浸潤性乳腺癌患者外周血中25羥維生素D3的測定及臨床意義

張慧芳，龔華

(南京醫(yī)科大學附屬無錫市婦幼保健院檢驗科，江蘇 無錫 214002)

浸潤性乳腺癌患者外周血中25羥維生素D3的測定及臨床意義

張慧芳，龔華

(南京醫(yī)科大學附屬無錫市婦幼保健院檢驗科，江蘇 無錫 214002)

目的檢測25羥維生素D3[25(OH)D3]在浸潤性乳腺癌外周血中的水平，探討其在浸潤性乳腺癌發(fā)生、發(fā)展的作用。方法收集2015年1～12月間來我院住院治療的浸潤性乳腺癌患者122例(乳腺癌組)，乳腺良性腫瘤患者40例(乳腺良性腫瘤組)和健康體檢者40例(健康對照組)，乳腺癌組患者均經病理檢查確診。采集外周血，酶聯(lián)免疫吸附實驗(Elisa法)測定25(OH)D3的水平；同時收集122例浸潤性乳腺癌患者的腫瘤組織，采用免疫組織染色法測定組織的石蠟切片中的雌激素受體(ER)、孕激素受體(PR)、血管內皮生長因子(VEGF)、人表皮生長因子受體-2(Cerb-2)和p53蛋白(抑癌基因p53)的表達水平，并分析其與25(OH)D3的關系。結果(1)乳腺癌組、乳腺良性腫瘤組和健康對照組外周血中的25(OH)D3的水平分別為(34.9±12.8)nmol/L、(46.9±11.3)nmol/L和(51.4±13.2)nmol/L，乳腺癌患者的外周血中25(OH)D3的水平明顯低于乳腺良性腫瘤患者和健康者，差異均具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)；(2)乳腺癌患者外周血中25(OH)D3水平與年齡、PR、VEGF和臨床分期有顯著性相關(P＜0.05)，而與淋巴結是否轉移、腫瘤大小、ER、Cerb-2和p53無顯著性相關(P＞0.05)。結論25(OH)D3在乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展中具有不可忽視的作用。

25羥維生素D3；乳腺癌；雌激素受體；孕激素受體；血管內皮生長因子；人表皮生長因子受體-2；抑癌基因p53

25羥維生素D3[25-hydroxyvitamin D3，25(OH)D3]是一種類固醇衍生物，可以促進骨骼生長，常作為預防佝僂病的重要藥物而廣泛應用。隨著科學研究的發(fā)展，人們發(fā)現(xiàn)維生素D3還與心血管、高血壓和腫瘤等密切相關[1]。乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤之一，近年來呈年輕化趨勢。本文分析了我院浸潤性乳腺癌、乳腺良性腫瘤和健康體檢者的外周血中25(OH)D3水平以及25(OH)D3與乳腺癌患者中雌激素受體(estrogen receptor，ER)、孕激素受體(progesterone receptor，PR)、血管內皮生長因子(vascular endothelial growth factor， VEGF)的相關性，探討25(OH)D3與乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展及其預后的關系。

1 資料與方法

1.1 一般資料 乳腺癌組：2015年1～12月來我院治療的浸潤性乳腺癌122例，年齡27～73歲。所有患者均經病理診斷確診，患者術前均未接受化療，未服用過25(OH)D3。乳腺良性腫瘤組：2015年1～12月于我院治療的乳腺良性腫瘤患者40例，均經病理確診為乳腺纖維瘤、乳腺導管內乳頭狀瘤和乳腺腺病等，年齡21～63歲。健康對照組：2015年1～12月于我院體檢健康女性40例，年齡28～59歲。

1.2 方法 各組受檢者抽取空腹血3 mL，離心，吸取上層血漿，檢測患者25(OH)D3水平，試劑盒采用艾狄斯試劑盒(英國)，按說明書操作；所有組織標本由穿刺活檢或手術切除獲得，均經10%中性緩沖甲醛溶液固定，石蠟包埋后行4 μm切片，ER、PR、VEGF、Cerb-2和p53均購自北京中杉金橋公司，操作按說明書。

1.3 判斷標準 (1)ER、PR：細胞核內有棕色顆粒為陽性細胞，著色陽性細胞數(shù)＞1%為陽性。(2)VEGF：細胞漿有著色顆粒為準，著色陽性細胞數(shù)＞10%為(++)陽性。Cerb-2染色陽性位于細胞膜和(或)細胞質中，完全沒著色或≤10%腫瘤細胞有細胞膜著色為-；＞10%的腫瘤細胞呈現(xiàn)微弱、不完整的細胞膜著色為+；＞10%的腫瘤細胞呈弱至中度完整的細胞膜著色為++；＞10%的腫瘤細胞呈強的、完整的細胞膜著色為+++。-～+為陰性，+++為陽性，++視為可疑，進一步經熒光原位雜交(FISH)檢測確認是否為陽性。p53以細胞核內有著色顆粒為陽性細胞。

1.4 統(tǒng)計學方法 應用SPSS17.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析，計量資料以均數(shù)±標準差(±s)表示，組間比較采用t檢驗，以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 各組受檢者外周血中25(OH)D3水平比較 乳腺癌組、乳腺良性腫瘤組和健康對照組受檢者外周血中25(OH)D3水平分別為(34.9±12.8)nmol/L、(46.9± 11.3)nmol/L和(51.4±13.2)nmol/L，乳腺癌患者外周血中25(OH)D3明顯低于健康對照組和乳腺良性腫瘤組，差異具有統(tǒng)計學意義(t=7.02、5.38，P＜0.05)。

2.2 乳腺癌患者外周血中25(OH)D3與臨床病理的關系 在浸潤性乳腺癌患者中，25(OH)D3水平在年齡≥50歲的患者中明顯高于年齡＜50歲的患者，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。臨床分期中，Ⅰ期與Ⅱ期患者外周血中25(OH)D3相比較，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)；PR陽性的患者外周血中25(OH)D3水平明顯低于PR陰性的患者，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)；VEGF＜++的患者外周血中維生素D水平明顯高于VEGF≥++的患者，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)；而外周血中25(OH)D3的水平與淋巴結是否轉移，腫瘤大小、ER、Cerb-2和p53無顯著性相關(P＞0.05)，見表1。

表1 乳腺癌患者外周血25(OH)D3水平與臨床病理的關系(±s)

表1 乳腺癌患者外周血25(OH)D3水平與臨床病理的關系(±s)

臨床病理因素年齡(歲)≥50＜50臨床分期Ⅰ期Ⅱ期Ⅲ+Ⅳ期有無淋巴結轉移例數(shù)25(OH)D3(nmol/L)t值2.93 P值＜0.05 68 54 37.9±14.4 31.2±9.6 56 52 14 32.5±9.2 38.7±14.9 30.6±16.2 2.62(Ⅰ期與Ⅱ期比較) 1.77(Ⅱ期與Ⅲ+Ⅳ期比) 0.58(Ⅰ期與Ⅲ+Ⅳ期比) 0.68＜0.05＞0.05＞0.05＞0.05無有70 52 35.9±12.7 34.3±13.2 EPR (＋) (－)腫瘤大小(mm)≤2＞2 VEGF＜++≥++以上ER 69 53 64 58 76 46 31.8±9.9 39.2±15.3 34.5±13.5 35.5±12.1 37.3±12.7 29.5±13.3 3.23 0.43 3.23 0.25＜0.05＞0.05＜0.05＞0.05 + -73 49 35.0±13.4 34.4±12.4 Cerb-2 1.17＞0.05 + -81 41 35.7±13.9 32.8±10.6 p53 0.93＞0.05 + -89 33 34.2±11.3 36.7±17.3

3 討論

25(OH)D3是人體的必需維生素之一，維持著體內的鈣磷平衡。人體內長期缺乏25(OH)D3可以導致免疫力低下，肥胖癥和抑郁癥等多種疾病。近年來，隨著分子生物學的發(fā)展，人們意識到25(OH)D3不僅與機體的免疫相關，而且與腫瘤的發(fā)生發(fā)展和預后都有關系。25(OH)D3可以通過調節(jié)相關基因的表達抑制腫瘤細胞的生長[2]，故25(OH)D3缺乏可以誘發(fā)乳腺癌、肺癌和結腸癌等多種腫瘤。

國外研究顯示，25(OH)D3可以通過與相應受體結合調控乳腺癌細胞的生長和轉移[3]。本文研究顯示，乳腺癌組患者外周血中25(OH)D3水平明顯低于乳腺良性腫瘤患者和健康對照組患者，而乳腺良性腫瘤組與健康對照組外周血中25(OH)D3水平差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)，提示25(OH)D3在乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮著一定的作用。Lue等[4]認為體內的25(OH)D3水平降低與乳腺癌的發(fā)病相關，本研究與之相符。

孕激素受體(PR)是雌激素和雄激素受體結合后誘導的產物，PR可以抑制癌細胞的生長、浸潤和轉移[5]。在乳腺癌中，PR陽性預示著內分泌治療效果較高，預后較好[6]。本文的研究結果顯示，PR(+)乳腺癌患者外周血中25(OH)D3水平明顯低于PR(-)患者，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。提示25(OH)D3可能通過另一種機制來調節(jié)了乳腺癌細胞的生長、發(fā)展與預后。

臨床分期越高，細胞分化程度越差。一些研究顯示，外周血中25(OH)D3水平在Ⅲ期和Ⅳ期明顯低于Ⅰ期和Ⅱ期[7]。國外研究表明，25(OH)D3可以誘導乳腺癌細胞的分化，使其在生物學或者形態(tài)學上與成熟細胞接近，同時能夠抑制乳腺癌細胞的轉移和細胞生成[8-9]。而本文研究結果顯示，Ⅱ期乳腺癌患者外周血中25(OH)D3的水平最高，Ⅰ、Ⅱ期與Ⅲ+Ⅳ期外周血25(OH)D3水平相比較，差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。本研究中Ⅲ+Ⅳ期的病例較少，因為隨著現(xiàn)代生活水平和醫(yī)療水平的提高，人們越來越注重日常的身體保健，乳腺癌也很少在Ⅲ期和Ⅳ期才被發(fā)現(xiàn)，后面應該加強對Ⅲ+Ⅳ的病例的研究，來進一步確認25(OH)D3與臨床分期的相關性。而Ⅰ期與Ⅱ期相比較，Ⅱ期患者外周血25(OH)D3平明顯高于Ⅰ期，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。Ⅱ期乳腺癌患者外周血中的25(OH)D3水平比Ⅰ期患者高，此結果是否與年齡因素相關(Ⅱ期患者年齡多在50～65歲)還需進一步研究。本文統(tǒng)計提示年齡＞50歲的乳腺癌患者外周血中的25(OH)D3水平明顯高于年齡＜50歲的患者，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)?，F(xiàn)代生活節(jié)奏的加快，年輕人忙于事業(yè)而忽視了鍛煉，體內25(OH)D3水平較低，也可能是乳腺癌發(fā)病呈年輕化的一個重要因素。

VEGF被公認為是促使腫瘤新血管生成的最重要生長因子之一。本文的結果顯示，VEGF＜++的乳腺癌患者外周血中25(OH)D3的水平明顯高于VEGF≥++的乳腺癌患者，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。這結果進一步預示了25(OH)D3在乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展、轉移和預后扮演著重要角色，有可能為臨床治療乳腺癌提供新的途徑。

本文研究結果顯示，乳腺癌患者外周血中的25(OH)D3水平與腫瘤的大小，有無淋巴結轉移、ER、p53和Cerb-2是否陽性無明顯關系，差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。

隨著對25(OH)D3的抗腫瘤機制進一步深入研究，其對腫瘤的預防治療作用日益受到關注。與放療和化療相比，其損傷小，無痛苦，可為臨床乳腺腫瘤的輔助治療提供新的思路。

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Clinical significance of detecting 25-hydroxyvitamin D3in peripheral blood of patients with invasive breast cancer

ZHANG Hui-fang,GONG Hua.Department of Clinical Laboratory,Wuxi Maternal and Child Health Care Hospital Affiliated to Nanjing Medical University,Wuxi 214002,Jiangsu,CHINA

ObjectiveTo investigate the level of 25-hydroxyvitamin D3(25(OH)D3)in the peripheral blood of patients and to reveal the occurrence and development of invasive breast cancer.MethodsOne hundred and twenty-two patients with invasive breast cancer,forty healthy volunteers and forty patients with benign breast tumor admitted in our hospital between January 2015 and December 2015 were recruited,and breast cancer patients were diagnosed by pathological examination.The level of 25-hydroxyvitamin D3in their peripheral blood samples were detected by enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA)method,and the results were statistically analyzed.Immunohistochemistry staining was used to determine the expression level of estrogen receptor(ER),progestrone receptor(PR),vascular endothelial growth factor(VEGF),Cerb-2 and p53 protein in 122 patients with invasive breast cancer,then the relationship between these protein level and 25-hydroxyvitamin D3was analyzed respectively.Results(1)The value of 25-hydroxyvitamin D3in invasive breast cancer patients was(34.9±12.8)nmol/L,which was significant lower than(46.9± 11.3)nmol/L in benign breast tumor patients and(51.4±13.2)nmol/L of healthy volunteers(P＜0.05).(2)The 25-hydroxyvitamin D3level of the peripheral blood in patients with invasive breast cancer was significantly associated with age,PR,VEGF and clinical stage(P＜0.05),but not with the metastasis of lymph node,tumor size,the level of ER, Cerb-2,and P53(P＞0.05).Conclusion25-hydroxy vitamin D3might play an important role in the occurrence and development of breast cancer.

25-hydroxyvitamin D3[25(OH)D3];Breast cancer;Estrogen receptor(ER);Progestrone receptor (PR);Vascular endothelial growth factor;Human epidermal growth factor receptor 2;Tumor suppressor gene p53

R737.9

A

1003—6350（2017）05—0774—03

2016-06-08)

張慧芳。E-mail：78224548@qq.com

10.3969/j.issn.1003-6350.2017.05.030