E-cad在低位直腸癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移裸鼠模型血清及移植瘤中的表達及其意義

艾斯克爾·吐拉洪，陳 凱，鄧大偉*

(1. 新疆醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院腫瘤中心，烏魯木齊 830000；2. 新疆醫(yī)科大學(xué)第五附屬醫(yī)院普外科，烏魯木齊 830000)

研究報告

E-cad在低位直腸癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移裸鼠模型血清及移植瘤中的表達及其意義

艾斯克爾·吐拉洪1，陳 凱2，鄧大偉2*

(1. 新疆醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院腫瘤中心，烏魯木齊 830000；2. 新疆醫(yī)科大學(xué)第五附屬醫(yī)院普外科，烏魯木齊 830000)

目的 探討裸鼠低位直腸癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移模型血清及移植瘤組織中E-鈣黏蛋白(E-cad)的表達情況，分析其在直腸癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移過程中的作用。方法 取對數(shù)生長期的人大腸癌細(xì)胞株SW480接種于裸鼠直腸黏膜下,建立裸鼠低位直腸癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移模型。120只裸鼠隨機分為3組，每組40只，A組(直腸癌模型組)采用二甲基肼注射+SW480種植，B組(二甲基肼對照組)采用二甲基肼注射，C組(空白對照組)不作任何處理。采用ELISA檢測血清E-cad的含量，采用Western blot法、RT-PCR法檢測種植瘤組織中E-cad蛋白及mRNA表達水平。結(jié)果 A組裸鼠的血清E-Cad含量為(19.48±1.25)mg/L,明顯高于B組裸鼠和C組裸鼠的血清E-Cad含量(2.36±0.18 mg/L和2.15±0.12 mg/L)(t=8.28，9.01，P< 0.05)。發(fā)現(xiàn)側(cè)方淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的裸鼠血清E-Cad含量，明顯高于未發(fā)現(xiàn)側(cè)方淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的裸鼠，差異有顯著性(t=10.28，P< 0.05)。A組裸鼠移植瘤組織中E-Cad蛋白的表達強度弱于B組和C組(t=9.81，7.69，P< 0.05)。A組中,有側(cè)方淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移發(fā)生的裸鼠移植瘤組織中E-Cad蛋白表達強度較未有側(cè)方淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移發(fā)生的裸鼠移植瘤組織中表達明顯減弱，差異有顯著性(t=9.36，P< 0.05)。A組裸鼠移植瘤組織中E-Cad mRNA 表達明顯下調(diào)，與B組和C組比較，有明顯的差異(P< 0.05)。A組中發(fā)現(xiàn)側(cè)方淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的裸鼠移植瘤組織中E-Cad mRNA表達強度明顯下調(diào)，與未發(fā)現(xiàn)側(cè)方淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的裸鼠比較，差異有顯著性(t=7.85，P< 0.05)。結(jié)論 血清E-cad的表達水平可能與直腸癌淋巴轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，同時直腸癌組織中E-Cad蛋白和mRNA表達減弱或缺失，導(dǎo)致癌細(xì)胞間粘附性降低，促進癌細(xì)胞獲得侵襲和轉(zhuǎn)移的能力。

直腸癌；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移；E-鈣黏蛋白；裸鼠

直腸癌的轉(zhuǎn)移侵襲是影響患者術(shù)后復(fù)發(fā)及生存率的關(guān)鍵因素，其是一個復(fù)雜演進的過程，與多種蛋白分子及基因相關(guān)。細(xì)胞黏附是癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移侵襲的一個重要步驟，E-鈣黏蛋白(E-cad)作為其中重要執(zhí)行分子，主要介導(dǎo)正常和腫瘤組織中細(xì)胞與細(xì)胞間的黏附過程[1]。目前研究資料表明，E-cad 表達在腫瘤組織中的表達與其發(fā)生浸潤轉(zhuǎn)移的幾率存在負(fù)相關(guān)性，即腫瘤組織中E-cad表達降低時，其介導(dǎo)的黏附作用相應(yīng)隨之減弱，致使腫瘤細(xì)胞能更容易脫離原發(fā)灶，同時相對血清中E-cad含量會相應(yīng)增高，與腫瘤轉(zhuǎn)移浸潤能力呈現(xiàn)正相關(guān)[2，3]。本研究選用人大腸癌細(xì)胞株SW480建立低位直腸癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移模型，檢測E-cad在裸鼠低位直腸癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移模型血清及移植瘤組織中的表達情況，探討其在直腸癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移過程中的可能作用機制。

1 材料和方法

1.1 材料

BALB/C-nu/nu雄性裸鼠120只，SPF級，購自新疆醫(yī)科大學(xué)動物實驗研究中心【SCXK(新)2011-0001】，鼠齡6～8周，體重18～22 g，分籠飼養(yǎng)于屏障系統(tǒng)的潔凈層流架內(nèi)【SYXK(新)2015-0002】。隨機分為3組，每組40只裸鼠，A組(直腸癌模型組)采用二甲基肼注射+人大腸癌細(xì)胞株SW480種植，B組(二甲基肼對照組)僅采用二甲基肼注射，C組(空白對照組)不作任何處理。

1.1.2 細(xì)胞來源

人大腸癌細(xì)胞株SW480(取自中科院上海細(xì)胞生物研究所)在含10%胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)，培養(yǎng)環(huán)境是37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱。

1.1.3 主要試劑

胎牛血清(FBS)購自杭州四季青公司，胰蛋白酶購自Sigma公司，RPMI-I64O培養(yǎng)基購自Gibco公司；小鼠E-cad酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)試劑盒分別購自Bender Medsystems公司；小鼠 E-Cad一抗及酶標(biāo)試劑盒(96孔)購自美國Santa Cruz公司。BCA法蛋白定量測定試劑盒購自武漢博士德生物工程技術(shù)有限公司。PCR 試劑盒購自美國Promega公司。

1.2 實驗方法

1.2.1 人大腸癌細(xì)胞株SW480的培養(yǎng)

光線從背后照過來，葉曉曉半躺在一張貴妃榻上，右手支著頭，左手順著身體輕輕撫在髖骨上，頭微揚。光線打在臉上，鍍上了一層柔和的小麥色光芒，身體的調(diào)子半明半暗，立體感很強，光潔如玉的身體因為青春和飽滿微微發(fā)出潤澤的光芒。

采用的培養(yǎng)基為含10%胎牛血清的RPMI-1640，培養(yǎng)箱的環(huán)境要求為：37℃、5%CO2，首先用0.25%胰酶對SW480細(xì)胞進行消化，收集并配置細(xì)胞懸液的濃度達1×106個/mL，備用。

1.2.2 裸鼠低位直腸癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移模型的建立

A組和B組裸鼠均采用二甲基肼注射液(生理鹽水配制，濃度為1%，pH值為6.5 ～ 7.0)進行頸部皮下注射，注射劑量和時間：30 mg/kg，1次/周，至第8周末。B組裸鼠完成8周的注射后分籠飼養(yǎng)。A組裸鼠繼續(xù)進行接種實驗：裸鼠在進行實驗前禁食12 h，10%水合氯醛(0.3 mL∶100 g)腹腔內(nèi)注射進行麻醉裸鼠，消毒會陰、肛門以及直腸腔，將直腸黏膜外翻，以顯露于擴張的肛門口外，取配置好備用的大腸癌細(xì)胞株SW480懸液0.2 mL，在裸鼠背側(cè)肛門緣上2 mm處，緩慢注射細(xì)胞懸液于直腸黏膜組織下。實驗后A組裸鼠分籠飼養(yǎng),繼續(xù)禁食禁水6 h后給予高能量飲食。C組裸鼠不作任何處理。對三組裸鼠分別于制模實驗完成后第6周時，各取10只裸鼠采用頸部脫曰法處死，處死前取裸鼠心臟血6 mL，處死后切開腹腔，切取A組裸鼠的移植瘤組織及周圍組織(包括側(cè)方淋巴結(jié)組織，對于側(cè)方淋巴結(jié)清掃范圍為自直腸筋膜臟層進行分離、膀胱下筋膜內(nèi)側(cè)骨盆神經(jīng)叢和髂血管之間以及髂內(nèi)血管和盆壁及閉孔筋膜之間)，而對B組和C組的裸鼠，則切取相對應(yīng)位置的直腸及周圍組織(包括側(cè)方淋巴結(jié)組織)。

1.2.3 血清E-Cad含量檢測

各組裸鼠血清E-Cad含量檢測采用ELISA雙抗夾心法進行檢測，方法嚴(yán)格按操作說明書進行，設(shè)標(biāo)準(zhǔn)孔8 孔，稀釋血清標(biāo)本，配置底物及標(biāo)準(zhǔn)液，每孔中加入第一抗體工作液50 μL，將反應(yīng)板充分混勻后置37℃ 60 min，洗板后每孔加酶標(biāo)抗體工作液100 μL，將反應(yīng)板置37℃ 30 min，洗板后每孔加入底物工作液100 μL，置37℃暗處反應(yīng)5 ～ 15 min。于492 nm處測吸光值并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)曲線圖得出E-Cad含量。

1.3 Western blot法檢測移植瘤組織中E-鈣黏蛋白的表達

將各組裸鼠的部分移植瘤組織浸入生理鹽水中，經(jīng)研磨成為細(xì)胞懸液，收集細(xì)胞，將400 μL含PMSF的裂解液加入細(xì)胞培養(yǎng)板上，培養(yǎng)板置于冰上作用30 min，使細(xì)胞完全裂解，提取細(xì)胞株的總蛋白，用Bradford法測定蛋白濃度并計算出標(biāo)準(zhǔn)曲線方程，然后進行Western印跡檢測，圖片掃描后用Quatity One 軟件分析條帶灰度值。

1.4 RT-PCR法檢測移植瘤組織中E-鈣黏蛋白的表達

按TRIzol總RNA提取試劑說明書進行操作，采用Trizol一步法提取各組裸鼠腫瘤組織的總RNA，并經(jīng)紫外分光光度計測定，計算提取物RNA濃度，按照逆轉(zhuǎn)錄試劑盒合成cDNA，設(shè)計DJ-1和PTEN mRNA引物，各引物均由上海生工合成。RT-PCR反應(yīng)條件為40℃ 30 min，94℃ 1 min，94℃ 15 s，50℃ 1 min，72℃ 1 min，取cDNA 1 μg，10× buffer 2 μL，MgCl24 μL，10 mmol/L dNTPs 2 μL，引物100 ng，TagDNA多聚酶 1 U，總體系20 μL，將PCR擴增之后的產(chǎn)物經(jīng)1.5%瓊脂糖凝膠電泳，應(yīng)用Gel-pro凝膠分析軟件對電泳譜帶mRNA進行基因表達差異分析。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 11.0統(tǒng)計分析軟件進行數(shù)據(jù)處理。計量資料數(shù)據(jù)比較采用方差檢驗，組間比較采用t檢驗。

2 結(jié)果

2.1 各組裸鼠血清E-Cad含量檢測結(jié)果

A組裸鼠的血清E-Cad含量為(19.48±1.25)mg/L，明顯高于B組裸鼠和C組裸鼠的血清E-Cad含量(2.36±0.18 mg/L和2.15±0.12 mg/L)(t=8.28，9.01，P< 0.05)，而B組和C組之間比較，差異無顯著性(t=0.69，P> 0.05)。A組中發(fā)現(xiàn)6例出現(xiàn)側(cè)方淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，發(fā)現(xiàn)側(cè)方淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的裸鼠血清E-Cad含量(24.07±1.65 mg/L)，明顯高于未發(fā)現(xiàn)側(cè)方淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的裸鼠血清E-Cad含量(12.64±1.35 mg/L)，差異有顯著性(t=10.28，P< 0.05)。

2.2 Western blot法檢測各組裸鼠移植瘤組織中E-Cad蛋白的表達

A組裸鼠移植瘤組織中E-Cad蛋白的表達強度(0.42±0.09)弱于B組(1.56±0.18)和C組(1.25±0.32)(t=9.81，7.69，P< 0.05)，而B組和C組之間比較，E-Cad表達強度則差異無顯著性(t=1.29，P> 0.05)，見圖1。A組中，有側(cè)方淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移發(fā)生的裸鼠移植瘤組織中E-Cad蛋白表達強度(0.14±0.05)較未有側(cè)方淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移發(fā)生的裸鼠移植瘤組織中表達強度(0.62±0.15)明顯減弱，差異有顯著性(t=9.36，P< 0.05)，見圖2。

注：A：直腸癌模型組(A組)；B：二甲基肼對照組(B組)；C：空白對照組(C組)。圖1 各組裸鼠移植瘤組織中E-Cad蛋白表達Note. A: Rectal cancer model group (group A); B: Dimethylhydrazine control group (group B); C: Blank control group (group C).Fig.1 The protein expression of E-cad in the tumor tissues of nude mice

注：1：發(fā)生側(cè)方淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移；2：未發(fā)生側(cè)方淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。圖2 A組伴有側(cè)方淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移發(fā)生和未伴有轉(zhuǎn)移發(fā)生的裸鼠移植瘤組織中E-Cad蛋白表達比較Note. 1: Lateral lymph node metastasis; 2: Without lateral lymph node metastasis.Fig.2 Comparison of the protein expression of E-cad in the mice of group A with or without lateral lymph node metastasis

2.3 RT-PCR法檢測各組裸鼠移植瘤組織中E-Cad mRNA的表達

A組裸鼠移植瘤組織中E-Cad mRNA 表達明顯下調(diào)，與B組和C組比較，差異有顯著性(P< 0.05)，而B組和C組之間比較差異無顯著性(P> 0.05)，見圖3。A組中發(fā)現(xiàn)側(cè)方淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的裸鼠移植瘤組織中E-Cad mRNA表達強度明顯下調(diào)，與未發(fā)現(xiàn)側(cè)方淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的裸鼠比較，差異有顯著性(t=7.85,P< 0.05)，見圖4。

注：M：Maker；A：直腸癌模型組(A組)；B：二甲基肼對照組(B組)；C：空白對照組(C組)。圖3 各組裸鼠移植瘤組織中E-Cad mRNA的表達Note. M: Marker; A: Rectal cancer model group (group A); B: Dimethylhydrazine control group (group B); C: Blank control group (group C).Fig.3 mRNA expression of E-cad in the tumor tissues of nude mice

注：M: Maker；1：發(fā)生側(cè)方淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移；2：未發(fā)生側(cè)方淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。圖4 A組發(fā)生側(cè)方淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和未發(fā)生的裸鼠種植瘤組織中E-Cad mRNA表達比較Note. M: Marker; 1: With lateral lymph node metastasis; 2: Without lateral lymph node metastasis.Fig.4 The mRNA expression of E-cad in the mice of the group A with or without lateral lymph node metastasis

3 討論

惡性腫瘤的轉(zhuǎn)移浸潤過程中涉及多分子參與、多因素影響，包含了粘附能力下降、降解、新生血管生成、免疫逃逸等多個方面，其中腫瘤細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞之間粘附能力下降是發(fā)生轉(zhuǎn)移浸潤的第一步，而粘附分子則是這個過程中起重要作用的分子基礎(chǔ)，其表達是決定細(xì)胞間粘附行為的重要因素。E-Cad屬于粘附分子家族，是一種鈣依賴跨膜糖蛋白，在靜息狀態(tài)下，E-Cad在大多數(shù)上皮組織的細(xì)胞表面都有表達,其主要功能是通過鈣離子形成同源二聚體介導(dǎo)同型細(xì)胞黏附，從而參與胚胎發(fā)育以及正常組織中上皮細(xì)胞層的形成和維持。研究表明，E-Cad通過與連環(huán)蛋白之間的交聯(lián)性改變，細(xì)胞生長、分化的粘附信號隨之發(fā)生改變，細(xì)胞粘附力被降低，從而為腫瘤浸潤、轉(zhuǎn)移的發(fā)生提供了更好的機會[4]。血清可溶性sE-cad是細(xì)胞內(nèi)E-cad的降解物，最早是1983年Damsky等在人乳腺癌細(xì)胞MCF-7的無血清培養(yǎng)液中檢測到sE-cad[5]，之后在臨床的血清檢測結(jié)果中發(fā)現(xiàn)腫瘤患者的sE-cad含量要明顯高于正常人水平，推測血清E-cad含量的增高可能與腫瘤細(xì)胞內(nèi)E-cad釋放入血有關(guān)，提示sE-cad的血清指標(biāo)可以用于監(jiān)測腫瘤患者的預(yù)后。國內(nèi)外研究也發(fā)現(xiàn)前列腺癌、肺癌、胃癌患者血清中能監(jiān)測到較高水平的E-cad含量，腫瘤切除后患者血清E-cad水平迅速下降[6, 7]。

二甲基肼是目前公認(rèn)致大腸癌的較為特異致癌劑，主要在肝臟被氧化成甲基偶氮甲醇，與β-葡萄糖醛酸結(jié)合，在腸道細(xì)菌和腸黏膜上皮的β-葡萄糖苷酸酶作用下，氧化甲基偶氮甲醇又重新游離出來，代謝成終致癌物，導(dǎo)致大腸黏膜上皮癌變。本課題組采用二甲基肼預(yù)處理裸鼠，再經(jīng)肛門種植大腸癌細(xì)胞株SW480于直腸粘膜下，能夠縮短實驗建模時間，保證造模成功。本實驗成功建立了裸鼠低位直腸癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移模型，在此基礎(chǔ)上通過ELISA法檢測了裸鼠血清E-cad的表達水平，研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)A組裸鼠的血清E-Cad含量為(19.48±1.25)mg/L，明顯高于B組裸鼠和C組裸鼠的血清E-Cad含量(2.36±0.18 mg/L和2.15±0.12 mg/L)(t=8.28，9.01，P< 0.05)，而B組和C組之間比較，差異無顯著性(t=0.69，P> 0.05)。證明了成功制模的裸鼠血清中能檢測到較高水平的E-Cad表達，較正常裸鼠明顯增高，證明了血清E-cad含量的增高可能與癌細(xì)胞內(nèi)E-cad釋放入血有關(guān)這一推測，也進一步證明了E-cad在直腸癌的發(fā)生、生長過程中扮演著重要的角色。同時，本研究的A組中發(fā)現(xiàn)6例出現(xiàn)側(cè)方淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，發(fā)現(xiàn)側(cè)方淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的裸鼠血清E-Cad含量，明顯高于未發(fā)現(xiàn)側(cè)方淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的裸鼠，差異有顯著性(t=10.28，P< 0.05)，提示血清E-cad的表達水平可能與直腸癌淋巴轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，可作為一種新的監(jiān)測直腸癌患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的新分子學(xué)參考指標(biāo)。

E-cad是影響直腸癌發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的重要因素之一，影響腫瘤生長速度、浸潤深度、大小及癌細(xì)胞向遠處的轉(zhuǎn)移[8]。近年來對多腫瘤細(xì)胞和癌組織從分子水平上進行了較深入的研究，發(fā)現(xiàn)癌組織黏膜中E-cad表達與腫瘤浸潤之間存在負(fù)相關(guān)性，而當(dāng)E-cad 表達降低或缺失時，由介導(dǎo)的細(xì)胞黏附功能出現(xiàn)障礙，癌細(xì)胞之間的同質(zhì)性黏附功能減弱，癌細(xì)胞更易于脫離原發(fā)灶，從而增加癌細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移的幾率[9-11]。本研究在建立低位直腸癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移裸鼠模型的基礎(chǔ)上，檢測E-cad在裸鼠移植瘤組織中的蛋白和mRNA表達情況，結(jié)果顯示制模組裸鼠移植瘤組織中E-Cad蛋白和mRNA的表達強度均弱于二甲基肼對照組和空白對照組(P< 0.05)，進一步證明了E-Cad作為細(xì)胞之間的鈣依賴性跨膜糖蛋白參與了直腸癌的發(fā)生過程，可能在直腸癌細(xì)胞的分化、增殖的環(huán)節(jié)中發(fā)揮著重要的生物學(xué)效應(yīng)[12]。本研究進一步探討了發(fā)生側(cè)方淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移裸鼠和未發(fā)生側(cè)方淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移裸鼠之間E-Cad蛋白表達情況比較，結(jié)果發(fā)現(xiàn)制模組中發(fā)現(xiàn)側(cè)方淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的裸鼠移植瘤組織中E-Cad蛋白和mRNA表達強度均明顯減弱，與未發(fā)現(xiàn)側(cè)方淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的裸鼠比較，差異有顯著性(P< 0.05)。提示E-Cad基因及其蛋白表達的異常可能參與了直腸癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移發(fā)生發(fā)展過程，由于E-Cad表達的減弱或缺失，致使其介導(dǎo)的粘附系統(tǒng)在癌組織中失去其功效，從而降低癌細(xì)胞間粘附性，促進癌細(xì)胞遷移、浸潤及轉(zhuǎn)移，這對癌組織的浸潤及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的發(fā)生過程是具有重要促進作用的[13-15]。

綜上所述，本研究結(jié)果提示，血清E-cad的表達水平可能與直腸癌淋巴轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，可作為一種新的監(jiān)測直腸癌患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的新觀察指標(biāo)；同時直腸癌組織中E-Cad蛋白和mRNA表達減弱或缺失，導(dǎo)致癌細(xì)胞間粘附性降低，促進癌細(xì)胞獲得侵襲和轉(zhuǎn)移的能力。但由于本研究樣本數(shù)較少，且未對E-Cad介導(dǎo)粘附作用的具體機制進行探討，結(jié)果存在一定局限性，有待進一步深入研究。

[1] 霍西茜，王寧. 鈣粘素蛋白-E與腫瘤發(fā)生及生物學(xué)行為相關(guān)性的研究進展[J]. 現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué), 2013, 21(8): 1879-1882.

[2] Reinhold WC, Reimers MA, Lorenzi P, et al. Multifactorial regulation of Ecadherin expression: an integrative study [J]. Mol Cancer Ther, 2010, 9(1): 1-16.

[3] Wheelock MJ, Shintani Y, Maeda M, et al. Cadherin switching [J]. J Cell Sci, 2008, 121(6): 727-735.

[4] 吳樺宗. 胃癌患者證素濕與血清E-Cad、sICAM-1、L-selectin的關(guān)系[D]. 福建中醫(yī)藥大學(xué), 2013.

[5] Damsky CH, Richa J, Solter D, er al. Identification and purification of a cell sarface glycoprotein mediating intercellular adhesion in embryonic and adult tissue[J]. Cell, 1983,34(2): 455-466.

[6] 許洪衛(wèi)，蔡誠忠，譚龍益. 胃癌根治手術(shù)與血清、組織E-鈣黏附素變化的關(guān)系[J] 中華實驗外科雜志, 2003, 20(8): 751- 752.

[7] 黃正軍. 食管癌患者手術(shù)前后血清E-cad、SICAM-1和IL-8檢測的臨床意義[J]. 放射免疫學(xué)雜志, 2013, 26(4): 395-396.

[8] Razavi R, Harrison LE. Thermal sensitization using induced oxidative stress decreases tumor growth in an in vivo model of hyperthermic intraperitoneal pefusion [J]. Ann Surg Oncol,2010, 17(1): 304-311.

[9] 娜仁，談順，饒翔，等. P120和E-cad在乳腺癌中的表達及鑒別診斷意義[J]. 中國婦幼保健, 2012, 27(6): 896-899.

[10] 肖帥，裘正軍，黃陳，等. 轉(zhuǎn)錄因子Snail及黏附分子E-cadherin在直腸癌中的表達及意義 [J]. 國際外科學(xué)雜志, ISTIC, 2010, 37(8): 514-519.

[11] Bezdekova M, Brychtova S, Sedlakova E, et al. Analysis of snail-1, e-cadherin and claudin-1 expression in colorectal adenomas and carcinomas [J]. Inter J Mol Sci, 2012, 13(2): 1632-1643.

[12] 艾斯克爾·吐拉洪，陳凱，鄧大偉. 低位直腸癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移動物模型的建立及其E-鈣黏蛋白的表達[J]. 中國醫(yī)藥導(dǎo)報, 2015, 12(23): 17-20.

[13] 張偉，李芳，張飛燕，等. 基質(zhì)金屬蛋白酶-7、上皮性鈣黏附蛋白和血管內(nèi)皮生長因子在乳腺癌中表達及意義的研究[J]. 中國醫(yī)藥導(dǎo)報, 2012, 09(18): 71-74.

[14] 江澤，許華，李勝水，等. MTT法檢測乳腺癌細(xì)胞對化療藥物敏感性的研究[J]. 中國醫(yī)藥導(dǎo)報, 2010, 7(3): 28-29.

[15] 王志華. 細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞治療癌癥的基礎(chǔ)與臨床[J]. 中國醫(yī)藥導(dǎo)報, 2013, 10(7): 4-8.

Expression and significance of E-cadherin in the serum and transplanted tumor of nude mouse model of low rectal cancer with lymph node metastasis

AISHIKEER·tulahong1, CHEN Kai2, DENG Da-wei2*

(1. Cancer Center, the First Affiliated Hospital of Xinjiang Medical University, Urumqi 830000, China；2. Department of General Surgery, the Fifth Affiliated Hospital of Xinjiang Medical University, Urumqi 830000)

Objective To establish a nude mouse model of low rectal cancer with lymph node metastasis, to detect the expression of E-calcium (E-cad) in the serum and transplanted tumor tissue of the mice, and to analyze the role of E-cad in lymph node metastasis of rectal cancer. Methods Human colorectal adenocarcinoma cells (SW-480) were inoculated into the rectal submucosa of nude mice to establish a model of low rectal cancer with lymph node metastasis. 120 nude mice were randomly divided into three groups (40 mice in each group). Group A (rectal cancer model group) was injected with dimethylhydrazine and implanted with SW480 cells. Group B (dimethylhydrazine control group) was injected with dimethylhydrazine alone. The group C (control group) received no treatment. Serum E-cad was detected by ELISA. The mRNA and protein expression of E-cad in the tumor tissue was detected by RT-PCR and western blot, respectively. Results The serum level of E-cad in group A was 19.48±1.25 mg/L, significantly higher than those in groups B (2.36±0.18 mg/L) and C (2.15±0.12 mg/L) (t=8.28, 9.01,P< 0.05). The serum levels of E-cad were significantly higher in the nude mice with lateral lymph node metastasis than those without lymph node metastasis (t=10.28,P< 0.05). The protein expression of E-cad in the group A was lower than that in the groups B and C (t=9.81, 7.69,P< 0.05). In the group A, the protein expression of E-cad in the nude mice with lateral lymph node metastasis was significantly lower than that without lateral lymph node metastasis (t=9.36,P< 0.05). The mRNA expression of E-cad in the group A was significantly lower than that in the groups B and C (P< 0.05), and the mRNA expression of E-cad in the nude mice with lateral lymph node metastasis was significantly lower than that in the mice without lateral lymph node metastasis (t=7.85,P< 0.05). Conclusions The serum level of E-cad may be closely associated with the lymphatic metastasis of rectal cancer, and the mRNA and protein expressions of E-cad in colorectal cancer tissue were weak or absent, leading to a decrease of adhesion ability between cancer cells, and promote the invasion and metastasis of cancer cells.

Rectal cancer; Lymph node metastasis; E-cadherin; Nude mice

新疆維吾爾自治區(qū)自然科學(xué)基金(項目編號：2014211C131)。

艾斯克爾·吐拉洪(1980-)，碩士，主治醫(yī)師，研究方向：肝膽腫瘤。Email: 277405546@qq.com

鄧大偉，Email: Hexiaoxiao2010@sina.com

R-33

A

1671-7856(2017) 03-0031-06

10.3969.j.issn.1671-7856. 2017.03.006

2016-11-28