孕婦中期唐氏篩查聯(lián)合外周血游離胎兒DNA檢測的研究價值

何學(xué)明

535000廣西欽州市第一人民醫(yī)院檢驗(yàn)科

孕婦中期唐氏篩查聯(lián)合外周血游離胎兒DNA檢測的研究價值

何學(xué)明

535000廣西欽州市第一人民醫(yī)院檢驗(yàn)科

目的：探討孕中期女性唐氏篩查聯(lián)合外周血游離胎兒DNA檢測的臨床診斷價值。方法：收治孕中期孕婦1 426例，先行唐氏綜合征篩查，對陽性患者再納入外周血游離胎兒DNA進(jìn)行染色體非整倍體檢測。結(jié)果：1 426例孕婦篩查出高危孕婦38例，其中檢出10例染色體數(shù)目異常，結(jié)構(gòu)異常4例，羊水細(xì)胞培養(yǎng)染色體核型分析檢出2例21三體綜合征及2例18三體綜合征，經(jīng)檢測，與細(xì)胞遺傳學(xué)的核型分析相符。結(jié)論：孕婦中期唐氏篩查聯(lián)合外周血游離胎兒DNA檢測能夠早期診斷高風(fēng)險(xiǎn)孕婦，預(yù)防和減少唐氏兒及其他缺陷兒的出生，操作簡單、安全、有效，有利于提高國民素質(zhì)。

孕中期檢查；唐氏綜合征；外周血游離胎兒DNA檢測

資料與方法

2013年3月-2016年5月在我院產(chǎn)前診斷科及產(chǎn)科門診就診孕中期孕婦1 426例，孕周為14～20周，平均(17.37± 2.46)周；年齡為20～46歲，平均(25.48±3.25)歲，平均孕(1.75±1.46)次，平均產(chǎn)次為(1.28±1.15)次。均為單胎妊娠，孕婦均無吸煙飲酒史，排除心臟病、糖尿病、貧血及肝、腎功能障礙等合并癥的患者。

方法：儀器和試劑：試劑均由廣州豐華公司提供，采用時間分辨免疫熒光測定儀進(jìn)行血清測定，由美國Illumina公司生產(chǎn)的測序儀檢測孕婦游離胎兒DNA血清。檢查方法：①空腹取孕婦靜脈血5 mL，置入含有乙二胺四乙酸抗凝劑的無菌管內(nèi)[1]，室溫4 h內(nèi)務(wù)必分離血清，于-80℃冰箱凍存?zhèn)溆?。分離血清后測定其血清標(biāo)記物濃度，采用時間分辨免疫熒光法檢測血清中甲胎蛋白(AFP)、血清相關(guān)蛋白-A(PAPP-A)、游離β-人絨毛膜促性腺激素(Fβ-hCG)及游離雌三醇(μE3)；②篩查出的高危孕婦給予遺傳咨詢，行游離胎兒DNA檢測或羊水穿刺，抽取其外周血10 mL混勻后，采用德國Qiagen公司生產(chǎn)的DNA提取試劑盒進(jìn)行DNA的提取，并使用50 μL緩沖劑對每份DNA標(biāo)本進(jìn)行洗脫，行羊膜腔穿刺羊水細(xì)胞染色體核型分析確診。

評價指標(biāo)[2]：①孕周計(jì)算：經(jīng)B超測定雙頂徑(BPD)或頭臀長度(CRL)。②風(fēng)險(xiǎn)評估：將孕婦血清標(biāo)記物指標(biāo)、B超指標(biāo)輸入PerkinElmer公司提供的Life Cycle軟件，分析得出風(fēng)險(xiǎn)率。唐氏綜合征風(fēng)險(xiǎn)值為1/250，建議高風(fēng)險(xiǎn)孕婦進(jìn)行染色體核型分析，最后應(yīng)用短串聯(lián)重復(fù)多態(tài)性聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù)(STR-PCR)進(jìn)行確診。

統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：采用SPSS 17.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，定量資料的描述采用(x±s)來表示，組間比較采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料的比較采用χ2校驗(yàn)。檢驗(yàn)水準(zhǔn)為：α=0.05。

結(jié)果

唐氏篩查結(jié)果：1 426例孕婦共檢出三體高風(fēng)險(xiǎn)孕婦38例，陽性檢出率2.66%。

外周血游離胎兒DNA檢測結(jié)果：38例高風(fēng)險(xiǎn)孕婦均進(jìn)行了游離胎兒DNA檢測，發(fā)現(xiàn)10例染色體數(shù)目異常，結(jié)構(gòu)異常4例，與細(xì)胞遺傳學(xué)的核型分析相符，外周血游離胎兒DNA檢測總準(zhǔn)確率為100%。檢出18三體綜合征及21三體綜合征各2例，4例孕婦均行引產(chǎn)術(shù)終止妊娠，見表1。

討論

唐氏綜合征是常見的染色體疾病，21三體綜合征是最常見的，會導(dǎo)致智力低下和發(fā)育緩慢；但時常危及嬰幼兒性命，發(fā)病率最高，病因尚不明確，無有效的治療手段，早期發(fā)現(xiàn)并終止妊娠是較好的預(yù)防手段[3]。唐氏篩查指血清學(xué)篩查或羊水穿刺診斷，主要是對孕母血液生化篩查、宮頸管脫落細(xì)胞檢查，外周血中胎兒細(xì)胞檢查及超聲波檢查，檢出高風(fēng)險(xiǎn)孕婦進(jìn)一步抽取絨毛、羊水或臍血，進(jìn)行侵入性產(chǎn)前診斷后終止妊娠。血清學(xué)唐氏篩查方法經(jīng)濟(jì)、有效，目前在世界范圍內(nèi)得到廣泛應(yīng)用，已經(jīng)是一項(xiàng)成熟的技術(shù)方法。本文檢出38例唐氏高風(fēng)險(xiǎn)孕婦，陽性檢出率為2.66%，但是唐氏篩查準(zhǔn)確度有限，易帶來流產(chǎn)風(fēng)險(xiǎn)。孕中期母血分離胎兒游離DNA分析能夠進(jìn)一步確定染色體疾病的發(fā)生情況，準(zhǔn)確、無創(chuàng)、安全，臨床受到廣大孕婦的喜歡[4]。

游離DNA來源：人體的外周血中存在著微量游離核酸，胎盤滋養(yǎng)層的浸潤具備空間及時間特性，胎兒的DNA能夠以游離狀態(tài)進(jìn)入孕婦的外周血循環(huán)中，并穩(wěn)定存在。游離的DNA主要來源于3種途徑：①母體血漿中的胎兒有核細(xì)胞，包括有核紅細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、粒細(xì)胞等，釋放游離DNA，進(jìn)入孕婦外周血的胎兒有核細(xì)胞凋亡，因此，胎兒有核細(xì)胞在孕婦外周血中的數(shù)量較少，而游離DNA卻大量存在于母體血漿中，因此孕婦血漿中源自胎兒有核細(xì)胞的胎兒游離DNA比例較小。②通過母胎界面進(jìn)入孕婦外周血，游離胎兒DNA約占母體血漿總游離DNA的10%以上，并且半衰期短、DNA分子長度相對較短，且在孕5周后隨孕周增加，其濃度也不斷升高[5]，胎兒游離DNA不可能是孕婦血漿中胎兒游離DNA的主要來源。③凋亡的胎兒組織細(xì)胞和胎盤滋養(yǎng)細(xì)胞，釋放胎兒游離DNA，在整個妊娠期間，胎兒組織細(xì)胞和胎盤滋養(yǎng)細(xì)胞在不斷凋亡，釋放出大量的游離DNA。

游離DNA檢測分析：待測樣本通過兩步離心法，第1次離心將血漿及紅細(xì)胞、淋巴細(xì)胞等成分沉淀分離開來，第2次超高速離心法，完全分開血漿中的細(xì)胞成分，利用孕婦血漿中的胎兒游離DNA進(jìn)行檢測診斷，比檢測胎兒細(xì)胞更加安全可靠。相較于傳統(tǒng)的細(xì)胞遺傳學(xué)方法，游離DNA檢測無需進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)，就能快速得到準(zhǔn)確的測定結(jié)果，并且該方法操作簡便、安全、診斷陽性的準(zhǔn)確率高[6]，適合大規(guī)模平行測序檢測，外周血游離胎兒DNA快速診斷常見三體綜合征，提高了診斷的準(zhǔn)確性及特異性。本文對38例高風(fēng)險(xiǎn)孕婦均進(jìn)行了游離胎兒DNA檢測，異常孕婦與細(xì)胞遺傳學(xué)的核型分析相符，外周血游離胎兒DNA檢測總準(zhǔn)確率為100%。檢出18三體綜合征及21三體綜合征各2例，4例孕婦均行引產(chǎn)術(shù)終止妊娠。

綜上所述，唐氏篩查聯(lián)合外周血游離胎兒DNA檢測，具有準(zhǔn)確、安全、高效的特點(diǎn)，對唐氏兒及其他缺陷兒能夠早期做出診斷，早期干預(yù)、預(yù)防對提高國民素質(zhì)具有重要意義，值得臨床推廣。

表1 唐氏篩查陽性患者游離胎兒DNA檢測結(jié)果

[1]趙光堅(jiān).孕婦血漿中胎兒游離DNA檢測在唐氏綜合征產(chǎn)前診斷中的應(yīng)用[J].中國醫(yī)藥指南,2014,12(16):11-12.

[2]丁庚才.孕婦中期唐氏篩查聯(lián)合外周血游離胎兒DNA檢測的研究價值[J].中國傷殘醫(yī)學(xué),2015,13(23):87-88.

[3]邱潔,楊曉華,方虹,等.血清學(xué)篩查聯(lián)合胎兒肺整倍體產(chǎn)前無創(chuàng)基因檢測臨床應(yīng)用價值的研究[J].中國產(chǎn)前診斷雜志,2013,5 (2):18.

[4]文海平.孕中期唐氏綜合征血清篩查聯(lián)合無創(chuàng)性產(chǎn)前基因診斷價值[J].吉林醫(yī)學(xué), 2015,36(8):1595.

[5]孫宏躍,袁路,徐廣立.孕婦中期唐氏篩查聯(lián)合外周血游離胎兒DNA檢測的臨床意義[J].中外醫(yī)學(xué)研究,2014,12(12):57-58.

[6]福林,哈斯,阿拉木蘇,等.超聲聯(lián)合無創(chuàng)產(chǎn)前基因檢測早期篩查唐氏綜合征[J].中國醫(yī)學(xué)工程,2013,21(3):42.

表1 超聲影像學(xué)診斷效果分析(n)

參考文獻(xiàn)

[1]梁隆科.聯(lián)合應(yīng)用經(jīng)陰道彩超和經(jīng)腹部彩超診斷婦產(chǎn)科急腹癥的臨床價值分析[J].當(dāng)代醫(yī)藥論叢,2014,12(2):168.

[2]王春華,祿琴梅,黃葉,等.經(jīng)腹部及陰道超聲聯(lián)合應(yīng)用在婦產(chǎn)科急腹癥中的診斷價值[J].中國婦幼保健,2014,29(22):3685-3687.

[3]黃小芳.經(jīng)陰道及經(jīng)腹部彩色多普勒超聲在婦產(chǎn)科急腹癥中的應(yīng)用[J].實(shí)用臨床醫(yī)學(xué),2016,17(4):54-57.

[4]王琳,郭燕鑫.經(jīng)腹與經(jīng)陰道彩色多普勒檢查婦產(chǎn)科急腹癥臨床價值分析[J].醫(yī)學(xué)影像學(xué)雜志,2015,25(11):2078-2080.

The value of down's screening combined with peripheral blood free fetal DNA detection in the second trimester of pregnancy

He Xueming
Department of Clinical Laboratory,the First People's Hospital of Qinzhou City,Guangxi 535000

Objective:To investigate the clinical diagnostic value of down's screening combined with peripheral blood free fetal DNA detection in the second trimester of pregnancy.Methods:A total of 1 426 pregnant women in the second trimester of pregnancy were enrolled in the screening of down's syndrome,and then the positive patients were included in the peripheral blood free fetal DNA.Results:Among those 1 426 cases,38 pregnant women with high-risk,in which 10 cases were detected abnormal chromosome number,and 4 cases with structural abnormality,2 cases of trisomy 21 and 2 cases of trisomy 18 were detected by karyotype analysis of cultured amniotic fluid cells,and karyotype analysis was consistent with cytogenetic analysis.Conclusion: Down's screening combined with peripheral blood free fetal DNA detection in the second trimester of pregnancy can early diagnosis high risk of pregnant women.It can prevent and reduce down's syndrome and other birth defects in children.The operation is simple,safe and effective,and it also can improve the national quality.

Second trimester;Down syndrome;Detection of free fetal DNA in peripheral blood

10.3969/j.issn.1007-614x.2017.8.66