復方川芎滴丸對糖尿病腎病模型大鼠血液流變學及血氣的影響

孫 昕，劉 衛(wèi)（解放軍第88醫(yī)院藥劑科，山東泰安 271000）

復方川芎滴丸對糖尿病腎病模型大鼠血液流變學及血氣的影響

孫 昕＊，劉 衛(wèi)#（解放軍第88醫(yī)院藥劑科，山東泰安 271000）

目的：探討復方川芎滴丸對糖尿病腎?。―N）模型大鼠血液流變學及血氣的影響。方法：將60只大鼠隨機分為正常對照組、模型組、陽性對照組[厄貝沙坦片，0.013 g/（kg·d）]和復方川芎滴丸高、中、低劑量組[0.4、0.2、0.1 g/（kg·d）]，每組10只。除正常對照組外，其余各組大鼠均以高糖高脂飼料+ip鏈脲佐菌素的方法復制DN模型。成模7 d后，各給藥組大鼠每天ig相應(yīng)藥物1次，10 mL/kg；正常對照組和模型組大鼠ig等體積純化水。64 d后，測定大鼠血液流變學指標[全血黏度（高、中、低切）、血漿黏度、全血還原黏度]和血氣指標（二氧化碳分壓、氧分壓、血紅蛋白含量、氧飽和度、氧合血紅蛋白占總蛋白的比例），蘇木精-伊紅染色觀察大鼠腎組織病理變化。結(jié)果：與正常對照組比較，模型組大鼠血液流變學各指標和二氧化碳分壓均明顯升高（P＜0.05或P＜0.01），氧分壓、血紅蛋白含量、氧飽和度、氧合血紅蛋白占總蛋白的比例均明顯降低（P＜0.05或P＜0.01），腎組織損傷嚴重。與模型組比較，除復方川芎滴丸低劑量組大鼠二氧化碳分壓、氧分壓、血紅蛋白含量改善不顯著外，其余各給藥組大鼠上述指標均顯著改善（P＜0.05或P＜0.01），大鼠腎組織損傷也不同程度地減輕。結(jié)論：復方川芎滴丸可顯著改善DN模型大鼠異常的血液流變學狀態(tài)，降低血液黏度，改善微循環(huán)，提高血液運輸氧的能力，且對DN大鼠的腎組織形態(tài)有一定的改善作用。

復方川芎滴丸；糖尿病腎??；血液流變學；血氣；腎組織病理；大鼠

糖尿病腎病（Diabetic nephropathy，DN）是由糖尿病引起的一種腎臟損傷性疾病，是導致糖尿病患者死亡的重要因素，且該病在我國的發(fā)病率日益升高[1]。DN發(fā)病機制復雜，現(xiàn)代藥理研究表明血流動力學改變在DN的發(fā)生發(fā)展過程中起到重要作用[2-4]。復方川芎滴丸是解放軍第88醫(yī)院的院內(nèi)制劑，2005年獲新藥證書[批準文號：濟制字（2011）B02045]，處方主要由川芎和當歸兩味中藥組成，具有活血化瘀、通脈止痛的功效，臨床上主要用于心腦血管疾病的治療，安全有效[5]。但據(jù)近幾年的臨床觀察和醫(yī)師反饋，該藥能夠改善DN患者的腎臟生理機能。為驗證其藥效，本研究通過檢測分析DN模型大鼠的血液流變學指標和血氣指標，并結(jié)合腎臟病理形態(tài)學變化，探究復方川芎滴丸對DN模型大鼠的影響，以期為擴大其臨床應(yīng)用提供實驗參考。

1 材料

1.1 儀器

B600A型醫(yī)用低速離心機（河北省安新縣白洋離心機廠）；穩(wěn)豪型血糖儀[強生（中國）有限公司]；BS224S Sartorius型精密電子天平（北京賽多利斯天平有限公司）；SA-6000型全自動血流變測試儀（北京賽科希德科技發(fā)展有限公司）；Roche Cobas b 221型血氣分析儀（瑞士羅氏診斷產(chǎn)品有限公司）。

1.2 藥品與試劑

復方川芎滴丸（中國人民解放軍第88醫(yī)院制劑室自制，批號：20151216，規(guī)格：10 mg/丸）；厄貝沙坦片（杭州賽諾菲安萬特民生制藥有限公司，批號：4A241，規(guī)格：150 mg/片）；鏈脲佐菌素（STZ，上海源葉生物科技有限公司，批號：GN0517BA14，純度：≥98.5%）；其余試劑均為分析純。

1.3 動物

Wistar大鼠60只，SPF級，♂，體質(zhì)量180～220 g，由山東大學實驗動物中心提供[動物合格證號：SCXK（魯）20130009]。

2 方法

2.1 分組與造模

先將大鼠在濕度和溫度均適宜的環(huán)境下適應(yīng)性飼養(yǎng)1周，飼養(yǎng)期間自由進食、飲水。飼養(yǎng)結(jié)束后，將大鼠按體質(zhì)量隨機分為正常對照組、模型組、陽性對照組和復方川芎滴丸高、中、低劑量組，每組10只。正常對照組大鼠給予普通飼料喂養(yǎng)，其余各組大鼠給予高糖高脂飼料喂養(yǎng)進行造模。56 d后禁食不禁水12 h，然后造模組大鼠ip STZ溶液（35 mg/kg），正常對照組大鼠ip等體積枸櫞酸緩沖液。3 d后斷尾取血測大鼠空腹血糖（FBG）值，若FBG≥16.7 mmol/L，且伴有飲水量、尿量增加者視為造模成功[6-7]。成模后，造模組大鼠繼續(xù)給予高糖高脂飼料，持續(xù)7 d。

2.2 給藥

成模7 d后開始給藥。給藥量按大鼠與人體系數(shù)計算[8]，陽性對照組大鼠ig厄貝沙坦片0.013 g/（kg·d），為人臨床等效劑量；復方川芎滴丸高、中、低劑量組大鼠分別ig復方川芎滴丸0.4、0.2、0.1 g/（kg·d），分別為人臨床用劑量的2、1、0.5倍，10 mL/kg；正常對照組與模型組大鼠給予等體積純化水。每天給藥1次，連續(xù)給藥64 d。

2.3 指標檢測

給藥結(jié)束后，各組大鼠禁食不禁水12 h，然后ip 10%水合氯醛溶液（3 mL/kg）麻醉，使用一次性注射器腹主動脈采血2 mL，肝素抗凝。排空注射器里的空氣然后橡皮塊封堵針頭，30 min內(nèi)注入血氣分析儀分析二氧化碳分壓、氧分壓、血紅蛋白含量、氧飽和度、氧合血紅蛋白占總蛋白比例等血氣指標。另用抗凝的真空采血管采血4 mL，利用全自動血流變測試儀對全血高、中、低切黏度，血漿黏度，全血還原黏度等血液流變學指標進行測定。取血后將大鼠處死，取腎組織，常規(guī)石碏包埋后行蘇木精-伊紅（HE）染色，顯微鏡下觀察腎組織病理變化。

2.4 統(tǒng)計學方法

采用SPSS 16.0統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進行處理。計量資料以±s表示，組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用t檢驗。P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學意義。

3 結(jié)果

3.1 復方川芎滴丸對DN模型大鼠血氣的影響

與正常對照組比較，模型組大鼠二氧化碳分壓明顯升高（P＜0.01），氧分壓、血紅蛋白含量、氧飽和度和氧合血紅蛋占總蛋白的比例明顯降低（P＜0.05或P＜0.01）。與模型組比較，除復方川芎滴丸低劑量組大鼠二氧化碳分壓、氧分壓和血紅蛋白含量變化不顯著外，其余各給藥組大鼠上述血氣指標均顯著改善（P＜0.05或P＜0.01），結(jié)果見表1（1 mmHg＝0.133 kPa）。

3.2 復方川芎滴丸對DN模型大鼠血液流變學的影響

與正常對照組比較，模型組大鼠全血黏度（高、中、低切）、血漿黏度和全血還原黏度均明顯升高（P＜0.05或P＜0.01），提示DN模型大鼠出現(xiàn)血流動力學異?，F(xiàn)象。與模型組比較，各給藥組大鼠上述血液流變學指標均顯著改善（P＜0.05或P＜0.01），結(jié)果見表2。

表1 各組大鼠血氣指標測定結(jié)果（±s，n＝10）Tab 1 Determination results of blood gas indicators of rats in each group（±s，n＝10）

表1 各組大鼠血氣指標測定結(jié)果（±s，n＝10）Tab 1 Determination results of blood gas indicators of rats in each group（±s，n＝10）

注：正常對照組比較，＊P＜0.05，＊＊P＜0.01；與模型組比較，#P＜0.05，##P＜0.01Note：vs.normal control group，＊P＜0.05，＊＊P＜0.01；vs.model group，#P＜0.05，##P＜0.01

氧合血紅蛋白占總蛋白比例，% 98.5±0.290.4±0.7＊＊95.5±0.6##97.2±0.9##94.4±0.5##93.6±0.3#分組正常對照組模型組陽性對照組復方川芎滴丸高劑量組復方川芎滴丸中劑量組復方川芎滴丸低劑量組二氧化碳分壓，mmHg 38.6±1.4 55.7±0.6＊＊40.7±0.8##39.9±0.5##43.6±0.9##48.9±0.8氧分壓，mmHg 96.7±1.574.6±0.7＊＊93.4±0.9##95.2±1.6##92.7±0.8#86.5±0.9血紅蛋白含量，g/dL 15.6±0.4 13.5±0.2＊14.3±0.5#14.6±0.3#14.1±0.4#13.7±0.2氧飽和度，% 97.8±1.1 86.3±1.3＊＊94.1±0.3##94.8±0.8##93.3±0.4##91.8±0.9#

表2 各組大鼠血液流變學指標測定結(jié)果（±s，n＝10）Tab 1 Determination results of hemorheology indicators of rats in each group（±s，n＝10）

表2 各組大鼠血液流變學指標測定結(jié)果（±s，n＝10）Tab 1 Determination results of hemorheology indicators of rats in each group（±s，n＝10）

注：正常對照組比較，＊P＜0.05，＊＊P＜0.01；與模型組比較，#P＜0.05，##P＜0.01Note：vs.normal control group，＊P＜0.05，＊＊P＜0.01；vs.model group，#P＜0.05，##P＜0.01

全血還原黏度，mPa·s 1.32±0.07 3.03±0.02＊1.87±0.08#1.47±0.04##2.11±0.10#2.49±0.05#分組正常對照組模型組陽性對照組復方川芎滴丸高劑量組復方川芎滴丸中劑量組復方川芎滴丸低劑量組全血黏度，mPa·s 300 s－12.65±0.055.21±0.10＊＊3.20±0.07##2.93±0.13##3.23±0.08##3.81±0.12##115 s－13.12±0.085.94±0.14＊＊3.58±0.05##3.45±0.07##3.65±0.09##5.14±0.11#1 s－10.51±0.061.67±0.13＊＊0.99±0.03##0.78±0.05##1.03±0.02#1.46±0.06#血漿黏度，mPa·s9.56±0.1216.44±0.28＊＊10.89±0.17##9.79±0.20##11.43±0.25##13.32±0.35#

3.3 復方川芎滴丸對DN模型大鼠腎組織病理的影響

正常對照組大鼠腎形狀大小正常、結(jié)構(gòu)完整，腎小球系膜細胞、系膜區(qū)及系膜基質(zhì)未見異常，腎間質(zhì)內(nèi)無炎細胞浸潤、充血或纖維化，腎間質(zhì)血管壁及腎小管形態(tài)未見異常。模型組大鼠可見腎小球體積顯著增大，系膜細胞增生，系膜區(qū)增寬，系膜基質(zhì)增多，腎間質(zhì)出現(xiàn)炎細胞浸潤及血管壁增厚的病理現(xiàn)象。與模型組比較，陽性對照組大鼠腎小球及腎小管結(jié)構(gòu)基本正常，系膜細胞、系膜區(qū)及系膜基質(zhì)未見明顯異常，腎間質(zhì)無明顯炎細胞浸潤或纖維化；復方川芎滴丸高、中劑量組大鼠腎臟組織形態(tài)均有所好轉(zhuǎn)，腎間質(zhì)內(nèi)未見炎細胞浸潤或纖維化，腎間質(zhì)血管壁未見顯著增厚，腎小球及腎小管結(jié)構(gòu)基本正常，這2組與陽性對照組病理變化相似；復方川芎滴丸低劑量組大鼠腎小球系膜區(qū)輕度增寬、系膜基質(zhì)可見輕度增多、間質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)局部炎細胞浸潤，但好于模型組，結(jié)果見圖1。

4 討論

圖1 各組大鼠腎組織病理切片圖（HE染色，×100）Fig 1 Graphs of kidney tissue pathological section of rats in each group（HE staining，×100）

DN的發(fā)生發(fā)展與血流動力學改變密切相關(guān)[9]。在高血糖狀態(tài)下，體內(nèi)的血糖不能被機體充分吸收，由此導致腎小球濾過超負荷而腎小管不能完全重吸收，隨著病情的發(fā)展，形成惡性循環(huán)，最終會導致腎小球出現(xiàn)高灌注、高內(nèi)壓和高濾過狀態(tài)。這3種病理狀態(tài)的出現(xiàn)，使得入球小動脈變得過分松弛，入球小動脈阻力低于出球小動脈阻力，進而引起腎小球功能的受損。腎小球的高灌注、高內(nèi)壓和高濾過狀態(tài)還會使機體的血液黏稠度增加并使血液呈高凝狀態(tài)，機體中的血小板高度聚集造成血液流通不暢。加之糖尿病患病日久，導致腎臟血管壁加厚、管腔變窄阻塞，進而引起腎臟毛細血管功能受損、粥樣硬化，最終導致DN的發(fā)生。本研究采用高糖高脂飼料并ip STZ的方法復制DN大鼠模型，與正常對照組比較，模型組大鼠全血黏度（高、中、低切）、血漿黏度、全血還原黏度均明顯增加，提示模型組大鼠的血液流變學異常，表明DN造模成功。厄貝沙坦是一種有效的、具有口服活性的選擇性血管緊張素Ⅱ受體（AT1亞型）拮抗藥，其對AT1的選擇性拮抗作用導致了血漿腎素、AT1水平的升高和血漿醛固酮水平的降低。厄貝沙坦對糖尿病早期腎病具有逆轉(zhuǎn)或延緩病情進展的作用[10-12]，故本研究以其為陽性藥物。

中醫(yī)學認為DN的病機是因瘀血阻滯于腎絡(luò)，在中醫(yī)學上治療DN通常以活血、化瘀、通絡(luò)為主[13-15]。本研究所用復方川芎滴丸的處方出自宋代的《太平惠民和劑局方》，由川芎和當歸兩味中藥組成。方中川芎既能活血化瘀，又能行氣止痛，為“血中之氣藥”?，F(xiàn)代藥理研究表明，川芎具有擴張血管、降低血管阻力、抑制血小板聚集和改善微循環(huán)的作用[15]。方中當歸辛行溫通，具有活血行氣、補血止痛的功效。現(xiàn)代藥理研究表明，當歸具有降低血液黏稠度、抗血栓、擴張血管、增加血流量的作用[16]。本研究結(jié)果顯示，復方川芎滴丸能夠明顯降低DN模型大鼠的全血黏度、全血還原黏度、血漿黏度和二氧化碳分壓（P＜0.05或P＜0.01），顯著提高血紅蛋白含量、氧合血紅蛋白占總蛋白比例、氧分壓和血氧飽和度（P＜0.05或P＜0.01），提示復方川芎滴丸能夠改善DN模型大鼠的血液流變性及提高血液載氧的能力，并明顯改善DN大鼠的腎組織病理狀態(tài)。

綜上所述，筆者采用檢測血液流變學及血氣指標并聯(lián)合腎組織病理學觀察的方法，探討了復方川芎滴丸對DN模型大鼠的影響。結(jié)果證明，該藥具有抵抗糖尿病腎損傷的作用，但是具體的作用機制有待進一步探索。

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（編輯：林 靜）

Effects of Compound Ligusticum chuanxiong Drop Pill on Hemorheology and Blood Gas in Model Rats with Diabetic Nephropathy

SUN Xin，LIU Wei（Dept.of Pharmacy，the 88th Hospital of PLA，Shandong Tai’an 271000，China）

OBJECTIVE：To explore the effects of Compound Ligusticum chuanxiong drop pill on hemorheology and blood gas in model rats with diabetic nephropathy（DN）.METHODS：60 rats were randomly divided into normal control group，model group，positive control group[Irbesartan tablet，0.013 g/（kg·d）]and Compound L.chuanxiong drop pill high-dose，medium-dose，lowdose groups[0.4，0.2，0.1 g/（kg·d）]，10 in each group.Except for normal control group，rats in other groups were given high-sugar high-fat feed and intraperitoneally injected streptozotocin to reduce DN model.After 7 d modeling，rats in each group received related drugs intragastrically，once a day，10 mL/kg；normal control group and model group received equal volume of purified water intragastrically.After 64 d，hemorheology indicators[whole blood viscosity（high-shear，medium-shear and low-shear），plasma viscosity，whole blood reduced viscosity]and blood gas indicators（carbon dioxide partial pressure，oxygen partial pressure，hemoglobin content，oxygen saturation，ratio of oxygenated hemoglobin to total protein）of rats were determined，hematoxylin-eosin staining was used to observe the pathological changes in kidney tissue.RESULTS：Compared with normal control group，hemorheology indicators and carbon dioxide partial pressure in model group were significantly increased（P＜0.05 or P＜0.01），oxygen partial pressure，hemoglobin content，oxygen saturation，ratio of oxygenated hemoglobin to total protein were significantly decreased（P＜0.05 or P＜0.01），with severe kidney damage.Compared with model group，except the improvement of carbon dioxide partial pressure，oxygen partial pressure，hemoglobin content in rats were not significant in Compound L.chuanxiong drop pill low-dose group，the＊副主任藥師。研究方向：中藥制劑。電話：0538-8839573。E-mail：s8839675@163.com#通信作者：主任藥師，博士。研究方向：藥理學、醫(yī)院藥學。電話：0538-8839841。E-mail：Liutrunk@163.comabove-mentioned indicators in other medicine groups were significantly improved（P＜0.05 or P＜0.01）；the kidney tissue damage was improved to varying degree.CONCLUSIONS：Compound L.chuanxiong drop pill can significantly improve the hemorheology indicators of DN model rats，reduce blood viscosity，improve microcirculation and capacity of the blood to transport oxygen，and has certain improvement effect on kidney tissue morphology of DN rats.

Compound Ligusticum chuanxiong drop pill；Diabetic nephropathy；Hemorheology；Blood gas；Kidney tissue pathology；Rats

R285.5

A

1001-0408（2017）07-0909-04

2016-07-08

2016-12-03）

DOI10.6039/j.issn.1001-0408.2017.07.13