雙致病菌混合感染引起家兔發(fā)病的調(diào)查分析

翁順太高昔英徐海濱姚堯林鍵詹先強(qiáng)潘晶晶*（.福建省人獸共患病研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室福建省疾病預(yù)防控制中心，福州35000；.福州大北農(nóng)生物技術(shù)有限公司，福州35004）

雙致病菌混合感染引起家兔發(fā)病的調(diào)查分析

翁順太1高昔英2徐海濱1姚堯2林鍵1詹先強(qiáng)2潘晶晶2*
（1.福建省人獸共患病研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室福建省疾病預(yù)防控制中心，福州350001；2.福州大北農(nóng)生物技術(shù)有限公司，福州350014）

2017年1月，某單位清潔級(jí)日本大耳白兔生產(chǎn)繁殖群體，有15只種兔（5♂、10♀）及其4窩33只25~30日齡哺乳仔兔先后混合感染大腸桿菌病及霉菌病。從觀察患兔的臨床癥狀與剖檢病變?nèi)胧?，結(jié)合實(shí)驗(yàn)室檢查，找出發(fā)病原因，為預(yù)防該病提供建議。采用保溫、按摩、補(bǔ)液、抗菌、促胃腸蠕動(dòng)、環(huán)境消毒等手段聯(lián)合進(jìn)行干預(yù)。聯(lián)合干預(yù)次日，3只癥狀較輕微母兔即排出些許膠凍樣液體或兩頭尖的黑便；5 d后，除7只重度感染大兔、15只仔兔死亡外，其余26只患兔均緩慢恢復(fù)。感染早期進(jìn)行聯(lián)合干預(yù)有一定效果，重癥感染者療效不佳。該病應(yīng)以加強(qiáng)日常管理入手，預(yù)防為主。

清潔級(jí)日本大耳白兔繁殖群體大腸桿菌霉菌混合感染聯(lián)合干預(yù)病因分析

某單位在培育清潔級(jí)日本大耳白實(shí)驗(yàn)兔過程中（生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（閩）-2016-****），有15只（5♂、10♀）9月齡左右日本大耳白種兔同時(shí)感染大腸桿菌病和霉菌病，隨后4窩33只25~30日齡哺乳仔兔也染病。出現(xiàn)病例時(shí)，采取給仔兔斷乳、患兔隔離、實(shí)驗(yàn)室檢查、調(diào)查研究、聯(lián)合干預(yù)等措施，26只大兔及仔兔得以康復(fù)。現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1 臨床癥狀

被毛松亂，腹部圓鼓，輕敲有“砰砰”響聲，精神差、基本趴著不動(dòng)。大兔飲少量水、尿量少色偏紅。患兔飼料廢食、便秘，偶排出些許淡黃色膠凍樣黏液和粒小質(zhì)硬兩頭尖糞便。仔兔腹瀉、肛門口附著稀便。發(fā)病初期體溫38.7~40.0℃，正?；蛏云?，發(fā)病后期體溫低至38℃以下。后期消瘦、脫水、貧血，全身冰冷、耳朵透光觀察僅見微弱血絲，大兔后肢內(nèi)側(cè)呈淡青色，從發(fā)病至衰竭死亡全程7~10 d。少數(shù)大兔出現(xiàn)皮膚淺表潰瘍、陰囊紅腫、角膜炎、乳房附近皮膚紅暈等炎癥癥狀，個(gè)別仔兔頭部、頸部、背部皮膚脫毛。

2 剖檢病變

3 培養(yǎng)鑒定

取3只病死兔胃內(nèi)容物、盲腸內(nèi)容物，加生理鹽水稀釋，分別接種于血平板37℃溫箱培養(yǎng)24 h[1]。結(jié)果顯示，接種2只病死兔內(nèi)容物血平板上的菌落為白色、直徑1 mm、凸起、圓形，經(jīng)革蘭氏染色鏡檢為G+橢圓形，為酵母樣真菌；另1只血平板上的菌落為灰色、直徑1~3 mm、扁平、圓形，革蘭氏染色鏡檢為G-長(zhǎng)桿菌或G-桿菌，經(jīng)VITEK2GN卡檢測(cè)，為大腸桿菌，再經(jīng)EPEC多價(jià)、ETEC多價(jià)、EIEC多價(jià)、EHEC多價(jià)檢測(cè)均為陰性。

4 聯(lián)合干預(yù)

4.1 隔離將所有患兔進(jìn)行隔離，置于隔離觀察室或設(shè)施內(nèi)壓強(qiáng)梯度較小的區(qū)域，并遠(yuǎn)離門縫、進(jìn)風(fēng)口、回風(fēng)口等風(fēng)速較大處。

4.2 保溫隔離觀察室內(nèi)采用保溫?zé)羧∨覝乇３衷?5℃或更高，利于患兔保暖。

4.3 腹部按摩每天上午、下午給患病大兔各施予腹部順時(shí)針按摩1次，30 min/次。

4.4 補(bǔ)液患兔灌服葡萄糖注射液或生理鹽水20 mL/只·次（仔兔2 mL/只·次），2次/d，連用5~7 d。4.5促胃腸蠕動(dòng)每只每次用嗎丁琳5 mg、木香順氣丸2 g研末兌水灌服（可結(jié)合補(bǔ)液同時(shí)進(jìn)行，仔兔用量減半），2次/d，連用5~7 d。

4.6 抗菌每只每次用青霉素20萬IU、慶大霉素2萬IU進(jìn)行肌肉注射，2次/d；飲水中添加恩諾沙星或諾氟沙星膠囊，100 mg/只·d，連用5~7 d。檢查結(jié)果出來后更換為每只每次口服制霉菌素50萬IU、慶大霉素4萬IU、土霉素0.25 g，2次/d，連用7~ 10 d。仔兔用量減半。

4.7 環(huán)境消毒干預(yù)期間，每天對(duì)屏障設(shè)施內(nèi)的各區(qū)域及外環(huán)境用0.5%過氧乙酸溶液進(jìn)行噴霧消毒，注意不能噴灑到動(dòng)物身上。

本設(shè)計(jì)介紹了主要模具的材料的選擇原則，材料選擇時(shí)必須要全面考慮此種材料的各方面因素，當(dāng)材料在在某些特性如硬度、脆性、抗光氧化率等不符合設(shè)計(jì)所需的原則時(shí)，我們必須加以調(diào)整，選擇用加入添加劑的方式，使其效果達(dá)到令人滿意的程度。準(zhǔn)備工作完成之后，介紹了零件的設(shè)計(jì)的內(nèi)容，其中，壁厚、尺寸精度、表面質(zhì)量都非常關(guān)鍵，看似簡(jiǎn)單，實(shí)則復(fù)雜。在介紹注塑成型時(shí)，著重介紹了注塑機(jī)的校核。

聯(lián)合干預(yù)后次日，3只癥狀較輕微母兔即排出少許膠凍樣液體或兩頭尖的油狀細(xì)小黑便；5~7 d后，除7只重度感染大兔（1♂、6♀）、15只仔兔死亡外，其余患兔均有一定恢復(fù)。

5 原因分析

1）與兔生產(chǎn)設(shè)施同樓底層的豬舍引進(jìn)未斷乳仔豬，最先感染致病雙菌。時(shí)處寒冷冬季，氣溫僅4~ 6℃，因科研需要從外地購進(jìn)未斷乳仔豬，仔豬年齡小、體溫調(diào)節(jié)不穩(wěn)定、長(zhǎng)途運(yùn)輸應(yīng)激、豬舍保溫能力差等綜合因素的作用，導(dǎo)致仔豬出現(xiàn)發(fā)燒、腹瀉、排血尿等大腸桿菌、霉菌感染癥狀。仔豬感染雙致病菌是引發(fā)交叉感染的罪魁禍?zhǔn)住?/p>

2）本試驗(yàn)利用IVC模式進(jìn)行生產(chǎn)繁殖，國產(chǎn)IVC制作材料上的缺陷，無法保證籠盒經(jīng)常性得到高壓滅菌。由于飼養(yǎng)管理人員少，普通級(jí)豬舍管理人員兼職屏障區(qū)域的保潔人員，于是工作人員便成了疾病的傳播者。工作人員無菌意識(shí)、防范意識(shí)、隔離意識(shí)的欠缺成為疾病傳播的關(guān)鍵因素。

3）營養(yǎng)過剩致消化不良。疫病傳染時(shí)，正值母兔處于哺乳后期，為了提高母兔的泌乳能力，保證仔兔得到充足的營養(yǎng)，在日糧基礎(chǔ)上每只母兔補(bǔ)充200 mL乳粉水及30~50粒煮熟黃豆。之前應(yīng)用并未出現(xiàn)任何問題，但可能受到大腸桿菌的刺激，導(dǎo)致營養(yǎng)過剩、消化不良，食物在胃腸道內(nèi)發(fā)酵、產(chǎn)氣。積食直接誘導(dǎo)了對(duì)病因的判斷。

4）母嬰傳播。染病的哺乳母兔通過乳汁將疾病傳播給仔兔，導(dǎo)致仔兔呈現(xiàn)同樣的食欲廢絕、精神差、肚大如鼓、骨瘦如柴、腹瀉等典型大腸桿菌感染癥狀。母嬰傳播成為仔兔大面積感染的絕佳途徑。

5）房間溫度過低?？照{(diào)系統(tǒng)電熱棒功率低，房間溫度上限只達(dá)22℃，顯然不能滿足染病動(dòng)物保暖的需要；處于進(jìn)風(fēng)口、回風(fēng)口、門縫等地方的動(dòng)物，由于風(fēng)力大、風(fēng)速高，更增加其寒冷感。由于飼養(yǎng)管理不妥和氣候突變等應(yīng)激因素，使腸道的正常菌群受到破壞，使腸道內(nèi)的大腸桿菌數(shù)量急劇增加[2]。發(fā)病初期，低溫加劇了疾病的進(jìn)程。

6）屏障設(shè)施設(shè)計(jì)上的缺陷。屏障環(huán)境沒有做到“恒溫恒濕”。發(fā)病時(shí)恰逢冬季，室內(nèi)寒冷干燥，即使加裝了電熱棒，但未安裝“加濕器”，溫度有所提高但相對(duì)濕度卻更低了；通風(fēng)換氣設(shè)計(jì)也不合理，換氣次數(shù)偏低，不能完全將室內(nèi)污濁空氣及時(shí)排出，使有毒物質(zhì)與病原在室內(nèi)堆積；回風(fēng)管沒有安裝止逆閥，不可避免會(huì)出現(xiàn)排風(fēng)逆流造成區(qū)間的相互污染現(xiàn)象。設(shè)計(jì)上的缺陷為疾病的擴(kuò)散蔓延提供了便利。

7）經(jīng)驗(yàn)不足未能準(zhǔn)確判斷。發(fā)病初期，僅考慮是氣溫低動(dòng)物感冒而腹瀉，沒有深入分析病因，也沒有綜合進(jìn)行干預(yù)與治療，導(dǎo)致疫病進(jìn)一步擴(kuò)散。管理經(jīng)驗(yàn)的不足，成了貽誤治療時(shí)機(jī)的最好噱頭。

6 討論

6.1 病原大腸桿菌是人和許多動(dòng)物腸道中最主要且數(shù)量最多的一種細(xì)菌，周身鞭毛，能運(yùn)動(dòng)，無芽胞，能發(fā)酵多種糖類產(chǎn)酸產(chǎn)氣，主要生活在大腸內(nèi)。大腸桿菌病屬人畜共患性疾病，一年四季均可發(fā)生，各種年齡兔均易感，尤其以1~2月齡仔兔易感[3]。此次由仔豬引發(fā)的大腸桿菌病蔓延到大兔及其哺乳仔兔，也驗(yàn)證了這一觀點(diǎn)，說明其毒性大，兩者的大腸桿菌病具有同源性與關(guān)聯(lián)性。分離鑒定結(jié)果為陰性，是由于前期使用了抗生素治療的原因，可見大腸桿菌對(duì)大部分抗生素高度或中度敏感[4]。

動(dòng)物皮膚霉菌病是一種真菌傳染病。霉菌不是疾病的直接病原體，而是通過毒害飼料而引起的，侵害動(dòng)物的皮膚和被毛[5]。主要通過接觸傳染，兔舍采光和通風(fēng)不良均可導(dǎo)致發(fā)病[6]。可見疾病的擴(kuò)散與該兔舍換氣次數(shù)低、通風(fēng)不暢不無關(guān)系。種兔往往隱性感染，不表現(xiàn)臨床癥狀，難以辨別認(rèn)識(shí)[7]。在繁殖期，母兔乳腺發(fā)育，利于真菌繁殖，從而在乳房周圍形成病灶。仔兔在哺乳時(shí)與母兔接觸，易被感染，幾天后表現(xiàn)臨床癥狀[7]。也與臨床發(fā)病順序哺乳母兔→哺乳仔兔→種公兔相吻合。該病對(duì)大部分抗生素和磺胺類耐藥，很大程度上加大了治療難度，且收效甚微。

6.2 加強(qiáng)日常管理

6.2.1 日糧營養(yǎng)不可過高基礎(chǔ)飼料中粗蛋白含量達(dá)18%，粗脂肪含量為3%，已能滿足大兔的日常需求。哺乳期母兔率先發(fā)病，說明與添加黃豆、營養(yǎng)過剩有關(guān)系。黃豆本就是一種產(chǎn)氣的食物，富含蛋氨酸、吸收卻低，吃多了就會(huì)脹氣。為了提高哺乳母兔泌乳能力，適量短期添加便可達(dá)到目的，不可貪多求長(zhǎng)。家兔作為草食性動(dòng)物，營養(yǎng)應(yīng)盡量滿足其自然習(xí)性與天性，不可操之過急，正所謂“拔苗助長(zhǎng)”會(huì)導(dǎo)致“欲速則不達(dá)”，當(dāng)引以為鑒。

6.2.2 進(jìn)入屏障所有物品應(yīng)徹底消毒滅菌屏障設(shè)施內(nèi)所需物品都應(yīng)經(jīng)過嚴(yán)格的滅菌處理，不能高壓的物品應(yīng)制定科學(xué)的滅菌程序。提醒國產(chǎn)IVC籠盒生產(chǎn)廠家注意IVC材料的選擇，提高產(chǎn)品質(zhì)量，確保IVC籠盒能經(jīng)常性地承受高溫高壓滅菌。

6.2.3 防交叉感染不同設(shè)施之間、不同樓層之間、同一樓層不同房間之間都應(yīng)制定嚴(yán)格的隔離防范措施，是防止疫病在動(dòng)物間交叉感染的前提。動(dòng)物自然感染疾病是由于全體直接接觸而傳播，也可以通過刷拭用具和飼養(yǎng)人員而間接傳播[2]。不同微生物控制等級(jí)的設(shè)施、動(dòng)物、房間應(yīng)有相對(duì)固定的工作人員進(jìn)行操作、管理，切不可越俎代庖或身兼數(shù)職。飼養(yǎng)管理人員無菌概念的培養(yǎng)與防范隔離意識(shí)的提高是保證動(dòng)物質(zhì)量和動(dòng)物試驗(yàn)結(jié)果的關(guān)鍵因素。

6.2.4 切斷母嬰傳播途徑一旦發(fā)現(xiàn)母兔出現(xiàn)食欲廢絕、無排便等現(xiàn)象，立即離乳并隔離仔兔，盡早切斷母嬰傳播途徑。注意觀察仔兔精神狀況，發(fā)現(xiàn)問題及時(shí)處理。

6.2.5 提高日糧中粗纖維含量，適當(dāng)補(bǔ)充青綠飼料或干草料家兔腸道發(fā)達(dá)，小腸與大腸的總長(zhǎng)超過家兔體長(zhǎng)的10倍以上，盲腸特別發(fā)達(dá)，對(duì)粗纖維消化能力強(qiáng)，所以，其日糧中粗纖維含量應(yīng)不低于10%～15%[8]。日糧中粗纖維含量增加了，可增強(qiáng)胃腸蠕動(dòng)能力，滿足家兔本身的習(xí)性。

6.3 及時(shí)查明原因、對(duì)癥治療將所有患病動(dòng)物進(jìn)行隔離、觀察，禁止與健康動(dòng)物混居一籠或混居一室，以免造成交叉感染、疫情蔓延；對(duì)死亡動(dòng)物剖檢，觀察其病理變化，同時(shí)采集胃內(nèi)容物、腸內(nèi)容物等樣本送實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)、鑒定，及時(shí)查明發(fā)病原因，制定治療方案；除了藥物治療，要注意動(dòng)物的保暖、補(bǔ)液和腹部按摩。保溫工作做得好，動(dòng)物腹部就不會(huì)受涼，也可緩解腹痛。腹瀉者大多脫水，應(yīng)及時(shí)給患病動(dòng)物補(bǔ)液。給患病大兔早期做腹部按摩對(duì)幫助胃腸恢復(fù)蠕動(dòng)、解決便秘、疏通胃腸積食或堵塞，是完全必要的措施，連續(xù)長(zhǎng)時(shí)間的按摩往往會(huì)收到意想不到的奇效。通過聯(lián)合干預(yù)，除7只大兔、15只仔兔病情嚴(yán)重治療無效死亡外，其余26只均得以緩慢恢復(fù)，病程7~40 d。說明感染早期進(jìn)行聯(lián)合干預(yù)有一定效果，重癥感染者療效不佳。

6.4 完善實(shí)驗(yàn)動(dòng)物設(shè)施的設(shè)計(jì)與布局實(shí)驗(yàn)動(dòng)物屏障設(shè)施的設(shè)計(jì)與建設(shè)是開展實(shí)驗(yàn)動(dòng)物工作的前提和基礎(chǔ)。各內(nèi)環(huán)境指標(biāo)應(yīng)在設(shè)計(jì)圖紙中予以具體標(biāo)明，以免留下管理隱患[9]。實(shí)踐表明，規(guī)范的布局和良好的建設(shè)對(duì)保證設(shè)施的正常運(yùn)作、實(shí)施科學(xué)化管理、減少疾病的發(fā)生與傳播、提高實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與動(dòng)物試驗(yàn)的質(zhì)量意義重大。

6.5 混合感染事故由多因素共同作用引起這些因素包括設(shè)施設(shè)計(jì)因素、氣候因素、營養(yǎng)因素、管理因素等。如何加強(qiáng)日常管理，做到防患于未然，是防止動(dòng)物疫病發(fā)生的重要舉措。

[1]國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局.GB/T 14926.11-2001實(shí)驗(yàn)動(dòng)物大腸埃希菌0115a,c:K(B)檢測(cè)方法[S].2001.

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[9]翁順太,鄭忠東,蔡武衛(wèi),等.設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物屏障系統(tǒng)時(shí)存在的問題及對(duì)策[J].海峽預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志,2008,14(6):76-78.

B

1003-4331（2017）03-0041-03

福建省引導(dǎo)性項(xiàng)目(No.2015Y0048)資助。

翁順太(1966-)，男，主任技師，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科研與管理，E-mail:wengshuntai@163.com。

*通信作者：潘晶晶，女，助理獸醫(yī)師，E-mail:ptcd0816@126. com。