液質(zhì)聯(lián)用檢測(cè)白酒中的微量甜蜜素

王鳳芹　伊芳　汪秀月

摘要 采用液質(zhì)聯(lián)用建立了分析白酒中微量甜蜜素的方法，以0.1%甲酸和甲醇（80∶20）為流動(dòng)相，樣品用水直接稀釋2倍測(cè)定，采用多反應(yīng)方式（MRM）進(jìn)行檢測(cè)。最低檢出限為2 ng/mL，最低定量限為10 ng/mL，在10～1 000 ng/mL時(shí)相關(guān)系數(shù)為0.999 9，平均回收率為102.9%～106.6%，最大相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.5%。采用2種類(lèi)型白酒做加標(biāo)回收，重復(fù)性良好，且能在3 min內(nèi)完成一次進(jìn)樣分析，該方法簡(jiǎn)單快捷，結(jié)果可靠，可用于白酒中微量甜蜜素的檢測(cè)。

關(guān)鍵詞 液質(zhì)聯(lián)用；白酒；甜蜜素

中圖分類(lèi)號(hào) TS202.3 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A 文章編號(hào) 1007-5739（2017）04-0246-02

Abstract A method for trance sodium cyclamate in liquor was established by HPLC-MS/MS.The solvent system was composed of water with 0.1% methane acid and methanol by 80∶20.Samples diluted 2 times with water were detected by multiple reaction monitoring mode（MRM）.The minimum detection limit was 2 ng/mL and the minimum quantification limit was 10 ng/mL.The correlation coefficient was higher than 0.999 9 from 10 ng/mL to 1 000 ng/mL，and the average recoveries were range from 102.9% to 106.6%.Maximum relative standard deviation was 2.5%.Using two types liquor for doing standard addition recoveries showed good reproducibility and finished a sample analysis within 3 min.The method is simple，quick and reliable，and can be used for analysis of trance sodium cyclamate in types of liquor.

Key words UPLC-MS/MS；liquor；sodium cyclamate

甜蜜素是一種人工合成甜味劑，具有高效的甜味特性。不法商家為改善酒的口味，欺騙消費(fèi)者，存在違法添加的可能[1-3]。打擊違法添加，保障酒的飲用安全是監(jiān)管部門(mén)的職責(zé)。因此，建立一種快捷、可靠的檢測(cè)甜蜜素的方法很有必要[4-5]?，F(xiàn)在參照?qǐng)?zhí)行的檢測(cè)方法是《進(jìn)出口食品中環(huán)己基氨基磺酸鈉的檢測(cè)方法液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法》（SN/T 1948—2007）[6]，蒸餾白酒中甜蜜素的測(cè)定并沒(méi)有相應(yīng)的國(guó)標(biāo)檢測(cè)方法。因此，本試驗(yàn)探究白酒中微量甜蜜素的檢測(cè)方法，以期為白酒中微量甜蜜素檢測(cè)國(guó)標(biāo)方法的建立提供參考。甜蜜素檢測(cè)運(yùn)用比較多的是氣相色譜法，但檢出限偏高，容易出現(xiàn)假陽(yáng)性[7-9]。而液質(zhì)聯(lián)用方法以其準(zhǔn)確、檢測(cè)限低的特點(diǎn)正在白酒中微量甜蜜素的檢測(cè)中發(fā)揮重要作用[10-12]。

1 材料與方法

1.1 儀器與設(shè)備

1260型超高液相色譜/6460三重四級(jí)桿質(zhì)譜聯(lián)用儀（美國(guó)Agilent公司），液相色譜儀配備Agilent G4226A自動(dòng)進(jìn)樣器，Agilent G1316C柱溫箱，Agilent G4220B泵，質(zhì)譜儀配備電噴霧離子源（ESI，美國(guó)Agilent公司），數(shù)據(jù)處理采用Agilent MassHunter工作站進(jìn)行，分析天平（型號(hào)：AL204/01，美國(guó)梅特勒-托利多公司）。

1.2 材料與試劑

酒樣：50種成品白酒，市售。甜蜜素標(biāo)準(zhǔn)品GBW（E）100173樣品編號(hào)為15090173，標(biāo)準(zhǔn)值10.00 mg/mL，相對(duì)擴(kuò)展不確定度為1%；甲醇（色譜級(jí)，DIKMA公司），甲酸（色譜級(jí)，aladdin公司），蒸餾水（屈臣氏公司）。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 貯備液。用移液槍精密移取100 μL標(biāo)準(zhǔn)品于10 mL容量瓶中，蒸餾水定容，配制出為100 μg/mL的貯備液。

1.3.2 標(biāo)準(zhǔn)使用溶液。用移液槍精密移取1 mL貯備液于10 mL容量瓶中，蒸餾水稀釋定容制成10 μg/mL的中間標(biāo)準(zhǔn)工作液。精密吸取10、25、50 μL的中間標(biāo)準(zhǔn)工作液于50 mL容量瓶中，制成2、5、10 ng/mL的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，精密吸取50、200、400、500 μL貯備液于50 mL容量瓶中，制成100、400、800、1 000 ng/mL的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，過(guò)0.45 μm濾膜，濾液待機(jī)分析。

1.3.3 色譜條件。色譜柱：ZORBAX SB-C18（21 mm×50 mm，1.8 μm），柱溫30 ℃，進(jìn)樣量5 μL，流動(dòng)相：A為0.1%（v/v）甲酸，B為甲醇，兩者比例為80∶20，流速0.2 mL/min。

1.3.4 質(zhì)譜條件。離子源：ESI負(fù)離子模式，霧化器壓力45 psi，干燥器溫度350 ℃，干燥氣流速5 L/min，鞘氣流溫度350 ℃，鞘氣流流速11 L/min，毛細(xì)管電壓4 500 V，最優(yōu)裂解電壓130 V，最優(yōu)碰撞能30 V，多重反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM），母離子178.1，子離子79.8，分析時(shí)長(zhǎng)3 min，載氣為氮?dú)獍l(fā)生器制取的氮?dú)?，碰撞氣為高純氮?

1.3.5 樣品的處理方法。用分析天平準(zhǔn)確稱(chēng)取1 mL均勻白酒于10 mL塑料離心管內(nèi)，加1 mL水，蓋塞混勻，倒進(jìn)一次性注射器內(nèi)過(guò)0.45 μm濾膜（水相），濾液待機(jī)分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 色譜條件的選擇

本試驗(yàn)采用甲醇-0.1%（v/v）甲酸水體系作為流動(dòng)相，體積比為20∶80時(shí)，甜蜜素響應(yīng)值最高。流動(dòng)相未引入銨鹽，對(duì)質(zhì)譜起到一定的保護(hù)[13]。

2.2 質(zhì)譜條件的選擇

選用400 ng/mL標(biāo)準(zhǔn)品溶液進(jìn)行質(zhì)譜條件的優(yōu)化。首先在ESI負(fù)離子模式下進(jìn)行全掃描（Scan），得到甜蜜素的一級(jí)質(zhì)譜圖，確認(rèn)178.1為其母離子；其次運(yùn)行選擇離子監(jiān)測(cè)模式（SIM）得到其最優(yōu)裂解電壓為130 V；最后運(yùn)行子離子掃描模式（PIS）優(yōu)化其碰撞能，并得到二級(jí)質(zhì)譜圖，最優(yōu)碰撞能為30 V，定量子離子為79.8。再采用MRM方式監(jiān)測(cè)178.1/79.8離子對(duì)，并根據(jù)優(yōu)化數(shù)據(jù)調(diào)節(jié)質(zhì)譜參數(shù)，進(jìn)行定量分析。

2.3 樣品處理?xiàng)l件的選擇

將白酒樣品直接稀釋2倍，過(guò)0.45 μm濾膜（水相）過(guò)濾，直接上機(jī)分析，處理方法便捷[14-15]。

2.4 線(xiàn)性范圍與檢出限

配制濃度在2～1 000 ng/mL范圍的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，按文中所述方法測(cè)定。當(dāng)甜蜜素標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為2 ng/mL時(shí)，S/N為3.26>3；當(dāng)為10 ng/mL時(shí)，S/N為11.92>10，故此方法甜蜜素檢出限為2 ng/mL，定量限為10 ng/mL。甜蜜素在10～1 000 ng/mL有良好的線(xiàn)性關(guān)系，濃度點(diǎn)分別為10、100、400、800、1 000 ng/mL，標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)為y=11.054 2x+50.272 3，相關(guān)系數(shù)R2為0.999 9（圖1）。

2.5 方法精密度與加標(biāo)回收率

選用2種類(lèi)型白酒作為加標(biāo)樣品（A和B），以驗(yàn)證其重復(fù)性，稀釋2倍后作為加標(biāo)基質(zhì)（甜蜜素含量為0），每種均加標(biāo)3個(gè)質(zhì)量濃度，加標(biāo)水平分別為100、400、800 ng/mL，采用上述建立的方法，每個(gè)添加水平重復(fù)測(cè)定6次，計(jì)算添加平均回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差，甜蜜素的平均回收率在102.9%～106.6%之間，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.2%～2.5%。方法精密度和加標(biāo)回收率均符合殘留分析的要求。2種類(lèi)型的白酒重復(fù)性良好，結(jié)果見(jiàn)表1。

2.6 樣品含量測(cè)定

運(yùn)用本試驗(yàn)建立的方法，測(cè)定市售白酒50個(gè)，每個(gè)樣品做2個(gè)平行，其中檢出2個(gè)白酒甜蜜素有響應(yīng)值，但樣品260因S/N<3，未達(dá)到檢出限，視為未檢出，結(jié)果見(jiàn)表2，樣品261測(cè)定圖譜見(jiàn)圖2。

3 結(jié)論

本試驗(yàn)使用超高壓液相-質(zhì)譜聯(lián)用儀，以0.1%甲酸和甲醇為流動(dòng)相建立的方法可以成功檢測(cè)出白酒中的微量甜蜜素。該方法樣品處理簡(jiǎn)單，只需將酒樣稀釋2倍[16]。最低檢出限為2 ng/mL，最低定量限為10 ng/mL，在10～1 000 ng/mL時(shí)相關(guān)系數(shù)R2為0.999 9，平均回收率為102.9%～106.6%，最大相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.5%（<5%）。方法精密度和加標(biāo)回收率均符合殘留分析的要求，且能在3 min內(nèi)完成一次進(jìn)樣分析，方法快捷，結(jié)果可靠。該方法的建立可滿(mǎn)足監(jiān)管部門(mén)的大規(guī)模監(jiān)督抽驗(yàn)任務(wù)，并能提供及時(shí)可靠的檢測(cè)數(shù)據(jù)，以期為白酒中甜蜜素檢測(cè)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)的建立提供參考。

4 參考文獻(xiàn)

[1] 食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)：GB 2760-2014[S].北京：中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社，2014.

[2] 夏于林，李明春，張瑩，等.液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法同時(shí)測(cè)定白酒中4種甜味劑方法研究[J].中國(guó)釀造，2011，30（3）：156-158.

[3] 王駿.HPLC/MS測(cè)定白酒中的微量甜味劑[J].食品與發(fā)酵工業(yè)，2007，33（10）：152-153.

[4] 張衛(wèi)軍，毛周平.高效液相色譜法對(duì)白酒中甜蜜素含量的測(cè)定[J].釀酒，2016，43（5）：86-88.

[5] 牛之瑞，王秀君，于毅濤，等.液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀同時(shí)測(cè)定白酒中8種甜味劑[J].食品科學(xué)，2016，37（2）：178-181.

[6] 進(jìn)出口食品中環(huán)己基氨基磺酸鈉的檢測(cè)方法液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法：SN/T1948-2007[S].北京：中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社，2007.

[7] 王貴雙，高麗華，趙俊平，等.氣相色譜法測(cè)定食品中甜蜜素定量方法的探討[J].中國(guó)釀造，2010（12）：159-161.

[8] 劉波.葡萄酒中甜蜜素含量測(cè)定方法探討[J].中國(guó)釀造，2010，29（7）：171-173.

[9] 王貴雙，高麗華，趙俊平，等.氣質(zhì)聯(lián)用技術(shù)測(cè)定食品中甜蜜素定性分析的探討[J].中國(guó)釀造，2011（12）：171-172.

[10] 梅婕，司冠儒，張溫清，等.高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定白酒中6種甜味劑[J].釀酒科技，2016（3）：122-124.

[11] 胡強(qiáng)，王延云，李超豪，等.超高液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法快速測(cè)定白酒中痕量甜味劑[J].食品科學(xué)，2013，34（20）：232-236.

[12] 孫棣，馮永渝，梁桂娟.白酒中甜味劑的檢測(cè)及其來(lái)源的探討[J].中國(guó)釀造，2015，34（7）：142-146.

[13] STORM T，REEMTSMA T，JEKEL M.Use of volatile amines as ion-pa-iring agents for the high-performance liquid chromatographic-tandem mass spectrometric determination of aromatic sulfonates in industrial wastewater[J].Journal of Chromatography A，1999，854（1-2）：175-185.

[14] 梁桂娟，馮永渝，田志強(qiáng)，等.超高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法（UPLC-MS/MS）同時(shí)測(cè)定白酒中的微量甜味劑[J].釀酒科技，2012（8）：109-115.

[15] 周彬，呂任一，肖麗恒，等.UPLC-MS/MS同時(shí)測(cè)定酒類(lèi)產(chǎn)品中多種人工合成甜味劑[J].食品科學(xué)，2014，35（12）：1-7.

[16] 劉國(guó)英，胡艷麗，萬(wàn)春環(huán)，等.超高液相色譜-三重四級(jí)桿串聯(lián)質(zhì)譜儀（UPLC-MS/MS）同時(shí)測(cè)定白酒中4種微量甜味劑[J].釀酒科技，2015（6）：92-94.