基于單味藥及藥對(duì)HPLC指紋圖譜探討小青龍湯組方特性＊

張玉蘋(píng)，王青青，鄧秀蘭，張曉晶，鐘相根

（北京中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)學(xué)院 北京 100029）

基于單味藥及藥對(duì)HPLC指紋圖譜探討小青龍湯組方特性＊

張玉蘋(píng)，王青青＊＊，鄧秀蘭，張曉晶，鐘相根

（北京中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)學(xué)院 北京 100029）

小青龍湯方出自張仲景《傷寒論》，其組成為麻黃、芍藥、細(xì)辛、干姜、甘草、桂枝、半夏、五味子。對(duì)單味藥以及麻黃-甘草藥對(duì)、麻黃-桂枝藥對(duì)、白芍-桂枝藥對(duì)、白芍-甘草藥對(duì)、五味子-細(xì)辛藥對(duì)的高效液相色譜（HPLC）指紋圖譜分析研究逐漸深入。本文從此角度出發(fā)分析小青龍湯組方特性，探討中醫(yī)方劑配伍科學(xué)內(nèi)涵。

小青龍湯 單味藥 藥對(duì) HPLC 指紋圖譜

小青龍湯方出自張仲景《傷寒論》，其組成為麻黃去節(jié)三兩、芍藥三兩、細(xì)辛三兩、干姜三兩、甘草三兩炙、桂枝去皮三兩、半夏半升洗、五味子半升[1]。小青龍湯證“喘滿”、“咳嗽”、“短氣”、“微腫”屬寒飲，故以寒飲為主癥者，均可投之，尤在涇在《金匱翼》中稱(chēng)其“此散寒蠲飲之神劑”。中藥單味藥及藥對(duì)的HPLC指紋圖譜分析研究逐漸深入，本文從此角度出發(fā)分析小青龍湯組方特性，探討中醫(yī)方劑配伍科學(xué)內(nèi)涵。

1 單味藥HPLC指紋圖譜研究

1.1 麻黃

麻黃為麻黃科植物草麻黃（Ephedra sinica Stapf）、中麻黃（Ephedra intermedia Schrenk&C.A.Mey.）或木賊麻黃（Ephedra equisetina Bunge）的干燥草質(zhì)莖，其含有生物堿類(lèi)、揮發(fā)油、有機(jī)酚酸、單萜糖苷類(lèi)、木脂素類(lèi)等化學(xué)成分[2]。木賊麻黃總生物堿含量最高（2.708%±0.642%），草麻黃其次（1.365%±0.624%），中麻黃最少（1.537%±0.746%）[3]，其中5種麻黃生物堿-去甲基偽麻黃堿、去甲基麻黃堿、麻黃堿、偽麻黃堿和甲基麻黃堿為麻黃單味藥或麻黃與他藥配伍時(shí)HPLC指紋圖譜中的代表性成分。

1.2 芍藥

白芍為毛茛科植物芍藥（Paeonia lactiflora Pall.）的干燥根，赤芍為毛茛科植物芍藥（Paeonia lactiflora Pall.）或川赤芍（Paeonia veitchii Lynch）的干燥根[4]。白芍偏于補(bǔ)虛，功效為平抑肝陽(yáng)、養(yǎng)血收陰；而赤芍偏于祛邪，功效為清熱涼血、散瘀止痛，兩者功效各有偏重。從化學(xué)成分組成上看，赤芍與白芍均含單萜苷類(lèi)、多元醇類(lèi)及揮發(fā)油類(lèi)成分，但仍有各自的特征。余捷婧等[4]發(fā)現(xiàn)赤芍和白芍中單萜苷類(lèi)化合物區(qū)別最大的是芍藥內(nèi)酯苷含量，白芍樣品中芍藥內(nèi)酯苷量均值是赤芍樣品量均值的6倍以上，而赤芍中沒(méi)食子酸、沒(méi)食子酸甲酯和1，2，3，4，6-五沒(méi)食子酰葡萄糖的含量明顯高于白芍。另外，白芍與赤芍主成分分析結(jié)果顯示白芍藥材中的代表性成分為芍藥苷，氧化芍藥苷，五沒(méi)食子酰葡萄糖，芍藥內(nèi)酯苷以及1個(gè)未知峰，其色譜峰對(duì)應(yīng)5個(gè)因子的特征值大于1，累積貢獻(xiàn)率達(dá)86.15%，而赤芍藥材中的代表性成分為芍藥苷，五沒(méi)食子酰葡萄糖，芍藥內(nèi)酯苷和2個(gè)未知峰，其色譜峰對(duì)應(yīng)5個(gè)因子的特征值均大于1，累積貢獻(xiàn)率達(dá)78.39%，提示兩者的代表性成分也存在明顯的不同[5]。

1.3 細(xì)辛

細(xì)辛為馬兜鈴科植物北細(xì)辛Asarum heterotropoides f.mandshuricum（Maxim.）Kitag.、漢城細(xì)辛Asarum sieboldii Miq.Var.seoulense Nakai或華細(xì)辛Asarum sieboldii Miq.的干燥根和根莖。細(xì)辛中含有的甲基丁香酚具鎮(zhèn)咳祛痰、鎮(zhèn)痛等作用、細(xì)辛脂素具抗病毒和抗菌作用、但也含有具較強(qiáng)腎毒性的馬兜鈴酸以及具致癌作用的黃樟醚。細(xì)辛可堿制、醋制、米泔水制、堿醋制、甘草制、酒制、姜制、鹽制、蜜制、炒制等。王元清等[6]通過(guò)對(duì)細(xì)辛10種不同炮制品的指紋圖譜進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)醋制、甘草制與堿醋制能較好的保留有效成分甲基丁香酚與細(xì)辛脂素，酒制可增加甲基丁香酚、細(xì)辛脂素的浸出量，尤其甲基丁香酚的浸出量可增加10%-20%，但炮制后馬兜鈴酸A和黃樟醚都有不同程度的降低。而姜制的樣品由于生姜中含有的姜烯、姜醇、樟烯等揮發(fā)油成分與姜辣素、蜜制可能由于蜂蜜中含有果糖、葡萄糖、氨基酸、有機(jī)酸等化學(xué)成分在炮制過(guò)程中影響細(xì)辛化學(xué)成分的轉(zhuǎn)化與轉(zhuǎn)變；炒制的樣品可能由于炒制加快細(xì)辛中化學(xué)成分的轉(zhuǎn)化與揮發(fā)油成分的散失，從而導(dǎo)致與其他樣品相比相似度較低。

1.4 干姜

干姜為姜科植物姜（Zingiber officinale Roscoe）的干燥根莖，其主要成分為揮發(fā)油和無(wú)揮發(fā)性的特征性化學(xué)成分姜辣素類(lèi)化合物（以6-姜酚、8-姜酚、6-姜烯酚和10-姜酚為代表）。對(duì)比姜的不同炮制品干姜與姜炭發(fā)現(xiàn)，干姜辛燥之性較強(qiáng)，而姜炭辛燥之性弱且具有止血的功效。薛丹丹等[7]研究發(fā)現(xiàn)受熱時(shí)6-姜酚分解、含量減少，而6-姜烯酚含量升高，干姜與姜炭功效的改變可能與6-姜酚和6-姜烯酚這兩種成分之間的的轉(zhuǎn)變有關(guān)，但具體有效物質(zhì)仍有待于進(jìn)一步研究。

1.5 甘草

甘草為豆科植物甘草（Glycyrrhiza uralensis Fisch.）的干燥根和根莖，其主要化學(xué)成分包括黃酮類(lèi)、三萜類(lèi)、多糖類(lèi)和生物堿類(lèi)。謝佳穎等[8]根據(jù)對(duì)照品的色譜保留時(shí)間對(duì)甘草色譜峰進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)包括芹糖甘草苷、甘草苷、異甘草素葡萄糖芹菜苷、異甘草苷在內(nèi)的甘草總苷以及甘草酸為甘草的特征峰。當(dāng)甘草與不同中藥配伍后，可以影響對(duì)方及自身特征峰水平，進(jìn)而影響療效的發(fā)揮[9]。

1.6 桂枝

桂枝為樟科樟屬植物肉桂Cinnamomum cassia（L.）J.Presl的干燥嫩枝，其含較高的揮發(fā)油，化學(xué)成分包括肉桂酸、桂皮醛、桂皮醇、香豆素、原兒茶酸、原兒茶醛，酚類(lèi)、有機(jī)酸、多糖及苷類(lèi)等。劉威等[10]研究不同產(chǎn)地或同一產(chǎn)地不同批次桂枝水提液HPLC指紋圖譜發(fā)現(xiàn)，可以指認(rèn)出包括桂皮醛、原兒茶酸、原兒茶醛、香豆素、肉桂醇和肉桂酸在內(nèi)的6個(gè)色譜峰，其中桂皮醛為桂枝含量測(cè)定指標(biāo)性成分，其色譜峰較大且穩(wěn)定性、重現(xiàn)性良好，但受藥材質(zhì)量、采收時(shí)節(jié)、儲(chǔ)存、運(yùn)輸?shù)纫蛩赜绊懀?個(gè)化學(xué)成分含量差異顯著。

1.7 半夏

半夏為天南星科植物半夏Pinellia ternata（Thunb.）Breit.的干燥塊莖，其主要成分包括核苷類(lèi)、生物堿類(lèi)、有機(jī)酸類(lèi)、氨基酸、多糖及揮發(fā)油等，目前報(bào)道核苷類(lèi)、生物堿類(lèi)和有機(jī)酸類(lèi)與其功效“燥濕化痰，降逆止嘔，消痞散結(jié)”相關(guān)。王甫成等[11]研究發(fā)現(xiàn)來(lái)源5個(gè)不同產(chǎn)地半夏的HPLC圖譜，均在7.96 min處出現(xiàn)《中華人民共和國(guó)藥典》規(guī)定的半夏指標(biāo)性成分琥珀酸的特征峰[12]，還出現(xiàn)10個(gè)共有特征峰，其中有8個(gè)比較容易辨識(shí)，可作為半夏鑒別的特征峰。楊冰月等[13]對(duì)半夏藥材不同提取部位-水、75%乙醇及95%乙醇的HPLC特征指紋圖譜進(jìn)行考察，其指紋圖譜共有峰分別為12，13和16個(gè)，表明提取溶劑極性降低而溶出化學(xué)成分增加，另外還指認(rèn)了5個(gè)特征峰分別為肌苷、鳥(niǎo)苷、腺苷、琥珀酸和鹽酸麻黃堿，提示不同提取溶劑對(duì)藥物溶出成分產(chǎn)生不同影響，同時(shí)也會(huì)影響藥效。

1.8 五味子

五味子是木蘭科植物五味子Schisandra chinensis（Turcz.）Baill.的干燥成熟果實(shí)[14]，其主要化學(xué)成分為木脂素[15]，另外還含有多糖、揮發(fā)油、有機(jī)酸、三萜、甾醇、香豆素、內(nèi)酯、生物堿類(lèi)、黃酮類(lèi)、強(qiáng)心苷類(lèi)等多種化學(xué)成分，具收斂固澀、益氣生津的功效。王連芝等[16]對(duì)不同產(chǎn)地五味子供試品的指紋圖譜進(jìn)行分析，從29個(gè)共有指紋峰中確認(rèn)五味子醇甲、五味子醇乙、五味子酯甲、五味子甲素、五味子乙素、五味子丙素6個(gè)主要的木脂素指紋峰。

2 藥對(duì)HPLC指紋圖譜研究

2.1 麻黃-甘草藥對(duì)

《傷寒論》及《金匱要略》中應(yīng)用麻黃-甘草藥對(duì)的方劑較多（如麻黃甘草湯、小青龍湯等），麻黃與甘草配比不同，水煎液中成分含量會(huì)有不同程度的改變，而這勢(shì)必會(huì)影響中藥復(fù)方的藥效。麻黃-甘草配伍，麻黃類(lèi)生物堿的含量隨著甘草配比量的增加出現(xiàn)不同程度地降低。徐文杰等[17]研究發(fā)現(xiàn)麻黃-甘草在共煎時(shí)，隨著甘草的配伍比例增大，5種麻黃生物堿的含量較麻黃單煎液均有不同程度的降低，其中麻黃甘草（12∶3）組去甲基偽麻黃堿、去甲基麻黃堿、麻黃堿、偽麻黃堿、甲基麻黃堿含量最高，麻黃甘草（12∶6）組次之，麻黃甘草（12∶12）組最低，而這與“麻黃甘草湯，麻黃之開(kāi)泄，得甘草以監(jiān)之”相吻合。

麻黃與甘草共煎，不僅麻黃類(lèi)生物堿的含量隨著甘草配比量的增加出現(xiàn)不同程度地降低，而且水煎液中甘草苷、甘草酸的含量隨著麻黃配伍比例的減少也發(fā)生改變。將不同配比麻黃甘草水煎液與相應(yīng)的甘草單煎液進(jìn)行HPLC分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)[17]麻黃甘草水煎液中甘草苷、甘草酸的含量隨麻黃配伍比例的減少，均有不同程度的降低。小青龍湯原方麻黃甘草配比為1∶1，現(xiàn)方劑學(xué)中兩者比例為9∶6，據(jù)此分析現(xiàn)方劑學(xué)中其作用應(yīng)較原方增強(qiáng)。

2.2 麻黃-桂枝藥對(duì)

《傷寒論》中麻黃與桂枝的比例不同、作用不同，如麻黃湯中麻黃用量大于桂枝，主發(fā)汗解表；桂枝去芍藥加麻黃細(xì)辛附子湯中麻黃用量小于桂枝，主溫胃化飲；小青龍湯中麻黃與桂枝劑量相等，主治表里兼證，在表是太陽(yáng)傷寒證，在里是寒飲郁肺證。徐文杰等[18]取桂枝單煎液、麻黃-桂枝不同配比水煎液以及麻黃湯水煎液的供試品溶液進(jìn)行HPLC分析，計(jì)算香豆素、桂皮醇和桂皮醛的含量，結(jié)果發(fā)現(xiàn)麻黃與桂枝配伍后，水煎液中5種麻黃生物堿的含量隨著桂枝的比例增加，與桂枝單煎液相比均有不同程度的降低，下降幅度在15%-42%；香豆素、桂皮醇、桂皮醛的含量也呈不同程度的降低，下降幅度在16%-57%，與《傷寒雜病論》中麻黃與桂枝的比例不同、作用不同有共通之處。

2.3 白芍-桂枝藥對(duì)

桂枝、白芍藥對(duì)始見(jiàn)于張仲景的《傷寒論》，兩者配伍，既有收調(diào)營(yíng)衛(wèi)、和氣血，又有啟發(fā)心陽(yáng)、益陰止汗之功。不同配比桂枝、白芍藥對(duì)的指紋圖譜中出現(xiàn)相應(yīng)的特征性成分峰，包括沒(méi)食子酸、氧化芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷、芍藥苷、苯甲酰芍藥苷、1，2，3，4，6-五沒(méi)食子酰葡萄糖、肉桂酸、香豆素等，但峰高比例不盡相同。研究發(fā)現(xiàn)[19]選擇肉桂酸和芍藥苷作為特征峰，小青龍湯《傷寒論》中芍藥三兩（9 g）、桂枝去皮三兩（9 g）兩者配比為1∶1時(shí)，指紋圖譜中肉桂酸和芍藥苷峰高比為7。

2.4 白芍-甘草藥對(duì)

芍藥甘草湯系東漢張仲景《傷寒論·太陽(yáng)篇》的著名方劑，是常用的緩急止痛之方，由白芍和炙甘草等組成，方中白芍與炙甘草配伍比例為1∶1，主營(yíng)陰不足、肝脾不和，癥見(jiàn)脘腹諸痛、四肢攣急等證候。芍藥甘草湯的主要藥理活性成分為白芍中的芍藥苷和苯甲酰芍藥苷，以及甘草中的甘草苷和甘草酸[9]。白芍與炙甘草不同配比對(duì)主要藥理活性成分溶出率影響的研究發(fā)現(xiàn)除芍藥甘草配比0.6∶1組中苯甲酰芍藥苷溶出率較低外，0.6∶1、1∶1、3∶1這3個(gè)芍藥甘草配伍比例中芍藥苷、甘草苷和甘草酸的溶出率均高于其他比例組，其中3∶1配比相對(duì)更優(yōu)[20]。

2.5 五味子-細(xì)辛藥對(duì)

五味子與細(xì)辛藥對(duì)，源于《傷寒論》中主治外感風(fēng)寒，內(nèi)有寒飲之咳喘惡寒、吐痰清稀的小青龍湯，以及《金匾要略》中主治寒飲咳嗽，痰稀胸滿川的荃甘五味姜辛湯。五味子與細(xì)辛藥對(duì)適用于寒飲伏肺之哮喘病，屬于止咳平喘類(lèi)、散斂相反藥對(duì)。吳建兵等[21]研究發(fā)現(xiàn)五味子揮發(fā)油和細(xì)辛揮發(fā)油為五味子-細(xì)辛藥對(duì)的平喘活性部位，而五味子揮發(fā)油、五味子水提液、五味子總酸和細(xì)辛揮發(fā)油為其鎮(zhèn)咳及祛痰活性部位。

3 展望

對(duì)單味中藥以及麻黃-甘草藥對(duì)、麻黃-桂枝藥對(duì)、白芍-桂枝藥對(duì)、白芍-甘草藥對(duì)、五味子-細(xì)辛藥對(duì)進(jìn)行HPLC指紋圖譜的分析研究，可以幫助人們更好的認(rèn)識(shí)每味中藥的特性，了解中藥不同植物來(lái)源、不同產(chǎn)地、不同炮制方法對(duì)其化學(xué)成分含量存在差異的影響，并且通過(guò)藥對(duì)配伍比例的進(jìn)一步研究可明了中藥配伍后各中藥成分含量的變化，以便解釋藥對(duì)不同配伍比例對(duì)臨床療效的影響。

但也需注意中藥單味藥以及藥對(duì)HPLC指紋圖譜研究中存在一些差異，包括供試品制備方法存在超聲一步法[1，22]和超聲兩步法[13]的不同、供試品處理所需溶劑不同（包括甲醇[23]、蒸餾水[11]及70%乙醇[19]等）、不同溶劑處理后供試品HPLC指紋不同等，因此，是否應(yīng)該在研究多樣化的基礎(chǔ)上，建立統(tǒng)一的針對(duì)方劑中單味藥或藥對(duì)HPLC指紋圖譜分析研究的規(guī)范化流程值得進(jìn)一步商榷?？傊?，雖然單味藥以及藥對(duì)HPLC指紋圖譜研究方案存在差異，但對(duì)單味藥以及藥對(duì)HPLC指紋圖譜的深入研究與分析，必將有助于更好的理解 小青龍湯的組方特性及探討其配伍科學(xué)內(nèi)涵。

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（責(zé)任編輯：陳 寧，責(zé)任譯審：王 晶）

Discussion on Character of Xiaoqinglong Decoction Based on HPLC Fingerprints of Single Herb and Herb-pair

Zhang Yuping,Wang Qingqing,Deng Xiulan,Zhang Xiaojing,Zhong Xianggen
(School of Chinese Medicine,Beijing University of Chinese Medicine,Beijing 100029,China)

Xiaoqinglong decoction,first recorded by Zhang Zhongjing in traditional Chinese medicine(TCM)classic text Shang Han Lun(Treatise on Cold Damage Diseases),has eight herbal components including Herb Ephedrae(Mahuang),Radix Paeoniae Alba(Shaoyao),Radix Asari(Xixin),Rhizoma Zingiberis(Ganjiang),Glycyrrhiza Uralensis(Gancao),Ramulus Cinnamomi(Guizhi),Rhizoma Pinelliae(Banxia)and Fructus Schisandrae(Wuweizi).Fingerprints of HPLC for single herb and herb-pair including Mahuang-Gancao,Mahuang-Guizhi,Shaoyao-Guizhi,Shaoyao-Gancao,Wuweizi-Xixin were analyzed.Based on the HPLC of single herb and herbal pair,we discussed the character of the Xiaoqinglong decoction and explored the scientific connotation of the compatibility of medicines in prescription.

Xiaoqinglong decoction,single herb,herb-pair,HPLC,fingerprints

10.11842/wst.2017.07.023

R917

A

2017-04-19

修回日期：2017-05-18

＊ 國(guó)家自然科學(xué)基金委青年基金項(xiàng)目（81403313）：基于IL-13/STAT6與纖毛自噬介導(dǎo)氣道粘液增多探討小青龍湯溫肺蠲飲治療哮喘發(fā)作機(jī)制研究，負(fù)責(zé)人：王青青。

＊＊ 通訊作者：王青青，副教授，碩士生導(dǎo)師，主要研究方向：免疫藥理學(xué)及中藥新藥研發(fā)。