離子色譜－積分脈沖安培檢測(cè)法測(cè)定－環(huán)糊精中的有關(guān)物質(zhì)

王 淼，靳貴英，王彩媚

（廣東省藥品檢驗(yàn)所，廣東 廣州 510180）

·檢驗(yàn)檢測(cè)·

離子色譜－積分脈沖安培檢測(cè)法測(cè)定－環(huán)糊精中的有關(guān)物質(zhì)

王 淼，靳貴英，王彩媚

（廣東省藥品檢驗(yàn)所，廣東 廣州 510180）

目的建立測(cè)定 －環(huán)糊精中有關(guān)物質(zhì)含量的方法。方法采用 Dionex ICS－500型色譜儀，利用糖分離柱、糖保護(hù)柱，以水、250 mmol／L NaOH溶液和500 mmol／L NaAC溶液為流動(dòng)相，以電化學(xué)檢測(cè)器（金為工作電極、Ag／AgCl為參比電極），測(cè)定 －環(huán)糊精

－環(huán)糊精；離子色譜；積分脈沖安培檢測(cè)；有關(guān)物質(zhì)

β－環(huán)糊精是由芽孢桿菌屬所產(chǎn)生的葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶作用于淀粉而生成的7個(gè)葡萄糖以α－1，4糖苷鍵結(jié)合的環(huán)狀低聚糖，其最顯著的分子特征是具有一個(gè)外環(huán)親水、內(nèi)環(huán)疏水，并有一定尺寸的立體手型空腔結(jié)構(gòu)，可以包合各種小分子[1－2]。β－環(huán)糊精可作為藥物的載體材料和緩釋材料，適用于乳劑、乳膏劑、微囊劑、栓劑、膠囊劑、片劑、顆粒劑等多種劑型，增加藥物穩(wěn)定性，提高藥物的生物利用度，減少藥品不良反應(yīng)，用于矯味防潮及使液體藥物固體化等[3－6]。β－環(huán)糊精也應(yīng)用于食品、化妝品工業(yè)。β－環(huán)糊精生產(chǎn)中可能會(huì)產(chǎn)生6個(gè)葡萄糖結(jié)合的α－環(huán)糊精和8個(gè)葡萄糖結(jié)合的γ－環(huán)糊精雜質(zhì)，同時(shí)還可能產(chǎn)生葡萄糖和麥芽糖等單糖還原糖雜質(zhì)，因此，有必要對(duì)有關(guān)物質(zhì)進(jìn)行研究及考察。筆者系統(tǒng)地研究了全國(guó)6個(gè)廠家12批β－環(huán)糊精樣品，運(yùn)用離子色譜－積分脈沖安培檢測(cè)法測(cè)定β－環(huán)糊精中有關(guān)物質(zhì)，為β－環(huán)糊精產(chǎn)品質(zhì)量控制提供科學(xué)依據(jù)。

1 儀器與試藥

1．1 儀器

Thermo ICS－5000型色譜儀（美國(guó)賽默飛世爾有限公司），配置有安培檢測(cè)器（金電極為工作電極，Ag／Ag-Cl為參比電極，糖四電位波形），色譜柱（CarPac PA200分析柱，250 mm×3 mm），保護(hù)柱（CarPac PA200保護(hù)柱，50 mm×3 mm），工作站為Chromeleon 6．8；MS205DU型電子天平（瑞士梅特勒－托利多公司）；醋酸鈉（優(yōu)級(jí)純，美國(guó)賽默飛世爾有限公司）；試驗(yàn)用水為超純水。

1．2 試藥

倍他環(huán)糊精（安徽山河藥用輔料股份有限公司，批號(hào)為16050431、160601，曲阜天利藥用輔料有限公司，批號(hào)為160516、160203，郁南永光集團(tuán)有限公司，批號(hào)為20160101、20160201，山東新大化工有限公司，批號(hào)為 160309、160415，孟州華興有限責(zé)任公司，批號(hào)為20160562、20160126，湖南爾康制藥股份有限公司，批號(hào)為109420160403，109420160701）；β－環(huán)糊精（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)為100317－201203）；α－環(huán)糊精（批號(hào)為1507070），γ－環(huán)糊精（批號(hào)為1529084），均購(gòu)于阿拉丁試劑有限公司；葡萄糖（批號(hào)為110833－201506），果糖（批號(hào)為111504－200001），乳糖（批號(hào)為10058－201204），半乳糖（批號(hào)為100206－200404），麥芽糖（批號(hào)為100287－201303），均購(gòu)于中國(guó)食品藥品檢定研究院。

2 方法與結(jié)果

2．1 色譜條件

色譜儀：Dionex ICS－5000型色譜儀；檢測(cè)器類型及工作參數(shù)：安培檢測(cè)器，金電極 Ag／AgCl參比模式，糖四電位波形；色譜柱：CarPac PA200型保護(hù)柱（50 mm×3 mm）和CarPac PA200型分析柱（250 mm× 3 mm）；柱溫：30℃；流速：0．45 mL／min；進(jìn)樣量：10 μL。洗脫程序見表1。

2．2 溶液制備

供試品溶液：取β－環(huán)糊精樣品適量，加水溶解并稀釋成質(zhì)量濃度為1 mg／mL的溶液，即得。

對(duì)照品溶液：取葡萄糖、乳糖、半乳糖、果糖、麥芽糖、α－環(huán)糊精、β－環(huán)糊精和γ－環(huán)糊精對(duì)照品適量，加水溶解并稀釋成葡萄糖、乳糖、半乳糖、果糖、麥芽糖、α－環(huán)糊精、β－環(huán)糊精和γ－環(huán)糊精質(zhì)量濃度分別為1．0，1．0，1．0，1．0，1．0，2．5，2．5，2．5 μg／mL的對(duì)照品混合溶液，即得。

表1 洗脫程序表(%)

2．3 方法學(xué)考察

系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：取對(duì)照品混合溶液進(jìn)樣。在此條件下，7種雜質(zhì)均能較好分離，其色譜圖見圖1。

線性關(guān)系考察：取各雜質(zhì)對(duì)照品，加水制成10，5，2，1，0．5倍于上述質(zhì)量濃度的對(duì)照品溶液，以峰面積對(duì)各成分質(zhì)量濃度進(jìn)行線性回歸。結(jié)果見表2。

圖1 離子色譜圖

表2 線性關(guān)系考察結(jié)果

精密度試驗(yàn)：取對(duì)照品混合溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄色譜圖。結(jié)果半乳糖、葡萄糖、果糖、乳糖、麥芽糖、α－環(huán)糊精、γ－環(huán)糊精峰面積的 RSD分別為1．6%，1．4%，1．0%，1．3%，1．0%，1．0%，3．0%（n＝6），表明儀器精密度良好。

重復(fù)性試驗(yàn)：取β－環(huán)糊精樣品（安徽山河藥用輔料股份有限公司，批號(hào)為160504），依法制備供試品溶液，重復(fù)測(cè)定6次。結(jié)果均只測(cè)得有γ－環(huán)糊精雜質(zhì)，測(cè)得值為0．15% ～0．19%（n＝6），說明方法重復(fù)性良好。

定量限和檢測(cè)限：取制備的各雜質(zhì)對(duì)照品溶液，逐步稀釋，進(jìn)樣，以信噪比為8～10時(shí)的質(zhì)量濃度為定量限，以信噪比約為3的質(zhì)量濃度為檢測(cè)限，半乳糖、葡萄糖、果糖和麥芽糖的定量限為0．05 μg／mL，乳糖的定量限為0．03 μg／mL，α－環(huán)糊精的定量限為0．4 μg／mL，γ－環(huán)糊精的定量限為1．0 μg／mL，半乳糖、葡萄糖、果糖和麥芽糖的檢測(cè)限為0．02 μg／mL，乳糖的檢測(cè)限為0．02 μg／mL，α－環(huán)糊精的檢測(cè)限為0．2 μg／mL，γ－環(huán)糊精的檢測(cè)限為0．5 μg／mL。

回收率試驗(yàn)：取β－環(huán)糊精樣品（安徽山河藥用輔料股份有限公司，批號(hào)為 160504，只含 γ－環(huán)糊精0．17%）9份，依法制備質(zhì)量濃度為1 mg／mL的供試品溶液，分別加入10倍濃度的對(duì)照品混合溶液0．8，1．0，1．2 mL各3份，依法進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果各雜質(zhì)成分的回收率及 RSD詳見表3。

表3 回收率試驗(yàn)結(jié)果（n＝9）

續(xù)表3 回收率試驗(yàn)結(jié)果（n＝9）

2．4 樣品含量測(cè)定

取6個(gè)廠家的12批樣品，依法制備供試品溶液，按擬訂方法進(jìn)樣測(cè)定，均未檢測(cè)到乳糖、半乳糖、果糖和α－環(huán)糊精，其余3種雜質(zhì)的測(cè)定結(jié)果見表4。

3 討論

β－環(huán)糊精質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)首次收載于2000年版《中國(guó)藥典（二部）》，作為賦形劑使用；經(jīng)《中國(guó)藥典》2002增補(bǔ)本修訂了還原糖限度后，2005年版《中國(guó)藥典》未作變動(dòng)，后該品種質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)經(jīng)過較大修訂和提高，收載于2010年版《中國(guó)藥典（二部）》，增加了紅外、雜質(zhì)吸光度、殘留溶劑（環(huán)己烷）、微生物限度，修訂了含量測(cè)定的限度，并將類別修訂為藥用輔料，包合劑和穩(wěn)定劑等。2015年版《中國(guó)藥典（四部）》收載的β－環(huán)糊精質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，與2010年版《中國(guó)藥典（二部）》收載的β－環(huán)糊精質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)一致，未作變動(dòng)。英國(guó)藥典(BP2016版)、歐洲藥典(EP8．0版)、美國(guó)藥典(USP39版)均有收載β－環(huán)糊精質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，與國(guó)外藥典標(biāo)準(zhǔn)比較，主要缺少有關(guān)物質(zhì)的控制項(xiàng)目[7－9]。

因工藝原因，β－環(huán)糊精生產(chǎn)過程中會(huì)同時(shí)產(chǎn)生6個(gè)葡萄糖結(jié)合的α－環(huán)糊精雜質(zhì)和8個(gè)葡萄糖結(jié)合的γ－環(huán)糊精雜質(zhì)，同時(shí)淀粉酶解還會(huì)產(chǎn)生葡萄糖及麥芽糖等，這些單糖或二糖大多具有還原性，對(duì)產(chǎn)品尤其是制劑的相容性有影響。因此，控制β－環(huán)糊精中的有關(guān)物質(zhì)的含量意義極大。國(guó)外藥典采用高效液相色譜法測(cè)定α－環(huán)糊精和γ－環(huán)糊精雜質(zhì)，所用色譜條件：C18色譜柱，示差檢測(cè)器，以乙腈和水為流動(dòng)相。筆者曾嘗試該方法，但2種雜質(zhì)無法有效分離，可能因?yàn)棣粒h(huán)糊精和γ－環(huán)糊精的極性較相似，用反相高效液相色譜法無法完全分離這2種雜質(zhì)，故嘗試用離子色譜法分離該雜質(zhì)。國(guó)內(nèi)外藥典均對(duì)還原糖進(jìn)行控制，分別采用滴定法和紫外分光光度法，2種方法的專屬性不高。故有必要采用新方法對(duì)上述雜質(zhì)進(jìn)行控制。

表4 樣品雜質(zhì)含量測(cè)定結(jié)果（%）

積分安培離子色譜法是近年發(fā)展起來的一種分析方法，分離機(jī)理主要為離子交換，即基于離子交換樹脂上可解離的離子與流動(dòng)相中具有相同電荷的溶質(zhì)離子之間進(jìn)行可逆交換，不需要進(jìn)行衍生化，可直接分離測(cè)定樣品中的糖類物質(zhì)，具有極高的靈敏度[10－15]。α－環(huán)糊精、γ－環(huán)糊精和還原糖均為糖類物質(zhì)，故該方法可對(duì)β－環(huán)糊精中有關(guān)物質(zhì)進(jìn)行一次性測(cè)定，且該方法靈敏高，精密度好，分離效果良好，且能準(zhǔn)確測(cè)定β－環(huán)糊精中上述7種糖類雜質(zhì)的含量。

采用離子色譜－積分脈沖安培檢測(cè)法，對(duì)12批β－環(huán)糊精樣品中的有關(guān)物質(zhì)進(jìn)行測(cè)定，測(cè)定結(jié)果顯示，均含γ－環(huán)糊精雜質(zhì)，甚至有的含量超出了國(guó)外藥典對(duì)該種雜質(zhì)的限度（0．25%），并說明各廠家產(chǎn)品生產(chǎn)過程中成環(huán)工藝控制均需改進(jìn)。而測(cè)定葡萄糖和麥芽糖雜質(zhì)，則說明淀粉被酶作用后生產(chǎn)的葡萄糖和麥芽糖等原料的去除不完全，亦說明純化工藝有待改進(jìn)。由于現(xiàn)行《中國(guó)藥典》未進(jìn)行該項(xiàng)目的控制，建議盡快對(duì)現(xiàn)有標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行修訂，以更好地對(duì)β－環(huán)糊精的質(zhì)量進(jìn)行控制。

[1]Raymond CR，Sheskey PJ．藥用輔料手冊(cè)[M]．第4版．鄭俊民，譯．北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005：218－222．

[2]羅明生，高天惠，宋民憲，等．中國(guó)藥用輔料[M]．北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2006：362．

[3]周志敏，劉偉林．頂空毛細(xì)管氣相色譜法測(cè)定倍他環(huán)糊精中的殘留溶劑[J]．中國(guó)藥師，2010，13（6）：830－831．

[4]刑其毅，徐瑞秋，周 政，等．基礎(chǔ)有機(jī)化學(xué)（下冊(cè)）[M]．第2版．北京：高等教育出版社，1994：995－996．

[5]劉華卿，黃振中，丁秋平，等．差熱分析與核磁共振研究 －環(huán)糊精包合物[J]．現(xiàn)代科學(xué)儀器，2006，18（4）：81－82．

[6]姚 力，姚 靜，于洪生．環(huán)糊精在藥物制劑方面的新應(yīng)用[J]．藥學(xué)進(jìn)展，2003，27（5）：279－283．

[7]美國(guó)藥典委員會(huì)．美國(guó)藥典39[M]．美國(guó)洛克威爾：美國(guó)藥典委員會(huì)出版社，2016：7179－7181．

[8]歐洲藥典委員會(huì)．歐洲藥典8．0[M]．法國(guó)斯特拉斯堡：歐洲藥品質(zhì)量管理局出版社（EDQM），2010：1653－1655．

[9]英國(guó)藥典委員會(huì)．英國(guó)藥典2016[M]．英國(guó)倫敦：英國(guó)藥監(jiān)機(jī)構(gòu)出版社（MHRA），2016：274－276．

[10]羅 君，劉 毅，張建玲，等．離子色譜－積分脈沖安培檢測(cè)法測(cè)定低聚木糖顆粒中低聚木糖的含量[J]．微量元素與健康研究，2014，11（6）：53－54．

[11]關(guān)皓月，孫會(huì)敏．HPLC法同時(shí)測(cè)定伏立康唑制劑中磺丁基－環(huán)糊精鈉、羥丙基－ －環(huán)糊精和 －環(huán)糊精的含量[J]．中國(guó)新藥雜質(zhì)，2016，25（20）：2386－2389．

[12]馬甲民，崔 鶴，李慧新，等．離子交換色譜－積分安培檢測(cè)器測(cè)定葡萄酒中的天然糖[J]．食品科學(xué)，2015，36（12）：108－112．

[13]林 敏．離子色譜法測(cè)定轉(zhuǎn)化糖注射液的含量[J]．海峽藥學(xué)，2014，26（1）：60－61．

[14]沈 潔，周光明，于 露．離子色譜－脈沖安培檢測(cè)法測(cè)定原桃膠中的多糖含量[J]．食品工業(yè)科技，2016，37（5）：298－301．

[15]費(fèi) 棟，陳梅蘭，朱 巖，等．離子交換色譜－積分脈沖安培檢測(cè)法測(cè)定食品中糖[J]．理化檢驗(yàn) －化學(xué)分冊(cè)，2010，46（1）：76－78．

Determination of Related Substance in Betacyclodextrin by Ion Chromatography with Integral Pulse Amperometric Detection

Wang Miao，Jin Guiying，Wang Caimei
（Guangdong Institute for Drug Control，Guangzhou，Guangdong，China 510180）

Objective To establish a method of ion chromatography with integral pulse amperometric detection for the determination of related substance in betacyclodextrin．M ethods Dionex ICS－500 and CarPac PA200 column were used．The mixtures of pure water，250 mmol／L NaOH solution and 500 mmol／L NaAC solution in different ratio were used as mobile phase in the gradient elution．In the amperometric detection，gold electrode was used as working electrode，Ag／AgCl electrode was used as reference electrode．Results The peaks of different impurities were separated completely．The calibration curve of each solvent of each impurity showed a good liner relationship with good precision and recovery rate．Conclusion The method showed good sensitivity，precision and reproducibility，which can be used to determine the related substance in betacyclodextrin．

betacyclodextrin；ion chromatography；integral impulse amperometric detection；related substance

R927．1；TQ460．4

A

1006－4931(2017)04－0027－05

2016－10－05；

2016－11－24)

10．3969／j．issn．1006－4931．2017．04．007

王淼（1980－），男，碩士研究生，副主任藥師，研究方向?yàn)樗幱幂o料質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，（電子信箱）949319255＠qq．com。

中有關(guān)物質(zhì)含量。結(jié)果各雜質(zhì)峰能較好分離，峰面積與質(zhì)量濃度線性關(guān)系良好，回收率良好。結(jié)論該方法靈敏度高，重復(fù)性好，可用于－環(huán)糊精中有關(guān)物質(zhì)含量的測(cè)定。