蛋白質(zhì)組學(xué)在中醫(yī)證候?qū)W研究中的應(yīng)用進(jìn)展

王新賢 殷海波 姜 泉 焦 娟

(中國中醫(yī)科學(xué)院廣安門醫(yī)院，北京，100053)

綜 述

蛋白質(zhì)組學(xué)在中醫(yī)證候?qū)W研究中的應(yīng)用進(jìn)展

王新賢 殷海波 姜 泉 焦 娟

(中國中醫(yī)科學(xué)院廣安門醫(yī)院，北京，100053)

對中醫(yī)證候微觀物質(zhì)基礎(chǔ)的研究是中醫(yī)學(xué)現(xiàn)代化研究的重要方面，“證”的整體性、模糊性、動(dòng)態(tài)性、差異性、復(fù)雜性的特點(diǎn)，又使得中醫(yī)“證”通過現(xiàn)代實(shí)驗(yàn)室檢查所得到的單一理化指標(biāo)缺乏足夠的特異性。以蛋白質(zhì)組學(xué)為代表的系統(tǒng)生物學(xué)技術(shù)的出現(xiàn)使現(xiàn)代醫(yī)學(xué)由還原論思維走向了整體思維，也使得中醫(yī)的理念有了數(shù)理化的可能。蛋白質(zhì)組學(xué)在中醫(yī)學(xué)證候的研究中取得了一系列的進(jìn)展，在動(dòng)物證候模型及中醫(yī)“病證結(jié)合”的研究中的得到了廣泛的應(yīng)用，為中醫(yī)證候?qū)W的研究提供了大量的研究數(shù)據(jù)及廣闊的視野。

證候；蛋白質(zhì)組學(xué)；中醫(yī)學(xué)；病證結(jié)合

《臨證指南醫(yī)案》言：“醫(yī)道在乎識證、立法、用方，此為三大關(guān)鍵，一有草率，不堪司命。然三者之中，識證萬為要緊”，證是中醫(yī)學(xué)認(rèn)識人體、疾病特有的一種形式，識證對于我們臨床診病至關(guān)重要。

1 中醫(yī)證候的含義

“證”字，在古代為“證”，《說文解字》解：“告也”，原有“告發(fā)”之意。1915年出版的《中華大字典》共收錄8項(xiàng)“證”的含義：告也，驗(yàn)也，驗(yàn)也，諫也，則也，候也、質(zhì)也，病證也。在中醫(yī)學(xué)中，證有患者向醫(yī)生訴說疾病病情之意。“證”字在《黃帝內(nèi)經(jīng)》中僅見于《素問·至真要大論》:“病有遠(yuǎn)近,證有中外”,證是指征象、病狀。而“證”字在《傷寒論》398條條文中出現(xiàn)有34次之多[1]，《傷寒論》中的113首處方都是“證以方名，方由證立，方證一體，有是證必有是方”，對于《傷寒論》中證的含義的理解，著名醫(yī)家劉渡舟[2]言:“《傷寒論》的證,又叫‘證候’,乃是反映疾病各種痛癢的一個(gè)客觀‘驗(yàn)證’。證有客觀的規(guī)律性,又有其特殊性,它有可供人分析研究、綜合歸納等諸多妙用。”“候”字，《說文解字》解“伺望也”。清·段玉裁在《說文解字注》中言“凡覷伺皆曰候”，故而其本意是指等待、觀望，迎接客人的到來。在中醫(yī)學(xué)中，“候”可以用來引申為醫(yī)生通過望、聞、切診，診察到的患者的癥狀及其疾病變化的過程?！端貑枴ち?jié)藏象論》：中講到“五日謂之候，三候謂之氣，六氣謂之時(shí)，四時(shí)謂之歲”，而在《素問·五運(yùn)行大論》：中言“夫候之所始，道之所生，不可不通也”，結(jié)合兩句話，可以看出候與時(shí)間相關(guān)，寓有變化之意。證候兩字共用，可見于王叔和《脈經(jīng)·序》:“聲色證候，靡不賅備”，其中證候有癥狀之意，而晉葛洪在《肘后方》中說:“其論諸病證候……”也是指疾病的臨床表現(xiàn)。至后世醫(yī)家，在中醫(yī)學(xué)發(fā)展過程中證與證候多相互引用、相互交叉，貫穿始終。

2 中醫(yī)證候的現(xiàn)代化研究

自上世紀(jì)50年代任應(yīng)秋提出“辨證論治”的概念，將其確立為中醫(yī)學(xué)的兩大基本特色之一以來，中醫(yī)對證候的研究逐漸多樣化，隨著現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的引入與發(fā)展，更是呈現(xiàn)出了百家爭鳴的征象。對于證、證候的深層次的含義的解釋也造成了一定程度上的分歧。國家標(biāo)準(zhǔn)《中醫(yī)臨床診療術(shù)語》中對“證”的定義為：“證”是中醫(yī)學(xué)特有的概念,是對疾病所處一定階段的病因、病位與病性等所作的概括?！吨袊t(yī)學(xué)百科·中醫(yī)學(xué)》則指出：“證是‘綜合分析了各種癥狀和體征,對于疾病處于一定階段的病因、病位、病變性質(zhì)以及邪正雙方力量對比各方面情況的病理概括’”。證的實(shí)質(zhì)是對疾病本質(zhì)的概括，而對于“證”與“證候”的互稱，對此有2種觀點(diǎn)，一種認(rèn)為“證”是“證候”的簡稱，二者有著相同的內(nèi)涵；另一種則認(rèn)為證候是每個(gè)證的外在表現(xiàn)，即證所表現(xiàn)出的具有內(nèi)在聯(lián)系的癥狀和體征。

沈自尹等20世紀(jì)50年代開始從分子水平對腎陽虛證本質(zhì)進(jìn)行研究始，中醫(yī)學(xué)的“證”開始了通過現(xiàn)代醫(yī)學(xué)手段探尋物質(zhì)基礎(chǔ)的道路，從現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的眼光去審視中醫(yī)成為中醫(yī)科研的一個(gè)主要研究方法，對中醫(yī)證的規(guī)范化和客觀化也提上日程，對于“證”的理解在一定程度上也結(jié)合了現(xiàn)代科學(xué)的色彩。如申維璽教授[3]認(rèn)為證的發(fā)病學(xué)機(jī)理是由于細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)紊亂所導(dǎo)致的，并提出中醫(yī)證的本質(zhì)是細(xì)胞因子，而其發(fā)病機(jī)理是細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)紊亂的結(jié)果。中醫(yī)學(xué)科學(xué)研究對于“證”的客觀物質(zhì)基礎(chǔ)的探尋是一種中醫(yī)客觀化的努力，也是一種中醫(yī)學(xué)與現(xiàn)代醫(yī)學(xué)相互聯(lián)系的嘗試。中醫(yī)學(xué)的理念天生不以數(shù)理邏輯作為研究自然人體的方式，《素問·陰陽離合論》曰：“夫陰陽者，數(shù)之可十，推之可百，數(shù)之可千，推之可萬。天地陰陽者，不以數(shù)推，以象之謂也”，意象思維是中醫(yī)學(xué)臨床診病的根本手段，無論是藏象、氣血還是風(fēng)、寒、暑、濕、燥、火，都是意象思維的產(chǎn)物，這種模式具有形象化的特點(diǎn)，恰與現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的數(shù)理化思維模式相向去遠(yuǎn)。中醫(yī)學(xué)的“證”是人體病理狀態(tài)的反應(yīng)，“證”的整體性、模糊性、動(dòng)態(tài)性、差異性、復(fù)雜性的特點(diǎn)，又使得中醫(yī)“證”通過現(xiàn)代實(shí)驗(yàn)室檢查所得到的單一理化指標(biāo)缺乏足夠的特異性。如何將中醫(yī)理論客觀量化一直是中醫(yī)與現(xiàn)代醫(yī)學(xué)結(jié)合的一個(gè)巨大障礙，也是中醫(yī)學(xué)進(jìn)入新的發(fā)展時(shí)期以來所面臨的一個(gè)瓶頸。

3 蛋白質(zhì)組學(xué)與中醫(yī)證候的關(guān)系

以蛋白質(zhì)組學(xué)為代表的系統(tǒng)生物學(xué)技術(shù)的出現(xiàn)使現(xiàn)代醫(yī)學(xué)由還原論思維走向了整體思維，也使得中醫(yī)的理念有了數(shù)理化的可能。1994年澳大利亞學(xué)者Wilkinst和Williams[4]在意大利召開的雙向電泳會(huì)議上首次提出了蛋白質(zhì)組學(xué)的概念(Proteome)，將其闡述為“一個(gè)基因組所表達(dá)的蛋白質(zhì)”，于1996年他們又進(jìn)一步完善這個(gè)概念，將其表達(dá)為“在一定條件下，在某一個(gè)生命體系中由基因組編碼的全部蛋白質(zhì)，即某一物種、個(gè)體、器官、組織乃至細(xì)胞的全部蛋白質(zhì)”。蛋白質(zhì)組學(xué)的整體性、復(fù)雜性、動(dòng)態(tài)性、信息化的特點(diǎn)和中醫(yī)學(xué)的理念不謀而合。陳竺院士于2005年曾提出“中醫(yī)強(qiáng)調(diào)整體論，西醫(yī)則強(qiáng)調(diào)還原論，所以多年來許多學(xué)者認(rèn)為兩者格格不入，但事實(shí)證明，到了系統(tǒng)生物學(xué)時(shí)代，他們找到了共同語言”，中醫(yī)證候?qū)W與蛋白質(zhì)組學(xué)兩者以都以整體為研究對象。中醫(yī)學(xué)的證候是人體病理狀態(tài)的整體表現(xiàn)，是人體陰陽、氣血、臟腑之間相互作用、相互聯(lián)系的結(jié)果。蛋白質(zhì)組學(xué)是以一個(gè)細(xì)胞、組織、器官的全部蛋白質(zhì)為研究對象，蛋白質(zhì)是生命活動(dòng)功能的執(zhí)行者，其含量、結(jié)構(gòu)、功能決定著機(jī)體的功能狀態(tài)。兩者都是動(dòng)態(tài)的開放的，中醫(yī)學(xué)的證隨著機(jī)體的狀態(tài)的改變而發(fā)生變化，并受外界環(huán)境的影響。蛋白質(zhì)同樣隨著機(jī)體的狀態(tài)的改變而發(fā)生著分解合成代謝，蛋白質(zhì)的代謝是自身基因與外界環(huán)境改變共同作用的結(jié)果。蛋白質(zhì)的總體的組成變化是否可以反映中醫(yī)證的本質(zhì)是中西醫(yī)溝通的一個(gè)交匯點(diǎn)。隨著蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)的進(jìn)步，蛋白質(zhì)組學(xué)在中醫(yī)學(xué)證候的研究中取得了一系列的進(jìn)展。

4 蛋白質(zhì)組學(xué)在證候動(dòng)物模型研究中的進(jìn)展

現(xiàn)代醫(yī)家通過建立中醫(yī)學(xué)“證”的動(dòng)物模型，結(jié)合蛋白質(zhì)組學(xué)的技術(shù)手段，以此來探討中醫(yī)證的蛋白質(zhì)表達(dá)差異，從面構(gòu)建臨床辨證的理化模型，對蛋白質(zhì)組學(xué)在辨證中的應(yīng)用起到了一定程度指引作用。呂凌[5]等采用勞倦過度、飲食不節(jié)與藥物損傷相結(jié)合的方法構(gòu)建了脾陽虛、脾陰虛大鼠模型，通過雙向電泳法和質(zhì)譜分析相結(jié)合的技術(shù)手段，尋找出脾陽虛證模型回腸組織12個(gè)異常蛋白點(diǎn)，脾陰虛證7個(gè)異常蛋白點(diǎn)表達(dá)，并分析得出結(jié)論脾陽虛證或與細(xì)胞骨架損傷和糖代謝異常關(guān)系更為密切，而脾陰虛證則與過氧化損傷有著更為密切的關(guān)系。于漫等[6]以飲食不節(jié)、勞倦過度及苦寒傷陽聯(lián)合應(yīng)用建立了脾陽虛大鼠模型，以雙向凝膠電泳和MALDI串聯(lián)飛行時(shí)間質(zhì)譜尋找脾陽虛證差異蛋白，發(fā)現(xiàn)差異表達(dá)蛋白質(zhì)共有8個(gè)，涉及到細(xì)胞骨架、能量代謝及信號轉(zhuǎn)導(dǎo)等多方面，其中有4個(gè)蛋白表達(dá)上調(diào)分別是：結(jié)蛋白、角蛋白8、丙酮酸激酶、埃茲蛋白；4個(gè)表達(dá)下調(diào)蛋白分別為:甘油醛三磷酸脫氫酶、角蛋白19、角蛋白1、肌動(dòng)蛋白。并認(rèn)為機(jī)體在脾陽虛證狀態(tài)下能量的代謝速率較正常情況減慢，并且能量生成減少，回腸絨毛蛋白結(jié)構(gòu)發(fā)生變化及消化吸收功能減弱?？道A[7]等通過分析溫陽補(bǔ)腎藥物對激素依賴性腎陽虛動(dòng)物對肝線粒體蛋白質(zhì)組的影響，共分離模型動(dòng)物組肝線粒體差異蛋白質(zhì)共16個(gè)，其中11個(gè)蛋白質(zhì)得到了鑒定，提示腎陽虛動(dòng)物熱休克蛋白60及70含量增加，可能與其能保護(hù)應(yīng)激狀態(tài)下的細(xì)胞存活及保護(hù)細(xì)胞免受損傷的作用特點(diǎn)相關(guān)；腎陽虛動(dòng)物的糖代謝和脂類代謝功能都較正常組降低，而蛋白質(zhì)代謝及核酸代謝卻表達(dá)增高，具體則表現(xiàn)為二氫硫辛酰胺脫氫酶和脂酰輔酶A脫氫酶活性降低，肌氨酸脫氫酶、氨甲酰磷酸合成酶及亞硫酸氧化酶活性增高；其分析腎陽虛的臨床癥狀可能是因?yàn)槿人嵫h(huán)和脂肪酸B-氧化功能障礙，導(dǎo)致的ATP合酶、醛脫氫酶和NADH脫氫酶活性代償性增加，雖然腎陽虛動(dòng)物機(jī)體試圖通過增加ATP產(chǎn)量以緩解能量代謝不足的現(xiàn)狀，但由于因鳥氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶活性的降低從而導(dǎo)致了肌酸合成降低，使能量的儲存大大減少，產(chǎn)生的ATP卻大部分被通過熱量的形式消耗掉。鐘小蘭[8]等以二維凝膠電泳結(jié)合基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時(shí)間質(zhì)譜，通過分析肝郁證模型大鼠血清差異蛋白質(zhì)表達(dá)，發(fā)現(xiàn)9個(gè)有明顯表達(dá)差異的蛋白質(zhì)斑點(diǎn)，其中6個(gè)得到鑒定分別為：轉(zhuǎn)甲狀腺素蛋白、水解酶Bal-647、血清白蛋白前體、抗乙酰膽堿受體抗體Fab片段，Igλ-2鏈C區(qū)和β1球蛋白，涉及免疫、神經(jīng)內(nèi)分泌和營養(yǎng)物質(zhì)代謝等多個(gè)方面。苗蘭[9]等利用二維凝膠電泳結(jié)合質(zhì)譜技術(shù)鑒定氣虛血瘀證大鼠血清蛋白質(zhì)表達(dá)譜改變情況，發(fā)現(xiàn)氣虛血瘀證大鼠血清與正常大鼠比較結(jié)合珠蛋白、補(bǔ)體C3、ZN-α-2-糖蛋白、免疫球蛋白λ輕鏈表達(dá)升高，而CD5抗原樣蛋白則表達(dá)降低。

5 蛋白質(zhì)組學(xué)在“病證結(jié)合”模式中的研究進(jìn)展

目前“病證結(jié)合”的模式已經(jīng)成為了中醫(yī)臨床診療的重要手段，“病證結(jié)合”的模式早在《傷寒雜病論》中就有所體現(xiàn)，其治療思想均是在辨六經(jīng)病的基礎(chǔ)上進(jìn)一步辨證。隨著現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對疾病的深入認(rèn)識，對于病的命名也更為的精確化、客觀化，病的含義更趨向于西醫(yī)學(xué)的命名，這對于中醫(yī)學(xué)的意義在于，可以更好的判斷疾病的病情、與預(yù)后，使臨床診療更加直觀化，使辨證有的放矢。而對于“病證結(jié)合”模式的標(biāo)準(zhǔn)化、客觀化同樣是中醫(yī)現(xiàn)代化的一個(gè)議題，在以疾病為主的大框架下，探討不同證型的客觀化指標(biāo)是一個(gè)基本的思路，蛋白質(zhì)組學(xué)的應(yīng)用，使“證”整體觀在物質(zhì)層面得以直觀體現(xiàn)，取得了一系列進(jìn)展。

5.1 心血管疾病 對于高血壓病的研究，胡元會(huì)[10]以蛋白質(zhì)芯片技術(shù)尋找高血壓病肝膽濕熱證、痰濕壅盛證、陰虛陽亢證差異蛋白表達(dá)譜，并建立診斷模型，結(jié)果顯示，肝膽濕熱證與痰濕壅盛證比較有46個(gè)差異蛋白質(zhì)峰；肝膽濕熱證與陰虛陽亢證比較有72個(gè)差異蛋白質(zhì)峰；痰濕壅盛證與陰虛陽亢證組比較有22個(gè)差異蛋白質(zhì)峰表達(dá)。通過Biomarker Patterns Software軟件分析肝膽濕熱證最佳標(biāo)志物結(jié)果顯示m/z為2 487.19，9 334.95，2 238.14，6 624.36，5 903.54的5個(gè)蛋白質(zhì)峰。該模型的敏感性為86.667%，特異性為96.552%。痰濕壅盛證的標(biāo)志物m/z為3 161.26,7 922.98,7 555.76,8 030.79,3 936.31的5個(gè)蛋白峰,該模型敏感性為96.552%，特異性為83.333%。楊波等[11]研究高血壓患者急性期肝陽化風(fēng)證、恢復(fù)期陰虛風(fēng)動(dòng)證外周血單個(gè)核細(xì)胞的蛋白質(zhì)差異變化，以雙向凝膠電泳分離外周血單個(gè)核細(xì)胞蛋白質(zhì)，并結(jié)合MALDI-TOF-MS質(zhì)譜分析，獲得了重復(fù)性好的蛋白質(zhì)圖譜，經(jīng)鑒定肌動(dòng)蛋白、假想蛋白、纖維蛋白原α鏈前體為差異蛋白，其中肌動(dòng)蛋白在腦出血肝陽化風(fēng)證組，陰虛風(fēng)動(dòng)證組均較對照組表達(dá)均明顯下調(diào)，而陰虛風(fēng)動(dòng)證組較之肝陽化風(fēng)證組又表達(dá)下調(diào)，纖維蛋白原α鏈前體則在腦出血肝陽化風(fēng)證組處于表達(dá)上調(diào)狀態(tài)，而在陰虛風(fēng)動(dòng)組表達(dá)下調(diào)。

對于冠心病的研究，朱明丹等應(yīng)用熒光差異凝膠電泳和電噴霧質(zhì)譜法對冠心病四個(gè)主要證型心氣虛弱證、心腎陰虛證、痰濁內(nèi)阻證、心血瘀阻證進(jìn)行蛋白質(zhì)組學(xué)的研究，發(fā)現(xiàn)凝血酶原、α2巨球蛋白、膜聯(lián)蛋白A5、補(bǔ)體C3、甘露糖結(jié)合蛋白C、載脂蛋白A1，載脂蛋白E、載脂蛋白H，活化T細(xì)胞核因子5亞型b等差異蛋白的表達(dá)，這些差異蛋白涉及凝血系統(tǒng)、激肽釋放酶-激肽系統(tǒng)、補(bǔ)體系統(tǒng)、脂代謝系統(tǒng)、Wnt途徑、凋亡系統(tǒng)等多方面。王剛等分析冠心病心血瘀阻和心腎陰虛證患者血漿蛋白質(zhì)差異表達(dá)情況，應(yīng)用熒光差異蛋白電泳與MALDI-TOF技術(shù)相結(jié)合發(fā)現(xiàn)10種差異表達(dá)蛋白，其中7種差異蛋白質(zhì)表達(dá)上調(diào)，有3種表達(dá)下調(diào)，涉及補(bǔ)體、凝血級聯(lián)通路、阿爾茲海默癥信號通路，說明冠心病心腎陰虛證與阿爾茲海默癥信號通路具有相關(guān)性。崔佩佩等[12]研究冠心病痰濁內(nèi)阻證和心氣虛弱證患者血清中差異蛋白的表達(dá)，通過差異凝膠電泳結(jié)合電噴霧質(zhì)譜技術(shù)發(fā)現(xiàn)，所分離的差異表達(dá)的蛋白參與體內(nèi)的血液連鎖反應(yīng)系、磷酸戊糖途徑、糖酵解和半乳糖代謝通路，從而可對2個(gè)證候進(jìn)行區(qū)分。在痰濁內(nèi)阻證中參與血液連鎖反應(yīng)系和脂類代謝的差異蛋白表達(dá)明顯升高，而心氣虛弱證參與能量代謝的蛋白表達(dá)明顯增高，這提示痰濁內(nèi)阻證的血瘀程度、脂類代謝紊亂程度和新陳代謝水平均要高于心氣虛證。

5.2 腎臟疾病 在腎臟疾病的研究中，劉垠浩等[13]應(yīng)用表面加強(qiáng)激光解析電離-飛行時(shí)間-質(zhì)譜技術(shù)對IgA腎病濕熱證患者進(jìn)行血清蛋白質(zhì)組學(xué)指紋圖譜檢測，發(fā)現(xiàn)IgA腎病組濕熱證與非濕熱證之間有7個(gè)蛋白質(zhì)峰有顯著差異；IgA腎病濕熱證與非IgA腎病濕熱證之間有4個(gè)差異蛋白峰；IgA腎病濕熱證與健康組之間有5個(gè)差異蛋白峰。綜合分析，m/z為4 987.92的Beta-defensin 33蛋白可能是IgA腎病濕熱證的特異血清蛋白標(biāo)志物，并篩選以m/z為1 092.71等11個(gè)蛋白峰組成的證候決策模型，該模型敏感性為92.86%,特異性為87.50%。程小燕[14]以雙向電泳技術(shù)分離氣陰兩虛型IgA腎病患者與正常人血清algA1刺激腎系膜細(xì)胞的蛋白質(zhì)，尋找差異蛋白點(diǎn)，進(jìn)行質(zhì)譜分析，獲得肽質(zhì)量指紋圖譜，結(jié)果為：IgA腎病組和正常組比較有22個(gè)差異蛋白點(diǎn)，其中8個(gè)僅見于IgA腎病組，6個(gè)僅見于正常組。經(jīng)質(zhì)譜分析共篩選8種有明確功能的蛋白質(zhì)，分別為信號轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白、熱休克蛋白、纖連蛋白、半乳糖凝集素以及代謝酶類，并鑒定了1種未知功能蛋白，4種無意義蛋白，其中熱休克蛋白、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白及未知蛋白僅表達(dá)于氣陰兩虛型IgA腎病組，纖連蛋白及半乳糖凝集素表達(dá)于正常組。鐘云良[15]探討中醫(yī)腎病綜合征濕熱證的內(nèi)涵，其以雙向電泳分析原發(fā)性腎病綜合征濕熱證與非濕熱證及健康組差異蛋白，再以質(zhì)譜技術(shù)進(jìn)行差異蛋白鑒定，發(fā)現(xiàn)載脂蛋白C-Ⅲ和α2-HS-糖蛋白可以作為原發(fā)性腎病綜合征濕熱證的特異性表達(dá)蛋白。

5.3 肺臟疾病 管艷等[16-17]利用雙向熒光差異凝膠電泳技術(shù)與基質(zhì)輔助激光解吸電離-飛行時(shí)間質(zhì)譜，研究非小細(xì)胞肺癌脾虛痰濕證和其他證型血清蛋白質(zhì)組學(xué)的表達(dá)差異，共分離出6個(gè)表達(dá)差異蛋白，其中CO9和CO4A在脾虛痰濕證組表達(dá)上調(diào)而在肺郁痰瘀證組下調(diào)，ITIH4、RLA2、A1AT和LHX5在脾虛痰濕證組表達(dá)下調(diào)而在肺郁痰瘀證組上調(diào)。而CO9、CO4A、ITIH4和A1AT參與了補(bǔ)體激活、蛋白水解催化活性的調(diào)節(jié)。劉姬艷[18]篩選肺結(jié)核病肺陰虛證、陰虛火旺證及氣陰兩虛證蛋白標(biāo)志物，建立診斷模型。其采用WCX磁珠結(jié)合SELDI-TOF-MS技術(shù)建立血清蛋白指紋圖譜，并通過RP-HPLC分離及純化潛在生物學(xué)標(biāo)志物，再應(yīng)用MALDI-TOF-MS和LC-MS/MS進(jìn)行分析鑒定潛在的證候標(biāo)志物蛋白。從而構(gòu)建了5個(gè)蛋白標(biāo)志峰組成的肺結(jié)核中醫(yī)證候蛋白質(zhì)指紋圖譜辨證模型，其分別m/z為3 961.7、4 679.7、5 646.4、8 891.2、9 416.7，對于肺陰虛證準(zhǔn)確率為74.0%，對于陰虛火旺證準(zhǔn)確率為72.5%，而氣陰兩虛證的準(zhǔn)確率為96.7%。

5.4 肝臟疾病 在慢性乙型肝炎的研究中，王磊瓊等[19]結(jié)合雙向凝膠電泳與質(zhì)譜技術(shù)分析了慢性乙肝虛證的蛋白質(zhì)表達(dá)，鑒定出3個(gè)下調(diào)的蛋白質(zhì)點(diǎn)，分別為載脂蛋白A2和2個(gè)結(jié)合珠蛋白，從而推測此蛋白質(zhì)變化可能與慢性乙肝各中醫(yī)虛型證型的形成機(jī)制有關(guān)。劉友平等[20]采用雙向電泳技術(shù)結(jié)合質(zhì)譜分析等生物信息學(xué)分析方法對慢性乙型肝炎肝腎陰虛證及正常健康人血漿蛋白進(jìn)行比較分析，獲得6個(gè)差異蛋白點(diǎn)，其中有明顯規(guī)律變化的差異蛋白質(zhì)有4個(gè):載脂蛋白AⅠ、載脂蛋白AⅡ、結(jié)合珠蛋白HPT、視黃醇結(jié)合蛋白RBP。戴幸平等[21]利用二維凝膠電泳結(jié)合MALDI-TOF-MS技術(shù)分析慢性乙肝肝膽濕熱型組與正常人單個(gè)核細(xì)胞蛋白表達(dá)譜,鑒定出相關(guān)蛋白約11個(gè),蛋白質(zhì)主要涉及與細(xì)胞骨架形成蛋白及血小板分泌蛋白。魏媚等[22]采用雙向凝膠電泳技術(shù)結(jié)合質(zhì)譜分析，探討慢性乙型肝炎濕熱中阻證本質(zhì)，發(fā)現(xiàn)8個(gè)差異表達(dá)蛋白點(diǎn)存在明顯的規(guī)律變化，通過鑒定得到7個(gè)蛋白點(diǎn)，包括載脂蛋白C2、玻連蛋白、結(jié)合珠蛋白、甲狀腺素結(jié)合蛋白、載脂蛋白A1、血清淀粉蛋白P、載脂蛋白A4，與健康對照組比較載脂蛋白A1、載脂蛋白A4表達(dá)升高，其余5個(gè)蛋白點(diǎn)表達(dá)下調(diào)。認(rèn)為載脂蛋白A1、載脂蛋白A4具有作為慢性乙肝濕熱中阻證生物學(xué)標(biāo)志物的價(jià)值。

5.5 風(fēng)濕免疫性疾病 孫志嶺等[23-24]結(jié)合雙向凝膠電泳技術(shù)與基質(zhì)輔助激光解吸飛行時(shí)間質(zhì)譜進(jìn)行了RA中醫(yī)證候?qū)W研究，其將RA濕熱痹阻證與肝腎陰虛證及正常對照組比較，共得到濕熱痹阻證差異蛋白9個(gè)，包括細(xì)胞周期調(diào)控蛋白、分泌多肽、泛素-蛋白酶體系統(tǒng)蛋白、膜蛋白質(zhì)類、運(yùn)輸?shù)鞍椎?。其課題組同樣將肝腎陰虛與寒濕痹阻證進(jìn)行對照分析，得到10個(gè)差異蛋白點(diǎn)，經(jīng)分析得到6個(gè)肝腎陰虛證差異蛋白，包括蛋白酶抑制劑、代謝相關(guān)酶蛋白、分泌多肽、運(yùn)輸?shù)鞍椎取疂癖宰璧姆治龅玫?個(gè)差異蛋白質(zhì),其中4.1蛋白、DLC-1蛋白等與細(xì)胞增殖和細(xì)胞分化相關(guān)蛋白具有作為RA寒濕痹阻證的生物標(biāo)志物的潛在價(jià)值。孫志嶺等[25-26]同樣對強(qiáng)直性脊柱炎濕熱痹阻證及寒濕痹阻證生物學(xué)標(biāo)志物進(jìn)行了探索，通過雙向凝膠電泳技術(shù)與基質(zhì)輔助激光解吸飛行時(shí)間質(zhì)譜，獲得7個(gè)濕熱痹阻證的差異蛋白點(diǎn)，經(jīng)數(shù)據(jù)庫檢索確定其中5個(gè)蛋白質(zhì)，分別為Fibulin-1、二肽基肽酶1，激肽原1、白細(xì)胞介素17F突變型、甘露糖結(jié)合蛋白C，涉及胞外基質(zhì)蛋白、蛋白酶類、凝血因子、細(xì)胞因子、轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白等。同時(shí)獲得寒濕痹阻差異蛋白5個(gè)，分別為聚腺苷二磷酸核糖聚合酶1、弗林蛋白酶、血管內(nèi)皮鈣黏蛋白、激肽原1、血管緊張素原。在系統(tǒng)性紅斑狼瘡的研究中，李顯紅等[27]利用蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)研究熱毒熾盛型和脾腎陽虛型狼瘡性腎炎與正常人之間的蛋白質(zhì)差異,以狼瘡性腎炎患者熱毒熾盛型與脾腎陽虛型比較，得到蛋白差異點(diǎn)5個(gè),在熱毒熾盛型處于高表達(dá)的蛋白質(zhì)是Ig uchain C和間α-胰蛋白酶抑制因子重鏈H4；在脾腎陽虛型處于高表達(dá)的蛋白質(zhì)是細(xì)胞角蛋白-10。狼瘡性腎炎與正常人比較差異蛋白點(diǎn)共有4個(gè)，在狼瘡性腎炎表達(dá)增高的是α1-抗胰蛋白酶和α1-抗糜蛋白酶，正常人中則高表達(dá)二硫鍵異構(gòu)酶A6蛋白。

6 展望

中醫(yī)學(xué)的“證”是中醫(yī)藥臨床診治的核心要素，中醫(yī)藥的客觀化、規(guī)范化在一定程度上首先要做到對于“證”的物理化，這不僅是中醫(yī)學(xué)與現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的結(jié)合，更是系統(tǒng)論與還原論的結(jié)合，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)已經(jīng)由實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)逐步邁向生物醫(yī)學(xué)與系統(tǒng)醫(yī)學(xué)，新的技術(shù)手段的出現(xiàn)、新的醫(yī)學(xué)理念的更新不僅對于西醫(yī)學(xué)是一種偉大的革新，對于中醫(yī)學(xué)也是一次機(jī)遇，更是一次挑戰(zhàn)一次洗禮。蛋白質(zhì)組學(xué)從一定程度上講為中醫(yī)學(xué)打開生物密碼提供了新的手段，但是蛋白質(zhì)組也僅僅是一種不完全的整體理念，僅僅是蛋白質(zhì)的整體，它無法將整個(gè)生物體的所有的改變從蛋白質(zhì)的改變一一呈現(xiàn)，某個(gè)細(xì)胞或者組織的整體也只是局部的整體；中醫(yī)學(xué)的“證”自帶的宏觀氣質(zhì)、瞬息萬變的動(dòng)態(tài)性、證型間相互交叉的復(fù)雜性又為我們的實(shí)驗(yàn)研究帶來了許多現(xiàn)實(shí)中的困難，臨床中我們不易覓得純粹單一的證型，而動(dòng)物實(shí)驗(yàn)卻又避免不了動(dòng)物與人體的差異性以及人造證型的不可靠性。我們會(huì)發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)室中所得的數(shù)據(jù)從不同的實(shí)驗(yàn)室中很難得到完全一致的重復(fù)。然而中醫(yī)學(xué)的現(xiàn)代化需要進(jìn)一步的探索，作為一種新的技術(shù)手段，隨著大量研究的深入，蛋白質(zhì)組學(xué)必將為我們積累大量的數(shù)據(jù)，局部的整體結(jié)合起來，這些數(shù)據(jù)的集合將為我們認(rèn)識中醫(yī)提供開闊的視野。

[1]閔范忠，管金芳.《傷寒論》中“證”的涵義[J].河南中醫(yī),2009,29(4):318.

[2]劉渡舟.方證相對論[J].北京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),1996,19(1):3.

[3]申維璽,孫燕.中醫(yī)證的本質(zhì)是細(xì)胞內(nèi)基因表達(dá)調(diào)控異常產(chǎn)生的細(xì)胞因子[J].河北中西醫(yī)結(jié)合雜志,1998,7(7):1-3.

[4]Pandey A，Mann M.Proteomics to study genes and genomics[J].Nature，2000,405(6788):837-846.

[5]呂凌,賈連群,馬巍,等.蛋白質(zhì)組學(xué)在脾虛大鼠陰陽辨證中的應(yīng)用研究[J].中華中醫(yī)藥雜志,2014,29(12):4002-4005.

[6]于漫,呂凌,王彩霞,等.脾陽虛證模型大鼠回腸的比較蛋白質(zhì)組學(xué)探析[J].中國中西醫(yī)結(jié)合雜志,2013,33(1):71.

[7]唐利華,沃興德,盧德趙,等.溫補(bǔ)腎陽對激素依賴性腎陽虛動(dòng)物肝線粒體蛋白質(zhì)組影響的研究[J].中華藥學(xué)雜志,2007,42(3):169.

[8]鐘小蘭,呂志平,錢令嘉,等.肝郁證模型大鼠血清蛋白質(zhì)組的差異表達(dá)研究[J].中華中醫(yī)藥雜志,2006,21(7):399.

[9]苗蘭，劉建勛，任建勛,等.氣虛血瘀證模型大鼠血清蛋白質(zhì)組學(xué)初步研究[J].中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志,2009,15(9):42.

[10]胡元會(huì),褚瑜光,吳華琴,等.高血壓病中基不同證候患者血清蛋白質(zhì)組學(xué)研究[A].“全國中醫(yī)藥中青年科技創(chuàng)新與成果展示論壇”論文集[C].北京：中華中醫(yī)藥學(xué)會(huì),2009.

[11]楊波,梁清華,熊新貴,等.高血壓腦出血急性期肝陽化風(fēng)證與恢復(fù)期陰虛風(fēng)動(dòng)證的蛋白質(zhì)組學(xué)比較研究[J].湖南中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),2014,34(10):34.

[12]崔佩佩,朱明丹,姜民,等.痰濁內(nèi)阻及心氣虛弱型冠心病患者的比較蛋白質(zhì)組學(xué)研究[J].中醫(yī)雜志,2011,52(6):75.

[13]劉垠浩,王麗萍.IgA腎病濕熱證的血清蛋白質(zhì)組學(xué)研究[J].中醫(yī)臨床研究，2014,6(14):7.

[14]程小燕.氣陰兩虛型IgA腎病患者的腎系膜細(xì)胞的蛋白質(zhì)組學(xué)研究[D].廣州：廣州中醫(yī)藥大學(xué),2010:3-4.

[15]鐘云良,謝桂權(quán).原發(fā)性腎病綜合征濕熱證的蛋白質(zhì)組學(xué)研究[J].中國中西結(jié)合腎病雜志,2011,12(2):150.

[16]管艷，王雄文，劉展華,等.非小細(xì)胞肺癌脾虛痰濕證相關(guān)蛋白持組學(xué)研究[J].中醫(yī)學(xué)報(bào),2015,30(8):1091.

[17]管艷.非小細(xì)胞肺癌脾虛痰濕證與肺郁痰瘀證差異的客觀化研究[D].廣州：廣州中醫(yī)藥大學(xué),2015:1-2.

[18]劉姬艷.基于蛋白組學(xué)的肺結(jié)核病及其中醫(yī)證候血清標(biāo)志物篩選與鑒定[D].杭州：浙江大學(xué),2013:5-6.

[19]王磊瓊,段新科,董寶剛.慢性乙型病毒性肝炎中醫(yī)虛證的蛋白質(zhì)組學(xué)規(guī)律初探[J].光明中醫(yī),2012,27(3):458-459.

[20]劉友平,王磊瓊,郭芳宏,等.慢性乙型肝炎肝腎陰虛證血漿蛋白質(zhì)組學(xué)[J].世界華人消化雜志,2011,19(7):718-722.

[21]戴幸平,戴姣,李家邦,等.慢性乙肝肝膽濕熱證的蛋白質(zhì)組學(xué)及清肝利濕湯的干預(yù)[A].第二十一屆全國中西醫(yī)結(jié)合消化系統(tǒng)疾病學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C].2009:472-477.

[22]魏媚,劉友平,郭芳宏,等.慢性乙型病毒性肝炎濕熱中阻證血漿蛋白質(zhì)組學(xué)分析[J].中國中西醫(yī)結(jié)合雜志2011,31(10):1341-1345.

[23]孫志嶺,王玲,王富強(qiáng),等.類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎肝腎陰虛證血清比較蛋白質(zhì)組學(xué)分析[J].中華中醫(yī)藥雜志,2013,28(10):3079-3081.

[24]孫志嶺,王玲,王富強(qiáng),等.類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎寒濕痹阻證患者血清蛋白組學(xué)分析[J].中國中西醫(yī)結(jié)合雜志,2013,33(7):901-904.

[25]孫志嶺,徐驍,王玲,等.強(qiáng)直性脊柱炎濕熱痹阻證血清差異蛋白組學(xué)研究[J].南京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),2015,31(5):412-415.

[26]王苗苗，王玲，王富強(qiáng),等.強(qiáng)直性脊柱炎寒濕痹阻證血清蛋白質(zhì)組學(xué)研究[J].中國中醫(yī)骨傷科雜志,2015,23(12):9-11.

[27]李顯紅，湯水福.狼瘡性腎炎熱毒熾盛證和脾腎陽虛證的蛋白組學(xué)研究[J].山西中醫(yī),2014,30(2):46-49.

(2017-04-24收稿 責(zé)任編輯：張文婷)

Progress Of TCM Syndrome Research With Proteomics

Wang Xinxian,Yin Haibo, Jiang Quan, Jiao Juan

(GuanganmenHospital,ChinaAcademyofChineseMedicalSciences,Beijing100053,China)

It is a major aspect of modernized research on Traditional Chinese Medicine (TCM) to study the micro substance as the basic for TCM syndrome. On account of the integrality, ambiguity, variability, diversity and complexity of TCM syndrome, single physical and chemical indicators out of modern laboratory cannot embody the meaning of TCM syndrome. The development of systems biology featuring proteomics, brings systematic thinking to modern medicine on the basis of reductionism. Systematic thinking makes it possible to objectify TCM syndrome. It coincides with TCM in the concept of integrality, variability, informatization and complexity. A lot of achievements have been made in the research of TCM syndrome by proteomic technology. The technology has been be widely used in the research of the animal model of the syndrome and combination of disease and syndrome. A mass of data has been accumulated that offers a broad future for the research of TCM syndrome.

Syndrome; Proteomics; Traditional Chinese Medicine; Combination of disease and syndrome

國家自然科學(xué)基金青年項(xiàng)目(81403364)——類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎濕熱瘀阻證敏感蛋白標(biāo)志物篩選及在證候診斷中的應(yīng)用初探

R2-03

A

10.3969/j.issn.1673-7202.2017.08.059