豬瘟常見疫苗類型及前景展望

時(shí)小萌 李 超 （山東省夏津縣畜牧獸醫(yī)局 252300）

豬瘟常見疫苗類型及前景展望

時(shí)小萌 李 超 （山東省夏津縣畜牧獸醫(yī)局 252300）

豬瘟(CSF)是一種各種年齡階段的豬均可感染的一種熱性傳染病，該病被國際動(dòng)物衛(wèi)生組織(OIE)列為A類傳染病，我國將其列為一類傳染病。當(dāng)前控制CSF的主要有免疫接種和撲殺感染豬群兩種方法。在CSF流行的國家和地區(qū)(如亞洲和非洲的一些國家和地區(qū))，還是采用傳統(tǒng)的免疫接種方式來控制CSF。我國豬群長(zhǎng)期免疫接種C-株疫苗，基本控制了CSF的大流行。但CSF仍是當(dāng)前危害我國養(yǎng)豬業(yè)最重要的傳染性疾病之一，在我國流行特點(diǎn)主要呈現(xiàn)地區(qū)性散發(fā)性流行，發(fā)病特點(diǎn)表現(xiàn)以非典型性CSF為主的持續(xù)性感染和混合感染現(xiàn)象。由于擔(dān)心在普通免疫的“保護(hù)傘”下隱藏有豬瘟野毒，所以一些國家往往不從任何有豬瘟疫情或注射豬瘟弱毒疫苗的國家進(jìn)口生豬及相關(guān)產(chǎn)品，這對(duì)我國影響極大。況且C株疫苗已延用了半個(gè)多世紀(jì)，在長(zhǎng)期的免疫壓力下，豬瘟流行毒株已向遠(yuǎn)離疫苗毒的方向演化，豬瘟弱毒疫苗的免疫效力也越來越多的受到質(zhì)疑。因此，新型豬瘟標(biāo)記疫苗的研制成為當(dāng)前我國豬瘟防控工作的迫切要求。

1 豬瘟疫苗主要類型

1.1 傳統(tǒng)C株疫苗 豬瘟病毒兔化弱毒疫苗(HCLV)又稱“C-株”是我國研究者上世紀(jì)五十年代將CSFV強(qiáng)毒在兔體內(nèi)進(jìn)行連續(xù)傳代后毒力得到致弱，自1956年開始推廣使用以來對(duì)世界范圍內(nèi)預(yù)防和控制CSF流行發(fā)揮重要作用。C株疫苗是世界公認(rèn)的最優(yōu)秀的CSFV弱毒疫苗，具有安全、免疫保護(hù)力好、能夠針對(duì)不同的CSFV野毒株產(chǎn)生免疫保護(hù)力、遺傳十分穩(wěn)定等優(yōu)點(diǎn)。

1.2 亞單位疫苗 E2亞單位疫苗是最早投入使用也是目前惟一投入使用的豬瘟標(biāo)記疫苗，其商品化產(chǎn)品為德國拜耳醫(yī)藥出品的Bayovacor Csf Marker和荷蘭英特威公司出品的Porcilis OR Pesti，前者早在1998年即已被列入歐洲藥典。在E2蛋白基礎(chǔ)上開發(fā)的亞單位疫苗不僅能夠?qū)笴SFV野毒株，而且很容易通過檢測(cè)抗Erns蛋白的抗體將免疫的和感染的豬區(qū)分開來。國外普遍采用桿狀病毒－昆蟲細(xì)胞系統(tǒng)來對(duì)重組E2蛋白進(jìn)行高水平表達(dá)。重組蛋白在昆蟲細(xì)胞內(nèi)能夠得到糖基化等加工處理，所得產(chǎn)物具有天然構(gòu)象，生物活性高。

1.3 重組豬瘟活載體疫苗 某些病原體對(duì)宿主不產(chǎn)生致病作用，但是利用其內(nèi)購在動(dòng)物體內(nèi)感染并復(fù)制的特點(diǎn)，我們可以將之改造為理想的疫苗載體。目的基因通過載體在宿主體內(nèi)得到表達(dá)，從而產(chǎn)生長(zhǎng)期的體液及細(xì)胞免疫應(yīng)答。由于插入的目的基因只是原病毒基因的一部分，因此可以比較容易設(shè)計(jì)出相應(yīng)的ELISA檢測(cè)方法來區(qū)分免疫動(dòng)物與感染動(dòng)物。（1）痘病毒載體疫苗：痘病毒的基因組較大，可以插入大片段的外源基因（超過25KB），同時(shí)表達(dá)多個(gè)目的基因，且各基因表達(dá)彼此不干擾，遺傳穩(wěn)定。痘病毒僅在感染細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中進(jìn)行復(fù)制，不會(huì)整合到宿主基因當(dāng)中，不存在產(chǎn)生插入突變的隱患，具有較高的生物安全性[8]。李譜華等[9]則選擇雞痘病毒作為載體，將CSFV石門株的Erns和E2基因克隆入雞痘病毒表達(dá)載體FPV-P11中，成功構(gòu)建了重組雞痘病毒，免疫豬后用100LD50的強(qiáng)毒進(jìn)行攻擊，結(jié)果顯示免疫組保護(hù)率達(dá)到75%，為進(jìn)一步研制豬瘟活載體疫苗奠定了基礎(chǔ)。（2）偽狂犬病病毒(PRV)載體疫苗：豬偽狂犬病病毒(PRV)基因組為單分子雙股DNA，大小約為150KB，外源基因可以穩(wěn)定的插入其中。劉燕等[10]將SV40啟動(dòng)子控制下的LaoZ報(bào)告基因表達(dá)盒與分別在CMV啟動(dòng)子控制下的含有CSFV E2基因及PRRSV GP5基因的表達(dá)盒插入到PRV Bartha K61株TK基因中，通過藍(lán)斑篩選獲得了一株插入E2、GP5與LacZ基因的重組偽狂犬病病毒，命名為rPRVE2-GP5。經(jīng)Western blot、間接免疫熒光試驗(yàn)證實(shí)E2、GP5基因在重組病毒感染細(xì)胞中獲得表達(dá)。由此可以看出PRV載體在構(gòu)建CSFV與其他豬病的多聯(lián)疫苗上具有相當(dāng)大的發(fā)展前景。（3）腺病毒載體疫苗：腺病毒(AdV)載體具有可感染分裂和非分裂細(xì)胞、高滴度制備、易純化、外源基因裝載容量大等優(yōu)點(diǎn)，故其現(xiàn)被廣泛用于疫苗的設(shè)計(jì)。何雷等在此基礎(chǔ)上將IL-2基因加入到腺病毒載體中，使之與E2基因共表達(dá)，其后的淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)和動(dòng)物試驗(yàn)結(jié)果均表現(xiàn)了其良好的免疫效力。孫宏宇等將PRRSV的GP5 和CSFV的E2基因通過口蹄疫病毒(FMDV)2A序列連接，形成一個(gè)完整的ORF，最后插入到腺病毒載體中，得到重組腺病毒rAdVGP52AE2。間接免疫熒光試驗(yàn)和Western blot證實(shí)2種蛋白均得到表達(dá)，小鼠免疫效力試驗(yàn)也取得理想的效果，故其有望開發(fā)為一種新型多聯(lián)疫苗。（4）牛病毒性腹瀉病毒(BVDV)載體疫苗：作為CSFV的同屬病毒，BVDV與CSFV具有明顯的交叉反應(yīng)性。CSFV僅以家豬和野豬為自然感染宿主，而BVDV則能夠越過種間障礙感染包括豬、牛等一系列家畜和野生動(dòng)物。BVDV載體疫苗具有較高的免疫原性，但在配套檢測(cè)和生物安全性上還有待驗(yàn)證和提高。目前國內(nèi)尚無此類研究的報(bào)道。

1.4 DNA疫苗 DNA疫苗具有一系列的自身優(yōu)勢(shì)：（1）設(shè)計(jì)簡(jiǎn)單，易于進(jìn)行修飾操作。（2）能夠同時(shí)誘導(dǎo)產(chǎn)生強(qiáng)力的體液和細(xì)胞免疫。（3）安全性良好，不與野毒發(fā)生基因重組，也不會(huì)整合到宿主基因組。（4）不受母源抗體干擾。同時(shí)重組DNA質(zhì)?？赏ㄟ^發(fā)酵培養(yǎng)的方法來大量制備，又具有相對(duì)較好的穩(wěn)定性，并且大容量的質(zhì)粒還可同時(shí)容納多種病毒的免疫原基因，因此，DNA疫苗技術(shù)具有廣闊的發(fā)展前景。

2 前景展望

2.1 豬瘟病毒 C株疫苗今后10年內(nèi)在我國預(yù)防和控制CSF工作中的的作用不太可能被別的疫苗所替代，但是在疫苗質(zhì)量和病毒效價(jià)方面仍需改進(jìn)。C株疫苗培養(yǎng)過程中BVDV 的污染問題必須加以重視。標(biāo)記疫苗及其鑒別診斷方法的研究開發(fā)將是未來我國豬瘟疫苗研究的主導(dǎo)方向，這對(duì)我國開展豬瘟凈化工作具有重要意義，如何研制有效的標(biāo)記疫苗免疫保護(hù)豬群及利用可靠的鑒別診斷方法凈化豬群中CSFV感染豬群是控制并凈化CSF的關(guān)鍵。

2.2 亞單位疫苗、重組病毒活疫苗和DNA 是豬瘟標(biāo)記疫苗重要的發(fā)展方向，關(guān)鍵是如何提高疫苗的免疫保護(hù)效果，改進(jìn)的途徑包括：（1）免疫增強(qiáng)因子或免疫增強(qiáng)劑的應(yīng)用；（2）多個(gè)免疫保護(hù)性抗原蛋白如EO和E2聯(lián)合使用，將EO和E2蛋白融合表達(dá)或分別表達(dá)作為亞單位蛋白疫苗，或者分別構(gòu)建EO和E2蛋白真核表達(dá)質(zhì)粒作為DNA疫苗，而用其他抗原性蛋白建立的檢測(cè)CSFV抗體的ELISA作為鑒別診斷方法；（3）多種類型疫苗聯(lián)合使用，如DNA疫苗與亞單位疫苗或重組病毒疫苗聯(lián)合使用。豬瘟標(biāo)記疫苗開發(fā)利用的另一重要方面是建立穩(wěn)定可靠的鑒別診斷方法，這就需要對(duì)現(xiàn)有的診斷方法的改進(jìn)，以及尋找新的CSFV抗原蛋白作為鑒別診斷的抗原。

[1] Changchun Tu, Zongji Lu, Hongwei Li, et al. Phylogenetic comparison of classical swine fever virus in China[J]. Virus Research, 2001, 81： 29-37.

[2] 謝沄, 白華. 新型豬瘟疫苗研究進(jìn)展[J]．動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2008,29(2)： 79-82.

[3] 李譜華, 張淼濤, 王養(yǎng)會(huì)等. 豬瘟病毒E2基因重組雞痘病毒的構(gòu)建及免疫保護(hù)試驗(yàn)[J]. 上海交通大學(xué)學(xué)報(bào)： 農(nóng)業(yè)科學(xué)版, 2009, 27(2)：96-101.

[4] 劉燕, 田志軍, 周艷君. 表達(dá)多個(gè)外源基因的重組偽狂犬病病毒的構(gòu)建及其細(xì)胞培養(yǎng)特性研究[J]. 中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào), 2007, 29(2)：8 1-85.

[5] 何雷, 張彥明, 徐彥召等. 共表達(dá)豬瘟病毒E2基因和豬白細(xì)胞介素2基因的重組腺病毒的構(gòu)建及其免疫原性研究[J]. 病毒學(xué)報(bào), 2010,26(5)： 385-391.

[6] 孫宏宇, 孫元, 常天明等. 共表達(dá)豬繁殖與呼吸綜合征病毒GP5基因和豬瘟病毒E2基因的重組腺病毒的構(gòu)建及其在小鼠模型上的免疫原性分析[J]. 中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào), 2010, 32(3)： 161-166.

S851.33

C

1007-1733(2017)12-0058-02

2017-08-04）