夏枯草多糖及凝膠抗單純皰疹病毒的藥效學(xué)研究＊

蔡雙璠，楊揚(yáng)，吳蓉，楊以阜＊，譚紅勝＊

（1.上海中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院上海201203；2.中藥創(chuàng)新藥物研發(fā)上海高校工程研究中心上海201203；3.上海中醫(yī)藥大學(xué)科技實(shí)驗(yàn)中心上海201203）

夏枯草多糖及凝膠抗單純皰疹病毒的藥效學(xué)研究＊

蔡雙璠1，2＊＊，楊揚(yáng)3＊＊，吳蓉1，2，楊以阜3＊＊＊，譚紅勝1，2＊＊＊

（1.上海中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院上海201203；2.中藥創(chuàng)新藥物研發(fā)上海高校工程研究中心上海201203；3.上海中醫(yī)藥大學(xué)科技實(shí)驗(yàn)中心上海201203）

目的：探究夏枯草多糖及凝膠在體外和體內(nèi)條件下的抗單純皰疹病毒作用，為抗皰疹病毒新藥研究提供科學(xué)依據(jù)。方法：本研究采用空斑減數(shù)法檢測(cè)夏枯草多糖的體外抗單純皰疹病毒（Herpes Simplex Virus，HSV）活性；同時(shí)，建立HSV-1（皮膚）和HSV-2（外陰部）病毒感染豚鼠模型，以病灶病變情況、丘皰疹數(shù)、典型病變?cè)u(píng)分結(jié)果以及病灶組織中HSV-1和HSV-2病毒的DNA拷貝數(shù)等為指標(biāo)，對(duì)夏枯草多糖凝膠的體內(nèi)抗HSV活性進(jìn)行評(píng)價(jià)。結(jié)果：夏枯草多糖在體外實(shí)驗(yàn)中能夠抑制HSV-1和HSV-2的活性；夏枯草多糖凝膠能夠削弱HSV-1和HSV-2病毒感染豚鼠的病灶病變，發(fā)揮抗單純皰疹病毒活性。結(jié)論：夏枯草多糖及凝膠在體外和體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中均具有抗單純皰疹病毒的活性，具有開發(fā)成為抗單純皰疹病毒藥物的潛在價(jià)值。

夏枯草抗單純皰疹病毒多糖凝膠

夏枯草為唇形科植物夏枯草Prunella vulgaris L.的干燥果穗，因“夏至后即枯”而得名，具有清肝瀉火、明目、散結(jié)消腫等功效，用于治療目赤腫痛、目珠夜痛、頭痛眩暈、瘰疬、癭瘤、乳癰、乳癖、乳房脹痛等，民間飲用的歷史已有1 000多年。現(xiàn)代藥理及化學(xué)成分研究證明，夏枯草主要含有三萜、黃酮、苯丙素、甾體、有機(jī)酸、揮發(fā)油及多糖類等成分[1]，具有降血壓、降血糖、抗菌、抗病毒、調(diào)節(jié)免疫力等生物活性。從夏枯草中分離得到的多糖類成分具有抗Ⅰ型單純性皰疹病毒（HSV-1）和Ⅱ型單純性皰疹病毒（HSV-2）的作用，其作用機(jī)制不同于目前臨床藥物阿昔洛韋（Acyclovir，ACV），這些成分可能不是直接作用于病毒的復(fù)制環(huán)節(jié)，而是阻止病毒吸附和穿入宿主細(xì)胞，發(fā)揮促進(jìn)淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化增殖和誘生干擾素等免疫調(diào)節(jié)作用，因此對(duì)標(biāo)準(zhǔn)病毒株和臨床耐藥株均有效，且不易產(chǎn)生耐藥性[2-6]。

本研究采用空斑減數(shù)法檢測(cè)夏枯草多糖的體外抗HSV活性；同時(shí)，建立HSV-1（皮膚）和HSV-2（外陰部）病毒感染豚鼠模型，以病灶病變情況、丘皰疹數(shù)、典型病變?cè)u(píng)分結(jié)果以及病灶組織中HSV-1和HSV-2病毒的DNA拷貝數(shù)為等指標(biāo)，對(duì)夏枯草多糖凝膠的體內(nèi)抗HSV活性進(jìn)行評(píng)價(jià)，為后續(xù)將夏枯草多糖開發(fā)成為抗單純皰疹病毒的新藥提供科學(xué)依據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 主要儀器與試藥

細(xì)胞培養(yǎng)箱（美國(guó)Thermo公司）；CPA2250電子分析天平（德國(guó)賽多利斯公司）；Alpha 2-4 LD plus型冷凍干燥機(jī)（德國(guó)ChRTST公司）；Pellicon XLFILTER超濾盒（美國(guó)Millipore公司）。

DMSO、甲醛（分析純，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）；結(jié)晶紫、MTT、臺(tái)盼藍(lán)（上海生工生物有限公司）；PBS磷酸鹽緩沖鹽（福建邁新試劑生物技術(shù)開發(fā)有限公司）；DMEM培養(yǎng)基、FBS（美國(guó)Invitrogen公司）；青霉素-鏈霉素（杭州吉諾生物有限公司）；阿昔洛韋粉末（中國(guó)藥品生物制品檢定所）；阿昔洛韋乳膏（福建太平洋制藥有限公司）；DNA抽提試劑盒、HSV-1和HSV-2核酸擴(kuò)增（PCR）熒光定量測(cè)定試劑盒（中山大學(xué)達(dá)安基因股份有限公司）；采用超濾技術(shù)制備的夏枯草多糖來(lái)自上海中醫(yī)藥大學(xué)中藥創(chuàng)新藥物研發(fā)上海高校工程研究中心[7]。

1.2 實(shí)驗(yàn)藥材

夏枯草藥材購(gòu)于上?？禈蛑兴庯嬈邢薰?，經(jīng)上海中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院生藥教研室張紅梅副教授鑒定為唇形科植物夏枯草Prunella Vulgaris L.的干燥果穗。

1.3 細(xì)胞株和病毒株

非洲綠猴腎細(xì)胞（Vero細(xì)胞，美國(guó)ATCC公司）；HSV-1 KOS病毒，HSV-2G病毒（美國(guó)ATCC公司）。

1.4 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

白豚鼠，雌性，260-280 g，購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院上海實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，飼養(yǎng)于上海中醫(yī)藥大學(xué)SPF級(jí)動(dòng)物房（溫度22±1℃，濕度55%±5%，12 h光暗循環(huán)；消毒后的飼料和水均由動(dòng)物自由攝?。Ｋ袆?dòng)物均嚴(yán)格按照國(guó)家和上海中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物中心動(dòng)物實(shí)用管理?xiàng)l例進(jìn)行實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)和實(shí)施。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 夏枯草多糖凝膠的制備

稱取卡波姆940 15 g，分次撒入500mL水中，攪拌，靜置過(guò)夜，使其充分溶脹均勻。取夏枯草超濾多糖30 g，加水200 mL，60℃水浴加熱使其溶解，放冷。另取尼泊金乙酯1 g，加入丙二醇80 g，超聲使其溶解后，加至夏枯草多糖水溶液中，再加入甘油100 g，三乙醇胺25 g，攪拌均勻，加至溶脹后的卡波姆中，加純水至1 000 g，攪拌均勻，即得每克含3%多糖的凝膠。

2.2 細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)（MTT法）

將Vero細(xì)胞計(jì)數(shù)后，以2×104/孔接種于96孔板，培養(yǎng)過(guò)夜。棄培養(yǎng)液，加入含不同濃度夏枯草超濾多糖（200、100、50、25μg·mL-1）和阿昔洛韋（50、100、200、400μM）的培養(yǎng)液，每濃度3個(gè)復(fù)孔，每孔200μL，同時(shí)設(shè)空白對(duì)照、未處理細(xì)胞對(duì)照和溶劑對(duì)照（0.1% DMSO）。培養(yǎng)72 h后，倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)，吸去培養(yǎng)液，加入MTT，孵育4 h，加入DMSO，在570/ 650 nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（A）。吸光度和細(xì)胞毒性率的計(jì)算公式如下：

用MicrosoftExcel的預(yù)測(cè)函數(shù)計(jì)算每個(gè)樣品的半數(shù)毒性濃度（Concentrationof50%CellularCytotoxicity，CC50）。

2.3 體外抗皰疹病毒活性測(cè)定（空斑減數(shù)法）

將Vero細(xì)胞計(jì)數(shù)后，以3×105/孔接種于12孔板，培養(yǎng)過(guò)夜。棄培養(yǎng)液，每孔接種病毒原液（HSV-1/ HSV-2）104倍稀釋液0.4mL（約含100 pfu），于37°C吸附1 h，棄病毒液，再加入含不同濃度夏枯草超濾多糖和甲基纖維素的培養(yǎng)液（終濃度200、100、50、25μg·mL-1）。每濃度2個(gè)復(fù)孔，每孔1mL，同時(shí)設(shè)正常細(xì)胞對(duì)照組、病毒對(duì)照組、陽(yáng)性藥物阿昔洛韋對(duì)照組（ACV濃度分別是：4、2、1、0.5μM）及DMSO溶劑對(duì)照組。培養(yǎng)72 h后，加入3.7%甲醛固定，1%結(jié)晶紫染色后，肉眼觀察并數(shù)出各孔內(nèi)的空斑數(shù)量，一個(gè)透明白點(diǎn)即為一個(gè)空斑，計(jì)算抑制率，公式如下：

通過(guò)SPSS軟件計(jì)算夏枯草超濾多糖對(duì)HSV-1和HSV-2抑制作用的IC50。一般來(lái)說(shuō)，治療指數(shù)（SI）越大，抗病毒活性越好，其計(jì)算公式如下：

2.4 HSV-1病毒感染動(dòng)物模型

將豚鼠隨機(jī)分為6組，即正常對(duì)照組、溶劑（輔料）對(duì)照組、多糖凝膠低劑量組、多糖凝膠中劑量組、多糖凝膠高劑量組和陽(yáng)性對(duì)照（阿昔洛韋乳膏）組，每組12只。

各組豚鼠進(jìn)行背部脊柱兩側(cè)皮膚脫毛處理，暴露背部15 cm2左右的皮膚。用75%乙醇擦洗脫毛部位皮膚去除殘余脫毛劑，待乙醇揮發(fā)再用純水擦洗。然后用醫(yī)用七星針在皮膚表面叩擊約50次，待皮膚微微滲血，（除正常對(duì)照組外）各組每只豚鼠背部涂抹100μL（2×107pfu·mL-1）HSV-1病毒液。夏枯草低、中、高劑量組每天每只給予相應(yīng)濃度的1鑰匙體積（約500mg）凝膠外涂于豚鼠造模部位，溶劑對(duì)照組給予等體積輔料外涂，陽(yáng)性藥對(duì)照組給予等體積阿昔洛韋乳膏外涂，連續(xù)給藥7天。

從HSV-1病毒感染次日起開始觀察病灶皮膚炎癥、水腫、浸潤(rùn)、丘皰疹、糜面及結(jié)痂等情況，并對(duì)皮膚炎癥、水腫、結(jié)痂的嚴(yán)重程度及丘皰疹數(shù)量進(jìn)行評(píng)價(jià)。在發(fā)病高峰期（HSV-1病毒感染后第5天）對(duì)其嚴(yán)重程度進(jìn)行評(píng)價(jià)，0分（-）為正常；1分（+）為輕度；2分（++）為中度；3分（+++）為重度；4分（++++）為極重度。

連續(xù)給藥7天后，處死各組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，取病灶皮膚組織。組織與生理鹽水按1∶9混合，對(duì)各組織樣本進(jìn)行勻漿處理，分離勻漿上清液。先將勻漿上清進(jìn)行總蛋白定量，根據(jù)蛋白定量結(jié)果，將所有樣本調(diào)至同樣總蛋白濃度。用試劑盒提供的DNA提取液抽提樣本中的DNA成分，通過(guò)實(shí)時(shí)定量PCR方法檢測(cè)各樣本中HSV-1的拷貝數(shù)量。

2.5 HSV-2病毒感染動(dòng)物模型

將豚鼠隨機(jī)分為6組，即正常對(duì)照組、溶劑（輔料）對(duì)照組、多糖凝膠低劑量組、多糖凝膠中劑量組、多糖凝膠高劑量組和陽(yáng)性對(duì)照（阿昔洛韋乳膏）組，每組12只。

用75%乙醇與純水清洗各組豚鼠外陰部。然后用粗糙細(xì)玻棒摩擦陰道粘膜數(shù)次；醫(yī)用七星針在外陰表面叩擊約20次。待皮膚微微滲血，（除正常對(duì)照組外）用灌胃針頭伸入陰道內(nèi)3 cm注射病毒液（1×107pfu，100μL），邊注射邊涂抹使病毒液完全滲入外陰粘膜組織。

夏枯草低、中、高劑量組每天每只給予相應(yīng)濃度的1鑰匙（?。w積（約200mg）凝膠外涂于豚鼠造模部位，溶劑對(duì)照組豚鼠給予等體積輔料外涂，陽(yáng)性藥對(duì)照組給予等體積阿昔洛韋乳膏外涂，連續(xù)給藥10天。

從豚鼠接種病毒后天開始分別觀察每只豚鼠外陰皮損，積分方法參用Kern's方法，具體評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)為：0分為無(wú)癥狀，0.5分為僅輕微紅腫；1.0分為紅腫明顯，無(wú)皰癥；1.5分為單個(gè)小皰癥（直徑≤2mm）；2.0分為單個(gè)大皰癥（直徑＞2mm）；2.5分為多個(gè)小皰癥和/或陰道潰瘍（出血）；3.0分為多個(gè)大皰癥；3.5分為嚴(yán)重外陰腫脹；4.0分為多個(gè)小/大皰癥融合；4.5分為后肢癱瘓；5.0分為外陰潰瘍，后肢癱瘓。

連續(xù)給藥10天后，處死各組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，取病灶外陰部組織。組織與生理鹽水按1∶9混合，對(duì)各組織樣本進(jìn)行勻漿處理，分離勻漿上清液。先將勻漿上清進(jìn)行總蛋白定量，根據(jù)蛋白定量結(jié)果，將所有樣本調(diào)至同樣總蛋白濃度。用試劑盒提供的DNA提取液抽提樣本中的DNA成分，通過(guò)實(shí)時(shí)定量PCR方法檢測(cè)各樣本中HSV-2的拷貝數(shù)量。

2.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)

表1 夏枯草超濾多糖和阿昔洛韋對(duì)Vero細(xì)胞的CC50值及對(duì)HSV-1和HSV-2的IC50值

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析

3.1 體外抗皰疹病毒活性測(cè)定結(jié)果

利用MTT法檢測(cè)夏枯草超濾多糖對(duì)Vero細(xì)胞的毒性作用，結(jié)果顯示夏枯草超濾多糖在1 600μg·mL-1濃度以下均無(wú)毒性?？瞻邷p數(shù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，夏枯草超濾多糖能夠在體外實(shí)驗(yàn)中抑制HSV-1和HSV-2的活性，并且其抑制作用呈劑量依賴性（表1、圖1）。

3.2 夏枯草多糖凝膠的體內(nèi)抗HSV-1作用

3.2.1 觀察病灶皮膚

從HSV-1病毒感染小鼠次日起開始觀察病灶皮膚，在病毒感染后第3天病灶皮膚開始出現(xiàn)丘皰疹，并伴有明顯的炎癥、水腫、大量分泌物和糜面的發(fā)生。在第5天達(dá)到發(fā)病高峰，隨后進(jìn)入自限階段，病灶處炎癥與水腫開始消退，丘皰疹發(fā)生部分結(jié)痂，分泌物減少糜面漸趨干燥。夏枯草多糖凝膠能夠緩解皰疹發(fā)病程度，改善各種病理體征，且呈濃度依賴關(guān)系，高劑量夏枯草多糖凝膠與陽(yáng)性對(duì)照藥物阿昔洛韋乳膏基本等效（圖2）。

圖1 夏枯草超濾多糖抗HSV-1和HSV-2的空斑效果圖

圖2 HSV-1感染小鼠的病灶皮膚觀察結(jié)果（感染后第5天）

3.2.2 丘皰疹數(shù)統(tǒng)計(jì)結(jié)果

在HSV-1病毒感染后第3、5、7天對(duì)各組豚鼠病灶皮膚處發(fā)生的直徑大于2mm的丘皰疹進(jìn)行計(jì)數(shù)與統(tǒng)計(jì)。統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示，夏枯草多糖凝膠能夠緩解感染模型豚鼠丘皰疹的發(fā)生，并促進(jìn)丘皰疹的消退，且具有明顯的量效關(guān)系。隨著給藥時(shí)間的延長(zhǎng)，其藥效逐漸顯現(xiàn)，在第3天高劑量組與溶劑對(duì)照組相比已具有顯著差異，在第5天中劑量組顯現(xiàn)差異，到第7天低劑量組開始表現(xiàn)出顯著療效，且在整個(gè)病程中高劑量組的療效接近于陽(yáng)性對(duì)照藥物阿昔洛韋乳膏（圖3）。

3.2.3 對(duì)病變情況的評(píng)價(jià)

通過(guò)對(duì)病灶皮膚發(fā)生典型炎癥反應(yīng)、水腫和結(jié)痂的程度進(jìn)行計(jì)分評(píng)價(jià)，發(fā)現(xiàn)夏枯草多糖凝膠能夠明顯緩解感染豚鼠皮膚的炎癥反應(yīng)與水腫，且具有量效關(guān)系。由于高劑量夏枯草多糖凝膠對(duì)丘皰疹發(fā)生的抑制，以及促進(jìn)丘皰疹消退的作用，其結(jié)痂程度也明顯減少。比較在炎癥反應(yīng)、水腫和結(jié)痂方面的療效，夏枯草多糖凝膠高劑量組的療效近于陽(yáng)性對(duì)照藥物阿昔洛韋乳膏（圖4）。

圖3 HSV-1病毒感染豚鼠病灶皮膚處的丘皰疹數(shù)

圖4 對(duì)HSV-1感染豚鼠病灶皮膚典型病變情況的評(píng)分結(jié)果

3.2.4 對(duì)病灶組織中HSV-1病毒的定量分析

為獲得可觀的量化評(píng)價(jià)，在HSV-1病毒感染后第7天對(duì)實(shí)驗(yàn)豚鼠進(jìn)行安樂(lè)死后，取病灶皮膚組織。通過(guò)實(shí)時(shí)定量PCR方法檢測(cè)單位組織中HSV-1的DNA拷貝數(shù)，從而評(píng)價(jià)HSV-1病毒在各組豚鼠病灶皮膚組織中的含量。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，夏枯草多糖凝膠能夠明顯降低感染豚鼠皮膚組織HSV-1的DNA拷貝數(shù)，且具有量效關(guān)系。高劑量夏枯草多糖凝膠與溶劑對(duì)照組比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，其減少病灶組織中HSV-1的效應(yīng)與陽(yáng)性藥物阿昔洛韋乳膏相當(dāng)（圖5）。

3.3 夏枯草多糖凝膠的體內(nèi)抗HSV-2作用

3.3.1 觀察外陰部病變情況

HSV-2病毒感染次日起開始觀察豚鼠外陰部病灶，在病毒感染后第2天開始外陰部出現(xiàn)紅腫、皰疹，并伴隨分泌物增加和外陰部皮膚潰破。在第6天達(dá)到發(fā)病高峰，隨后進(jìn)入自限階段，病灶處紅腫開始消退，皰疹發(fā)生部分結(jié)痂，分泌物減少，糜面漸趨干燥。夏枯草多糖凝膠能夠緩解皰疹發(fā)病程度，改善各種病理體征，且呈濃度依賴關(guān)系，高劑量夏枯草多糖凝膠與陽(yáng)性對(duì)照藥物阿昔洛韋乳膏基本等效（圖6）。

圖5 HSV-1病毒感染豚鼠病灶組織中HSV-1的DNA拷貝數(shù)

圖6 HSV-2病毒感染小鼠病灶外陰部觀察結(jié)果（感染后第6天）

3.3.2 對(duì)發(fā)病情況的評(píng)價(jià)

HSV-2病毒感染后第2天開始外陰部出現(xiàn)皮膚紅腫、皰癥、陰道潰瘍等典型評(píng)分指征，在第6天達(dá)到發(fā)病高峰。在第2、4、6、8、10天用Kern's方法進(jìn)行評(píng)價(jià)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，夏枯草多糖凝膠能夠明顯緩解感染豚鼠HSV-2病毒引起的各種病變現(xiàn)象，且具有量效關(guān)系。其中，夏枯草多糖凝膠高劑量組的療效接近于陽(yáng)性對(duì)照藥物阿昔洛韋乳膏（圖7）。

3.3.3 對(duì)病灶組織中HSV-2病毒的定量分析

為獲得可觀的量化評(píng)價(jià)，在HSV-2病毒感染后第10天對(duì)實(shí)驗(yàn)豚鼠進(jìn)行安樂(lè)死后，取病灶組織。通過(guò)實(shí)時(shí)定量PCR方法檢測(cè)單位組織中HSV-2的DNA拷貝數(shù)，從而評(píng)價(jià)HSV-2病毒在各組豚鼠病灶組織中的含量。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，夏枯草多糖凝膠能夠明顯降低感染豚鼠皮膚組織HSV-2的DNA拷貝數(shù)。其中，中劑量與高劑量夏枯草多糖凝膠與溶劑對(duì)照組比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，其減少病灶組織中HSV-2的效果與陽(yáng)性藥物阿昔洛韋乳膏相當(dāng)（圖8）。

圖7 HSV-2病毒感染小鼠病灶外陰部典型病變情況的Kern's評(píng)分結(jié)果

圖8 HSV-2病毒感染豚鼠病灶外陰部組織中HSV-2的DNA拷貝數(shù)

4 討論

在進(jìn)行藥物體外抗病毒的研究過(guò)程中，最為常用的方法是細(xì)胞病變效應(yīng)（Cytopathic Effect，CPE）法，即CPE法。在藥物的無(wú)毒范圍內(nèi)，細(xì)胞病變隨著藥物濃度的提高逐漸減輕，從而可以粗略的估計(jì)藥物有效范圍。但此法主觀性強(qiáng)，且不能進(jìn)行精確的定量分析。MTT分析法是使用MTT[(4,5-二甲基噻唑)-2,5-二苯基四唑溴化物]對(duì)細(xì)胞進(jìn)行染色，通過(guò)檢測(cè)其光密度值（Optical Density，OD）的改變可判斷細(xì)胞的活性，從而進(jìn)行藥效的定量分析。但MTT法必須與CPE法相結(jié)合，通過(guò)在光鏡下觀察細(xì)胞的CPE，決定進(jìn)行MTT測(cè)定的最適時(shí)間，以保證結(jié)果的準(zhǔn)確性。空斑試驗(yàn)是病毒學(xué)研究中的經(jīng)典實(shí)驗(yàn)技術(shù)，可精確測(cè)定病毒的感染程度。它比MTT法更敏感、精確，藥物有效范圍更大，檢查結(jié)果直觀，而且不受CPE類型的限制，但應(yīng)用空斑減數(shù)法對(duì)操作技術(shù)要求較高，方法較繁瑣[8]。本課題組前期研究已利用MTT結(jié)合CPE的方法對(duì)夏枯草多糖提取物的抗單純皰疹病毒活性進(jìn)行了篩選[7]，本研究利用空斑減數(shù)法再次驗(yàn)證了夏枯草超濾多糖的體外抗HSV-1和HSV-2活性。

進(jìn)一步建立HSV-1（皮膚感染）和HSV-2（外陰部感染）病毒感染豚鼠模型，以病灶病變情況、丘皰疹數(shù)、典型病變?cè)u(píng)分結(jié)果以及病灶組織中HSV-1和HSV-2病毒的DNA拷貝數(shù)等為指標(biāo)，對(duì)夏枯草多糖凝膠的體內(nèi)抗單純皰疹病毒活性進(jìn)行評(píng)價(jià)。結(jié)果顯示，對(duì)于HSV-1病毒感染的豚鼠模型中，夏枯草多糖凝膠能夠降低感染豚鼠皮膚的皰疹發(fā)病程度，改善各種病理體征，減少丘皰疹的發(fā)生并促進(jìn)其消退，緩解感染豚鼠皮膚的炎癥反應(yīng)與水腫，降低感染豚鼠皮膚組織HSV-1的DNA拷貝數(shù)；對(duì)于HSV-2病毒感染的豚鼠模型中，夏枯草多糖凝膠能夠緩解感染豚鼠外陰部的皰疹發(fā)病程度，減少外陰部皮膚紅腫、皰癥和陰道潰瘍，明顯降低感染豚鼠皮膚組織HSV-2的DNA拷貝數(shù)。此外，對(duì)感染豚鼠病變指標(biāo)的評(píng)價(jià)結(jié)果顯示，高劑量夏枯草多糖凝膠與陽(yáng)性對(duì)照藥物阿昔洛韋乳膏基本等效。因此，夏枯草多糖及其凝膠制劑具有開發(fā)成為抗單純皰疹病毒藥物的潛在價(jià)值，本研究結(jié)果將為后續(xù)將夏枯草多糖開發(fā)成為抗單純皰疹病毒的新藥提供科學(xué)依據(jù)。

1蓋春艷,孔德云,王曙光,等.夏枯草化學(xué)成分研究.中國(guó)醫(yī)藥工業(yè)雜志,2010,41(8)：580-582.

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A Pharm acodynam ic Study on the Anti-Herpes Sim p lex Virus(HSV)Activity of the Polysaccharidesand Gels from Prunella vulgaris L.

CaiShuangfan1,2,Yang Yang3,Wu Rong1,2,Yang Yifu3,Tan Hongsheng1,2
(1.SchoolofPharmacy,ShanghaiUniversity ofTraditionalChineseMedicine,Shanghai201203,China; 2.Engineering Research CenterofShanghaiCollegesforTCM New Drug Discovery,Shanghai201203,China; 3.The ExperimentCenterofScienceand Technology,ShanghaiUniversity ofTraditionalChineseMedicine, Shanghai201203,China)

The aim of this study is to explore the anti-HSV activity of P.vulgaris polysaccharides and gels in vitro and in vivo with the provision of scientific evidence for the further research of anti-HSV new drugs.Plaque reduction assay was adopted to determine the IC50value of P.vulgaris polysaccharideson HSV-1 and HSV-2 in vitro.In addition,HSV-1(skin)and HSV-2(vulva)infected guinea-pigmodelswere established for assessing the anti-HSV activity ofpolysaccharides and gels in vivo,and infected lesion degree,number of papulovesicle,typical lesion score and the DNA copy numbersofHSV-1 and HSV-2 viruses in the lesion tissuewere taken as the indexes.Itwas found that the activitiesofHSV-1 and HSV-2 viruseswas inhibited by P.vulgaris polysaccharides in vitro,while HSV induced skin lesions in the guineapigswere ameliorated by P.vulgaris gel,exerting an anti-HSV action.In conclusion,itwas demonstrated that P.vulgaris polysaccharidesand gelsperformed an anti-HSV action both in vitro and in vivo with the hidden value ofdevelopinganti-HSV agents.

Prunella vulgaris L.,anti-herpessimplex virus,polysaccharides,gel

10.11842/wst.2017.02.010

R285.5

A

（責(zé)任編輯：馬雅靜，責(zé)任譯審：朱黎婷）

2017-02-21

修回日期：2017-02-21

＊科學(xué)技術(shù)部“重大新藥創(chuàng)制”科技重大專項(xiàng)“十二五”計(jì)劃（2013ZX09103002-020）：夏枯草多糖抗皰疹病毒候選藥物研究，負(fù)責(zé)人：徐宏喜。

＊＊蔡雙璠、楊揚(yáng)為共同第一作者。

＊＊＊通訊作者：楊以阜，研究員，主要研究方向：免疫藥理學(xué)評(píng)價(jià)及作用機(jī)制研究；譚紅勝，副研究員，主要研究方向：中藥活性成分研究及中藥新藥研發(fā)。