一起蛋雞禽白血病的熒光RT-PCR診斷

凌洪權(quán) 黎朝燕 陳忠瓊 史小文 歐陽吳莉 董春霞

（①重慶市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心 401120 ②重慶市璧山區(qū)來鳳畜牧獸醫(yī)站）

一起蛋雞禽白血病的熒光RT-PCR診斷

凌洪權(quán)①黎朝燕②陳忠瓊①史小文①歐陽吳莉①董春霞①

（①重慶市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心 401120 ②重慶市璧山區(qū)來鳳畜牧獸醫(yī)站）

2017年1月，重慶市動(dòng)物防控中心實(shí)驗(yàn)室收到某蛋雞場送來的10份蛋雞肝臟、脾臟等病料，根據(jù)蛋雞的臨床癥狀和病理剖解變化，采用熒光RT-PCR方法進(jìn)行了禽白血病的檢測。結(jié)果表明，10份樣品全為禽白血病病毒陽性。

蛋雞 禽白血病 熒光RT-PCR 診斷

禽白血病是由反轉(zhuǎn)錄病毒科C型反轉(zhuǎn)錄病毒屬禽白血病/肉瘤病毒群病毒(AL/SV)所引起的禽類多種腫瘤性疾病的總稱，其感染率高，發(fā)病率低[1]。ALV主要引起淋巴細(xì)胞性白血病、成髓細(xì)胞白血病、成紅細(xì)胞性白血病和髓細(xì)胞樣白血病。該病幾乎在實(shí)行規(guī)?；B(yǎng)殖的國家都有發(fā)生，造成的經(jīng)濟(jì)損失極為嚴(yán)重，是危害養(yǎng)雞業(yè)的主要疾病之一[2,3]。

1 材料與方法

1.1 樣品 10份蛋雞肝臟、脾臟等病料。取約1.0g病料于組織研磨器中研磨，磨碎后加入1.0ml生理鹽水繼續(xù)研磨成勻漿，倒入2.0ml離心管，8000r/min離心5min，取上清液200ul于1.5ml離心管中備用。

1.2 試劑 禽白血病病毒檢測試劑盒(實(shí)時(shí)熒光PCR法)，購自深圳真瑞生物科技有限公司；核酸提取試劑盒(EXRNA/DNA病毒），購自蘇州天隆生物科技有限公司。

1.3 方法 按照核酸提取試劑盒說明書提取禽白血病病毒核酸RNA；按照禽白血病病毒檢測試劑盒說明書配制RT-PCR反應(yīng)體系。反應(yīng)條件如下：42℃10min ，95℃3min;95℃5s ，55℃40s，5個(gè)循環(huán)進(jìn)行預(yù)擴(kuò)增；95℃5s，55℃40s，40個(gè)循環(huán)，在此第二階段結(jié)束時(shí)采集熒光信號(hào)。

2 結(jié)果

按照禽白血病病毒檢測試劑盒(實(shí)時(shí)熒光PCR法)說明書的判斷標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行結(jié)果判斷。檢測的10份樣品結(jié)果全為禽白血病病毒核酸陽性(見附圖)。

3 討論

禽白血病病毒根據(jù)病毒中和反應(yīng)形式、宿主范圍、囊膜特性及其他標(biāo)準(zhǔn)將其劃分為A-J10個(gè)亞型。目前存在于我國禽白血病病毒感染的有A、B、J亞型，其中主要以J亞型感染為主。該病的傳播方式有兩種：經(jīng)卵由母雞傳給子代雞的垂直傳播和雞與雞之間的直接或間接接觸的水平傳播[4]。垂直傳播途徑則可通過種群凈化的方式來解決。其主要原則是阻斷病毒從親代到子代的垂直傳播。禽白血病病毒可通過糞便污染場地、飼料、飲水及其他用具進(jìn)行水平傳播，搞好雞群的環(huán)境衛(wèi)生、加強(qiáng)雞場的日常管理，是防止禽白血病的中心環(huán)節(jié)。

近年來，我國對(duì)活禽市場AL的防控沒有得到足夠的重視。國內(nèi)外學(xué)者對(duì)ALV-J的研究比較深入(分子病原學(xué)調(diào)查為主)，但野生鳥類中ALV分子病原學(xué)調(diào)查的數(shù)據(jù)很少[5]。已有文獻(xiàn)報(bào)道我國東北地區(qū)死亡的野生鳥類中存在ALV-J[6]。一旦野生鳥類感染了ALV后到雞場去覓食，將病毒傳播到雞場，從而引起雞的發(fā)病，因此杜絕野生鳥類到雞場覓食是減少ALV感染發(fā)病的措施之一。

[1] 喬彩霞, 關(guān)云濤, 陳洪巖. 禽白血病研究進(jìn)展[J]. 動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展, 2003, 24(6)∶18-21.

[2] B.W, 卡爾尼克. 高福等譯. 禽病學(xué)(第10版)[M]. 北京∶ 中國農(nóng)業(yè)出版社, 1999∶ 529.

[3] 辛朝安. 禽病學(xué)[M]. 北京∶ 中國農(nóng)業(yè)出版社, 2003∶ 114.

[4] 蔡麗婭, 秦愛建. 我國禽白血病病毒生物學(xué)特點(diǎn)及其控制[J]. 中國獸藥雜志. 2009, 43(11)∶ 46-48.

[5] 楊樹青, 贠魯祥, 王麗媛等. 2015～2016年江蘇鹽城地區(qū)市場活禽與野生鳥類中J亞型禽白血病分子病原學(xué)調(diào)查[J]. 中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào), 2016, 38(9)∶ 748-750.

[6] 李德龍, 高玉龍, 曾祥偉等. 東北地區(qū)野生鳥類J 亞群禽白血病分子流行病學(xué)調(diào)查及部分基因組序列分析[J]. 畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào), 2013, 44(3)∶ 488-494.

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1007-1733(2017)06-0012-01

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