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    利用雙縮脲試劑檢驗蜘蛛絲成分的探索

    2017-04-08 16:19:15朱秀燕胡東升
    生物學通報 2017年4期
    關鍵詞:蜘蛛絲蛛絲試劑

    朱秀燕 胡東升

    (北京市順義牛欄山第一中學 北京 101301)

    蜘蛛絲是蜘蛛為了取食而結成的輕、柔軟且結實的網(wǎng)狀結構。人們利用多種技術手段和精密儀器了解蜘蛛絲的物理機械性能、蜘蛛絲蛋白的氨基酸成分、蜘蛛絲蛋白基因序列及蜘蛛絲蛋白的空間構型等多方面內(nèi)容。天然或人工蜘蛛絲已被廣泛應用。古希臘人用蜘蛛網(wǎng)為傷口止血,第二次世界大戰(zhàn)時蜘蛛絲曾被用作望遠鏡、槍炮的瞄準系統(tǒng)中光學裝置的十字準線,目前在航空航天(例如飛機和人造衛(wèi)星的結構材料、復合材料、宇航服裝)、軍事(例如坦克裝甲、防彈衣、降落傘)、建筑(例如橋梁和高層建筑的結構材料)、醫(yī)學(例如眼科及顯微手術繃帶、手術縫合線、人造韌帶、血管支架)等領域均表現(xiàn)出廣闊的應用前景[1]。

    蜘蛛絲是由氨基酸(約42%甘氨酸、約25%丙氨酸及少量谷氨酸、酪氨酸、亮氨酸、絲氨酸等體積較大的氨基酸)組成的天然蛋白質[2]??蒲腥藛T通過高科技手段及一些精密儀器(電鏡技術)等對其進行測定和研究。筆者嘗試指導學生利用雙縮脲試劑顯色法對其進行初步鑒定,從而使學生了解“檢測生物組織中的蛋白質實驗”不僅是單純的驗證實驗,而是利用所學知識解釋生活現(xiàn)象,從而達到學以致用的目的。

    1 實驗原理

    雙縮脲試劑是由雙縮脲試劑A(NaOH)和雙縮脲試劑B(CuSO4)2種試劑組成,雙縮脲試劑用來檢測雙縮脲,因蛋白質中有肽鍵(-CO-NH-),所以也可用于蛋白質檢驗,與蛋白質接觸后的顏色呈紫色。

    2 實驗儀器和試劑

    1)儀器:廣口瓶,鑷子,玻璃棒,剪刀,酒精燈,三腳架,火柴,試管,玻璃棒,燒杯,石棉網(wǎng),滴管。照相器材:華為榮耀6手機(1 300萬像素)。

    2)試劑:蒸餾水,10%的氯化鈣溶液,雙縮脲試劑(0.1 g/mL氫氧化鈉水溶液和0.01 g/mL硫酸銅水溶液),雞蛋白溶液。

    3 實驗過程

    3.1 蜘蛛絲的采集

    3.1.1 野外采集 采集地點盡量選擇人們活動少的地方;采集時間選擇傍晚或晚上,該時間段是蜘蛛結網(wǎng)捕食的時間;由于漏斗蛛的網(wǎng)結成時間較長,上面灰塵和蚊蟲的殘體較多,盡量不采集,金蛛和大腹園蛛的網(wǎng)不僅大[3],而且都是當天結成或補織,便于采集,另外雜質少對檢驗實驗的顯色反應干擾較少。

    本實驗蜘蛛絲采集環(huán)境分別選取在北京市順義區(qū)潮白河河畔的灌木叢、居民小區(qū)的綠化帶及學校校園圍墻下,采集漏斗蛛剛結成的新網(wǎng)和園蛛結的圓網(wǎng)。

    3.1.2 飼養(yǎng)蜘蛛絲采集 由于不能長時間到野外采集,且野外采集的蜘蛛絲上面灰塵和雜質較多,干擾實驗現(xiàn)象觀察,所以捕捉蜘蛛后在室內(nèi)飼養(yǎng),再提取其蜘蛛絲,以提供較為純凈的實驗材料。

    本實驗選擇一只個體較大的大腹園蛛進行飼養(yǎng),飼養(yǎng)環(huán)境是50 cm×40 cm紙箱(上面遮蓋透明塑料布,便于觀察結網(wǎng)情況),每天喂食蒼蠅、瓢蟲等活體昆蟲,第2天早晨用玻璃棒纏繞、采集蜘蛛絲。連續(xù)采集10 d,將蜘蛛絲收集在一起待用。

    3.2 蜘蛛絲蛋白質成分的檢驗

    1)制取蜘蛛絲混濁液:將野外采集的蜘蛛絲用剪刀剪成碎末,置于50 mL的燒杯中,加入少量蒸餾水,酒精燈煮沸0.5 h形成混濁液,冷卻后待用。

    2)實驗步驟:用膠頭滴管取蛛絲蛋白混濁液約1 mL置于試管中,取另一支試管加入1 mL雞蛋白溶液作為對照組。分別滴加雙縮脲試劑(先加入0.1 g/mL的氫氧化鈉水溶液約1 mL,再加入4~5滴0.01 g/mL的硫酸銅水溶液),充分振蕩后觀察現(xiàn)象。

    3)實驗結果:對照組出現(xiàn)明顯的紫色,蛛絲蛋白組沒有出現(xiàn)明顯的紫色。

    4)實驗現(xiàn)象分析:①蜘蛛絲可能沒有充分溶解,溶液中蛋白質濃度低;②野外采集的蜘蛛絲雜質較多,蜘蛛絲渾濁液較黑,干擾實驗現(xiàn)象的觀察;③蜘蛛絲蛋白質結構的破壞不夠充分。

    查閱資料后得知蛛絲纖維蛋白極其不容易溶解[4-5],只能溶于高濃度的鹽溶液如溴化鋰、硫氰酸鋰、氯化鈣等,另外高濃度的丙酸和鹽酸混合物及甲酸也能溶解蛛絲。

    5)根據(jù)以上分析,將實驗改進為:①取材:室內(nèi)飼養(yǎng)蜘蛛的蜘蛛絲,保證蜘蛛絲混濁液的顏色盡量為無色;②實驗方法:將蜘蛛絲剪碎后,置于研缽中,加入石英砂和氯化鈣溶液充分研磨。靜置后取上清液進行雙縮脲試劑檢測實驗;③實驗結果:蜘蛛絲混濁溶液加入雙縮脲試劑后顯示紫色;④實驗結論:蜘蛛絲的主要成分是蛋白質。

    4 實驗反思

    學生通過對蜘蛛絲成分的研究,不僅對蜘蛛絲的蛋白質成分有了更清晰的認識,同時也將所學知識很好地應用于實踐。在實驗過程和實驗改進中提高了分析問題和解決問題的能力。

    5 實驗創(chuàng)新點

    1)蜘蛛絲蛋白質成分的研究一般在高校和科研機構進行,需要借助一些先進的和大的設備完成。本研究的方法和手段完全是基于高中生物學研究方法,學生能夠將所學內(nèi)容直接用于實踐檢驗,簡單易行,現(xiàn)象明顯。

    2)高中生物學教學中檢驗蛋白質所用到的材料都是雞蛋白溶液(其成分更多的是球蛋白,便于溶解配成溶液),利用教材所學到的方法應用于生活中其他蛋白質的檢驗(本實驗是對蜘蛛絲蛋白質的檢驗),更好體現(xiàn)學以致用的理念,培養(yǎng)學生的探究能力。

    3)查閱的資料中對于蜘蛛絲蛋白質(其成分主要是絲蛋白)的溶解是研究中的一個難點,本實驗借助于研缽、石英砂和氯化鈣溶液溶解蜘蛛絲蛋白是一個大膽的嘗試。

    主要參考文獻

    [1]張野妹.天然蜘蛛絲蛋白的分子構象轉變特征.蘇州:蘇州大學碩士學位論文,2014.

    [2]IIT Kharagpur,Rahul,G Asai.蜘蛛絲研究與應用概述.纖維技術,2006(7):26.

    [3]王建南,白倫.蜘蛛絲蛋白及其基因工程研究.絲綢,2008(6):53.

    [4]許菁,潘志娟.蜘蛛絲蛋白的人工合成及人造蛛絲.蘇州大學學報(工科版),2005,25(1):48.

    [5]宋大祥,周開亞,潘鴻春.蜘蛛絲蛋白研究進展.蛛形學報,2006,15(1):52.

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