無花果干果不同溶劑提取物及其抗氧化活性研究

徐 蔓，張錦華，白寶清

（山西大學生命科學學院，山西太原030006）

無花果干果不同溶劑提取物及其抗氧化活性研究

徐 蔓，張錦華，白寶清

（山西大學生命科學學院，山西太原030006）

采用4種極性溶劑（乙酸乙酯、正己烷、氯仿、乙醇）通過一次提取和雙溶劑萃取2種不同方法提取無花果干果中的總酚和總黃酮，測定其含量，并通過還原能力及羥自由基清除能力測定對其抗氧化活性進行比較分析。結(jié)果表明，一次提取法得到的無花果干果提取物中總酚、總黃酮含量和相應的抗氧化能力均高于雙溶劑萃取法；采用同種提取方法時提取溶劑極性越大其多酚和黃酮含量與對應的抗氧化活性越高（乙醇提取物＞乙酸乙酯提取物＞氯仿提取物＞正己烷提取物）；采用60%乙醇作為提取溶劑通過一次提取法提取效果最好，提取物中總酚和總黃酮含量相對其他有機溶劑最高，相應的還原能力和羥自由基清除率均最好。

無花果干果；提取方法；抗氧化活性

無花果（Ficus carica L.）系?？坡淙~小喬木，是一種有悠久栽培歷史的藥食同源果品樹種，也是一種開發(fā)應用較廣的經(jīng)濟植物，其果實含有豐富的碳水化合物、蛋白質(zhì)、粗纖維、脂肪酸、多酚、維生素、礦物質(zhì)等，葉、根均可入藥[1]。無花果極易腐壞，因此，很大一部分是干無花果。干無花果是世界上最盛產(chǎn)的水果產(chǎn)品之一，除整個果實被食用外，還被加工為膏、濃縮汁、粉、粒等工業(yè)產(chǎn)品[2]。無花果富含酚類化合物，酚類物質(zhì)具有很強的生理活性[3-4]。植物多酚是水果中含量最豐富的抗氧化物質(zhì)之一，能夠有效清除自由基、保護機體生物大分子以及抗腫瘤、抗動脈硬化等[5]。

無花果中亦含有黃酮類化合物。黃酮類化合物具有高度的化學反應性，例如它能夠清除生物體內(nèi)的自由基，具有抗氧化作用[6]；在生物體中具有抗心腦血管病、抗氧化、抗病毒、抗腫瘤、抗衰老、抗過敏、免疫調(diào)節(jié)等作用[7-8]，在食品、醫(yī)藥、保健品等方面應用十分廣泛，但是目前在無花果的研究中鮮有報道。

目前，國內(nèi)對無花果的研究主要集中在無花果多糖提取工藝優(yōu)化和無花果葉中活性物質(zhì)的提取及抗氧化活性方面。張澤俊等[9]以不同溶劑對無花果葉進行超聲輔助提取，比較了各提取物抗氧化能力，結(jié)果表明，無花果葉水提取具有較強的抗氧化性。房昱含等[10]采用乙醇冷浸與溶劑分相萃取相結(jié)合的方法獲得無花果葉3種相提取物，測定不同相抗氧化能力，結(jié)果表明，無花果葉提取物各相均有抗氧化活性，并且有劑量依賴關(guān)系。大多研究主要使用乙醇作為提取溶劑，通過超聲波對無花果葉中的多酚及黃酮進行提取，實現(xiàn)了無花果葉的綜合利用。

楊潤亞等[1]通過正交試驗設計優(yōu)化出超聲波輔助提取無花果葉中總黃酮的工藝條件，其提取量可以達到25.04 mg/g。莊奕筠等[11]通過乙醇浸提與超聲波輔助相結(jié)合的方法提取無花果葉中總黃酮，確定最佳工藝并得到了2.39%的較高提取率。齊建紅等[12]以金黃色葡萄球菌等5種菌作為供試菌種，對無花果葉提取物中有效成分的抑菌活性進行了測定，結(jié)果表明，無花果葉提取物對5種試驗菌均有抑菌作用，且抑菌作用隨著濃度的增加而增強。而報道中對于無花果干果提取物的研究較少。

本試驗立足于無花果干果中的活性成分，采用不同溶劑及方法進行提取，對其多酚和黃酮含量測定，并結(jié)合相應的抗氧化活性的分析比較，尋找無花果干果活性物質(zhì)提取的最適溶劑和方法，旨在為無花果干果活性物質(zhì)的有效提取提供理論依據(jù)和應用基礎。

1 材料和方法

1.1 材料與試劑

無花果干果購于太原市美特好超市。

無水乙醇，正己烷，氯仿，乙酸乙酯，甲醇，福林酚，Na2CO3，NaNO2，Al（NO3）3，NaOH，NaH2PO4·2H2O，Na2HPO4·12H2O，鐵氰化鉀，三氯乙酸，三氯化鐵，硫酸亞鐵，水楊酸，雙氧水（以上試劑均為分析純）；沒食子酸標準品、蘆丁標準品（上海融禾醫(yī)藥科技有限公司）。

1.2 儀器與設備

UV-2800型紫外可見分光光度計（尤尼柯（上海）儀器有限公司）；GZX-9023MBE型電熱鼓風干燥箱（上海博迅實業(yè)有限公司醫(yī)療設備廠）；JA1203N型電子天平（上海精密科學儀器有限公司）；SC-3614型低速離心機（安徽中科中佳科學儀器有限公司）；RE-52AA型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海亞榮生化儀器廠）；SHZ-III型循環(huán)水真空泵（上海知信試驗儀器技術(shù)有限公司）；XL-600B型多功能粉碎機（永康市小寶電器有限公司）；SB-4200DT型超聲波清洗機（寧波新芝生物科技股份有限公司）。

1.3 試驗方法

1.3.1 原料預處理 無花果干果切小塊后放置于55℃烘箱中24 h，粉碎后過0.25 mm篩備用。

1.3.2 提取液的制備

1.3.2.1 一次提取法 取10 g待測樣品，分別于250 mL三角瓶中加入100 mL乙酸乙酯、正己烷、氯仿，室溫下100 r/min搖床提取2 h，每個試驗重復2次，合并濾液，于50℃下減壓濃縮至干，再用甲醇定容至10 mL容量瓶中，得到乙酸乙酯、正己烷、氯仿提取物原液，4℃冰箱冷藏備用。同法以體積分數(shù)分別為20%，40%，60%，80%的乙醇提取得到相應的乙醇提取物原液。

1.3.2.2 雙溶劑萃取法 取10 g待測樣品，于250 mL三角瓶中加入100 mL 95%的乙醇進行提取，放置于搖床（100 r/min）2 h，重復2次，合并濾液。50℃下減壓濃縮，得到無花果干果的乙醇浸膏。然后直接加入100 mL乙酸乙酯、正己烷、氯仿進行萃取，直到有機相澄清為止。收集萃取液在50℃下再次減壓濃縮，用甲醇定容至10 mL容量瓶中，分別得到乙酸乙酯、正己烷、氯仿萃取液，于4℃冰箱冷藏備用[13]。

1.3.3 總酚含量測定[14]總酚含量采用福林-酚法進行測量。分別吸取一次提取和雙溶劑萃取2種方法得到的乙酸乙酯、正己烷、氯仿及不同體積分數(shù)乙醇提取物各0.5 mL于10 mL容量瓶中，加入1 mL福林-酚試劑，迅速搖勻，再加入2%碳酸鈉溶液3 mL，蒸餾水定容至刻度線。避光靜置反應2 h后，用紫外可見分光光度計在760 nm處測量吸光度。結(jié)果以每克無花果干果中含有相當于沒食子酸毫克數(shù)表示，單位為mg/g。

1.3.4 總黃酮含量測定[14]分別吸取一次提取和雙溶劑萃取2種方法得到的乙酸乙酯、正己烷、氯仿及不同體積分數(shù)乙醇提取物各0.5 mL于10 mL容量瓶中，依次加入0.4 mL 5%的NaNO2，搖勻后靜置反應6 min，加入0.4 mL 5%的Al（NO3）3，搖勻后靜置反應6 min，再加入4 mL 5%的NaOH，搖勻后繼續(xù)靜置反應15 min，于510 nm處測定吸光度值。結(jié)果以每克無花果干果中含有相當于蘆丁毫克數(shù)表示，單位為mg/g。

1.3.5 還原能力測試[15]分別吸取1 mL樣品于10 mL離心管中，加入2.0 mL 0.2 mol/L磷酸鹽緩沖液（pH值為6.6），搖勻后加入2.0 mL 1%鐵氰化鉀溶液，混勻，50℃恒溫水浴反應20 min，回到室溫后加入2.0 mL 10%三氯乙酸，4 000 r/min條件下反應10 min。之后取2.0 mL上清液，再加入2.0 mL蒸餾水以及0.4 mL 0.1%三氯化鐵混勻，靜置10 min，700 nm處測定吸光度。重復測量求平均值，吸光度越高，還原能力越強。

1.3.6 羥自由基清除率測定[16]向離心管中依次各加入2.0 mmol/LFeSO42.0 mL，1.0 mmol/LH2O22.0 mL，振蕩，搖勻。再加入6.0 mmol/L水楊酸3.0 mL，搖勻，于37℃水浴加熱15 min。加熱完畢后于510 nm波長處分別測定吸光度A1。之后分別加入各待試樣品1.0 mL，搖勻，繼續(xù)水浴加熱15 min，待加熱完畢后再次分別測其吸光度A2。對照試驗：用2.0 mL蒸餾水取代H2O2溶液，嚴格重復上述過程，測吸光度A3。其計算公式如下。

2 結(jié)果與分析

2.1 提取方法與相應提取液中總酚、總黃酮含量[17]比較

2.1.1 一次提取法及其不同溶劑提取物的總酚、總黃酮含量比較 從表1可以看出，3種溶劑作為提取劑均可以有效地提取無花果干果中的多酚和黃酮類物質(zhì)，但是不同溶劑提取物中總酚和總黃酮含量不同，其中以乙酸乙酯為提取溶劑得到的提取物中的總酚和總黃酮含量（分別為（1.528±0.046），（7.946±0.210）mg/g）要高于其他2種提取溶劑得到的。

表1 一次提取及其不同溶劑提取物的總酚、總黃酮含量 mg/g

2.1.2 不同體積分數(shù)乙醇提取物中總酚、總黃酮含量比較 乙醇是大多數(shù)活性成分的有效提取溶劑。從圖1可以看出，采用乙醇作為提取溶劑，通過一次提取法可以有效地提取無花果干果中的總酚和總黃酮類物質(zhì)，選擇的乙醇的體積分數(shù)不一樣，提取的效率也不一樣，其中，采用體積分數(shù)為60%的乙醇作為提取溶劑時，提取效果明顯高于其他體積分數(shù)的乙醇，提取物中的總酚（1.738 mg/g）和總黃酮含量（8.472 mg/g）要明顯高于其他體積分數(shù)的乙醇。

結(jié)合表1和圖1可以看出，4種提取溶劑中，60%乙醇提取物的總酚和總黃酮含量均高于其他3種提取溶劑。

2.1.3 雙溶劑萃取及其不同溶劑萃取物的總酚、總黃酮含量 從表2可以看出，采用不同溶劑對無花果干果的乙醇浸膏進行再萃取可以將其中的多酚和黃酮物質(zhì)進一步萃取出來，得到的提取物的總酚和總黃酮含量也不同，其中以乙酸乙酯為萃取溶劑得到的提取物中的總酚和總黃酮含量略高于其他2種溶劑的，且沒有明顯差異。

表2 雙溶劑萃取及其不同溶劑提取物總酚、總黃酮含量 mg/g

與表1相比，同種提取溶劑采用一次提取法得到的相應提取物中總酚和總黃酮含量明顯比雙溶劑萃取法的高，且2種提取方法中，極性越大溶劑萃取所得提取物中總酚和總黃酮含量越高，乙酸乙酯提取物總酚和總黃酮含量最高，正己烷提取物總酚和總黃酮含量最低。

2.2 各提取物還原能力比較[18]

同樣條件下，試驗測定了不同提取物對應的還原力，結(jié)果用吸光度值表示，吸光度值越高，還原能力越大。由圖2可知，在保證多酚活性物質(zhì)濃度一致的情況下，采用一次提取法得到的各提取物的還原能力均比雙溶劑萃取法略高，其中，3種有機溶劑中乙酸乙酯2種提取方法的提取物還原能力均最高，還原力分別為0.57和0.55；正己烷提取物還原能力最低。還原能力強弱與活性物質(zhì)含量高低的趨勢一致。但是與乙醇為提取溶劑相比，一次提取法中乙醇提取物的還原力高于其他提取溶劑的，其中，60%乙醇提取物的還原力最大（還原力為1.14），低于或高于這一值，對應的還原力都偏低，與對應不同體積分數(shù)乙醇提取物的多酚和黃酮含量的趨勢一致（圖3）。

2.3 各提取物羥自由基清除能力分析比較[19]

由圖4可知，2種提取方法相比較，在保證多酚活性物質(zhì)濃度一致的情況下，一次提取法各提取物清除羥自由基能力均高于雙溶劑萃取法，不同溶劑清除羥自由基能力趨勢為：乙酸乙酯＞氯仿＞正己烷，與相應的活性物質(zhì)含量趨勢一致，其中，一次提取法中乙酸乙酯提取物的羥自由基清除能力達到89.17%，但仍低于60%乙醇提取物（羥自由基清除率為98.77%），低于或高于這一體積分數(shù)值，對應的乙醇提取物的羥自由基清除率都偏低，與不同體積分數(shù)乙醇提取物中多酚和黃酮含量的趨勢一致（圖5）。

3 結(jié)論與討論

試驗較系統(tǒng)地研究了不同溶劑和不同提取方法對無花果干果中多酚和黃酮物質(zhì)提取含量和抗氧化活性的影響[20]。本研究結(jié)果表明，采用同種提取溶劑時，一次提取法和雙溶劑萃取法都可以有效地提取無花果干果中的多酚和黃酮類物質(zhì)，相比較之下，一次提取法效果更好，一次提取法提取物中多酚和黃酮含量及抗氧化能力均比雙溶劑萃取法高，推測可能是由于相比一次提取法直接從植物材料中提取活性成分，雙溶劑萃取法中乙醇浸膏的制備可以將原料中的絕大多數(shù)活性成分提取出來，而再采用乙酸乙酯、氯仿、正己烷等極性較弱的溶劑很難從乙醇中進一步將有效成分進行萃取，提取機理還有待進一步試驗推理。采用3種有機溶劑乙酸乙酯、氯仿、正己烷進行提取，其中，2種方法得到的乙酸乙酯提取物中的多酚和黃酮含量相對較高，對應的抗氧化能力也較好；3種溶劑提取物的抗氧化能力強弱與其多酚和黃酮含量多少的趨勢一致，可見提取物的抗氧化活性主要是由其含有的多酚和黃酮物質(zhì)貢獻的，即無花果干果提取物中多酚和黃酮可能是發(fā)揮抗氧化作用的主要活性物質(zhì)；但是3種有機溶劑提取物中的多酚和黃酮物質(zhì)含量低于采用乙醇作為提取溶劑得到的提取物中含量，相應的抗氧化能力也偏低，試驗發(fā)現(xiàn)，采用60%的乙醇為溶劑通過一次提取法提取無花果干果中的活性物質(zhì)時，提取物中的多酚和黃酮含量最高，并與乙醇的體積分數(shù)呈正相關(guān)，也與相應的抗氧化活性趨勢一致?？梢?，無花果干果活性成分及抗氧化活性與提取的溶劑和提取方法有一定的關(guān)系，通過本試驗可以推斷，無花果干果中多酚和黃酮物質(zhì)的最佳提取溶劑為60%乙醇，采用一次提取法效果較好，乙醇提取物中的總酚和總黃酮含量分別為1.738，8.472 mg/g，試驗將進一步輔助超聲波對提取條件進行優(yōu)化，提高無花果干果中多酚和黃酮的提取率，也為以后無花果及其他天然產(chǎn)物的提取提供了參考。

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Study on Different Solvent Extracts of Fig Dried Fruit and Its Antioxidative Activity

XUMan， ZHANGJinhua，BAIBaoqing

（College ofLife Science，ShanxiUniversity，Taiyuan 030006，China）

Four polar solvent（ethylacetate,n-hexane,chloroform,ethanol）were used to extractthe phenols and flavonoids from dried fig fruits by the two differentmethods ofone-time extraction and dual-solventextraction,the totalcontentofwhich were measured. At the same time,the antioxidant activity wes compared by the scavenging activities against hydroxyl and reducing capacity evaluated. The results showed thatthe contentoftotalphenols and flavonoids by one-time extraction were higher than dual-solventextraction,also with theirantioxidantactivity correspondingly.Using the same extraction method,the polarity ofsolventextracts was greater,totalphenols and flavonoids content offour differentextracts was higher,the same as the trend of their antioxidant activity（ethanol extract＞ethyl acetate extract＞chloroform extract＞n-hexane extract）.The extraction effectwas the bestwhen using 60%ethanolas extraction solvent through one-time extraction method,with the highest of the total phenols and flavonoids content and their scavenging activities against hydroxyland reducing capacity.

dried figs;extraction method;antioxidantactivity

S663.3

：A

：1002-2481（2017）09-1430-05

10.3969/j.issn.1002-2481.2017.09.09

2017-04-10

山西大學引進人才建設項目（113533801003）

徐 蔓（1992-），女，山西運城人，在讀碩士，研究方向：天然活性物質(zhì)的提取。張錦華為通信作者。