四種水產(chǎn)藥物對硬刺松潘裸鯉幼魚的急性毒性試驗

徐 濱，聶媛媛1,，魏開金1,，鄧龍君，甘維熊，馬寶珊，朱祥云，徐 進

(1.大連海洋大學(xué)水產(chǎn)與生命學(xué)院，遼寧大連 116023；2.中國水產(chǎn)科學(xué)研究院長江水產(chǎn)研究所，農(nóng)業(yè)部淡水生物多樣性保護重點實驗室,武漢 430223；3. 雅礱江流域水電開發(fā)有限公司,成都 610015)

四種水產(chǎn)藥物對硬刺松潘裸鯉幼魚的急性毒性試驗

徐 濱2，聶媛媛1,2，魏開金1,2，鄧龍君3，甘維熊3，馬寶珊2，朱祥云2，徐 進2

(1.大連海洋大學(xué)水產(chǎn)與生命學(xué)院，遼寧大連 116023；2.中國水產(chǎn)科學(xué)研究院長江水產(chǎn)研究所，農(nóng)業(yè)部淡水生物多樣性保護重點實驗室,武漢 430223；3. 雅礱江流域水電開發(fā)有限公司,成都 610015)

在溶氧(7.0±0.3)mg/L，水溫(18±1)℃，pH 7.8±0.1條件下，采用國家標(biāo)準半靜態(tài)方式水生生物急性毒性實驗法研究了高錳酸鉀、硫酸銅與硫酸亞鐵合劑(5∶2)、敵百蟲和甲醛對硬刺松潘裸鯉(GymnocyprispotaninifirmispinatusWu et Wu)幼魚的急性毒性試驗。試驗結(jié)果顯示，高錳酸鉀、硫酸銅與硫酸亞鐵合劑、敵百蟲和甲醛對硬刺松潘裸鯉幼魚的24 h半致死濃度(24 h LC50)分別為4.57、2.74、8.00和54.69 mg/L，48 h半致死濃度(48 h LC50)分別為4.13、2.35、7.34和47.03 mg/L；96 h半致死濃度(96 h LC50)分別為3.37、1.92、4.76和40.44 mg/L；其安全濃度分別為1.01、0.52、1.85和10.43 mg/L。根據(jù)國家標(biāo)準和本實驗數(shù)據(jù)表明，甲醛對硬刺松潘裸鯉幼魚微毒，高錳酸鉀、硫酸銅與硫酸亞鐵合劑和敵百蟲對其中毒。

硬刺松潘裸鯉(Gymnocyprispotaninifirmispinatus)；水產(chǎn)藥物；急性毒性；半致死濃度；安全濃度

硬刺松潘裸鯉(GymnocyprispotaninifirmispinatusWu et Wu)隸屬鯉形目(cypriniformes)鯉科(Cyprinidae)裂腹魚亞科(Schizothoracinae)，自然分布于我國金沙江水域，其肉味鮮美，營養(yǎng)經(jīng)濟價值高，極具增養(yǎng)殖開發(fā)潛力[1-2]。硬刺松潘裸鯉分布江段有梯級開發(fā)的水電站，加上過度捕撈、環(huán)境污染等人為因素的影響，硬刺松潘裸鯉的數(shù)量急劇下降[3]，資源量日益減少，被四川省列為重點保護野生動物。國內(nèi)外有關(guān)松潘裸鯉的研究較少，僅涉及繁殖、胚胎發(fā)育、耳石微結(jié)構(gòu)等[4-6]，關(guān)于硬刺松潘裸鯉未見相關(guān)研究報道。

由于硬刺松潘裸鯉具有較高的經(jīng)濟價值，人工繁殖的成功，有利于養(yǎng)殖新品種的開發(fā)，并為該魚的資源保護與人工增殖放流提供苗種來源。在該魚幼魚培育階段常因細菌、霉菌、寄生蟲等病害侵襲而出現(xiàn)大批死亡，其中采用藥物進行防治是最直接、最有效和最經(jīng)濟的方法[7-8]。但有關(guān)水產(chǎn)藥物對魚類急性毒性研究表明，不同種類、不同規(guī)格的魚對同種藥物的安全質(zhì)量濃度都存在一定的差異[9]，用藥過程中因?qū)λ幬锏亩拘圆幻?、濃度使用不?dāng)而造成魚中毒的情況時有發(fā)生。故需通過開展急性毒性試驗確定藥物的安全濃度和毒性等級，以選用合適的藥物及用藥質(zhì)量濃度。本試驗研究了高錳酸鉀、硫酸銅與硫酸亞鐵合劑(5∶2)、敵百蟲和甲醛四種常規(guī)水產(chǎn)病害防治藥物對硬刺松潘裸鯉的急性毒性，為硬刺松潘裸鯉的幼魚培育階段水產(chǎn)藥物的使用提供參考。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

試驗用硬刺松潘裸鯉的幼魚為課題組2016年3-4月在雅礱江錦屏官地水電站魚類增殖站車間采用人工干法授精孵化出的幼魚。挑選體格健康、活潑的幼魚用于實驗，實驗魚規(guī)格為全長(43.83±3.14)mm，體重(0.62±0.13)g。實驗前幼魚暫養(yǎng)于雅礱江錦屏官地水電站魚類增殖站車間，飼養(yǎng)用水和試驗用水為經(jīng)曝氣和靜止沉淀過濾后的雅礱江江水，水中溶氧(7.0±0.3)mg/L，水溫(18±1)℃，pH 7.8±0.1。

高錳酸鉀由成都民生消毒劑有限公司生產(chǎn)，有效≥99%；五水合硫酸銅由廣東光華科技股份有限公司生產(chǎn)，有效濃度≥99%；七水合硫酸亞鐵由國藥集團化學(xué)試劑有限公司生產(chǎn)，有效濃度≥99%；敵百蟲由湖北沙隆達股份有限公司生產(chǎn)，有效濃度90%；甲醛溶液由成都民生消毒劑有限公司生產(chǎn)，有效濃度37%～40%。

1.2 試驗

進行預(yù)實驗，觀察硬刺松潘裸鯉幼苗的行為存活狀況，得到4種藥物的24 h全致死濃度和96 h無死亡濃度，兩個濃度之間為藥物的濃度區(qū)間。在預(yù)實驗基礎(chǔ)上按等對數(shù)間距設(shè)計5個濃度梯度，每組24尾，組內(nèi)2個平行，一個對照組(無任何處理)。實驗前24 h停止喂食。

實驗采用半靜態(tài)方式水生生物急性毒性實驗法[10]。前6 h連續(xù)觀察，接著在24、48、72和96 h進行觀察，記錄死亡數(shù)據(jù)。死亡個體以試驗對象失去活力、用玻璃棒觸碰刺激無反應(yīng)為死亡標(biāo)準。因曝氣、藥物降解及實驗魚排泄等易使水質(zhì)發(fā)生變化，試驗期間每24 h換藥液1次。試驗期間不喂食并及時撈出死亡個體。

表1 4種水產(chǎn)藥物對硬刺松潘裸鯉的急性毒性實驗分組

1.3 數(shù)據(jù)處理與分析

采用寇式法[11](Karber)估算半致死濃度(LC50)、安全濃度(SC)和半致死濃度的95%置信區(qū)間，并做試驗濃度對數(shù)與死亡率的回歸方程，相關(guān)計算公式如下：

LogLC50=Xm-d(∑p-0.5)

SC=48 hLC50×0.3/(24hLC50/48hLC50)2

LogLC50的95%置信限= LogLC50±1.96×d[∑(pg/n)]0.5

式中：Xm為最大劑量的對數(shù)，d為相鄰劑量組比值的對數(shù)，p為死亡率，∑p為各組死亡率之和，g為存活率，n為每組受試魚數(shù)。

2 結(jié)果

2.1 急性毒性結(jié)果

試驗幼魚的藥物應(yīng)激反應(yīng)和死亡判定：首先表現(xiàn)出躁動不安，快速游動，呼吸頻率加快等現(xiàn)象；若干小時后游泳緩慢并慢慢失去平衡，部分個體有仰游現(xiàn)象；然后慢慢腹部朝上漂浮在水面上，魚體僵直，用玻璃棒觸碰，在3 min內(nèi)無刺激反應(yīng)，判定死亡。

高錳酸鉀組，幼魚進入藥液后急速游動，并伴隨呼吸頻率加快，20 min后2、2.62和3.46 mg/L 3個組的魚基本適應(yīng)環(huán)境，并能正常游動，而4.56 mg/L和6 mg/L 2個組的魚則逐漸失去平衡，2 h 31 min 6 mg/L組開始出現(xiàn)死亡。硫酸銅與硫酸亞鐵組，幼魚進入藥液后急速游動，并伴隨呼吸頻率加快，25 min后1、1.50、2.24和3.34 mg/L 4個組的魚基本適應(yīng)環(huán)境，并能正常游動，而5 mg/L組的魚逐漸失去平衡，4 h 6 min 5 mg/L 開始死魚。敵百蟲組，幼魚進入藥液后急速游動，并伴隨呼吸頻率加快，32 min后1 mg/L、2 mg/L和4 mg/L 3個組的魚基本適應(yīng)環(huán)境，并能正常游動，而8 mg/L和16 mg/L組的魚逐漸失去平衡，隨著時間的延長，魚體會出現(xiàn)抽搐癥狀，伴隨魚體僵硬，尾鰭擺動幅度明顯低于對照組，4 h 52 min 16 mg /L組開始出現(xiàn)死亡。甲醛組，幼魚進入藥液后急速游動，并伴隨呼吸頻率加快，35 min后20、29.91和44.72 mg/L 3個組的魚基本適應(yīng)環(huán)境，并能正常游動，而66.87 mg/L和100 mg/L 2個組的魚逐漸失去平衡，1 h 31 min 6 mg/L 開始出現(xiàn)死亡，死后魚體僵直，體表粘液增多。硬刺松潘裸鯉幼苗在4種水產(chǎn)藥物不同濃度藥液中隨時間的存活情況見圖1。

圖1 四種水產(chǎn)藥物對硬刺松潘裸鯉的急性毒性結(jié)果Fig.1 Acute toxicity of four pesticides to G.p.firmispinatus

2.2 4種水產(chǎn)藥物對硬刺松潘裸鯉的毒性效應(yīng)

高錳酸鉀、硫酸銅與硫酸亞鐵合劑(5∶2)、敵百蟲和甲醛對硬刺松潘裸鯉的24 h半致死濃度(24 hLC50)分別為4.57、2.74、8.00和54.69 mg/L，48 h半致死濃度(48 hLC50)分別為4.13、2.35、7.34和47.03 mg/L；96 h半致死濃度(96 hLC50)分別為3.37、1.92、4.76、40.44 mg/L。其安全濃度分別為1.01、0.52、1.85和10.43 mg/L。根據(jù)國家標(biāo)準[12]，水生生物急性毒性分級標(biāo)準如下：LC50>1 000 mg/L為無毒，100～1 000 mg/L為實際無毒，10～100 mg/L為微毒，1～10 mg/L為中毒，<1 mg/L為高毒。 根據(jù)國家標(biāo)準和本實驗數(shù)據(jù)可以看出，甲醛對硬刺松潘裸鯉微毒，高錳酸鉀、硫酸銅與硫酸亞鐵合劑和敵百蟲對其中毒。

表2 四種水產(chǎn)藥物對硬刺松潘裸鯉的回歸方程、半致死濃度和安全濃度

3 討論

3.1 硬刺松潘裸鯉幼苗對4種水產(chǎn)藥物的敏感性差異

不同藥物對于硬刺松潘裸鯉的毒性存在差異。這些差異主要可能由藥物的毒性大小所致，但實驗條件、測定方法(如馴化過程、水質(zhì)、溫度和作用時間)的差異以及實驗魚所處發(fā)育階段的不同等也均可能導(dǎo)致毒性試驗結(jié)果的差異。本實驗得出了幾種水產(chǎn)藥物對硬刺松潘裸鯉24、48、72、96 h 的LC50，一般較多采用96 h 的LC50來確定毒物對水生動物的急性毒性大小[13]。根據(jù)本次實驗結(jié)果，由96h LC50推斷這4種水產(chǎn)藥物對硬刺松潘裸鯉的毒性大小依次為硫酸銅與硫酸亞鐵合劑(5∶2)>高錳酸鉀>敵百蟲>甲醛。

不同魚類的苗種對各種藥物的耐受性有所差別。高錳酸鉀對厚頜魴(Megalobramapellegrini)[14]、鱖(Sinipercachuatsi)[15]、半刺厚唇魚(Acrossocheiliushemispinus)[16]、烏鱧(Channaargus)[17]、褐鱒(Salmotrutta)[18]和昆明裂腹魚(Schizothoraxgraham)[19]的96 h LC50分別為5.28、1.80、21.919、5.080、0.75和2.267 mg/L。而高錳酸鉀對硬刺松潘裸鯉的96 h LC50為1.92 mg/L，表明硬刺松潘裸鯉對高錳酸鉀的耐受性高于鱖和褐鱒，低于半刺厚唇魚、烏鱧和昆明裂腹魚。

硫酸銅與硫酸亞鐵合劑對厚頜魴[14]、褐鱒[18]和昆明裂腹魚[19]魚苗的96 h LC50分別為4.45、1.57和2.275 mg/L。硫酸銅與硫酸亞鐵合劑對硬刺松潘裸鯉魚苗的96 h LC50為0.52 mg/L，表明硬刺松潘裸鯉對硫酸銅與硫酸亞鐵合劑的耐受性低于厚頜魴、褐鱒和昆明裂腹魚。

敵百蟲對厚頜魴[14]、鱖[15]、半刺厚唇魚[16]、烏鱧[17]、褐鱒[18]、高體鳑鲏(Rhodeusocellatus)[20]、齊口裂腹魚 (Schizothoraxprenanti)[21]和昆明裂腹魚[19]魚苗的96 h LC50分別為2.68、2.6、3.032、2.719、1.43、82.88、0.473和302 mg/L。敵百蟲對硬刺松潘裸鯉魚苗的96 h LC50為4.76 mg/L，表明硬刺松潘裸鯉對敵百蟲的耐受性高于厚頜魴、鱖、半刺厚唇魚、齊口裂腹魚、烏鱧和褐鱒，低于高體鳑鲏和昆明裂腹魚。

甲醛對厚頜魴魚苗[14]、齊口裂腹魚[21]、烏鱧[17]、褐鱒[18]的96 hLC50分別為75、37.565、115.159、82.88 mg/L。甲醛對硬刺松潘裸鯉魚苗的96 h LC50為40.44 mg/L，表明硬刺松潘裸鯉對甲醛的耐受性高于齊口裂腹魚，低于厚頜魴、烏鱧、高體鳑鲏。

3.2 生產(chǎn)過程中幾種水產(chǎn)藥物的使用注意事項

高錳酸鉀為強氧化劑，水溶液可以迅速氧化有機物，主要用于細菌性疾病和指環(huán)蟲、三代蟲、口絲蟲和斜管蟲等防治。常用劑量為2～4 mg/L 全池潑灑或10～20 mg/L浸泡[22]。高錳酸鉀對硬刺松潘裸鯉的安全濃度為1.01 mg/L，低于其常用劑量，表明該藥不宜使用，如需使用建議采用短時間浸泡方法，并注意用藥時間和觀察幼魚行為。硫酸銅對藻類、纖毛蟲類和真菌等具有較強的殺滅作用，硫酸亞鐵可加強硫酸銅對魚體的滲透性提高藥效。硫酸銅與硫酸亞鐵合劑(5：2)常用劑量為0.7 mg/L 全池潑灑[22]。硫酸銅與硫酸亞鐵合劑對硬刺松潘裸鯉的安全濃度為0.52 mg/L，低于常用劑量，但是1 mg/L組試驗幼魚至96 h未發(fā)生魚苗死亡，說明該藥可按常規(guī)劑量使用，但溫度較高時，硫酸銅對幼魚的毒性會加大[22]，用藥時應(yīng)謹慎。敵百蟲為膽堿酯酶抑制劑，能將膽堿酯酶的活性位點磷酸化而抑制其活性，因其在魚體內(nèi)殘留量少、殘留時間短而被廣泛用于防治體外寄生甲殼類、單殖吸蟲及腸內(nèi)寄生的部分蠕蟲，常用劑量為0.2～0.5 mg/L[22]。試驗中敵百蟲對硬刺松潘裸鯉的安全濃度為1.85 mg/L，高于常用劑量，表明安全劑量的敵百蟲可用于硬刺松潘裸鯉的寄生蟲病防治。甲醛具有廣譜性殺滅細菌、寄生蟲、真菌、芽孢和病毒的作用，甲醛已被廣泛應(yīng)用于水生動物疾病防治，且使用劑量較大，常規(guī)用量為10～30 mg/L[22]。試驗中，甲醛的安全濃度為10.43 mg/

L，在其常規(guī)使用劑量范圍內(nèi)，且本實驗采用半靜態(tài)方式水生生物急性毒性實驗法，每隔24 h換藥液，而在實際使用過程中甲醛是易揮發(fā)的，我們認為甲醛可以用于硬刺松潘裸鯉的疾病防治，同時建議在使用甲醛時濃度不要超過10.43 mg/L。

在生產(chǎn)上選用藥物除了從藥物的半致死濃度和安全濃度上考慮之外，還需結(jié)合藥物的常用濃度及用藥時間綜合考慮。本實驗并未涉及這些水產(chǎn)藥物在硬刺松潘裸鯉的富集情況，這些水產(chǎn)藥物在硬刺松潘裸鯉體內(nèi)是否富集、富集系數(shù)以及富集后產(chǎn)生的組織學(xué)變化等，有待進一步的研究。

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(責(zé)任編輯：張紅林)

Acute toxicity of four pesticides toGymnocyprispotaninifirmispinatus

XU Bin2，NIE Yuan-yuan1，2，WEI Kai-jin1，2，DENG Long-jun3，GAN Wei-xiong3，MA Bao-shan2，ZHU Xiang-yun2，XU Jin2

(1.CollegeofFisheriesandLifeSciences,DalianOceanUniversity,Dalian116023,Liaoning,China;2.KeyLaboratoryofFreshwaterBiodiversityConservation,MinistryofAgricultureofChina,YangtzeRiverFisheriesResearchInstitute，ChineseAcademyofFisherySciences，Wuhan430223,China;3.YalongRiverHydropowerDevelopmentCompany,Ltd.Chengdu610015,China)

The acute toxicity of four pesticides toGymnocyprispotaninifirmispinatuswere studied under laboratory conditions and room temperature. The results showed that the mean static acute 24h LC50of permanganate, the mixture of copper ferrous sulphate (ratio 5:2), dipterex and formaldehyde were 4.57, 2.74, 8.00 and 54.69 mg/L, respectively. The mean static acute 48h LC50were 4.13, 2.35, 7.34 and 47.03 mg/L, respectively. The mean static acute 96h LC50were 3.37, 1.92, 4.76 and 40.44 mg/L. The safe concentration of the fish to the four pesticides were 1.01, 0.52, 1.85 and 10.43 mg/L. It was concluded that forG.p.firmispinatus, formaldehyde was slight-toxic, while permanganate, the mixture of copper sulphate and ferrous sulphate (ratio 5∶2) and dipterex were medium-toxic.

Gymnocyprispotaninifirmispinatus; insecticide; acute toxicity; median lethal concentration; safe concentration

2016-09-05；

2016-11-08

中央級公益性科研院所基本科研業(yè)務(wù)費專項資金項目(2015JBFM38)；雅礱江水電開發(fā)有限公司科研項目(JPIA-G201225)

徐 濱(1982- )，男，助理研究員，研究方向為水產(chǎn)養(yǎng)殖與遺傳育種。E-mail：xubin@yfi.ac.cn 通訊作者：魏開金。E-mail：weikj@yfi.ac.cn

S948

A

1000-6907-(2017)02-0086-04