MMP-9在舌癌中的表達及其意義

習(xí)利軍，吳菊芳，王利宏，劉建林，陳坤，張鐵柱

(1.深圳市福田區(qū)中醫(yī)院口腔科，廣東 深圳 518034；2.深圳市福田人民醫(yī)院影像科，廣東 深圳 518033；3.廣東醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院口腔科，廣東 湛江 524001)

MMP-9在舌癌中的表達及其意義

習(xí)利軍1，吳菊芳2，王利宏1，劉建林1，陳坤3，張鐵柱3

(1.深圳市福田區(qū)中醫(yī)院口腔科，廣東 深圳 518034；2.深圳市福田人民醫(yī)院影像科，廣東 深圳 518033；3.廣東醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院口腔科，廣東 湛江 524001)

目的研究MMP-9在舌癌(TSCC)組織中的表達及其與臨床病理因素的關(guān)系。方法收集2000年1月至2010年1月廣東醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院口腔科舌癌患者手術(shù)切除包埋石蠟標(biāo)本60例，其中有15例取癌旁正常組織及21例有轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)，應(yīng)用免疫組化PV9000法分別檢測舌癌組織、癌旁組織及轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)中MMP-9的表達。結(jié)果MMP-9在TSCC組織中的陽性表達率為78.33%(47/60)，明顯高于癌旁組織的20.00%(3/12)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)；在舌癌的低分化組中MMP-9陽性表達率為88.00%(22/25)，明顯高于高分化組的71.42%(25/35)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)；TSCC在有頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組中MMP-9陽性表達率為90.48%(19/21)，明顯高于無頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組織中的71.79%(28/39)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)；在TSCC原發(fā)灶與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶中的MMP-9陽性表達率分別為78.33%(47/60)、76.19%(16/21)，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。結(jié)論MMP-9在TSCC組織中和有頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組織中高表達，MMP-9可作為評估舌癌浸潤和轉(zhuǎn)移的重要指標(biāo)。

舌癌；MMP-9；免疫組織化學(xué)

近些年研究表明，在肺、乳腺、肝、結(jié)腸、前列腺等多種惡性腫瘤中均檢測出MMP-9陽性表達，并與這些腫瘤的侵襲浸潤和轉(zhuǎn)移有著密切聯(lián)系[1-2]。TSCC是口腔頜面部常見的惡性腫瘤，其惡性程度較高，呈浸潤生長而且也易發(fā)生頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，在TSCC中MMP-9是否也呈陽性高表達，是否與其早期頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，目前國內(nèi)研究報道不多。本研究采用免疫組化PV9000法檢測口腔TSCC組織中MMP-9的表達情況，以探討MMP-9在TSCC中的表達及其與頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 納入標(biāo)準(zhǔn) 收集廣東醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院口腔科2000年1月至2010年1月手術(shù)患者TSCC石蠟包埋切片，其中60例TSCC組織、21例有轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)、15例帶有癌旁正常組織(所有標(biāo)本經(jīng)患者知情同意)，所有病例采取手術(shù)治療，術(shù)前均未做過放療或化療且全部患者病例均經(jīng)病理確診為TSCC。60例TSCC中男性32例，女性28例；平均年齡52歲；有頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者21例，無頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者39例；病理學(xué)分級：35例高分化，17例中分化，8例低分化。

1.2 所用試劑與染色方法 所用試劑：PV9000兩步法免疫組化試劑盒、MMP-9單克隆抗體及DAB顯色試劑盒(國產(chǎn))，對照組則以PBS代替一抗作陰性對照；陽性對照用TSCC組織陽性切片。由同一醫(yī)生嚴(yán)格按說明進行操作。

1.3 結(jié)果判定 隨機選取5個高倍視野(×100)，計數(shù)500個癌細(xì)胞中陽性細(xì)胞數(shù)，并計算其占癌細(xì)胞的百分?jǐn)?shù)(MMP-9染色陽性顯示在細(xì)胞漿或部分細(xì)胞質(zhì)有棕黃色或棕褐色顆粒沉著)。陽性細(xì)胞數(shù)在51%以上者為強性(+++)，陽性細(xì)胞數(shù)在26%～50%者為陽性(++)，陽性細(xì)胞數(shù)在10%～25%者為弱陽性(+)，陽性細(xì)胞數(shù)＜10%者為陰性(-)。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析，計數(shù)資料采用χ2檢驗，檢驗水準(zhǔn)為α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 MMP-9在TSCC組織及癌旁組織中的表達 MMP-9在TSCC組織中的陽性表達率為78.33% (47/60)，明顯高于癌旁正常組織的20.00%(3/15)，有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=18.38，P＜0.05)，見表1。在癌旁正常組織中MMP-9分布于胞漿內(nèi)(圖1)；在舌癌組織中MMP-9明顯表達呈灶狀或團片狀(圖2)。

表1 TSCC及癌旁組織中MMP-9的表達（例）

圖1 MMP-9在正常黏膜中陰性表達(PV9000法×100)；圖2 MMP-9陽性表達主要位于腫瘤細(xì)胞漿（PV9000法×100）

2.2 MMP-9表達與臨床組織病理學(xué)分級關(guān)系 MMP-9在舌癌中/低分化組中陽性表達率為88.00%(22/25)，明顯高于高分化組的71.42%(25/35) (P＜0.05)，TSCC在有頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組中MMP-9陽性表達率為90.48%(19/21)，明顯高于無頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組織中71.79%(28/39)，見表2。

2.3 TSCC原發(fā)灶與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶中MMP-9表達 MMP-9在TSCC原發(fā)灶的陽性表達率為78.33% (47/60)，MMP-9在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶中陽性表達率為76.19%(16/21)，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=0.02，P＞0.05)，見表3。

表2 TSCC中MMP-9的表達與其臨床病理因素的關(guān)系（例）

表3 TSCC原發(fā)灶與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶中MMP-9表達（例）

3 討 論

3.1 TSCC組織中MMP-9的表達 MMP-9屬于基質(zhì)金屬蛋白酶家族，主要功能是降解和重塑細(xì)胞外基質(zhì)的動態(tài)平衡，其主要降解產(chǎn)物為構(gòu)成基膜重要骨架成分的Ⅳ型膠原，是基質(zhì)金屬蛋白酶主要成員之一。腫瘤細(xì)胞從原發(fā)腫瘤病灶脫離后向周圍、遠處組織浸潤侵襲和轉(zhuǎn)移的過程中，關(guān)系到腫瘤細(xì)胞穿過ECM屏障、血管壁的基底膜及穿出血管壁進入人體另一組織的過程。MMP-9通過對細(xì)胞外基質(zhì)、基底膜的降解和重塑而促進腫瘤癌細(xì)胞的侵襲浸潤，是降解ECM等成分的關(guān)鍵性酶[3-4]。MMPs能降解ECM中的大部分成分，在腫瘤的浸潤侵襲和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移中有重要作用。腫瘤癌細(xì)胞中MMP-9產(chǎn)生的差異表明了癌細(xì)胞侵襲浸潤、轉(zhuǎn)移能力的大小。Jordan等[5]在研究對比口腔上皮異常增生和口腔鱗狀細(xì)胞癌中MMP-9mRNA水平時發(fā)現(xiàn)，口腔癌中MMP-9mRNA水平明顯高于上皮異常增生，而且在上皮異常增生惡變?yōu)榭谇话┎±蠱MP-9mRNA水平明顯高于沒有惡變的病例。本研究顯示：高分化組中MMP-9陽性表達率顯著低于中/低分化組，表明在TSCC組織中MMP-9的陽性表達率與其病理組織學(xué)分級相關(guān)。因此，MMP-9可作為檢測TSCC的標(biāo)志物。

3.2 MMP-9在TSCC中的表達與頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移關(guān)系 本研究在有頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組中MMP-9陽性表達率要顯著高于無頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組，有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，結(jié)果與大多數(shù)報道一致[5]。黃喆等[6]研究表明MMP表達與病理分級和OSCC頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均相關(guān)；在不同浸潤方式的舌鱗狀細(xì)胞癌中MMP-9的表達不同，在Ⅲ、Ⅳ型的舌鱗狀細(xì)胞癌中，MMP-9的表達明顯高于Ⅰ、Ⅱ型，而且臨床易出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。本研究顯示MMP-9在腫瘤細(xì)胞及其間質(zhì)組織均有高表達，其陽性表達多呈彌散狀、片狀或灶狀，腫瘤細(xì)胞大多位于腫瘤癌巢的邊緣，表明在腫瘤病灶的周圍腫瘤細(xì)胞更具有侵襲性。腫瘤癌細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移的病理過程是非常復(fù)雜的，但BM和ECM的降解和重塑是其必然過程[7]。MMP-9能降解BM和ECM，這些基質(zhì)降解酶的產(chǎn)生能促進腫瘤癌細(xì)胞的侵襲浸潤和轉(zhuǎn)移。陳坤等[8]研究也表明MMP-9的過度表達與腫瘤組織的轉(zhuǎn)移和浸潤呈正相。Elahi等[9]對48例口腔鱗癌患者應(yīng)用免疫組織化檢測MMP-9表達，結(jié)果顯示MMP-9表達與口腔鱗癌侵襲與轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)。MMP-9不僅能夠降解ECM和基底膜導(dǎo)致癌細(xì)胞侵襲與轉(zhuǎn)移，而且還可通過細(xì)胞因子、細(xì)胞表面蛋白、細(xì)胞粘附蛋白及生長因子與周圍細(xì)胞表面等發(fā)生相互反應(yīng)，促進癌細(xì)胞的侵襲與轉(zhuǎn)移。因此，MMP-9可作為評估舌癌浸潤和轉(zhuǎn)移的重要指標(biāo)。

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Expression of MMP-9 in tongue squamous cell carcinoma and its significance

XI Li-jun1,WU Ju-fang2,WANG Li-hong1,LIU Jian-lin1,CHEN Kun3,ZHANG Tie-zhu3.1.Department of Stomatology,Futian District Hospital of TCM of Shenzhen,Shenzhen 518034,Guangdong,CHINA;2.Department of Radiology,Futian People's Hospital of Shenzhen, Shenzhen 518033,Guangdong,CHINA;3.Department of Stomatology,the Affiliated Hospital of Guangdong Medical University,Zhanjiang 524001,Guangdong,CHINA

ObjectiveTo study the expression of matrix metalloproteinase-9(MMP-9)in tongue squamous cell carcinoma(TSCC)tissues and its relationship with clinical pathological factors.MethodsA total of 60 cases of surgical resection of paraffin embedded specimens,which came from tongue cancer patients who admitted to Department of Stomatology of the Affiliated Hospital of Guangdong Medical University from January 2000 to January 2010, were collected as the research objects.At the same time,15 cases of tumor-adjacent normal tissues and 21 cases of metastatic lymph nodes were also included in this research.The expression of MMP-9 in tongue squamous cell carcinoma,tumor-adjacent tissues and metastatic lymph node was detected by immunohistochemistry(PV9000).ResultsThe positive expression of MMP-9 in TSCC tissues was 78.33%(47/60),which was significantly higher than 20.00%(3/12)in tumor-adjacent tissues(P＜0.05).The positive expression of MMP-9 in tongue squamous cell carcinoma/low differentiation group was 88.00%(22/25),which was significantly higher 71.42%(25/35)in high differentiation TSCC group(P＜0.05).The positive expression of MMP-9 in cervical lymph node metastasis was 90.48%(19/21),which was significantly higher than 71.79%(28/39)in without lymph node metastasis tissues(P＜0.05).The positive expression of MMP-9 in focal TSCC in primary tumor and lymph node metastasis rate were 78.33%(47/60),76.19%(16/21),respectively,and there was no significant difference(P＞0.05).ConclusionMMP-9 has the high expression in TSCC and cervical lymph node metastasis tissues,which can serve as an important indicator to evaluate the invasion and metastasis of tongue cancer.

Tongue squamous cell carcinomas(TCSS);Matrix metalloproteinase-9(MMP-9);Immunohistochemistry

R739.86

A

1003—6350（2017）05—0747—03

2016-06-26)

習(xí)利軍。E-mail：xilijun_001@163.com

10.3969/j.issn.1003-6350.2017.05.020