and Preimplantation Embryo Development

PU Li-ping CHEN Fu-mei ZHAO Xiu-ling WANG Huan-jing HOU Zhen XU Zhuang-zhuang ZHANG Peng-fei ZHANG Ming
（State Key Laboratory for Conservation and Utilization of Subtropical Agro-Bioresources，Animal Reproduction Institute，Guangxi University，Nanning 530004）

Proteomics，as a high-throughput method for displaying protein expression profiles of specific biological processes in a panoramic view，is being applied in more and more research fields. Bovine oogenesis and development of preimplantation embryo are inseparable from a series of changes in protein，thus the molecular mechanism of bovine oocyte maturation and embryo development can be investigated by proteomics. By establishing the proteomic expression profiles of oocytes before and after maturation as well as preimplantation embryos in different stages，we obtained marker proteins related to oocyte maturation and further validated and analyzed these markers，benefiting to understand the molecular mechanism of bovine oocyte maturation，in vitro fertilization and preimplantation embryo development. It lays a foundation for improving the mature rate of bovine oocyte，the rate of embryonic development and the rate of bovine reproduction. In this paper，the progress of proteomics in the bovine oocytes and development of preimplantation embryos was reviewed from the methods of studying proteomics，such as two-dimensional polyacrylamide gel electrophoresis，chromatography and mass spectrometry. To provide reference for further study of bovine oocyte and preimplantation embrv.

proteome；oocyte；preimplantation embryo

10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2017-0404

2017-05-18

國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目（31460603），廣西水牛遺傳繁殖重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室開放課題（SNKF-2015-02）

濮黎萍，女，碩士研究生，研究方向：動(dòng)物蛋白質(zhì)組學(xué)；E-mail：1171728501@qq.com

張明，女，博士，研究方向：胚胎技術(shù)，動(dòng)物蛋白質(zhì)組學(xué)；E-mail：mingzhang@gxu.edu.cn

（責(zé)任編輯 李楠）