• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    傳統(tǒng)醬香大曲與機(jī)械化醬香大曲中酵母菌的初步研究

    2017-04-07 12:53:29蔣思峽邱樹毅鄒江鵬陳琳琳羅小葉王曉丹
    中國釀造 2017年3期
    關(guān)鍵詞:醬香大曲酒精度

    蔣思峽,邱樹毅,鄒江鵬,陳琳琳,羅小葉,王曉丹,4*

    (1.貴州大學(xué)貴州省發(fā)酵工程與生物制藥重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,貴州貴陽550025;2.貴州大學(xué)釀酒與食品工程學(xué)院,貴州貴陽550025;3.貴州國臺酒業(yè)有限公司,貴州仁懷564501;4.貴州大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院,貴州貴陽550025)

    傳統(tǒng)醬香大曲與機(jī)械化醬香大曲中酵母菌的初步研究

    蔣思峽1,2,邱樹毅1,2,鄒江鵬3,陳琳琳1,2,羅小葉1,2,王曉丹1,2,4*

    (1.貴州大學(xué)貴州省發(fā)酵工程與生物制藥重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,貴州貴陽550025;2.貴州大學(xué)釀酒與食品工程學(xué)院,貴州貴陽550025;3.貴州國臺酒業(yè)有限公司,貴州仁懷564501;4.貴州大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院,貴州貴陽550025)

    采用可培養(yǎng)方法從傳統(tǒng)醬香大曲和機(jī)械化醬香大曲中分離篩選酵母,并對這些酵母的數(shù)量、種類及功能差異進(jìn)行分析比較。結(jié)果表明,機(jī)械化醬香大曲中酵母數(shù)量為傳統(tǒng)醬香大曲的1.44倍;傳統(tǒng)醬香大曲中酵母種類為機(jī)械化醬香大曲的2倍;相同條件下兩者中產(chǎn)酒性能最高的酵母產(chǎn)酒精度在20℃時(shí)均為10.2%vol,機(jī)械化醬香大曲中篩選得到的酵母菌株平均產(chǎn)酒性能為傳統(tǒng)醬香大曲的1.04倍;從產(chǎn)香上看,兩種大曲中的產(chǎn)香酵母均能產(chǎn)生醇、酸、酯、酮類揮發(fā)性物質(zhì)。

    醬香型;傳統(tǒng)大曲;機(jī)械大曲;酵母;功能

    醬香型白酒屬于大曲酒,大曲具有糖化、發(fā)酵、生香等作用,原料經(jīng)自然界的微生物接種、繁殖,在高溫堆積及入窖貯存的過程中與環(huán)境中的微生物發(fā)生復(fù)雜的生化反應(yīng),為醬香型白酒獨(dú)特風(fēng)味形成提供基礎(chǔ)[1]。

    醬香型大曲傳統(tǒng)制曲是將水和母曲加入粉碎的小麥中攪拌,轉(zhuǎn)入木盒,工人站在曲盒中踩曲,制成曲塊。這種方法勞動強(qiáng)度大,效率低,因人的體質(zhì)量和技術(shù)有差異,做成的曲塊也會有差異[2]。20世紀(jì)80年代以來,茅臺、瀘州老窖、四特酒、會稽山紹興酒業(yè)等酒企用一些簡單的機(jī)械設(shè)備來節(jié)約人力[3-7],機(jī)械化制曲具有節(jié)省人力、效率高、均一性好、節(jié)約生產(chǎn)場地等優(yōu)點(diǎn)。目前醬香型大曲的生產(chǎn)還基本采用傳統(tǒng)制曲。2013年貴州國臺酒莊有限公司開始研發(fā)機(jī)械化成套制曲設(shè)備,并投入生產(chǎn)使用,降低勞動力強(qiáng)度50%以上,從根本上改善了人工操作憑經(jīng)驗(yàn)、靠感覺的不確定性,確保了曲塊質(zhì)量的穩(wěn)定性和食品安全性。

    酵母作為大曲微生物區(qū)系中最重要的類群之一,其種類和數(shù)量的差異,影響著酒質(zhì)和出酒率[8]。酵母在白酒釀造過程中除了表現(xiàn)出很強(qiáng)的酒精生成能力,還可以產(chǎn)生酯類、醇類、酮類、烯類、酚類等揮發(fā)性化合物[9]。對于傳統(tǒng)大曲和機(jī)械大曲的質(zhì)量,主要集中在曲塊外觀、理化指標(biāo)、微生物數(shù)量等方面的比較研究上,對兩者微生物類群結(jié)構(gòu)及功能研究還尚未見報(bào)道[5-7]。因此對傳統(tǒng)大曲和機(jī)械大曲中的酵母進(jìn)行比較研究具有重要意義。

    本研究對醬香型傳統(tǒng)大曲和機(jī)械大曲中的酵母采用可培養(yǎng)方法進(jìn)行分離篩選,對酵母的數(shù)量、種類及功能差異進(jìn)行分析比較,探討酵母類群結(jié)構(gòu),為提高機(jī)械化制曲的大曲品質(zhì)提供理論支持。

    1 材料與方法

    1.1 材料與試劑

    1.1.1 大曲樣品來源

    GT01:貴州國臺酒莊有限公司生產(chǎn)車間儲存6個(gè)月大曲,采用自主研發(fā)的機(jī)械化制曲方式生產(chǎn)。

    GT02:貴州國臺酒業(yè)集團(tuán)有限公司生產(chǎn)車間儲存6個(gè)月大曲,采用醬香型高溫大曲的傳統(tǒng)制曲工藝生產(chǎn)。

    兩種大曲在制酒生產(chǎn)前將大曲曲塊粉碎成曲粉,在曲粉的存放處隨機(jī)20個(gè)點(diǎn)取樣,混合均勻,保證其微生物種類的多樣性和均勻性,樣品4℃冰箱保存。

    1.1.2 主要試劑

    酵母基因組DNA提取試劑盒:美國Biomiga公司;脫氧核糖核苷三磷酸(deoxy ribonucleoside triphosphate,dNTP)、TaqDNA聚合酶:北京天根生物技術(shù)有限公司;糖化酶(5000U/g):湖南鴻鷹祥生物工程有限公司。其他試劑均為國產(chǎn)分析純和生化試劑。

    1.1.3 培養(yǎng)基

    孟加拉紅瓊脂培養(yǎng)基、馬鈴薯瓊脂(potatodextroseagar,PDA)培養(yǎng)基、麥芽汁瓊脂(malt extract agar,MEA)培養(yǎng)基、麥芽汁液體培養(yǎng)基:上海博微生物科技有限公司。

    酵母浸出粉胨葡萄糖(yeast extract dextrose medium,YEPD)液體培養(yǎng)基:酵母膏1%,蛋白胨2%,葡萄糖2%。115℃滅菌20 min。

    產(chǎn)酒初篩培養(yǎng)基:

    上層培養(yǎng)基采用紅四氮唑培養(yǎng)基:紅四氮唑(2,3,5-triph enyltetrazoliumchloride,TTC)0.05g,葡萄糖0.5g,瓊脂1.5g,蒸餾水100mL。(將未加入TTC的培養(yǎng)基滅菌后冷卻至50℃左右,再加入TTC溶液)。

    下層培養(yǎng)基采用YEPD固體培養(yǎng)基:酵母膏1%,蛋白胨2%,葡萄糖2%,瓊脂2%。115℃滅菌20 min。

    產(chǎn)酒復(fù)篩培養(yǎng)基(葡萄糖發(fā)酵培養(yǎng)基):葡萄糖200g/L,酵母膏10 g/L,(NH4)2SO41 g/L,KH2PO41 g/L,MgSO4·7H2O 1 g/L,115℃滅菌30 min。

    產(chǎn)香培養(yǎng)基(高粱-小麥培養(yǎng)基):將小麥全部粉碎,高粱整粒和碎粒比為3∶1(g∶g),高粱和小麥比1∶1(g∶g),混勻,加入60%左右95℃水潤糧5 h,按200 U/g淀粉加入糖化酶,60℃糖化2 h,裝瓶,115℃滅菌20 min[12]。

    生理生化實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)基,參考《酵母菌的特征與鑒定手冊》等[10-11]。

    1.2 儀器與設(shè)備

    YS100光學(xué)顯微鏡:日本尼康公司;50/30 μm DVB/ CAR/PDMS萃取頭、手動SPME進(jìn)樣器:美國Supelco公司;HP7890/5975C氣相色譜-質(zhì)譜(gas chromatograph mass spectrometer,GC-MS)聯(lián)用儀:美國Agilent公司;Sorvall ST16R高速冷凍離心機(jī):美國Thermo公司;Flex cycler多功能PCR儀:德國耶拿分析儀器股份公司。

    1.3 實(shí)驗(yàn)方法

    1.3.1 醬香大曲的理化指標(biāo)測定

    參見國標(biāo)QBT4257—2011《釀酒大曲通用分析方法》[13]。

    1.3.2 酵母菌的計(jì)數(shù)及分離篩選

    分別稱取10 g樣品至加有玻璃珠的90 mL無菌生理鹽水的三角瓶中,160 r/min振蕩30 min,分別按10-1、10-2、10-3、10-4、10-5的梯度稀釋,各梯度取1 mL菌液在孟加拉紅瓊脂培養(yǎng)基上進(jìn)行和傾注培養(yǎng)和平板涂布,每個(gè)梯度3個(gè)平行,28℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)2 d,選擇菌落數(shù)在30~300個(gè)之間的傾注平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。挑取涂布平板上典型酵母菌落在PDA培養(yǎng)基平板上劃線純化,將純化后的菌種編號,接種于MEA培養(yǎng)基試管斜面28℃培養(yǎng)3 d后4℃保藏。

    1.3.3 酵母菌的單菌落形態(tài)、細(xì)胞形態(tài)鑒定以及生理生化鑒定

    參照《酵母菌的特征與鑒定手冊》進(jìn)行[10]。

    1.3.4 酵母菌的分子生物學(xué)鑒定

    挑取酵母菌單菌落接種到30mLYEPD液體培養(yǎng)基中,28℃、160 r/min條件下?lián)u床培養(yǎng)24 h,吸取1 mL菌懸液,采用Biomiga公司的酵母DNA基因組試劑盒提取DNA。聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(polymerase chain reaction,PCR)擴(kuò)增采用酵母序列通用引物NL1(5′-GGTCCGTATTTCAAGACG-3′)和NL4(5′-GGTCCGTATTTCAAGACGG-3′)。

    PCR反應(yīng)體系(25μL體系):primer1和primer2各1μL,DNA模板2μL,ddH2O8.5μL,Mix12.5μL。PCR反應(yīng)程序:94℃預(yù)變性5 min,94℃變性30 s,55℃退火45 s,72℃延伸1 min,35個(gè)循環(huán)反應(yīng),最后72℃繼續(xù)延伸10 min。

    引物對合成及PCR產(chǎn)物測序由上海立菲生物技術(shù)有限公司完成,測序結(jié)果在GenBank數(shù)據(jù)庫中進(jìn)行同源序列搜索(BLAST search,http://blast.ncb-i.nlm.nih.gov/Blast.cgi),選取同源性較高的菌株的26S rDNA D1/D2區(qū)域序列作為參比對照[14],用MEGA5.05軟件構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹[15]。

    1.3.5 產(chǎn)酒酵母的一級篩選

    酵母菌在YEPD固體培養(yǎng)基上純化,28℃培養(yǎng)2d,然后傾入50℃左右的TTC上層培養(yǎng)基,28℃條件下避光保存2h,觀察菌落顏色變化。選取顏色較深的菌株進(jìn)行產(chǎn)酒實(shí)驗(yàn)[16]。

    1.3.6 產(chǎn)酒酵母的二級篩選

    將上述顏色較深的酵母,挑取單菌落接入20mLYEPD液體發(fā)酵培養(yǎng)基中,28℃、160 r/min搖床培養(yǎng)28 h,再按體積分?jǐn)?shù)5%接種至140 mL發(fā)酵培養(yǎng)基中,28℃發(fā)酵8 d,記錄CO2總質(zhì)量損失,測定20℃時(shí)酒精度(%vol)及殘?zhí)呛浚╣/100 g)[17]。

    1.3.7 酒精含量測定

    取100 mL發(fā)酵液和50 mL蒸餾水于裝有數(shù)粒玻璃珠的蒸餾瓶,蒸餾,收集100 mL餾出液,控制蒸餾時(shí)間在30~40 min以內(nèi)。用酒精濃度計(jì)記錄此時(shí)的刻度即酒精濃度,同時(shí)測定溫度,按照酒精溫度與濃度換算表,換算成20℃時(shí)的酒精度(%vol)[18]。

    1.3.8 CO2質(zhì)量損失測定

    在發(fā)酵前測定三角瓶和發(fā)酵液的總質(zhì)量,發(fā)酵開始后定期測量三角瓶和發(fā)酵液總質(zhì)量。當(dāng)12 h內(nèi)質(zhì)量損失小于0.1 g時(shí)即可認(rèn)為發(fā)酵結(jié)束,此時(shí)的總質(zhì)量損失即可認(rèn)為發(fā)酵過程中CO2的總質(zhì)量損失。

    1.3.9 殘?zhí)呛繙y定

    參見國標(biāo)GB/T 5009.7—2008《食品中還原糖的測定》中的直接滴定法[19]。

    1.3.10 酵母菌株的固態(tài)發(fā)酵[12,19]

    挑取活化后的酵母菌株,接入50 mL麥芽汁液體培養(yǎng)基中,28℃、160 r/min搖瓶培養(yǎng)36 h,將菌懸液按質(zhì)量濃度4g/100mL的比例接入盛有50g產(chǎn)香培養(yǎng)基,28℃固態(tài)發(fā)酵7 d,對發(fā)酵后樣品的酯味(10分)、酸味(10分)、酒味(10分)進(jìn)行評定,總分(30分),氣味強(qiáng)度按照數(shù)字1~10逐漸升高,可接受性數(shù)值越高接受性越強(qiáng)[20]。邀請10位專業(yè)人員對樣品的酯、酸、酒味及總體可接受性評分,篩選出感官評定總體可接受性評分較高的菌株樣品。

    1.3.11 揮發(fā)性成分分析

    采用頂空固相微萃取(headspace solid-phase microextraction,HS-SPME)技術(shù)對菌株固態(tài)發(fā)酵樣品的揮發(fā)性成分進(jìn)行萃取,然后采用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用(GC-MS)技術(shù)對揮發(fā)性成分進(jìn)行分析檢測。

    HS-SPME條件:菌株固態(tài)發(fā)酵樣品在60℃下,用50/30 μm DVB/CAR/PDMS Supelco纖維頭,手動SPME進(jìn)樣器,頂空萃取40 min。

    GC條件:DB-CP97723A色譜柱,載氣為He(99.999%),載氣流速為1mL/min;程序升溫:起始溫度40℃,保持5min,以5℃/min升溫至200℃,并保持9 min;不分流進(jìn)樣;溶劑延遲時(shí)間:2 min。

    MS條件:離子源為電子電離(electronic ionization,EI)源;離子源溫度230℃;四極桿溫度150℃;電子能量70 eV;發(fā)射電流34.6 μA;倍增器電壓1 125 V;接口溫度280℃;質(zhì)量范圍20~450 u。以峰面積定量。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 醬香型大曲理化指標(biāo)對比

    兩種醬香型大曲理化指標(biāo)測定結(jié)果見表1。

    表1 醬香型大曲理化指標(biāo)對比Table 1 Physical and chemical indexes comparison of sauce-flavorDaqu

    由表1可知,采用兩種工藝操作制得的大曲理化指標(biāo)均符合制曲標(biāo)準(zhǔn),GT02的水分、淀粉含量、酸度高于GT01,糖化力小于GT01。大曲的水分和大曲成型力度有關(guān),機(jī)械方法比人工踩曲受力更均勻,壓力更大,使得機(jī)械曲曲料間的間隙較傳統(tǒng)曲小,這些原因可能導(dǎo)致機(jī)械曲的水分低于傳統(tǒng)曲;大曲的酸度差異在于產(chǎn)酸微生物的數(shù)量及功能差異比如醋酸菌、乳酸菌的差異,這些微生物的數(shù)量也與大曲水分相關(guān);淀粉含量和糖化力有關(guān),GT01的糖化力高于GT02,故GT01中剩余淀粉量低于GT02。

    2.2 酵母菌的計(jì)數(shù)、分離篩選及鑒定

    采用平板稀釋涂布法,從GT01中分離篩選到9株酵母,將這些菌株按FBKL2.0200—FBKL2.0208編號;從GT02中分離篩選到12株酵母,將這些菌株按FBKL2.0209—FBKL 2.0220編號。

    通過這些酵母菌株在PDA培養(yǎng)基上的單菌落形態(tài)圖、1 000×光學(xué)顯微鏡下鏡檢圖和細(xì)胞顯微形態(tài),進(jìn)行了形態(tài)學(xué)和生理生化鑒定,菌株鑒定結(jié)果及來源見表2。

    表2 酵母菌株形態(tài)學(xué)及生理生化鑒定結(jié)果Table 2 Morphologic,physiological and biochemical identification results of yeast strains

    計(jì)數(shù)得到GT01酵母菌數(shù)為(4.71±0.11)×104CFU/g,GT02酵母菌數(shù)為(3.28±0.13)×103CFU/g。傳統(tǒng)認(rèn)為高溫大曲中酵母數(shù)量較少,現(xiàn)在通過聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)-變性梯度電泳技術(shù)對中國白酒微生物群落結(jié)構(gòu)的分析得知,在成品高溫大曲中仍存在大量酵母[21]??赡苁窃诟邷刂魄^程中,多數(shù)酵母死亡,但依然有部分酵母處于存活或休眠狀態(tài),且成品曲出房后儲存在常溫下,可以繼續(xù)網(wǎng)絡(luò)環(huán)境中的酵母,因而導(dǎo)致成品曲粉中酵母數(shù)量較多。酵母的數(shù)量與大曲的水分有關(guān)[7],水分含量高會使產(chǎn)酸微生物數(shù)量增加,這些微生物的生長會在一定程度上抑制酵母的數(shù)量,所以可能導(dǎo)致了GT02中的酵母數(shù)量低于GT01。由表2可知,GT01中酵母的種類少于GT02,由于GT01生產(chǎn)的曲塊全程機(jī)械化生產(chǎn),許多微生物在環(huán)境中還沒有穩(wěn)定,GT02是傳統(tǒng)制曲工藝,在長期的制曲環(huán)境中已經(jīng)經(jīng)過選擇形成穩(wěn)定的菌群,在制曲過程中通過傳統(tǒng)工人操作也會被帶入大曲的大量微生物,所以這些原因可能導(dǎo)致GT01與GT02中酵母種類上的差異。

    2.3 酵母菌的分子生物學(xué)鑒定

    測序結(jié)果在GenBank數(shù)據(jù)庫中搜索,同源性均≥99%,MEGA5.05軟件構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹,結(jié)果見圖1。GT01和GT02中酵母種類維恩圖見圖2。

    圖1 酵母菌株系統(tǒng)發(fā)育樹Fig.1 Phylogenetic tree of yeast strains

    圖2 GT01和GT02中酵母種類維恩圖Fig.2 Yeast classies Venn diagram in GT01 and GT02

    結(jié)合酵母菌的形態(tài)學(xué)、生理生化和分子生物學(xué)鑒定,確定GT01中篩選出來的酵母共有3種:扣囊復(fù)膜酵母(Saccharomycopsis fibuliqura)、釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)、長孢婁德酵母(Lodderomycese longisporus);GT02中篩選出來的酵母共有6種:扣囊復(fù)膜酵母(Saccharomycopsisfibuliqura)、釀酒酵母(Saccharomycescerevisiae)長孢婁德酵母(Lodderomyces elongisporus)、伯頓畢赤酵母(Hyphopichia burtonii)、粉狀畢赤酵母(Pichia farinosa)、庫德里阿茲威氏畢赤酵母(Pichia kudriavzeviil)。

    扣囊復(fù)膜酵母(S.fibuliqura)大量存在于酸性潮濕的環(huán)境,為大曲上霉主要微生物,和釀酒酵母(S.cerevisiae)一樣在白酒成品曲中廣泛存在,具有較好的產(chǎn)酒和產(chǎn)香能力[22-23]。畢赤酵母屬(Pichiasp.)也屬于大曲中的常見酵母屬[24],從醬香白酒酒醅中篩選出來的庫德里阿茲威氏畢赤酵母(P.kudriavzeviil)具有高產(chǎn)乙酸苯乙酯的能力,對白酒有增香作用[25],這種酵母對葡萄糖、酒精度、pH值具有較高耐受性,也用來作為果酒發(fā)酵專用菌種[26];粉狀畢赤酵母(P.farinosa)具有高產(chǎn)甘油的能力[27]。伯頓畢赤酵母(H.burtonii)可能在大曲中對白酒香味的形成有影響[28]。從濃香型白酒酒窖中篩選出的長孢婁德酵母(L.elongisporus)具有高產(chǎn)β-葡萄糖苷酶的能力,在葡萄酒釀造過程中與其余酵母混菌發(fā)酵時(shí)能夠明顯提高葡萄酒的香氣感官品質(zhì)[29],粉狀畢赤酵母(P.farinosa)和長孢婁德酵母(L.longisporus)這兩種酵母的功能雖然目前在醬香型白酒釀造過程中還未見報(bào)道,但是它們產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物和胞外酶等在一定程度上能提高白酒風(fēng)味的復(fù)雜性[30],隨著人們對白酒釀造微生物認(rèn)識的不斷深入,這類酵母在醬香型白酒釀造中的具體功能將逐漸被揭示。

    2.4 酵母菌的產(chǎn)酒功能

    表3 TTC培養(yǎng)基上的顯色反應(yīng)結(jié)果Table 3 Chromogenic reaction results in TTC medium

    TTC是一種無色顯色劑,能和酵母細(xì)胞中的還原性脫氫物質(zhì)發(fā)生顯色反應(yīng),因此可以根據(jù)酵母菌株在TTC培養(yǎng)基上的顯色程度,初步判定酵母呼吸酶活力的大小,即酵母產(chǎn)酒精能力的大小[31]。呼吸酶活力較強(qiáng)的菌株顯色較深,即顯色較深的酵母菌株產(chǎn)酒精能力較強(qiáng)[32]。酵母菌株在TTC培養(yǎng)基上顯色反應(yīng)結(jié)果如表3所示。

    通過顯色反應(yīng),選擇表3中顏色為玫紅色、深玫紅、深紅色的17株酵母菌株進(jìn)行產(chǎn)酒復(fù)篩實(shí)驗(yàn),以市售安琪酵母菌株為對照組進(jìn)行實(shí)驗(yàn),以發(fā)酵8d后的CO2質(zhì)量損失,20℃時(shí)的酒精度和殘?zhí)呛繛閰⒖贾笜?biāo),對這些酵母的產(chǎn)酒性能進(jìn)行進(jìn)一步的比較,結(jié)果見圖3。

    圖3 不同菌株的CO2質(zhì)量損失、20℃時(shí)酒精度及殘?zhí)呛糠治鯢ig.3 Analysis of CO2weightloss,alcohol content at 20℃and residual sugar content of different strains

    從圖3可以看出,GT01中篩選出來的產(chǎn)酒精度最高的酵母菌株為FBKL2.0207,發(fā)酵8 d后,發(fā)酵液殘?zhí)呛繛椋?.10±0.6)g/100 g,CO2質(zhì)量損失為(13.06±0.02)g,20℃時(shí)酒精度為(10.2±0.1)%vol;GT02中篩選出來的產(chǎn)酒精度最高的酵母菌株為FBKL2.0217,發(fā)酵8 d后,發(fā)酵液殘?zhí)呛繛椋?.10±0.4)g/100 g,CO2質(zhì)量損失為(12.68±0.01)g,20℃時(shí)酒精度為(10.2±0.4)%vol;這兩株酵母都為釀酒酵母(S.cerevisiae)。對照組市售安琪酵母菌株,發(fā)酵8 d后,發(fā)酵液殘?zhí)呛繛椋?.7±0.3)g/100 g,CO2質(zhì)量損失為(12.87±0.09)g,20℃時(shí)酒精度為10.2%vol;與對照組相比,兩者中的其余菌株產(chǎn)酒性能均較弱。通過計(jì)算GT01和GT02中進(jìn)行產(chǎn)酒復(fù)篩實(shí)驗(yàn)的菌株在20℃時(shí)產(chǎn)酒精度平均值,發(fā)現(xiàn)GT01中篩選出的菌株的平均產(chǎn)酒性能為GT02的1.04倍。兩者中產(chǎn)酒精度最強(qiáng)的菌株在相同條件下產(chǎn)酒精度基本一致??傮w來看GT01中酵母菌株的產(chǎn)酒精度較強(qiáng)。

    2.5 酵母菌的產(chǎn)香功能

    酵母菌株經(jīng)固態(tài)發(fā)酵后的產(chǎn)物,以酯味(10分)、酸味(10分)、酒味(10分)、總分(30分)為評定指標(biāo),邀請10位專業(yè)人員進(jìn)行感官評定,感官評定結(jié)果見表4。

    表4 菌株固態(tài)發(fā)酵產(chǎn)物感官評定結(jié)果Table 4 Sensory evaluation results of product from strains with solid state fermentation

    根據(jù)表4的感官評定結(jié)果,可以看出大曲中篩選出來的不同種屬的酵母產(chǎn)香能力各異,同種屬酵母間產(chǎn)香功能差異不大。選擇感官評定總體評分≥15分的菌株作為產(chǎn)香優(yōu)勢菌株,將它們的固態(tài)發(fā)酵產(chǎn)物經(jīng)HS-SPME后進(jìn)行GC-MS分析檢測,對總離子流圖中的各峰經(jīng)質(zhì)譜計(jì)算機(jī)數(shù)據(jù)系統(tǒng)檢索及核對Nist2005和Wiley275標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)譜圖,確定揮發(fā)性化學(xué)成分,用峰面積歸一化法測定了各化學(xué)成分的相對百分含量,篩選出來的優(yōu)勢菌株FBKL2.0207、FBKL2.0211、FBKL2.0217固態(tài)發(fā)酵產(chǎn)物揮發(fā)性成分的相對含量結(jié)果如圖4所示。

    由圖4可知,在菌株FBKL2.0207固態(tài)發(fā)酵產(chǎn)物揮發(fā)性香氣成分中檢測到醇類物質(zhì)5種,相對含量總和為37.356%;酯類物質(zhì)6種,相對含量總和為17.453%;酮類物質(zhì)1種,相對百分含量為0.603%;酸類物質(zhì)2種,相對含量總和為13.167%;烯類物質(zhì)1種,相對含量為1.101%。其中帶有水果香氣的揮發(fā)性物質(zhì)相對含量為17.526%,帶甜味的揮發(fā)性物質(zhì)相對含量為16.645%,帶有芳香氣味的揮發(fā)性物質(zhì)的相對含量為1.101%,帶有奶油香氣味的揮發(fā)性物質(zhì)的相對含量為0.603%,帶酸味的揮發(fā)性物質(zhì)的相對含量為11.261%,帶有愉快的玫瑰香氣的物質(zhì)相對含量為17.788%。

    圖4 產(chǎn)香優(yōu)勢菌株揮發(fā)性成分相對含量Table 4 Relative content of volatile components of aroma-producing superiority strains

    在菌株FBKL2.0211固態(tài)發(fā)酵產(chǎn)物揮發(fā)性香氣成分中檢測到醇類物質(zhì)6種,相對含量總和為18.252%;酮類物質(zhì)3種,相對含量總和為58.479%;酸類物質(zhì)2種,相對含量總和為2.306%。其中帶有水果香氣的揮發(fā)性物質(zhì)相對含量為5.943%,具有芳香氣味的揮發(fā)性物質(zhì)的相對含量為0.1%,帶有草藥香味揮發(fā)性物質(zhì)的相對含量為0.7%,帶有青草香氣味的揮發(fā)性物質(zhì)相對含量為0.232%,帶有蠟香氣味的揮發(fā)性物質(zhì)相對含量為11.322%,帶有奶油香氣味的揮發(fā)性物質(zhì)相對含量為56.654%,帶酸味的揮發(fā)性物質(zhì)相對含量為0.534%,帶有愉快的玫瑰香氣的揮發(fā)性物質(zhì)含量為4.086%。

    在菌株FBKL2.0217固態(tài)發(fā)酵產(chǎn)物揮發(fā)性香氣成分中檢測到醇類物質(zhì)4種,相對含量總和為38.821%;酯類物質(zhì)3種,相對含量總和為17.092%;酮類物質(zhì)2種,相對含量總和為1.416%;酸類物質(zhì)1種,相對含量為0.802%。其中帶有水果香氣的揮發(fā)性物質(zhì)相對含量為17.797%,帶甜味的揮發(fā)性物質(zhì)相對含量為1.751%,帶有草藥香味的揮發(fā)性物質(zhì)相對含量為1.051%,帶有奶油香氣味的揮發(fā)性物質(zhì)相對含量為1.264%,帶酸味的揮發(fā)性物質(zhì)相對含量為0.802%,帶有愉快的玫瑰香氣的揮發(fā)性物質(zhì)含量為37.119%。

    綜上,兩種大曲中的產(chǎn)香酵母均能產(chǎn)生醇、酸、酯、酮類揮發(fā)性物質(zhì)。揮發(fā)性化合物在白酒風(fēng)味中扮演著重要的角色,這些揮發(fā)性化合物一些來自原料老熟過程,但主要為酵母在發(fā)酵過程中代謝產(chǎn)生[33]。醬香型白酒的風(fēng)味與揮發(fā)性成分所占比例密切相關(guān),這些成分之間相互協(xié)調(diào)的比例,才使醬香型白酒具有了獨(dú)特的風(fēng)味。

    3 結(jié)論

    GT01中酵母菌的數(shù)量為GT02的1.44倍,GT02中的酵母種類為GT01的2倍;兩個(gè)大曲中同時(shí)存在的酵母屬有復(fù)膜孢酵母屬(Saccharomycopsissp.)、婁德酵母菌屬(Lod deromycessp.)、酵母屬(Saccharomycessp.)。兩種大曲中數(shù)量最多的酵母均是扣囊復(fù)膜酵母(S.fibuligera)。GT01和GT02中產(chǎn)酒精度最高的兩株菌均為釀酒酵母(S.cerevisiae),且在相同條件下兩株菌的產(chǎn)酒精度相同。從產(chǎn)酒精度平均值水平上看,GT01中篩選出來的酵母菌株的產(chǎn)酒功能為GT02的1.04倍。從產(chǎn)香上看,兩種大曲中的產(chǎn)香酵母均能產(chǎn)生醇、酸、酯、酮類揮發(fā)性物質(zhì)。通過對GT01和GT02中酵母菌的初步研究,可以看出兩者各有優(yōu)劣,科學(xué)技術(shù)的發(fā)展創(chuàng)新,可使機(jī)械大曲逐步改良優(yōu)化使其性能更接近于傳統(tǒng)大曲,同時(shí)結(jié)合機(jī)械化生產(chǎn)節(jié)省人力物力,降低成本的優(yōu)點(diǎn),未來大規(guī)模的機(jī)械化生產(chǎn)在保證大曲質(zhì)量的前提下,還能提高企業(yè)生產(chǎn)效率和經(jīng)濟(jì)效益。

    [1]楊國華,邱樹毅,黃永光.醬香白酒生產(chǎn)中產(chǎn)香微生物研究[J].中國釀造,2011,30(4):24-27.

    [2]付捷,王瑛,羅鋼.一種新型酒廠制曲壓塊機(jī)[J].包裝與食品機(jī)械,2006(4):46-47.

    [3]周劍麗,黃平,楊國華,等.麩曲醬香白酒自動化通風(fēng)制曲技術(shù)的應(yīng)用及工藝總結(jié)[J].中國釀造,2016,35(9):138-140.

    [4]沈才洪,許德富.中國白酒必將步入制曲專業(yè)化道路[J].釀酒,2003(4):5-6.

    [5]嚴(yán)楠峰.兼香型白云邊酒不同工藝高溫大曲差異性分析[D].武漢:華中農(nóng)業(yè)大學(xué),2013.

    [6]李超,穆林,王建耀,等.汾型大曲的理化指標(biāo)和微生物指標(biāo)分析[J].中國釀造,2009,28(1):140-142.

    [7]邊佳娜.黃酒手工制曲與機(jī)械化制曲工藝之比較[J].江蘇調(diào)味副食品,2007,24(6):33-34.

    [8]WU Q,CHEN L Q,XU Y.Yeast community associated with the solid state fermentation of traditional Chinese Maotai-flavour liquor[J].Int J Food Microbiol,2013,166(2):323-330.

    [9]WU Q,XU Y,CHEN L.Diversity of yeast species during fermentative process contributing to Chinese Maotai-flavour liquor making[J].Lett Appl Microbiol,2012,55(4):301-307.

    [10]巴尼特,佩恩·亞羅.酵母菌的特征與鑒定手冊[M].青島:青島海洋大學(xué)出版社,1991:50-57.

    [11]王小紅,徐康,趙山,等.孝感鳳窩酒曲中酵母菌的分離及特性研究[J].現(xiàn)代食品科技,2008,24(2):134-137.

    [12]沈怡方.白酒生產(chǎn)技術(shù)全書[M].北京:中國輕工業(yè)出版社,2013:20-25.

    [13]中華人民共和國輕工行業(yè).QB/T 4257—2011《釀酒大曲通用分析方法》[S].北京:中國標(biāo)準(zhǔn)出版社,2011.

    [14]惠豐立,柯濤,褚學(xué)英,等.大曲中酵母菌種群結(jié)構(gòu)及多樣性分析[J].食品與生物技術(shù)學(xué)報(bào),2009,28(1):102-106.

    [15]TAMURA K,DUDLEY J,NEI M,et al.MEGA4:Molecular evolutionary genetics analysis(MEGA)software version 4.0[J].Molecul Biol Evol,2007,24(8):1596-1599.

    [16]余婷婷,賴世強(qiáng),曹文濤,等.醬香型白酒高溫堆積糟醅中耐高溫產(chǎn)香酵母的篩選及鑒定[J].貴州職教論壇,2015(2):15-18.

    [17]劉慶軍.新疆野生酵母的耐受性、發(fā)酵特性及生產(chǎn)適用性研究[D].濟(jì)南:山東輕工業(yè)學(xué)院,2009.

    [18]郜希璐.白酒窖泥中酵母菌的分離鑒定及發(fā)酵特性研究[D].天津:天津大學(xué),2009.

    [19]中華人民共和國輕工行業(yè).GB/T 5009.7—2008《食品中還原糖的測定》[S].北京:中國標(biāo)準(zhǔn)出版社,2008.

    [20]龐博,王曉丹,魏燕龍,等.金沙窖酒酒醅中產(chǎn)香酵母分離與鑒定[J].中國釀造,2014,33(12):42-46.

    [21]高亦豹.聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)—變性梯度電泳技術(shù)(PCR-DGGE)研究中國白酒大曲中微生物群落結(jié)構(gòu)[D].無錫:江南大學(xué),2010.

    [22]MACHIDA M,OHTSUKII,FUKU S,et al.Nucleotide sequences of Saccharomycopsis fibuligeragene for extracellular beta-glucosidases as expressed inSaccharomyces cerevisiae[J].Appl Environ Microbiol, 1988,54(12):3147-3155.

    [23]馮薇,段緒果.面包酵母研究進(jìn)展[J].化工時(shí)刊,2008(7):42-45.

    [24]張亞麗.貴州省仁懷地區(qū)茅臺空氣微生物的鑒定與分離[D].北京:北京化工大學(xué),2014.

    [25]王曉丹,龐博,陳孟強(qiáng),等.醬香白酒酒醅中產(chǎn)香酵母分離與鑒定[J].食品安全質(zhì)量檢測學(xué)報(bào),2014,5(6):1799-1808.

    [26]郝瑤,王陶,李文,等.富硒獼猴桃果酒酵母的篩選及鑒定[J].食品科學(xué),2014,35(21):175-179.

    [27]喬代蓉,曹毅,魏亮,等.產(chǎn)甘油酵母菌株的分離與鑒定[J].四川大學(xué)學(xué)報(bào):自然科學(xué)版,2003,40(5):986-989.

    [28]譚淑君,蔣愛民,劉慧君.伯頓畢赤酵母菌對混合奶酪成熟期間蛋白質(zhì)降解的影響[J].食品與發(fā)酵科技,2015,51(5):10-13.

    [29]牟含.川南白酒釀造環(huán)境中葡萄酒增香釀造酵母菌株的篩選[D].楊凌:西北農(nóng)林科技大學(xué),2015.

    [30]HIERRO N,GONZALEZ A,MAS A,et al.Diversity and evolution of non-Saccharomycesyeast populations during wine fermentation:effect of grape ripeness and cold maceration[J].Fems Yeast Res,2006,6(1): 102-111.

    [31]陸棟.重離子束輻照酵母菌種選育及誘變機(jī)理研究[D].北京:中國科學(xué)院,2010.

    [32]王梅,張彭湃,帥桂蘭,等.TTC在黃酒酵母選育中的應(yīng)用[J].釀酒,2001(5):62-64.

    [33]CHEN S,XU Y.The Influence of yeast strains on the volatile flavour compoundsofChinesericewine[J].J Inst Brew,2010,116(2):190-196.

    Preliminary studies on yeasts from sauce-flavorDaqumade by traditional and mechanical methods

    JIANG Sixia1,2,QIU Shuyi1,2,ZOU Jiangpeng3,CHEN Linlin1,2,LUO Xiaoye1,2,WANG Xiaodan1,2,4*
    (1.Guizhou Provincial Key Laboratory of Fermentation Engineering and Biological Pharmacy,Guizhou University,Guiyang 550025,China; 2.School of Liquor and Food Engineering,Guizhou University,Guiyang 550025,China;3.Guizhou Guotai Distillery Co.,Ltd.,Renhuai 564501,China;4.College of Life Sciences,Guizhou University,Guiyang 550025,China)

    The yeasts were screened and isolated from sauce-flavorDaqumade by traditional and mechanical methods.The quantity,species and functional differences of yeasts were analyzed and compared.Results showed that the quantity of yeasts in mechanical-madeDaquwas 1.44 times than that in traditional-madeDaqu;but the yeasts species in traditional-madeDaquwas 2 times than that in the mechanical-madeDaqu.In the same condition,the alcohol content of the highest performance yeast by both methods at 20℃were 10.2%vol,the alcohol production capacity of yeasts screened from mechanical-madeDaquwas 1.04 times than that from traditional-madeDaquin average.In aroma-producing aspect,bothDaqucan produce alcohols,acids,esters and ketones.

    sauce-flavor;traditional-madeDaqu;mechanical-madeDaqu;yeast;function

    TS261.1

    0254-5071(2017)03-0059-07

    10.11882/j.issn.0254-5071.2017.03.013

    2016-10-17

    貴州省科技支撐計(jì)劃項(xiàng)目(黔科合支撐[2016]2340);貴州省工業(yè)攻關(guān)項(xiàng)目(黔科合GZ字[2014]3012);貴州省重大專項(xiàng)項(xiàng)目(黔科合重大專項(xiàng)字[2015]6012)

    蔣思峽(1993-),女,碩士研究生,研究方向?yàn)槲⑸锱c發(fā)酵技術(shù)。

    *通訊作者:王曉丹(1980-),女,高級實(shí)驗(yàn)師,博士,研究方向?yàn)閼?yīng)用生物技術(shù)。

    猜你喜歡
    醬香大曲酒精度
    小曲酒固態(tài)發(fā)酵工藝的優(yōu)化研究
    釀酒科技(2024年2期)2024-04-02 01:46:18
    兩宋大曲異同考
    戲曲研究(2020年2期)2020-11-16 01:21:10
    唐雅樂大曲存辭考略
    中華戲曲(2020年1期)2020-02-12 02:28:10
    酒精度快速測定儀測定飲料酒酒精度
    論茅臺鎮(zhèn)醬香酒發(fā)展前景及投資分析報(bào)告
    中脈名酒事業(yè)部 領(lǐng)航醬香白酒之旅
    醬香永存
    貴州大曲
    遵義(2017年1期)2017-07-12 17:57:38
    貴州大曲
    遵義(2017年5期)2017-07-05 13:50:16
    醬香大鯢皮膚泡制酒對腸道微生物的影響
    中國釀造(2016年12期)2016-03-01 03:08:18
    国产国语露脸激情在线看| 日韩人妻精品一区2区三区| 国产精品自产拍在线观看55亚洲 | 日日摸夜夜添夜夜添小说| 国产一区二区 视频在线| 搡老乐熟女国产| 国产av国产精品国产| 美国免费a级毛片| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看 | 亚洲国产欧美在线一区| 91大片在线观看| 757午夜福利合集在线观看| 亚洲精品在线观看二区| 大香蕉久久网| 欧美成狂野欧美在线观看| 高清在线国产一区| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 免费少妇av软件| 国产精品自产拍在线观看55亚洲 | 国产av又大| 亚洲天堂av无毛| 国产区一区二久久| 国产精品一区二区在线不卡| 精品高清国产在线一区| 国产视频一区二区在线看| 国产一区二区三区视频了| 丝袜在线中文字幕| 精品亚洲成国产av| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 狠狠狠狠99中文字幕| 嫁个100分男人电影在线观看| 国产麻豆69| 国产亚洲欧美精品永久| 在线观看免费高清a一片| 国产老妇伦熟女老妇高清| 超碰97精品在线观看| 亚洲成人免费av在线播放| kizo精华| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 丝袜人妻中文字幕| 精品一区二区三区四区五区乱码| 制服人妻中文乱码| 欧美精品啪啪一区二区三区| 午夜视频精品福利| 欧美变态另类bdsm刘玥| 在线天堂中文资源库| 日本欧美视频一区| 亚洲av电影在线进入| 人成视频在线观看免费观看| 国产精品美女特级片免费视频播放器 | 欧美在线黄色| 一二三四社区在线视频社区8| 国产免费福利视频在线观看| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 国产熟女午夜一区二区三区| 国产激情久久老熟女| 一级毛片女人18水好多| 高清欧美精品videossex| 中文亚洲av片在线观看爽 | 久久久久久久国产电影| 老熟女久久久| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 99精品欧美一区二区三区四区| 黄色视频,在线免费观看| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 国产极品粉嫩免费观看在线| 法律面前人人平等表现在哪些方面| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 亚洲色图av天堂| 黄色a级毛片大全视频| 欧美另类亚洲清纯唯美| 丰满少妇做爰视频| 日韩中文字幕欧美一区二区| 亚洲精品在线美女| 免费黄频网站在线观看国产| 欧美日本中文国产一区发布| 一级,二级,三级黄色视频| 国产麻豆69| 久久久久久久久免费视频了| 9色porny在线观看| 久久久久网色| 十八禁高潮呻吟视频| 国产欧美日韩一区二区三| 露出奶头的视频| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 亚洲国产av新网站| av国产精品久久久久影院| 高清欧美精品videossex| 精品一区二区三区视频在线观看免费 | 国产成人啪精品午夜网站| 中文字幕高清在线视频| 999精品在线视频| 日韩视频在线欧美| 美女午夜性视频免费| 国产伦理片在线播放av一区| 人成视频在线观看免费观看| 国产精品亚洲av一区麻豆| 啦啦啦在线免费观看视频4| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 欧美日韩成人在线一区二区| 精品久久蜜臀av无| 国产精品久久久久成人av| 老熟妇仑乱视频hdxx| 久久亚洲精品不卡| av在线播放免费不卡| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 人妻 亚洲 视频| videosex国产| 免费人妻精品一区二区三区视频| 精品欧美一区二区三区在线| 久久国产亚洲av麻豆专区| 亚洲三区欧美一区| 两个人免费观看高清视频| 久久人妻福利社区极品人妻图片| 两人在一起打扑克的视频| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 我要看黄色一级片免费的| 999精品在线视频| 日韩欧美三级三区| 一级,二级,三级黄色视频| 欧美黄色淫秽网站| 9191精品国产免费久久| 999久久久精品免费观看国产| 男人舔女人的私密视频| 国产精品二区激情视频| 性少妇av在线| 精品久久久久久久毛片微露脸| 国产又爽黄色视频| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 国产精品久久久久久精品电影小说| 丁香六月欧美| 人人澡人人妻人| 精品卡一卡二卡四卡免费| e午夜精品久久久久久久| 久久精品国产99精品国产亚洲性色 | 日本av免费视频播放| 99精品久久久久人妻精品| 男女下面插进去视频免费观看| 午夜福利免费观看在线| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 在线天堂中文资源库| 51午夜福利影视在线观看| 久久久欧美国产精品| 国产成人精品在线电影| 韩国精品一区二区三区| 精品福利观看| 国产极品粉嫩免费观看在线| 91成年电影在线观看| 精品国产亚洲在线| 久热爱精品视频在线9| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 色尼玛亚洲综合影院| 黄色a级毛片大全视频| 在线观看免费日韩欧美大片| 满18在线观看网站| 久久久水蜜桃国产精品网| 久久国产精品大桥未久av| 少妇精品久久久久久久| 国产又爽黄色视频| 少妇精品久久久久久久| 久久久久网色| 老司机在亚洲福利影院| 人人澡人人妻人| 高潮久久久久久久久久久不卡| 两性夫妻黄色片| 精品人妻在线不人妻| 亚洲欧美色中文字幕在线| 12—13女人毛片做爰片一| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看 | 一个人免费在线观看的高清视频| 三上悠亚av全集在线观看| 新久久久久国产一级毛片| 国产精品一区二区在线不卡| xxxhd国产人妻xxx| 久久这里只有精品19| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 亚洲精品自拍成人| 欧美日韩成人在线一区二区| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| cao死你这个sao货| 亚洲第一av免费看| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 久久热在线av| 欧美久久黑人一区二区| 国产极品粉嫩免费观看在线| 久久香蕉激情| 色精品久久人妻99蜜桃| 国产欧美日韩一区二区精品| 青草久久国产| 国产黄色免费在线视频| 大陆偷拍与自拍| 日韩人妻精品一区2区三区| 99国产精品免费福利视频| 亚洲av第一区精品v没综合| 欧美激情极品国产一区二区三区| 男女下面插进去视频免费观看| 俄罗斯特黄特色一大片| 这个男人来自地球电影免费观看| 日韩欧美三级三区| 欧美日韩亚洲高清精品| 极品少妇高潮喷水抽搐| 一二三四在线观看免费中文在| 婷婷成人精品国产| 啦啦啦免费观看视频1| 蜜桃国产av成人99| 色播在线永久视频| 757午夜福利合集在线观看| 高清在线国产一区| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 正在播放国产对白刺激| 两个人看的免费小视频| 国产单亲对白刺激| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 欧美人与性动交α欧美软件| 精品福利观看| 岛国在线观看网站| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 国产精品久久久人人做人人爽| 国产一区有黄有色的免费视频| 一区二区日韩欧美中文字幕| 色在线成人网| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 亚洲 国产 在线| av视频免费观看在线观看| 亚洲精品一二三| 国产一区二区三区在线臀色熟女 | 欧美日韩福利视频一区二区| 成人国产av品久久久| 亚洲国产欧美在线一区| 欧美精品av麻豆av| 精品少妇久久久久久888优播| 中文字幕精品免费在线观看视频| 欧美日韩一级在线毛片| 欧美精品av麻豆av| 精品第一国产精品| 怎么达到女性高潮| 午夜福利影视在线免费观看| 搡老熟女国产l中国老女人| 一级a爱视频在线免费观看| 美女视频免费永久观看网站| 无遮挡黄片免费观看| 午夜免费成人在线视频| 国产精品影院久久| 国产91精品成人一区二区三区 | 欧美精品一区二区大全| tocl精华| 中文欧美无线码| 男人操女人黄网站| 电影成人av| 久久久久视频综合| 精品久久蜜臀av无| aaaaa片日本免费| 丰满迷人的少妇在线观看| 亚洲精品久久午夜乱码| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看 | 久久中文字幕人妻熟女| 国产高清视频在线播放一区| 91成人精品电影| 纯流量卡能插随身wifi吗| 色在线成人网| 国产精品久久久久久精品古装| 91成人精品电影| 国产野战对白在线观看| 一本一本久久a久久精品综合妖精| 99国产综合亚洲精品| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| 久久中文字幕人妻熟女| 一夜夜www| 国产欧美日韩一区二区精品| 电影成人av| 三级毛片av免费| 国产精品99久久99久久久不卡| 亚洲色图av天堂| 午夜福利视频精品| 久热爱精品视频在线9| 成人永久免费在线观看视频 | 精品熟女少妇八av免费久了| 日本wwww免费看| 国产一区二区 视频在线| 最近最新中文字幕大全电影3 | 久久久久久免费高清国产稀缺| 国产欧美日韩精品亚洲av| 精品熟女少妇八av免费久了| 黄片大片在线免费观看| 精品国内亚洲2022精品成人 | 丰满少妇做爰视频| 欧美日韩黄片免| 日韩视频一区二区在线观看| 捣出白浆h1v1| 一边摸一边抽搐一进一小说 | 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 一区二区三区精品91| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 国产深夜福利视频在线观看| 欧美黑人精品巨大| 国产精品av久久久久免费| 精品福利永久在线观看| 国产精品一区二区免费欧美| 国产精品一区二区在线不卡| 少妇粗大呻吟视频| 99re6热这里在线精品视频| 久久中文字幕一级| 国产男女内射视频| 人妻久久中文字幕网| 一边摸一边做爽爽视频免费| 91字幕亚洲| 大陆偷拍与自拍| 久久久水蜜桃国产精品网| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 曰老女人黄片| 日本五十路高清| cao死你这个sao货| svipshipincom国产片| 91九色精品人成在线观看| 丁香欧美五月| 中文字幕人妻丝袜制服| 美女扒开内裤让男人捅视频| 日日爽夜夜爽网站| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 黄片播放在线免费| 亚洲av片天天在线观看| 日韩欧美一区视频在线观看| 欧美激情高清一区二区三区| 国产片内射在线| 欧美日韩亚洲高清精品| 18禁美女被吸乳视频| 亚洲情色 制服丝袜| 久久精品亚洲熟妇少妇任你| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 如日韩欧美国产精品一区二区三区| 日韩大片免费观看网站| 欧美日韩精品网址| 国产精品一区二区在线观看99| 亚洲av第一区精品v没综合| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 亚洲国产欧美网| 考比视频在线观看| av在线播放免费不卡| 欧美成狂野欧美在线观看| 老司机亚洲免费影院| 国产精品香港三级国产av潘金莲| 亚洲av美国av| 国产单亲对白刺激| 麻豆成人av在线观看| 亚洲,欧美精品.| 一级,二级,三级黄色视频| 午夜福利视频精品| 精品国产一区二区三区四区第35| 最近最新免费中文字幕在线| 两个人看的免费小视频| 久久久精品区二区三区| www.999成人在线观看| 欧美日韩视频精品一区| 午夜免费鲁丝| 在线亚洲精品国产二区图片欧美| 欧美激情极品国产一区二区三区| 国产麻豆69| 色婷婷久久久亚洲欧美| 日本精品一区二区三区蜜桃| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 亚洲 欧美一区二区三区| 99国产极品粉嫩在线观看| 久久精品成人免费网站| 丝袜美足系列| 99re在线观看精品视频| 亚洲精华国产精华精| 一区福利在线观看| 日韩视频在线欧美| 大香蕉久久成人网| 一级毛片精品| 久久久精品免费免费高清| 日韩欧美一区二区三区在线观看 | av线在线观看网站| 久久精品成人免费网站| 啦啦啦在线免费观看视频4| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 啦啦啦 在线观看视频| 夫妻午夜视频| 亚洲第一av免费看| 日本黄色日本黄色录像| 成人国产av品久久久| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 三级毛片av免费| 久久毛片免费看一区二区三区| 免费观看av网站的网址| 久久久精品94久久精品| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 性高湖久久久久久久久免费观看| 国产精品亚洲av一区麻豆| 欧美 日韩 精品 国产| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 国产精品av久久久久免费| 两个人看的免费小视频| 亚洲精品在线观看二区| 丁香欧美五月| 国产国语露脸激情在线看| av免费在线观看网站| 少妇被粗大的猛进出69影院| 女人精品久久久久毛片| 大型黄色视频在线免费观看| 99在线人妻在线中文字幕 | 国产片内射在线| 中文字幕制服av| 桃红色精品国产亚洲av| 老司机午夜福利在线观看视频 | 国产男靠女视频免费网站| 精品国产乱码久久久久久小说| 精品久久久精品久久久| 国产精品免费一区二区三区在线 | 天天影视国产精品| 亚洲人成77777在线视频| 搡老乐熟女国产| 12—13女人毛片做爰片一| 丁香欧美五月| 最近最新免费中文字幕在线| 成人免费观看视频高清| www.999成人在线观看| 一本色道久久久久久精品综合| 在线播放国产精品三级| 国产精品久久久av美女十八| 久久九九热精品免费| 国产在线精品亚洲第一网站| 日本欧美视频一区| 在线看a的网站| 国产精品免费大片| 亚洲美女黄片视频| 日韩欧美免费精品| 成人三级做爰电影| 老熟女久久久| 亚洲,欧美精品.| svipshipincom国产片| 精品亚洲成a人片在线观看| 欧美激情 高清一区二区三区| 亚洲综合色网址| 97在线人人人人妻| 最近最新中文字幕大全免费视频| 成人18禁在线播放| 国产淫语在线视频| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 大型av网站在线播放| 黄色怎么调成土黄色| 亚洲成人免费av在线播放| 欧美日韩成人在线一区二区| 91精品国产国语对白视频| 91精品三级在线观看| 99riav亚洲国产免费| 色老头精品视频在线观看| 一二三四社区在线视频社区8| 99久久国产精品久久久| 一级a爱视频在线免费观看| 久久人妻福利社区极品人妻图片| 看免费av毛片| 捣出白浆h1v1| 伦理电影免费视频| 亚洲欧美激情在线| 电影成人av| 97人妻天天添夜夜摸| 国产在线免费精品| 男女免费视频国产| 午夜91福利影院| 日韩视频一区二区在线观看| 成人手机av| 妹子高潮喷水视频| a级毛片在线看网站| 男女高潮啪啪啪动态图| 亚洲精品国产区一区二| 国产成人精品无人区| 不卡av一区二区三区| 国产野战对白在线观看| 桃花免费在线播放| 久久人人97超碰香蕉20202| 俄罗斯特黄特色一大片| 亚洲午夜理论影院| 亚洲人成77777在线视频| 精品一区二区三区av网在线观看 | 久久狼人影院| 中文字幕色久视频| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 国产精品.久久久| www.熟女人妻精品国产| 午夜福利乱码中文字幕| 精品国产乱码久久久久久男人| 美国免费a级毛片| 久久中文字幕人妻熟女| 级片在线观看| 亚洲av美国av| 桃红色精品国产亚洲av| 久久香蕉精品热| 18美女黄网站色大片免费观看| 亚洲成人久久爱视频| 亚洲成人久久性| 亚洲精品久久国产高清桃花| 亚洲最大成人中文| 在线观看美女被高潮喷水网站 | 欧美中文综合在线视频| avwww免费| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 高潮久久久久久久久久久不卡| www.999成人在线观看| 99久久成人亚洲精品观看| 免费一级毛片在线播放高清视频| 国产亚洲欧美在线一区二区| 国产午夜精品论理片| 国产精品女同一区二区软件 | av黄色大香蕉| 一级a爱片免费观看的视频| 久久精品国产99精品国产亚洲性色| 午夜日韩欧美国产| 国产精品自产拍在线观看55亚洲| 夜夜躁狠狠躁天天躁| 国产精品一区二区三区四区久久| 亚洲天堂国产精品一区在线| 国产一区二区在线观看日韩 | 国产亚洲精品久久久com| 在线观看66精品国产| 18美女黄网站色大片免费观看| 国产成人欧美在线观看| 无遮挡黄片免费观看| 亚洲九九香蕉| 91九色精品人成在线观看| 香蕉丝袜av| 中文字幕精品亚洲无线码一区| 午夜福利18| 桃色一区二区三区在线观看| 悠悠久久av| 在线免费观看不下载黄p国产 | 全区人妻精品视频| 午夜a级毛片| 亚洲精品乱码久久久v下载方式 | 精品一区二区三区视频在线观看免费| 亚洲精华国产精华精| h日本视频在线播放| 嫁个100分男人电影在线观看| 日本黄大片高清| 性色avwww在线观看| 白带黄色成豆腐渣| 岛国在线免费视频观看| 久久伊人香网站| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 女人被狂操c到高潮| 国产男靠女视频免费网站| 狂野欧美激情性xxxx| 亚洲国产看品久久| 亚洲av电影不卡..在线观看| 最新中文字幕久久久久 | 欧美不卡视频在线免费观看| 久久精品综合一区二区三区| 国产亚洲精品一区二区www| 国产高清有码在线观看视频| 女同久久另类99精品国产91| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 日韩国内少妇激情av| 精品久久久久久久末码| 老司机在亚洲福利影院| 91久久精品国产一区二区成人 | 女人被狂操c到高潮| 国产av在哪里看| 成人亚洲精品av一区二区| 一进一出好大好爽视频| 观看免费一级毛片| 天堂√8在线中文| 首页视频小说图片口味搜索| 在线观看一区二区三区| 成熟少妇高潮喷水视频| 1024香蕉在线观看| 色尼玛亚洲综合影院| 老汉色av国产亚洲站长工具| 麻豆一二三区av精品| 精品国产乱码久久久久久男人| 欧美日本视频| 九色成人免费人妻av| 亚洲一区二区三区不卡视频| 久久精品人妻少妇| 人妻久久中文字幕网| 18禁国产床啪视频网站| 免费观看的影片在线观看| 嫩草影视91久久| 老司机福利观看| 国产男靠女视频免费网站| 国产亚洲欧美98| 草草在线视频免费看| 亚洲成a人片在线一区二区| 色噜噜av男人的天堂激情| 真实男女啪啪啪动态图| 午夜福利18| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 亚洲熟妇熟女久久| 成人18禁在线播放| 亚洲精品美女久久av网站| 色综合婷婷激情| 精品乱码久久久久久99久播| 午夜日韩欧美国产| 国产精品免费一区二区三区在线| 天堂av国产一区二区熟女人妻| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| 国产一级毛片七仙女欲春2| 99久久国产精品久久久| av欧美777| 桃色一区二区三区在线观看| 久久婷婷人人爽人人干人人爱| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 男人舔女人下体高潮全视频| 天堂网av新在线| 国产伦人伦偷精品视频| 一本综合久久免费| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 日韩欧美 国产精品| xxxwww97欧美| av国产免费在线观看|