• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    “低溫誘導(dǎo)植物染色體數(shù)目變化”實(shí)驗(yàn)的探究與思考

    2017-04-08 08:40:44李加重
    生物學(xué)通報(bào) 2017年7期
    關(guān)鍵詞:實(shí)驗(yàn)學(xué)生

    鄧 琳 李加重

    (1天津市靜海區(qū)瀛海學(xué)校 天津 301600 2天津市靜海區(qū)教育教學(xué)研究室 天津 301600)

    “低溫誘導(dǎo)植物染色體數(shù)目變化”實(shí)驗(yàn)是人教版高中生物學(xué)必修2“染色體變異”一節(jié)中的實(shí)驗(yàn)內(nèi)容。該實(shí)驗(yàn)的目的是幫助學(xué)生理解低溫誘導(dǎo)植物細(xì)胞染色體數(shù)目變化的作用機(jī)制,有利于了解染色體變異在實(shí)際生活中的應(yīng)用。但是在實(shí)際教學(xué)中,按照教材介紹的步驟進(jìn)行實(shí)驗(yàn)時(shí)遇到了很多問(wèn)題,例如成功率低、觀察效果不理想等,不利于學(xué)生對(duì)誘導(dǎo)機(jī)制形成直觀感受與認(rèn)知。分析原因,一方面是低溫誘導(dǎo)的溫度和處理時(shí)間的選擇存在爭(zhēng)議;另一方面是在制作裝片的過(guò)程中對(duì)解離、染色等環(huán)節(jié)條件的控制有待改進(jìn)。因此筆者組織學(xué)生在實(shí)際操作中對(duì)該實(shí)驗(yàn)進(jìn)行了進(jìn)一步的探究和改進(jìn)。

    1 材料與方法

    1.1 實(shí)驗(yàn)材料 結(jié)合教材,實(shí)驗(yàn)小組本著實(shí)驗(yàn)材料易獲得、操作簡(jiǎn)單、染色體條數(shù)少、易觀察等原則,確定了幾種實(shí)驗(yàn)材料:蠶豆(2n=12)、洋蔥(2n=16)、豌豆(2n=14)、大蔥、大蒜。

    1.2 實(shí)驗(yàn)方法與步驟

    1.2.1 培養(yǎng)根尖 將蠶豆和豌豆種子在清水中浸泡,待種子泡發(fā)后放入鋪有濕潤(rùn)紗布的培養(yǎng)皿中于室溫下培養(yǎng)。因氣溫較高,培養(yǎng)皿置于無(wú)光陰涼處,且每天換水2次。若實(shí)驗(yàn)室具備恒溫箱,可將培養(yǎng)皿放入10℃中培養(yǎng),每2天換一次水(水浸沒(méi)種子的1/3或1/2)。洋蔥需在實(shí)驗(yàn)前去除老根和干枯的鱗片葉,放入盛有清水的容器中,水以沒(méi)過(guò)洋蔥根部為宜,于室溫下培養(yǎng)。

    1.2.2 低溫誘導(dǎo)處理 待實(shí)驗(yàn)材料根的長(zhǎng)度達(dá)到1 cm左右時(shí),將實(shí)驗(yàn)材料平均分為3組,分別置于2℃、4℃的冰箱中進(jìn)行低溫處理;對(duì)照組于室溫下進(jìn)行培養(yǎng)。低溫處理時(shí)長(zhǎng)控制在36 h(換水時(shí)注意用相應(yīng)溫度的水以減少實(shí)驗(yàn)誤差)。低溫處理后恢復(fù)常溫培養(yǎng)10 h。

    1.2.3 材料處理制作裝片

    1)固定和解離:借助卡諾氏液(無(wú)水乙醇∶冰醋酸=3∶1)進(jìn)入組織和細(xì)胞并將其殺死,使其形態(tài)結(jié)構(gòu)和內(nèi)容物盡可能保持完整,還能增強(qiáng)染色體的染色效果。用解離液(15%HCl∶95%酒精=1∶1)去除細(xì)胞壁間的果膠使細(xì)胞壁軟化,并使細(xì)胞間中膠層物質(zhì)溶解便于細(xì)胞分離。依據(jù)教材實(shí)驗(yàn)步驟[1],取 0.5~1 cm 的根尖(可取 1 cm,便于在之后的操作中取放,在染色時(shí)再將多余部分去除)放入卡諾氏液中浸泡。教材要求固定0.5~1 h,解離3~5 min,因考慮解離效果受到自身材料、溫度和時(shí)長(zhǎng)及固定效果的影響[2],實(shí)驗(yàn)小組學(xué)生將固定和解離結(jié)合考慮,設(shè)置多組對(duì)比實(shí)驗(yàn)。通過(guò)不斷調(diào)整固定和解離的時(shí)間發(fā)現(xiàn),固定時(shí)間控制在0.5 h對(duì)于之后的操作效果更好。固定后的材料用95%的酒精進(jìn)行充分沖洗,以免影響解離效果。為保證數(shù)據(jù)準(zhǔn)確,固定過(guò)程中借助恒溫箱將溫度設(shè)定為25℃,濕度40%。解離效果蠶豆以25~30 min為宜;豌豆15 min為宜;洋蔥 10 min為宜(材料保持完整形態(tài),染色時(shí)可被搗碎,壓片時(shí)蓋上蓋玻片即可將材料壓碎使細(xì)胞分散開(kāi))。解離時(shí)間不足會(huì)導(dǎo)致壓片不能成霧狀、細(xì)胞不能充分分散重疊度高、染色不充分等情況。

    2)漂洗:依據(jù)教材介紹的實(shí)驗(yàn)步驟,解離后使用清水對(duì)實(shí)驗(yàn)材料進(jìn)行漂洗以去除殘留的解離液,防止解離過(guò)度。注意應(yīng)漂洗3次,每次2~3 min,且注意動(dòng)作力度,防止破壞根尖形態(tài)。

    3)染色:可選染液包括龍膽紫、醋酸洋紅和改良苯酚品紅溶液。本次實(shí)驗(yàn)選擇龍膽紫(缺點(diǎn)在于易對(duì)細(xì)胞質(zhì)染色,染色體觀察不清,增大觀察難度)和醋酸洋紅(缺點(diǎn)在于配制復(fù)雜,購(gòu)買(mǎi)配制好的染液價(jià)格昂貴)。采取2種染色方法,其一將實(shí)驗(yàn)材料浸泡在染液中3~5 min;其二在載玻片上滴一滴清水,將已漂洗的實(shí)驗(yàn)材料置于清水中,滴加一滴染液,再用鑷子將根尖輕輕搗碎至組織分散,染色 2 min[3](通過(guò)比較,學(xué)生發(fā)現(xiàn)第 2 種方法染色更快、更均勻)。

    4)蓋上蓋玻片,在蓋玻片上鋪吸水紙并加一層載玻片,輕輕按壓,注意力度。也可用鑷子鈍頭輕輕敲打蓋玻片下的材料,使材料分散成霧狀。用高倍鏡觀察細(xì)胞的染色體情況。

    2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

    2.1 洋蔥和蠶豆實(shí)驗(yàn)效果的比較 實(shí)驗(yàn)操作中發(fā)現(xiàn),蠶豆根尖因培養(yǎng)時(shí)間較長(zhǎng)、根比較粗壯、細(xì)胞質(zhì)豐富等原因,使得現(xiàn)有實(shí)驗(yàn)條件下不利于染色體數(shù)目的觀察。豌豆根尖質(zhì)地堅(jiān)硬,不易制作壓片。與前2種材料相比,洋蔥根的培養(yǎng)時(shí)間較短、分裂旺盛、便于染色觀察。根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果觀察,洋蔥試驗(yàn)比較容易獲得對(duì)比度較好的染色體(染色質(zhì))染色效果。

    2.2 洋蔥根尖于龍膽紫、醋酸洋紅染液染色效果的比較(圖1、圖2,本文附圖見(jiàn)封四)。

    如圖可見(jiàn),0.02%龍膽紫染液較0.01%龍膽紫染液染色效果深,影響染色體(染色質(zhì))觀察,醋酸洋紅染液染色效果清晰、明亮,可清晰地觀察到細(xì)胞中染色體(染色質(zhì))的分布情況。

    2.3 蠶豆、洋蔥根尖在不同處理?xiàng)l件下的實(shí)驗(yàn)結(jié)果

    1)蠶豆在 2℃、4℃條件下培養(yǎng)36 h,然后在室溫培養(yǎng)10 h,隨后鏡檢,分析實(shí)驗(yàn)效果(圖3)可見(jiàn),細(xì)胞分裂的中期和后期,部分細(xì)胞大小和染色區(qū)域面積明顯較大。因染色條件不易把握,不易觀察到清晰的分裂前期圖像和染色體數(shù)量加倍的現(xiàn)象。

    2)洋蔥根尖 2℃、4℃條件下培養(yǎng) 36 h,然后在室溫培養(yǎng)10 h,隨后鏡檢。結(jié)果(圖4、圖5)顯示,2種溫度誘導(dǎo)處理后再進(jìn)行常溫培養(yǎng)的根尖,細(xì)胞分裂均比較旺盛,少數(shù)細(xì)胞出現(xiàn)染色體數(shù)目加倍的現(xiàn)象。其中,4℃條件下能觀察到根尖細(xì)胞分裂更旺盛,說(shuō)明洋蔥在這樣的誘導(dǎo)條件下實(shí)驗(yàn)效果相對(duì)更好。

    3 討論和分析

    本次實(shí)驗(yàn)在實(shí)驗(yàn)前學(xué)生按教材過(guò)程進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作,針對(duì)操作中發(fā)現(xiàn)的問(wèn)題對(duì)實(shí)驗(yàn)過(guò)程進(jìn)行了分析和討論,并分組進(jìn)行實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)。針對(duì)實(shí)驗(yàn)材料、原理、自變量和因變量進(jìn)行了設(shè)定,例如以溫度為自變量,以誘導(dǎo)時(shí)間為自變量等。

    3.1 對(duì)低溫范圍的設(shè)定 在操作中要將溫度控制在多少度才能更好地使植物細(xì)胞發(fā)生染色體數(shù)目變化?教材中要求將溫度設(shè)定在4℃,但學(xué)生對(duì)“低溫”這一概念存在許多疑問(wèn)。在進(jìn)行低溫誘導(dǎo)研究時(shí),通過(guò)分組實(shí)驗(yàn),學(xué)生將溫度分別控制在2℃、4℃。對(duì)于學(xué)生提出的為何不能將溫度設(shè)置在零下,筆者保留了問(wèn)題,要求學(xué)生參考低溫誘導(dǎo)染色體加倍和酶活性原理查閱相關(guān)資料進(jìn)行思考。學(xué)生經(jīng)實(shí)際培養(yǎng)發(fā)現(xiàn),0℃誘導(dǎo)條件下根尖出現(xiàn)凍害變黑、變軟,不能用于鏡檢。

    3.2 對(duì)低溫處理時(shí)間的探究 學(xué)生通過(guò)查閱低溫誘導(dǎo)植物染色體數(shù)目變化的原理可知,低溫阻礙細(xì)胞內(nèi)酶促反應(yīng)的進(jìn)行,從而導(dǎo)致細(xì)胞分裂時(shí)紡錘體的形成途徑受阻,以致影響子染色體被拉向細(xì)胞兩極,使細(xì)胞不能分裂成2個(gè)子細(xì)胞,于是植物細(xì)胞染色體數(shù)目加倍。觀察染色體數(shù)目的最佳時(shí)期是細(xì)胞分裂的中期。因此,要在低溫條件下處理多長(zhǎng)時(shí)間成為另一個(gè)重要問(wèn)題。學(xué)生討論得出答案:只有當(dāng)細(xì)胞分裂進(jìn)入到第2個(gè)細(xì)胞周期的中期時(shí)才能確保觀察比較低溫誘導(dǎo)染色體數(shù)目變化是否成功。因此低溫處理時(shí)長(zhǎng)至少需要長(zhǎng)于1個(gè)細(xì)胞周期。其次,低溫降低酶的活性,細(xì)胞代謝水平整體下降,分裂速度變緩,使得細(xì)胞周期延長(zhǎng)。筆者提供常溫下蠶豆根尖的細(xì)胞周期為17.3 h[4],洋蔥根尖的細(xì)胞周期大于12 h,因此,實(shí)驗(yàn)小組決定按教材要求將低溫處理時(shí)間設(shè)定為36 h。

    3.3 實(shí)驗(yàn)中如何確定染色體數(shù)目發(fā)生變化的細(xì)胞 為便于比較細(xì)胞中染色體數(shù)目是否發(fā)生變化,進(jìn)行常溫培養(yǎng)對(duì)照實(shí)驗(yàn),用以觀察不經(jīng)低溫誘導(dǎo)的根尖分生區(qū)細(xì)胞中染色體數(shù)目及分布情況。但在實(shí)際觀察中很難數(shù)清染色體條數(shù)。

    在實(shí)驗(yàn)裝片的觀察中,學(xué)生發(fā)現(xiàn)某些細(xì)胞中存在2個(gè)距離很近且清晰的細(xì)胞核(圖6、圖7),不同于分裂末期的細(xì)胞。學(xué)生提出質(zhì)疑后,筆者組織學(xué)生對(duì)比觀察對(duì)照組材料裝片和實(shí)驗(yàn)組裝片,設(shè)置表格記錄雙核細(xì)胞出現(xiàn)的頻率。比較發(fā)現(xiàn)只有實(shí)驗(yàn)組裝片存在這一現(xiàn)象,就此問(wèn)題學(xué)生深入思考雙細(xì)胞核形成的原因。經(jīng)查閱資料和分析得出,低溫誘導(dǎo)過(guò)程中細(xì)胞分裂并未阻斷細(xì)胞的分裂行為而使分裂停止在前期或中期。由于低溫使紡錘體裝配組件受到影響,使分開(kāi)的染色單體不能拉向細(xì)胞兩極,也未形成2個(gè)子細(xì)胞。對(duì)于已經(jīng)進(jìn)入后期但染色體未到達(dá)兩極的細(xì)胞來(lái)說(shuō),子染色體將停止運(yùn)動(dòng)隨后形成2個(gè)新的細(xì)胞核,同時(shí)低溫影響細(xì)胞質(zhì)分裂2個(gè)子核保留在同一個(gè)母細(xì)胞中[5]。學(xué)生提出可利用雙核細(xì)胞作為“低溫誘導(dǎo)細(xì)胞染色體數(shù)目變化”的實(shí)驗(yàn)輔助觀察指標(biāo),提高實(shí)驗(yàn)的成功率。

    3.4 實(shí)驗(yàn)中一些細(xì)節(jié)問(wèn)題 實(shí)驗(yàn)小組學(xué)生通過(guò)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),經(jīng)過(guò)低溫處理的根尖直接進(jìn)行實(shí)驗(yàn),可觀察到的進(jìn)行細(xì)胞分裂的細(xì)胞較少。分析原因可能是低溫處理后,細(xì)胞未能進(jìn)入新的分裂期,即出現(xiàn)細(xì)胞同步化[6]。針對(duì)這一問(wèn)題,選擇在低溫誘導(dǎo)后恢復(fù)常溫培養(yǎng)使細(xì)胞分裂再次進(jìn)行?;謴?fù)常溫培養(yǎng)的時(shí)間嚴(yán)格控制在實(shí)驗(yàn)材料的1個(gè)細(xì)胞周期以?xún)?nèi)即10 h,從而使低溫誘導(dǎo)后的細(xì)胞再次出現(xiàn)一個(gè)細(xì)胞分裂的高峰。

    細(xì)胞分裂在24 h內(nèi)旺盛程度不同,考慮細(xì)胞分裂于上午10時(shí)至下午14時(shí)較旺盛,選擇將放入冰箱進(jìn)行低溫誘導(dǎo)的時(shí)間定為上午10時(shí)。對(duì)誘導(dǎo)處理后的細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察也應(yīng)將時(shí)間選擇在上午10時(shí)左右進(jìn)行。

    4 結(jié)論

    本實(shí)驗(yàn)通過(guò)學(xué)生分組探究,對(duì)“低溫誘導(dǎo)植物染色體數(shù)目的變化”實(shí)驗(yàn)中的一些細(xì)節(jié)進(jìn)行了補(bǔ)充,對(duì)固定、解離、染色等常規(guī)操作步驟做了更詳細(xì)的處理,以提高實(shí)驗(yàn)的成功率。染色體觀察效果證明,雖然蠶豆的染色體數(shù)目少、細(xì)胞大,但在高中實(shí)驗(yàn)中洋蔥相比于蠶豆、豌豆等實(shí)驗(yàn)材料更理想,具有操作簡(jiǎn)單、解離時(shí)間短、染色體染色效果清晰等優(yōu)點(diǎn)。根據(jù)實(shí)驗(yàn),醋酸洋紅染色較龍膽紫更易獲得對(duì)比度高的染色體(染色質(zhì))圖像;考慮使用安全和經(jīng)濟(jì)條件等因素,可使用0.01%龍膽紫染液。

    需要說(shuō)明的是,蠶豆、洋蔥等都是經(jīng)過(guò)許多人探索,適于教學(xué)實(shí)驗(yàn)的材料;龍膽紫、醋酸洋紅等均被長(zhǎng)期用于染色體顯色實(shí)驗(yàn)。有經(jīng)驗(yàn)、有水平的實(shí)驗(yàn)者均可利用這些材料、方法獲得高質(zhì)量實(shí)驗(yàn)結(jié)果。所以,這里僅從探究角度進(jìn)行分析,所獲的經(jīng)驗(yàn)在同等條件下具有參考價(jià)值和教學(xué)意義,但不試圖無(wú)條件推廣。相反,同行在此基礎(chǔ)上的進(jìn)一步改進(jìn)(甚至糾偏)一定更有價(jià)值。

    本實(shí)驗(yàn)仍有許多改進(jìn)之處。例如:將實(shí)驗(yàn)的誘導(dǎo)溫度和時(shí)間進(jìn)行更細(xì)化處理;在處理實(shí)驗(yàn)結(jié)果時(shí),可通過(guò)列表對(duì)細(xì)胞分裂指數(shù)進(jìn)行計(jì)算和比較,從而更準(zhǔn)確探究更好地誘導(dǎo)染色體數(shù)量變化的條件。筆者將進(jìn)一步嘗試,并組織學(xué)生設(shè)置后續(xù)實(shí)驗(yàn)方案,繼續(xù)探究。

    本次實(shí)驗(yàn)在教師的引導(dǎo)和提示下,學(xué)生充分參與實(shí)驗(yàn)的探究和思考,更好地體現(xiàn)了學(xué)生的主導(dǎo)地位,從而培養(yǎng)學(xué)生的實(shí)驗(yàn)思維和實(shí)驗(yàn)?zāi)芰?,逐步養(yǎng)成不斷質(zhì)疑、不斷研究的學(xué)習(xí)習(xí)慣。

    [1]人民教育出版社,課程教材研究所,生物課程教材研究開(kāi)發(fā)中心.生物:必修2.北京:人民教育出版社,2007.

    [2]郁建強(qiáng),陸文初.植物細(xì)胞有絲分裂實(shí)驗(yàn)技術(shù)的改進(jìn).實(shí)驗(yàn)室研究與探索,2001(6):70.

    [3]林荔,肖義軍,詹曉梅.低溫誘導(dǎo)植物細(xì)胞數(shù)目變化實(shí)驗(yàn)的改進(jìn).中學(xué)生物學(xué),2012,28(1):45.

    [4]顧文波.細(xì)胞周期與細(xì)胞同步化.生物學(xué)教學(xué),2011,36(6):54.

    [5]利榮千.植物細(xì)胞學(xué)專(zhuān)題講座:第2講:植物細(xì)胞周期與細(xì)胞的異常分裂.湖北農(nóng)業(yè)科學(xué),1980(8):35.

    [6]周愛(ài)文,柯鐵,梅興國(guó).低溫誘導(dǎo)紅豆杉細(xì)胞同步化的研究.武漢化工學(xué)院學(xué)報(bào),2001,34(1):12.

    猜你喜歡
    實(shí)驗(yàn)學(xué)生
    記一次有趣的實(shí)驗(yàn)
    微型實(shí)驗(yàn)里看“燃燒”
    快把我哥帶走
    做個(gè)怪怪長(zhǎng)實(shí)驗(yàn)
    《李學(xué)生》定檔8月28日
    電影(2018年9期)2018-11-14 06:57:21
    趕不走的學(xué)生
    學(xué)生寫(xiě)話(huà)
    NO與NO2相互轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)的改進(jìn)
    實(shí)踐十號(hào)上的19項(xiàng)實(shí)驗(yàn)
    太空探索(2016年5期)2016-07-12 15:17:55
    學(xué)生寫(xiě)的話(huà)
    3wmmmm亚洲av在线观看| 99re6热这里在线精品视频| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 视频中文字幕在线观看| 天美传媒精品一区二区| 日本av手机在线免费观看| 欧美激情在线99| 久久久久久久精品精品| 一个人观看的视频www高清免费观看| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 午夜福利视频精品| 日韩欧美精品免费久久| 久久国内精品自在自线图片| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 男人和女人高潮做爰伦理| 亚洲精品456在线播放app| 免费人成在线观看视频色| 亚洲电影在线观看av| 99热这里只有是精品在线观看| 亚洲久久久久久中文字幕| 日韩国内少妇激情av| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 观看美女的网站| 99热这里只有是精品在线观看| 欧美变态另类bdsm刘玥| 蜜臀久久99精品久久宅男| 国国产精品蜜臀av免费| 人妻系列 视频| 成人午夜精彩视频在线观看| 亚洲av中文av极速乱| 亚洲国产欧美人成| 色视频www国产| 人妻 亚洲 视频| 国产免费福利视频在线观看| 亚洲国产欧美人成| 国产亚洲一区二区精品| 大香蕉久久网| 美女国产视频在线观看| 一级毛片我不卡| 99久久人妻综合| 色综合色国产| 亚洲av男天堂| 久久久色成人| 国产欧美日韩精品一区二区| 午夜福利网站1000一区二区三区| 日韩三级伦理在线观看| 黄色视频在线播放观看不卡| 亚洲人成网站在线观看播放| 自拍偷自拍亚洲精品老妇| 国产亚洲最大av| 精品人妻熟女av久视频| 尾随美女入室| 久久国产乱子免费精品| 精品久久久久久久末码| 国产色爽女视频免费观看| 国产av码专区亚洲av| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 国产成人免费无遮挡视频| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 国产欧美亚洲国产| 精品一区二区免费观看| 久久午夜福利片| 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 欧美最新免费一区二区三区| 亚洲精品乱久久久久久| 亚洲国产精品成人久久小说| 亚洲性久久影院| 黄片无遮挡物在线观看| 色播亚洲综合网| 中文字幕免费在线视频6| www.av在线官网国产| 黄片wwwwww| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| 香蕉精品网在线| 亚洲欧美日韩东京热| 日本午夜av视频| 久久97久久精品| 国产爽快片一区二区三区| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 日韩精品有码人妻一区| 插阴视频在线观看视频| 日韩一区二区视频免费看| 22中文网久久字幕| 偷拍熟女少妇极品色| 成人鲁丝片一二三区免费| 人人妻人人看人人澡| 国产毛片a区久久久久| 亚洲在久久综合| 日韩成人伦理影院| 最近中文字幕2019免费版| 日韩欧美 国产精品| 九草在线视频观看| 久久久久久久久久久免费av| 交换朋友夫妻互换小说| 亚洲熟女精品中文字幕| 国产一区二区在线观看日韩| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 五月伊人婷婷丁香| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 亚洲一区二区三区欧美精品 | freevideosex欧美| eeuss影院久久| 国产精品人妻久久久影院| 国产男女内射视频| 国产精品久久久久久精品古装| 国产成人freesex在线| 日韩伦理黄色片| 天天躁日日操中文字幕| 男女无遮挡免费网站观看| 久久热精品热| 我要看日韩黄色一级片| 亚洲人成网站在线播| av福利片在线观看| 少妇的逼好多水| 亚洲精品成人av观看孕妇| 尾随美女入室| 国产伦精品一区二区三区视频9| 天天躁日日操中文字幕| 欧美变态另类bdsm刘玥| 久久久久精品久久久久真实原创| 亚洲精品国产av成人精品| 天堂网av新在线| 22中文网久久字幕| 丝袜美腿在线中文| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 最近2019中文字幕mv第一页| www.av在线官网国产| 久久久久久久久大av| 在线 av 中文字幕| 国产成人freesex在线| 99久久精品热视频| 亚洲人与动物交配视频| 尾随美女入室| 一本色道久久久久久精品综合| 中文乱码字字幕精品一区二区三区| 国产在线男女| 日本wwww免费看| 亚洲欧美清纯卡通| 中国美白少妇内射xxxbb| 黄片wwwwww| 日韩免费高清中文字幕av| 国产探花在线观看一区二区| 97人妻精品一区二区三区麻豆| 一个人观看的视频www高清免费观看| 国产 一区 欧美 日韩| 中文字幕av成人在线电影| 国产精品女同一区二区软件| 中文在线观看免费www的网站| 在线看a的网站| 欧美成人午夜免费资源| 1000部很黄的大片| 久久韩国三级中文字幕| 欧美97在线视频| 国产极品天堂在线| 一本久久精品| 国产精品99久久久久久久久| 各种免费的搞黄视频| 秋霞在线观看毛片| 大陆偷拍与自拍| 亚洲欧洲日产国产| 国产乱人偷精品视频| 在线看a的网站| 亚洲av电影在线观看一区二区三区 | 国产亚洲最大av| 一本久久精品| 久久精品国产亚洲av天美| 亚洲精品乱久久久久久| 国产一区二区亚洲精品在线观看| 毛片一级片免费看久久久久| 成人亚洲精品av一区二区| 高清视频免费观看一区二区| 亚洲精品,欧美精品| av一本久久久久| 99久国产av精品国产电影| 欧美极品一区二区三区四区| 国产精品不卡视频一区二区| 一个人看视频在线观看www免费| 日韩一本色道免费dvd| 国产成人精品婷婷| 热99国产精品久久久久久7| videos熟女内射| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 欧美日韩精品成人综合77777| 欧美一区二区亚洲| 免费黄色在线免费观看| 中文字幕久久专区| 寂寞人妻少妇视频99o| 中国三级夫妇交换| 成人无遮挡网站| 亚洲av在线观看美女高潮| 色综合色国产| 26uuu在线亚洲综合色| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 香蕉精品网在线| 十八禁网站网址无遮挡 | 亚洲国产高清在线一区二区三| 成人毛片a级毛片在线播放| 丰满人妻一区二区三区视频av| 国产高清有码在线观看视频| 亚洲精品成人av观看孕妇| 九九爱精品视频在线观看| 美女cb高潮喷水在线观看| 高清在线视频一区二区三区| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 日韩精品有码人妻一区| 国产高清有码在线观看视频| 国内精品宾馆在线| 中文在线观看免费www的网站| 伊人久久精品亚洲午夜| 大话2 男鬼变身卡| 精品午夜福利在线看| 国内精品宾馆在线| av在线老鸭窝| av在线蜜桃| 国产成年人精品一区二区| 午夜老司机福利剧场| 乱系列少妇在线播放| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 国产精品无大码| 日韩成人av中文字幕在线观看| 天堂俺去俺来也www色官网| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| 亚洲精品成人久久久久久| 在线观看免费高清a一片| tube8黄色片| 夫妻性生交免费视频一级片| 日本午夜av视频| 国产男人的电影天堂91| 色播亚洲综合网| 日本黄色片子视频| 国产又色又爽无遮挡免| 国产免费一级a男人的天堂| 日日撸夜夜添| 日韩欧美精品免费久久| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 最近中文字幕2019免费版| 最近最新中文字幕免费大全7| 春色校园在线视频观看| 午夜精品一区二区三区免费看| 亚洲av日韩在线播放| 国产国拍精品亚洲av在线观看| 好男人在线观看高清免费视频| 精品一区二区三卡| 国产爱豆传媒在线观看| 欧美国产精品一级二级三级 | 免费看a级黄色片| 亚洲va在线va天堂va国产| 国产毛片在线视频| 欧美另类一区| 男女无遮挡免费网站观看| 日韩不卡一区二区三区视频在线| 秋霞在线观看毛片| 国产爱豆传媒在线观看| 久久久色成人| 日本免费在线观看一区| 大片免费播放器 马上看| 欧美老熟妇乱子伦牲交| av又黄又爽大尺度在线免费看| 国产精品蜜桃在线观看| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 高清欧美精品videossex| 精品少妇黑人巨大在线播放| 嫩草影院精品99| 真实男女啪啪啪动态图| 欧美日韩在线观看h| 久久久久久久精品精品| 国产成人精品婷婷| 久久久国产一区二区| 午夜福利视频精品| 99热这里只有是精品50| 男人舔奶头视频| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 日本免费在线观看一区| 免费播放大片免费观看视频在线观看| 18禁在线播放成人免费| 一级av片app| 国产精品人妻久久久影院| 国内精品宾馆在线| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 久久99蜜桃精品久久| 久久99热这里只频精品6学生| 亚洲不卡免费看| 亚洲欧美精品自产自拍| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 在线免费观看不下载黄p国产| 91狼人影院| 搡女人真爽免费视频火全软件| 午夜福利视频1000在线观看| 久久久精品免费免费高清| 精品人妻视频免费看| videossex国产| av在线老鸭窝| 在线观看av片永久免费下载| 黄色怎么调成土黄色| 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| 久久99热这里只有精品18| 国产v大片淫在线免费观看| 婷婷色麻豆天堂久久| 2021少妇久久久久久久久久久| 白带黄色成豆腐渣| 青青草视频在线视频观看| 久久这里有精品视频免费| 我的女老师完整版在线观看| 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 日本午夜av视频| 久久99热6这里只有精品| 成人毛片a级毛片在线播放| 日韩欧美精品免费久久| 人体艺术视频欧美日本| av国产久精品久网站免费入址| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 狂野欧美激情性xxxx在线观看| 男女无遮挡免费网站观看| 色吧在线观看| 新久久久久国产一级毛片| 日韩中字成人| 国产欧美日韩一区二区三区在线 | 最后的刺客免费高清国语| 欧美激情久久久久久爽电影| 国产av国产精品国产| 麻豆成人av视频| 一级毛片电影观看| 日韩电影二区| 国产黄a三级三级三级人| 亚洲av在线观看美女高潮| 交换朋友夫妻互换小说| av免费在线看不卡| 在线观看一区二区三区| 在线 av 中文字幕| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频 | 下体分泌物呈黄色| 真实男女啪啪啪动态图| 成年av动漫网址| 亚洲经典国产精华液单| 亚洲国产av新网站| 69av精品久久久久久| 欧美成人午夜免费资源| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 尾随美女入室| av国产免费在线观看| 一区二区三区乱码不卡18| 久久久欧美国产精品| 亚洲怡红院男人天堂| 国产 精品1| 99久久九九国产精品国产免费| 国产亚洲91精品色在线| 国产精品99久久99久久久不卡 | 亚洲图色成人| 久久热精品热| 久久97久久精品| 免费人成在线观看视频色| 黄片无遮挡物在线观看| 插阴视频在线观看视频| 亚洲人成网站高清观看| 国产中年淑女户外野战色| 在线观看一区二区三区激情| 中文字幕av成人在线电影| 一级二级三级毛片免费看| 中文字幕免费在线视频6| 精品熟女少妇av免费看| 在线观看美女被高潮喷水网站| 新久久久久国产一级毛片| 久久精品人妻少妇| 免费观看性生交大片5| 国产亚洲av片在线观看秒播厂| 亚洲av国产av综合av卡| 卡戴珊不雅视频在线播放| 午夜精品一区二区三区免费看| 只有这里有精品99| 男男h啪啪无遮挡| 看黄色毛片网站| 最近最新中文字幕免费大全7| 一级av片app| 成人毛片a级毛片在线播放| 色播亚洲综合网| 18+在线观看网站| 一本色道久久久久久精品综合| 干丝袜人妻中文字幕| 国产女主播在线喷水免费视频网站| 亚洲色图综合在线观看| 国产伦在线观看视频一区| 精品一区在线观看国产| 亚洲在线观看片| 国产成人91sexporn| 成人鲁丝片一二三区免费| 亚洲无线观看免费| 青春草亚洲视频在线观看| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 狂野欧美激情性xxxx在线观看| 97超碰精品成人国产| 91久久精品国产一区二区三区| 欧美高清成人免费视频www| 国产亚洲最大av| 99久久精品一区二区三区| 激情五月婷婷亚洲| 高清视频免费观看一区二区| 一二三四中文在线观看免费高清| .国产精品久久| 一区二区三区乱码不卡18| 肉色欧美久久久久久久蜜桃 | 免费大片黄手机在线观看| 最近中文字幕高清免费大全6| 国产探花极品一区二区| 久久97久久精品| 看十八女毛片水多多多| 春色校园在线视频观看| 国产永久视频网站| 午夜激情福利司机影院| 国产极品天堂在线| 免费看av在线观看网站| 日本午夜av视频| 九九爱精品视频在线观看| 亚洲综合色惰| 联通29元200g的流量卡| 国产精品精品国产色婷婷| 欧美激情国产日韩精品一区| 欧美成人a在线观看| 国产熟女欧美一区二区| 成年人午夜在线观看视频| 22中文网久久字幕| 超碰97精品在线观看| eeuss影院久久| 亚洲精品一区蜜桃| 国产男人的电影天堂91| 在线播放无遮挡| 国产黄片视频在线免费观看| 久久久久久久久久人人人人人人| 五月天丁香电影| 日韩av在线免费看完整版不卡| 99热这里只有是精品在线观看| av国产免费在线观看| 久久精品国产a三级三级三级| 亚洲精品乱久久久久久| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| av免费在线看不卡| 一级爰片在线观看| 亚洲精品国产色婷婷电影| 在线精品无人区一区二区三 | 美女视频免费永久观看网站| 久久99热这里只有精品18| 一级爰片在线观看| 久久ye,这里只有精品| 一个人看视频在线观看www免费| 国产成人a∨麻豆精品| 亚洲国产高清在线一区二区三| 视频中文字幕在线观看| 色视频在线一区二区三区| 亚洲最大成人中文| 91久久精品国产一区二区三区| 中国美白少妇内射xxxbb| 久久6这里有精品| 99视频精品全部免费 在线| 成年人午夜在线观看视频| 2022亚洲国产成人精品| 亚洲久久久久久中文字幕| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频 | av一本久久久久| 久久精品国产亚洲av涩爱| 一二三四中文在线观看免费高清| 大陆偷拍与自拍| 丝袜脚勾引网站| 国产黄频视频在线观看| 亚洲av在线观看美女高潮| 国产亚洲91精品色在线| 91狼人影院| 六月丁香七月| 国产高潮美女av| 美女高潮的动态| 国产伦精品一区二区三区视频9| 天堂网av新在线| 在线观看国产h片| 五月开心婷婷网| 99久久精品国产国产毛片| 日韩一本色道免费dvd| 成年免费大片在线观看| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 精品一区二区三卡| 超碰av人人做人人爽久久| 亚洲经典国产精华液单| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 免费观看a级毛片全部| 亚洲天堂国产精品一区在线| 国国产精品蜜臀av免费| 久久久久国产网址| 久久久色成人| 国产精品成人在线| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 亚洲国产欧美人成| 国产成人精品福利久久| 国产亚洲av嫩草精品影院| 国产精品国产三级专区第一集| 熟妇人妻不卡中文字幕| 啦啦啦在线观看免费高清www| 91狼人影院| 能在线免费看毛片的网站| 日韩一本色道免费dvd| 中文字幕亚洲精品专区| 在线观看三级黄色| 人妻一区二区av| 欧美成人一区二区免费高清观看| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 欧美成人精品欧美一级黄| 亚洲av免费在线观看| 中国美白少妇内射xxxbb| 一区二区三区免费毛片| 成人毛片a级毛片在线播放| 久久99精品国语久久久| 欧美成人午夜免费资源| 男女边吃奶边做爰视频| 白带黄色成豆腐渣| 乱系列少妇在线播放| 国产一区二区在线观看日韩| 男女无遮挡免费网站观看| 日本av手机在线免费观看| 肉色欧美久久久久久久蜜桃 | 日韩制服骚丝袜av| 国产淫语在线视频| 91在线精品国自产拍蜜月| 欧美xxⅹ黑人| 国产精品伦人一区二区| 黑人高潮一二区| 国产毛片在线视频| 国产在视频线精品| 国产亚洲5aaaaa淫片| 国产在线一区二区三区精| 亚洲国产欧美人成| 亚洲av二区三区四区| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 精品国产三级普通话版| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 在线观看免费高清a一片| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 亚洲久久久久久中文字幕| 国产精品三级大全| 网址你懂的国产日韩在线| 人妻少妇偷人精品九色| 免费播放大片免费观看视频在线观看| 秋霞伦理黄片| 天天躁日日操中文字幕| 午夜日本视频在线| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 在线观看国产h片| 国产av码专区亚洲av| 成年免费大片在线观看| 黑人高潮一二区| 亚洲在久久综合| 在线 av 中文字幕| 在线观看一区二区三区| 久久这里有精品视频免费| 毛片一级片免费看久久久久| 亚洲一区二区三区欧美精品 | 91久久精品国产一区二区三区| av福利片在线观看| 99热这里只有是精品在线观看| 中国三级夫妇交换| 亚洲,欧美,日韩| 高清欧美精品videossex| 深夜a级毛片| 亚洲av成人精品一区久久| 免费观看性生交大片5| 欧美精品一区二区大全| 欧美极品一区二区三区四区| 成人特级av手机在线观看| 99精国产麻豆久久婷婷| 欧美3d第一页| 大片电影免费在线观看免费| 99久久九九国产精品国产免费| 欧美xxxx性猛交bbbb| 免费av毛片视频| 亚洲无线观看免费| 久久久色成人| 精品国产三级普通话版| 91精品一卡2卡3卡4卡| 婷婷色综合www| 亚洲成人中文字幕在线播放| 亚洲丝袜综合中文字幕| 一区二区三区免费毛片| 亚洲自拍偷在线| 日韩视频在线欧美| 男男h啪啪无遮挡| 日产精品乱码卡一卡2卡三| 日本一本二区三区精品| 日本爱情动作片www.在线观看| 国产爱豆传媒在线观看| 精品人妻一区二区三区麻豆| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 在线看a的网站| 欧美成人午夜免费资源| 99九九线精品视频在线观看视频| 日本黄大片高清| 丝瓜视频免费看黄片| 欧美性感艳星| 麻豆久久精品国产亚洲av| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 国国产精品蜜臀av免费| 国产熟女欧美一区二区| 18禁动态无遮挡网站| 亚洲精品国产成人久久av| 免费观看在线日韩| 国产爽快片一区二区三区| 青春草亚洲视频在线观看| 亚洲av日韩在线播放| 亚洲图色成人| 在线观看美女被高潮喷水网站| 成人毛片a级毛片在线播放| 97在线人人人人妻| 久久99热这里只频精品6学生| 久久精品人妻少妇| 男女那种视频在线观看| av在线播放精品| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 国产免费又黄又爽又色|