狼毒不同溶劑提取物殺煙蚜活性初步測(cè)定

熊納納++劉鐵++代林楓++梁倩

摘要：研究了石油醚、氯仿、乙酸乙酯以及水這4種不同溶劑對(duì)狼毒（Euphorbia fischeriana Steud）提取物的殺煙蚜（Myzus persicae）活性。結(jié)果表明，石油醚提取物的殺蚜蟲活性最好，在濃度為0.500 mg/mL，時(shí)間為12 h時(shí)，蚜蟲全部死亡。其他3種溶劑提取物的殺蚜蟲活性相對(duì)沒有明顯的規(guī)律性。試驗(yàn)期望進(jìn)一步拓展植物源農(nóng)藥的發(fā)展?jié)摿?，篩選出殺蟲活性高的分段提取物，為進(jìn)一步研究狼毒大戟提供理論依據(jù)。

關(guān)鍵詞：狼毒（Euphorbia fischeriana Steud）；煙蚜（Myzus persicae）；殺蟲活性

中圖分類號(hào)：S482.5+9 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：0439-8114（2017）05-0870-03

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2017.05.019

Insecticidal Activity of Different Solvent Extracts from

E. fischeriana against Myzus persicae

XIONG Na-naa，LIU Tieb，DAI Lin-fengb，LIANG Qianb

（Southwest Forestry University， a. College of Material Engineering； b. College of Forestry， Kunming 650224， China）

Abstract： The different solvent extracts from Euphorbia fischeriana including petroleum ether， chloroform， ethyl acetate and water were tested to study their insecticidal activities against Myzus persicae. The results showed that petroleum ether extract had the best insecticidal activity against Myzus persicae，and all aphids had been killed at the concentration of 0.500 mg/mL and at 12 hours. Comparatively，the other three solvent extracts showed no clear regularity. By the experiment，it can be expected to further expand the development potential of botanical pesticides， and screen out segmented extracts with high insecticidal activity，as well as provide theoretical basis for the further study of Euphorbia fischeriana.

Key words： E. fischeriana； Myzus persicae； insecticidal activity

狼毒（Euphorbia fischeriana Steud）系大戟科大戟屬多年生草本植物，分布于黑龍江、吉林、遼寧、內(nèi)蒙古（東部）和山東（煙臺(tái)、嶗山）等地。生長于海拔100～600 m的草原、干燥丘陵坡地、多石礫干山坡及陽坡稀疏的松林下。根入藥，主治結(jié)核類、痔瘡癬類等病癥，有毒[1]。目前對(duì)狼毒大戟的研究主要集中在狼毒根部的化學(xué)成分、藥理活性及植物源農(nóng)藥等方面。其主要化學(xué)成分有萜類、甾醇和酚酸性化合物等[2]，主要藥理活性有抑菌[3-5]、抗病毒[6，7]、抗癌[8-14]等，毒殺的害蟲主要有蛾蝶類、紅蜘蛛、落葉松球蚜[15]、楊扇舟蛾、舞毒蛾、黃褐天幕毛蟲[16]、朱砂葉螨[17]、家蠶[18]等。徐德昌等[19]報(bào)道了大戟狼毒（Radix euphorbiae Fischerianae）對(duì)蔬菜桃蚜的毒殺作用，但與本研究的狼毒（Euphorbia fischeriana Steud）不是同一個(gè)種。狼毒地上部分的化學(xué)成分及殺蚜蟲的活性未見報(bào)道。

煙蚜（Myzus persicae）是一種為害煙草的害蟲，傳播多種植物病毒，例如黃瓜花葉病、煙草蝕紋病、馬鈴薯Y病毒病等[20]，它還能刺吸煙葉汁液，引起植物營養(yǎng)缺乏，導(dǎo)致植株畸形生長、落葉甚至枯死[21]，嚴(yán)重影響了煙葉的產(chǎn)量和質(zhì)量。

化學(xué)農(nóng)藥存在毒性、殘留和抗性問題，導(dǎo)致植物源農(nóng)藥成為當(dāng)今研究的熱點(diǎn)之一，因?yàn)橹参镌崔r(nóng)藥對(duì)人畜相對(duì)安全，較少環(huán)境污染，抗性發(fā)展較緩慢，受到農(nóng)藥和植物資源研究者的重視。

張建英等[22]對(duì)益母草、龍葵、蒼耳、白癬、菖蒲、葫蘆巴、蒺藜、黑柴胡、鉤腺大戟、伏毛鐵棒錘、瑞香狼毒等11種植物提取物，進(jìn)行枸杞蚜蟲的拒食和毒殺活性研究，發(fā)現(xiàn)瑞香狼毒毒殺活性最強(qiáng)，因此本試驗(yàn)就狼毒大戟地上部分殺煙蚜活性進(jìn)行探討，以期為狼毒大戟資源的應(yīng)用提供依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 材料

狼毒（狼毒地上部分，2014年10月采自云南省迪慶藏族自治州香格里拉縣），經(jīng)西南林業(yè)大學(xué)林學(xué)院植物學(xué)教研室杜凡教授鑒定為大戟科大戟屬植物狼毒；石油醚（分析純，天津市風(fēng)船化學(xué)試劑科技有限公司）；氯仿（分析純，云南楊林工業(yè)開發(fā)區(qū)汕滇藥業(yè)有限公司）；乙酸乙酯（分析純，廣東省化學(xué)試劑工程技術(shù)研究開發(fā)中心）；煙苗（西南林業(yè)大學(xué)溫室大棚培養(yǎng)）；供試蚜蟲采自西南林業(yè)大學(xué)林學(xué)院溫室大棚養(yǎng)殖的煙苗上。

1.2 試驗(yàn)方法

將陰干的2.5 kg狼毒地上部分材料粉碎，用95%的乙醇冷浸3次，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀將提取液濃縮成浸膏。將浸膏用水懸浮，依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯分別萃取3次，將萃取液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀進(jìn)行濃縮合并，最后得到總浸膏348 g。萃取后得到石油醚提取物浸膏6 g，得到氯仿提取物浸膏15 g，得到乙酸乙酯提取物浸膏54 g，水提取物浸膏273 g。查閱國家對(duì)于農(nóng)藥使用的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)要求，將4種提取物浸膏分別配制成6個(gè)不同濃度梯度，分別為0.125、0.250、0.500、1.000、1.500和2.000 mg/mL。

采用葉片浸漬法[23，24]：選取生長良好的新鮮煙葉片，在藥液中浸漬5 s后取出，放在培養(yǎng)皿內(nèi)，吸去多余的藥液，并將濕潤的棉條包裹在葉柄處，以保持葉片濕度；挑取30頭大小一致、行動(dòng)活潑的蚜蟲，將蚜蟲轉(zhuǎn)移到葉片上，放在溫度25 ℃、相對(duì)濕度85%左右的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，分別于12、24、36和48 h觀察試蟲的反應(yīng)癥狀，記錄死亡蟲口數(shù)（死亡標(biāo)準(zhǔn)為試蟲不能正?；顒?dòng)或者輕輕觸動(dòng)蟲體無任何反應(yīng)）。每個(gè)處理重復(fù)3次，計(jì)算死亡率，數(shù)據(jù)取3次重復(fù)的平均值。死亡率計(jì)算公式如下：死亡率=死亡數(shù)/供試總數(shù)×100%。

2 結(jié)果與分析

狼毒的石油醚、氯仿、乙酸乙酯、水提取物的殺蚜蟲活性試驗(yàn)數(shù)據(jù)見下表1、表2、表3、表4。

由表1可知，隨著時(shí)間的增加，蚜蟲死亡率升高，濃度為0.500 mg/mL，12 h觀察時(shí)，蚜蟲已經(jīng)全部死亡。

由表2可知，隨著時(shí)間的增加，蚜蟲的死亡率升高，但是隨著濃度的增加，死亡率的變化先降低后升高。

由表3可知，隨著時(shí)間的增加，蚜蟲的死亡率升高，隨著濃度的增加，規(guī)律不是很明顯，但是基本呈現(xiàn)升高趨勢(shì)。

由表4可知，隨著時(shí)間的增加，蚜蟲的死亡率升高，但是隨著濃度的變化，蚜蟲死亡率變化沒有規(guī)律。

從表1可以看出，隨著時(shí)間以及濃度的增加，蚜蟲死亡率升高，在濃度為0.500 mg/mL，時(shí)間為12 h時(shí)，蚜蟲已經(jīng)全部死亡，表明石油醚提取物殺煙蚜作用最強(qiáng)。從表2、表3、表4可以看出，隨著時(shí)間的增加，蚜蟲的死亡率升高，但是隨著濃度的增加，死亡率的變化沒有規(guī)律性。

3 小結(jié)與討論

本試驗(yàn)用乙醇提取狼毒浸膏，將浸膏用水懸浮，用石油醚、氯仿、乙酸乙酯萃取，將萃取后的液體部分蒸干，得到四部分粗提物。將四部分粗提物分別配成6組不同的濃度，做殺蚜蟲試驗(yàn)，觀察蚜蟲死亡情況，進(jìn)行記錄。從試驗(yàn)結(jié)果可以看出，石油醚提取物殺蟲活性最強(qiáng)，在濃度為0.500 mg/mL，時(shí)間為12 h時(shí)，蚜蟲已經(jīng)全部死亡。

煙蚜通過取食煙苗汁液生存，在取食的過程中會(huì)傳播疾病，也會(huì)導(dǎo)致煙苗營養(yǎng)物質(zhì)流失、畸形生長甚至死亡，影響產(chǎn)量和質(zhì)量。狼毒植物化學(xué)成分、藥理活性及殺蟲活性復(fù)雜多樣。劉素琪等[25]用狼毒大戟的提取物對(duì)朱砂葉螨進(jìn)行殺蟲活性試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)石油醚部分殺蟲活性最強(qiáng)，趙奎君等[26]用狼毒大戟的提取物對(duì)結(jié)核桿菌抑菌試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)石油醚部分抑菌作用最強(qiáng)，本試驗(yàn)也是石油醚部分殺煙蚜活性最強(qiáng)。因此，希望后續(xù)研究者通過對(duì)狼毒石油醚部分進(jìn)行化合物的提取分離、結(jié)構(gòu)鑒定、構(gòu)效關(guān)系研究，期望從狼毒的石油醚部分分離得到高效低毒的植物源無公害殺蟲劑，再將其應(yīng)用到農(nóng)業(yè)中，為廣大的煙農(nóng)造福。

參考文獻(xiàn)：

[1] 中國科學(xué)院《中國植物志》編輯委員會(huì).中國植物志[M].北京：科學(xué)出版社，2004.

[2] 么煥開，張文婷，鄭雪晶.狼毒大戟化學(xué)成分及藥理作用研究進(jìn)展[J].中成藥，2010，32（8）：1404-1406.

[3] 孫瑞艷，陳亞彤，范海延，等.狼毒大戟根提取物抑菌活性及其提取方法初探[J].中國蔬菜，2010（16）：67-73.

[4] 龐麗紋，丁立軍，簡(jiǎn) 麗，等.狼毒大戟生藥提取物抑菌活性的初步研究[J].內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2012，33（Z1）：253-256.

[5] 趙奎君，劉鎖蘭，李洪敏.狼毒大戟中不同組分和成分抗結(jié)核桿菌作用的研究[J].中國藥師，2007，10（11）：1063-1065.

[6] 王學(xué)林，鄧旭明，袁書智，等.狼毒大戟抗菌抗病毒作用初步研究[J].中獸醫(yī)醫(yī)藥雜志，2001，20（6）：5-7.

[7] 俞媚華，侯愛君.狼毒大戟抗乙肝病毒活性成分的研究[J].中國中藥雜志，2010，35（22）：3002-3006.

[8] 姚 蘋，崔 晞，劉 萍，等.狼毒大戟對(duì)病毒性T細(xì)胞白血病的抑制作用[J].中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志，2003，23（3）：183-187.

[9] 楊 柯，王義善，趙騰達(dá).狼毒大戟對(duì)小鼠Lewis肺癌細(xì)胞凋亡影響及其機(jī)制的初步探討[J].中華腫瘤防治雜志，2012，19（9）：652-654.

[10] 劉文粢，何風(fēng)雷，阮子鏞，等.狼毒大戟二萜內(nèi)酯對(duì)人癌細(xì)胞體外抑制作用的研究[J].中藥材，2000，23（10）：623-625.

[11] 簡(jiǎn)白羽，郭麗娜，馬立威，等.狼毒大戟中沒食子酸乙酯的提取分離及抗腫瘤活性[J].中醫(yī)藥信息，2014，31（3）：7-9.

[12] LEE S H，TANAKA T，NONAKA G I.Allose gallates from Euphorbia fischeriana[J].Phytochemistry，1991，30（4）：1251-1253.

[13] 何華紅，王華倩，嚴(yán)小紅，等.月腺大戟與狼毒大戟對(duì)人肝癌細(xì)胞BEL-7402體外增殖的影響對(duì)比研究[J].中國藥房，2012， 23（15）：1359-1361.

[14] 何華紅，劉 肅，李 薇，等.月腺大戟及狼毒大戟體外抗腫瘤藥理活性對(duì)比研究[J].中藥材，2011，34（6）：950-952.

[15] 張 萍，梁延海，趙雪嶺，等.狼毒大戟人工栽培及其生物農(nóng)藥開發(fā)[J].防護(hù)林科技，2005（5）：87.

[16] 孫繼武，周 彪，郝德君.幾種有毒植物提取物對(duì)食葉害蟲的生物活性研究[J].中國林副特產(chǎn)，2005（1）：40-42.

[17] 顧雅靜，高寶巖，周廣錄，等.大戟狼毒提取物對(duì)朱砂葉螨生物活性的研究[J].天津農(nóng)林科技，2011（2）：1-3.

[18] 侯偉倬，甄占萱，李云祥.狼毒大戟水浸液對(duì)家蠶的藥殺效果[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2011，39（6）：3251-3252.

[19] 徐德昌，駱成高，陳鳳芝.大戟狼毒殺蟲劑藥效試驗(yàn)[J].中國甜菜糖業(yè)，2004（2）：5-7.

[20] 任廣偉，張連濤.煙蚜和煙青蟲的發(fā)生與防治[J].煙草科技，2002（5）：43-45.

[21] 馬亞玲，劉長仲.蚜蟲的生態(tài)學(xué)特性及其防治[J].草業(yè)科學(xué)， 2014，31（3）：519-525.

[22] 張建英，楊貴軍，于有志，等.11種植物提取物對(duì)枸杞蚜蟲的拒食和毒殺活性測(cè)定[J].農(nóng)業(yè)科學(xué)研究，2007，28（1）：21-23.

[23] 黃素青，徐漢虹，曾東強(qiáng)，等.農(nóng)田害螨的幾種生物測(cè)定方法[J].植物保護(hù)，2005，31（1）：79-81.

[24] 張 勇. 2種生物測(cè)定方法對(duì)殺蟲劑毒力測(cè)定結(jié)果比較[J].中國果樹，2007（4）：38-40.

[25] 劉素琪，顧雅靜，王海香，等.大戟狼毒不同部位提取物對(duì)朱砂葉螨的觸殺活性[J].林業(yè)科學(xué)，2010，46（3）：111-115.

[26] 趙奎君，楊 雋，張蒲芝.5種狼毒大戟提取物對(duì)結(jié)核桿菌抗菌作用的比較[J].時(shí)珍國醫(yī)國藥，2000，11（7）：589-590.