原發(fā)性腎病綜合征患兒外周血單個(gè)核細(xì)胞IL-18、Fas mRNA表達(dá)變化及其意義

龍彪,曾冬梅,羅莉

(黔東南州人民醫(yī)院,貴州黔東南 556000)

原發(fā)性腎病綜合征患兒外周血單個(gè)核細(xì)胞IL-18、Fas mRNA表達(dá)變化及其意義

龍彪,曾冬梅,羅莉

(黔東南州人民醫(yī)院,貴州黔東南556000)

目的觀察原發(fā)性腎病綜合征(PNS)患兒外周血IL-18、Fas mRNA表達(dá)變化，并探討其臨床意義。方法選擇68例PNS患兒為觀察組，其中單純型PNS45例、腎炎型PNS23例，另選47例健康體檢兒童為對(duì)照組。抽取兩組患兒外周血分離單個(gè)核細(xì)胞，采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)Fas、IL-18 mRNA。結(jié)果觀察組、對(duì)照組兒童外周血單個(gè)核細(xì)胞IL-18 mRNA表達(dá)量分別為0.13±0.02、0.02±0.01，F(xiàn)as mRNA表達(dá)量分別為0.05±0.02、0.48±0.08。觀察組外周血單個(gè)核細(xì)胞IL-18、Fas mRNA與對(duì)照組相比P均<0.05。單純型、腎炎型PNS患兒外周血單個(gè)核細(xì)胞IL-18 mRNA表達(dá)量分別為0.08±0.06、0.19±0.09，F(xiàn)as mRNA表達(dá)量分別為0.51±0.13、0.32±0.11。觀察組單純型PNS患兒外周血單個(gè)核細(xì)胞IL-18 、Fas mRNA表達(dá)量與腎炎型PNS相比P均<0.05。 Pearson相關(guān)性分析結(jié)果顯示觀察組患兒、單純型PNS患兒、腎炎型PNS患兒外周血單個(gè)核細(xì)胞Fas mRNA表達(dá)量與IL-18 mRNA表達(dá)量呈負(fù)相關(guān)(r=-0.468、-0.567、-0.327，P均< 0.05)。結(jié)論P(yáng)NS患兒外周血單個(gè)核細(xì)胞IL-18表達(dá)升高、FAS mRNA表達(dá)下降。檢測(cè)外周血單個(gè)核細(xì)胞IL-18 、FAS mRNA有助于鑒別判斷單純型和腎炎型PNS。

白細(xì)胞介素18;Fas蛋白;原發(fā)性腎病綜

原發(fā)性腎病綜合征(PNS)是各種原因引起腎小球的通透性增加，進(jìn)而導(dǎo)致水腫、高血脂癥、大量蛋白尿、低蛋白血癥等特征性的臨床癥狀[1]。兒童腎病綜合征是泌尿系統(tǒng)常見(jiàn)的疾病[2]。PNS的發(fā)病機(jī)理目前不是十分明確。IL- 18是重要的炎癥因子，F(xiàn)as是細(xì)胞凋亡標(biāo)志物[3～5]。IL- 18、Fas是否在PNS發(fā)生過(guò)程中發(fā)揮作用尚無(wú)定論。我國(guó)臨床將PNS分為單純型和腎炎型兩種類(lèi)型[6]。這兩種類(lèi)型的PNS患兒IL- 18、Fas表達(dá)情況是否有差異也不明確。為解決上述問(wèn)題，本研究觀察了PNS患兒外周血單個(gè)核細(xì)胞IL- 18、Fas mRNA表達(dá)變化，并比較了單純型、腎炎型PNS患兒外周血單個(gè)核細(xì)胞IL- 18、Fas mRNA表達(dá)情況。現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2016年1月～2017年3月收治的初治PNS患兒68例為觀察組。納入標(biāo)準(zhǔn)：①年齡14歲；②滿(mǎn)足PNS診斷標(biāo)準(zhǔn)[7]，即血清白蛋白(ALB)<25 g/L、24 h尿蛋白定量≥50 mg/(kg·d)、尿蛋白≥+++伴有水腫、高脂血癥等臨床癥狀。排除標(biāo)準(zhǔn)：①繼發(fā)性腎病綜合征；②心臟、肝臟功能不全者；③身體患有其他可能影響本研究結(jié)果的疾病。其中男38例、女30例，年齡3～9(6.15±3.18)歲。按照《兒童常見(jiàn)腎臟疾病診治循證指南》[8]將患兒分為單純型45例，腎炎型23例。另選同期體檢的健康兒童47例作為對(duì)照組，其中男27例、女20例，年齡4～10(7.85±3.71)歲。兩組兒童性別、年齡相比P均> 0.05。本研究已獲得我院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，患兒及其家屬均簽署知情同意書(shū)。

1.2 外周血單個(gè)核細(xì)胞Fas 和IL-18 mRNA檢測(cè)方法 觀察組患兒入院第2天，對(duì)照組患兒體檢時(shí)采血5 mL，分離單個(gè)核細(xì)胞。按照RNA提取試劑盒的說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作提取RNA。然后反轉(zhuǎn)錄為cDNA。采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法進(jìn)行擴(kuò)增，以GAPDH為內(nèi)參照。Fas上游引物序列為5′-ACCAACTATTGCTTCAGCTC-3′，下游引物序列為5′-CTTGCAGGAGCGCACGATCA-3′；IL-18上游引物序列為5′-GGCCTCTATTTGAAGATATGACTGATT-3′，下游引物序列為5′-CCTCTAGGCTGGCTATCTTTATACATAC-3′；GAPDH上游引物序列為5′-TGGTATCGTGGAAGGACTCATGAC-3′，下游引物序列為5′ - ATGCCAGTGAGCTTCCCGTTCAGC-3′ 。PCR反應(yīng)條件：94 ℃預(yù)變性3 min，然后進(jìn)行40個(gè)循環(huán)(94 ℃變性30 s，53 ℃退火30 s，72 ℃延伸45 s)，最后72 ℃延伸5 min，產(chǎn)物在4 ℃恒溫保存。采用2-ΔΔCt表示Fas 和IL-18 mRNA表達(dá)量。

2 結(jié)果

2.1 觀察組、對(duì)照組兒童外周血單個(gè)核細(xì)胞IL-18、Fas mRNA比較 觀察組、對(duì)照組兒童外周血單個(gè)核細(xì)胞IL-18 mRNA表達(dá)量分別為0.13±0.02、0.02±0.01，F(xiàn)as mRNA表達(dá)量分別為0.05±0.02、0.48±0.08。觀察組外周血單個(gè)核細(xì)胞IL-18 、Fas mRNA表達(dá)量與對(duì)照組相比，P均<0.05。

2.2 觀察組單純型、腎炎型PNS患兒外周血單個(gè)核細(xì)胞Fas、IL-18 mRNA比較 單純型、腎炎型PNS患兒外周血單個(gè)核細(xì)胞IL-18 mRNA表達(dá)量分別為0.08±0.06、0.19±0.09，F(xiàn)as mRNA表達(dá)量分別為0.51±0.13、0.32±0.11。觀察組單純型PNS患兒外周血單個(gè)核細(xì)胞IL-18、Fas mRNA表達(dá)量與腎炎型PNS相比P均<0.05。

2.3 觀察組患兒外周血單個(gè)核細(xì)胞Fas、IL-18 mRNA表達(dá)量的相關(guān)性 Pearson相關(guān)性分析結(jié)果顯示觀察組患兒外周血單個(gè)核細(xì)胞Fas mRNA表達(dá)量與IL-18 mRNA表達(dá)量呈負(fù)相關(guān)(r=-0.468，P<0.05)，單純型PNS患兒中外周血單個(gè)核細(xì)胞Fas mRNA表達(dá)量與IL-18 mRNA表達(dá)量呈負(fù)相關(guān)(r=-0.567，P<0.05)，腎炎型PNS患兒中外周血單個(gè)核細(xì)胞Fas mRNA表達(dá)量與IL-18 mRNA表達(dá)量呈負(fù)相關(guān)(r=-0.327，P<0.05)。

3 討論

兒童PNS主要由腎小球毛細(xì)血管的通透性增加，導(dǎo)致血漿中的白蛋白從尿液中大量丟失。有研究表明，原發(fā)性腎病綜合征占小兒腎病的90%[7～9]，是小兒中比較常見(jiàn)的腎小球疾病，但其發(fā)病機(jī)制目前尚未清楚。近年來(lái)的研究發(fā)現(xiàn)，T淋巴細(xì)胞亞群可能參與PNS的發(fā)生發(fā)展過(guò)程，PNS患兒的T淋巴細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子異常于正常兒童，并介導(dǎo)細(xì)胞的免疫應(yīng)答過(guò)程，進(jìn)而在兒童體內(nèi)引發(fā)遲發(fā)型的超敏反應(yīng)[10～12]。

IL-18是由活激活后的單核細(xì)胞分泌，是近年來(lái)新發(fā)現(xiàn)的炎癥因子，可以加強(qiáng)NK細(xì)胞的毒性作用能力，可參與新月體腎炎以及急性缺血性腎功能衰竭過(guò)程[13～15]。已有研究報(bào)道，PNS患兒在治療前后的外周血中的IL-18 mRNA差異顯著，且與24h尿蛋白定量有著呈顯著的正相關(guān)性[16]。本研究結(jié)果顯示觀察組患兒外周血單個(gè)核細(xì)胞IL-18 mRNA高于對(duì)照組，與其結(jié)果一致。Fas又稱(chēng)細(xì)胞凋亡蛋白1，是細(xì)胞凋亡過(guò)程中重要的細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)因子，F(xiàn)as及其配體FasL與細(xì)胞外細(xì)胞因子，如白細(xì)胞介素、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子等結(jié)合，將凋亡信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)到細(xì)胞內(nèi)，啟動(dòng)細(xì)胞凋亡程序。本研究結(jié)果顯示，觀察組患兒外周血單個(gè)核細(xì)胞Fas mRNA低于對(duì)照組，表明PNS患兒外周血單個(gè)核細(xì)胞的凋亡活性弱于對(duì)照組，細(xì)胞免疫功能處于亢進(jìn)狀態(tài)，這符合已知的PNS的發(fā)病機(jī)理。本研究結(jié)果顯示，觀察組患兒外周血單個(gè)核細(xì)胞Fas與IL-18 mRNA表達(dá)水平呈負(fù)相關(guān)，說(shuō)明在PNS發(fā)病過(guò)程中Fas與IL-18之間相互作用的方式可能是相互拮抗或者負(fù)性調(diào)節(jié)。結(jié)合文獻(xiàn)筆者認(rèn)為IL-18可能是Fas的上游調(diào)控因子，對(duì)Fas的表達(dá)發(fā)揮負(fù)性調(diào)控作用。

腎病綜合癥的類(lèi)型中，單純型主要以腎臟的微小病變?yōu)橹鳎I炎型主要以非微小型病理改變?yōu)橹?，如系膜增生性腎炎、膜性腎炎、局灶節(jié)段性腎小球硬化等等。從病理?yè)p傷程度方面分析，腎炎型PNS的病情要比單純型PNS重，而且更容易引起激素類(lèi)藥物耐藥[17]。本研究結(jié)果提示，單純型組PNS患兒外周血單個(gè)核細(xì)胞IL-18 mRNA表達(dá)低于腎炎組、Fas mRNA表達(dá)高于腎炎組，也佐證了腎炎型PNS患者的病情比單純型PNS輕，同時(shí)提示我們檢測(cè)外周血單個(gè)核細(xì)胞IL-18、Fas mRNA表達(dá)有助于鑒別單純型和腎炎型PNS。

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2017-06-22)

貴州省衛(wèi)生廳重點(diǎn)基金資助項(xiàng)目(GW-2014B-101237)。