四數(shù)九里香揮發(fā)油對離體蟾蜍坐骨神經(jīng)動作電位的影響*

李旭偉 伏清堯 包煜忠 蔡雪敏 陳珍 張世鵬

(1.川北醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院機(jī)能實(shí)驗(yàn)中心；2.川北醫(yī)學(xué)院麻醉學(xué)系；3.川北醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，四川 南充 637000)

四數(shù)九里香揮發(fā)油對離體蟾蜍坐骨神經(jīng)動作電位的影響*

李旭偉1伏清堯2包煜忠2蔡雪敏2陳珍3張世鵬3

(1.川北醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院機(jī)能實(shí)驗(yàn)中心；2.川北醫(yī)學(xué)院麻醉學(xué)系；3.川北醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，四川 南充 637000)

目的：研究四數(shù)九里香揮發(fā)油對離體蟾蜍坐骨神經(jīng)動作電位的傳導(dǎo)阻滯作用。方法：采用水蒸氣蒸餾法提取四數(shù)九里香揮發(fā)油，觀察四數(shù)九里香揮發(fā)油對離體蟾蜍坐骨神經(jīng)復(fù)合動作電位的振幅和傳導(dǎo)速度的影響。結(jié)果：四數(shù)九里香揮發(fā)油使坐骨神經(jīng)復(fù)合動作電位的振幅變小(P<0.01)，傳導(dǎo)速度變慢(P<0.01)，并最終使坐骨神經(jīng)動作電位消失。結(jié)論：四數(shù)九里香揮發(fā)油能阻滯神經(jīng)動作電位的傳導(dǎo)。

四數(shù)九里香揮發(fā)油；離體坐骨神經(jīng)；復(fù)合動作電位；阻滯

四數(shù)九里香(murrayatetramerahuang)為蕓香科九里香屬植物，以干燥樹葉入藥，全年均可采收。主產(chǎn)于云南、廣西、貴州、福建、臺灣等亞洲熱帶及亞熱帶地區(qū)[1]，其味辛、微苦，性微溫，具有祛風(fēng)解表、行氣、活血散痛、抗炎、解熱之功效[2]，可治胃痛、風(fēng)濕痹痛，外用則可治牙痛、跌撲腫痛、蟲蛇咬傷等[3]?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，九里香具有抗生育和終止妊娠、抗菌、抗甲狀腺腫大、降血糖、麻醉鎮(zhèn)靜及增強(qiáng)免疫功能等作用[4]。相關(guān)研究表明，九里香揮發(fā)油在醋酸致痛小鼠扭體試驗(yàn)(Nakainur的方法)及熱板試驗(yàn)(Edd的方法)中均表現(xiàn)出一定的鎮(zhèn)痛作用，說明其具有一定的外周鎮(zhèn)痛及中樞鎮(zhèn)痛作用[5]。本研究從電生理學(xué)的角度，觀察四數(shù)九里香揮發(fā)油對離體蟾蜍坐骨神經(jīng)動作電位的影響，以進(jìn)一步探討九里香鎮(zhèn)痛作用的可能機(jī)制。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)試劑

任氏液(NaCL6.5g，KCL0.14g，CaCL20.12g，NaHCO30.20g，NaH2PO40.01g)加蒸餾水至1000ml，所用試劑均為化學(xué)純，購自成都市科龍化工試劑廠；四數(shù)九里香揮發(fā)油：四數(shù)九里香購自南充市德勝堂大藥房，水蒸氣蒸餾提取法提取揮發(fā)油(川北醫(yī)學(xué)院藥學(xué)實(shí)驗(yàn)中心制備)[6]，具體如下：取250g四數(shù)九里香，加純水1000ml浸泡30min，用揮發(fā)油提取器加熱提取揮發(fā)油2h，至揮發(fā)油不再增多，停止加熱，冷卻后分液漏斗收集揮發(fā)油2.5ml。

1.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器

BL-420F生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)(四川成都泰盟科技有限公司)；神經(jīng)屏蔽盒(四川成都泰盟科技有限公司)；調(diào)溫電熱套(北京中興偉業(yè)儀器有限公司)；電子天平(沈陽龍騰電子有限公司生產(chǎn))。

1.2 方法

1.2.1 實(shí)驗(yàn)動物分組

中華大蟾蜍12只，雌雄兼用，體重100-110g，由川北醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動物中心提供，隨機(jī)分為2組：任氏液組和四數(shù)九里香揮發(fā)油組，每組6只。

1.2.2 坐骨神經(jīng)標(biāo)本制備

將蟾蜍進(jìn)行稱重，搗毀腦和脊髓，分離坐骨神經(jīng)3～5cm，盡量將神經(jīng)干周圍的組織剔除干凈，神經(jīng)干脊柱端和足端用棉線結(jié)扎，置于任氏液中浸泡孵育5min穩(wěn)定其興奮性[7]。

1.2.3 動作電位引導(dǎo)并記錄

將孵育后的神經(jīng)干慢慢沿培養(yǎng)皿壁取出，瀝干其水分，搭到神經(jīng)屏蔽盒的電極上，測定動作電位振幅和傳導(dǎo)速度。在位于刺激電極與引導(dǎo)電極的神經(jīng)干上分別放置浸濕藥液(任氏液組，四數(shù)九里香揮發(fā)油組)的小棉條，浸潤神經(jīng)干后取出小棉條，用BL-420F生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)每隔1min檢測動作電位相關(guān)值。動作電位速度測定需要測量兩個引導(dǎo)電極之間距離。單個動作電位及傳遞速度測定儀器設(shè)置值：方式，單刺激；延時：5.00ms；波寬：0.05ms；強(qiáng)度：1.00v；頻率：10KHZ；采樣率：1.25ms·div-1[8]。

1.3 數(shù)據(jù)處理

2 結(jié)果

2.1 四數(shù)九里香揮發(fā)油對蟾蜍坐骨神經(jīng)復(fù)合動作電位振幅的影響

隨著四數(shù)九里香揮發(fā)油作用時間的延長，可使坐骨神經(jīng)干復(fù)合動作電位的振幅逐漸變小(P<0.01)，見表1。

2.2 四數(shù)九里香揮發(fā)油對蟾蜍坐骨神經(jīng)復(fù)合動作電位速度的影響

隨著藥物作用時間的延長，可使坐骨神經(jīng)干復(fù)合動作電位的傳導(dǎo)速度逐漸變小(P<0.01)，神經(jīng)傳導(dǎo)速度的改變與神經(jīng)動作電位振幅的改變基本同步，見表2。

3 討論

四數(shù)九里香為蕓香科植物，主要產(chǎn)于廣西的百色、德保和云南東部的硯山、富寧、文山、西疇，常見于石灰?guī)r山頂陽光充足的地方。民間常用于治療感冒、發(fā)熱、支氣管炎、哮喘、風(fēng)濕麻木、筋骨疼痛、跌打瘀血腫痛、胃痛及水腫等，現(xiàn)代中藥學(xué)已研制三九胃泰治療胃痛，將其枝葉醇提取物和精油制成注射劑，用于治療急慢性腎盂腎炎、急性腎小球腎炎、慢性腎炎、肺癌等。

現(xiàn)代藥理學(xué)研究結(jié)果顯示[5]，四數(shù)九里香揮發(fā)油能顯著抑制角叉菜膠致大鼠足腫脹程度和大鼠棉球肉芽組織重量；能顯著減少醋酸引起的小鼠扭體反應(yīng)次數(shù)和延長小鼠熱板痛閾值。實(shí)驗(yàn)研究表明，四數(shù)九里香揮發(fā)油具有顯著的抗炎和鎮(zhèn)痛作用。

表1 四數(shù)九里香揮發(fā)油對蟾蜍坐骨神經(jīng)復(fù)合動作電位振幅的影響±SD，n=6)

注：與任氏液組相比，*P<0.01。

表2 四數(shù)九里香揮發(fā)油對蟾蜍坐骨神經(jīng)動作電位傳導(dǎo)速度的影響±SD，n=6)

注：與任氏液組相比，*P<0.01。

本實(shí)驗(yàn)通過離體實(shí)驗(yàn)方法，觀察了四數(shù)九里香揮發(fā)油對蟾蜍坐骨神經(jīng)復(fù)合動作電位振幅及傳導(dǎo)速度的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明四數(shù)九里香揮發(fā)油對坐骨神經(jīng)動作電位的傳導(dǎo)具有明顯阻滯的作用，提示阻滯神經(jīng)動作電位的傳導(dǎo)是四數(shù)九里香鎮(zhèn)痛作用可能的機(jī)制之一，其分子藥理學(xué)、分子病理學(xué)機(jī)制還有待進(jìn)一步研究。

有關(guān)四數(shù)九里香化學(xué)成分方面的研究較多，龔志強(qiáng)等采用超臨界CO2流體萃取法提取四數(shù)九里香揮發(fā)油鑒定了其中的38種成分，其中相對質(zhì)量分?jǐn)?shù)最高的是薄荷酮(38.17%)、異薄荷酮(12.34%)、胡椒酮(10.90%)和β-水芹烯(9.75%)。水蒸氣蒸餾法提取四數(shù)九里香揮發(fā)油鑒定了其中的33種成分，其中胡椒酮(17.40%)、薄荷酮(20.51%)、異薄荷酮(6.94%)、β-水芹烯(11.59%)、萜品烯(13.38%)。超聲波溶劑萃取法提取四數(shù)九里香揮發(fā)油鑒定了其中的12種成分，其中相對質(zhì)量分?jǐn)?shù)最高的是薄荷酮(43.45%)、異薄荷酮(16.31%)、胡椒酮(9.97%)、側(cè)柏烯(11.40%)、β-水芹烯(9.35%)。因此，四數(shù)九里香有效藥物成分篩選及新藥制劑開發(fā)成為可能熱點(diǎn)之一。

1 中國科學(xué)院中國植物志編輯部委員會. 中國植物志[M]. 北京: 科學(xué)技術(shù)出版社, 1997, 145-146.

2 中華本草編委會. 中華本草[M]. 上海: 上?？茖W(xué)技術(shù)出版社, 1998, 947-948.

3 全國中草藥匯編編寫組. 全國中草藥匯編( 上冊) [M]. 第2版. 北京: 人民衛(wèi)生出版社, 1996, 10-11.

4 張宗禹,韋松,陳安蘭,等. 九里香糖蛋白成分終止孕兔妊娠及其機(jī)理[J]. 中國藥科大學(xué)學(xué)報, 1989, 20(5): 283-286.

5 毛長智,黃蓓,庚志斌. 四數(shù)九里香揮發(fā)油抗炎及鎮(zhèn)痛作用研究[J]. 云南中醫(yī)中藥雜志, 2011, 32(8): 74-75.

6 龔志強(qiáng),談遠(yuǎn)鋒,黃敏,等. 不同方法提取四數(shù)九里香揮發(fā)油氣質(zhì)聯(lián)用分析[J]. 湖南師范大學(xué)自然科學(xué)學(xué)報, 2014, 37(2): 47-50.

7 李旭偉,張俊清,羅露,等. 辣椒堿對離體蟾蜍坐骨神經(jīng)動作電位的影響[J]. 現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生, 2011, 28(7): 979-980.

8 張建武,陳詩渝,林靜,等. 蛇床子提取液對離體蟾蜍坐骨神經(jīng)動作電位的影響[J].四川生理科學(xué)雜志, 2014, 36(2): 58-59.

Effects of essential oil frommurrayatetramerahuangon compound action potential of sciatic nerve of toad*

Li Xu-wei1, Fu Qing-rao2,Bao Yu-zhong2,Cai Xue-min2,Chen Zheng3,Zhang Shi-peng3

(1.Functional Experimental Center of Preclinical Medical School, North Sichuan Medical College; 2.Department of Anaesthesiology, North Sichuan Medical College; 3.School of Pharmacy, North Sichuan Medical College, Sichuan NanChong 637100)

Objective：To study the blockade effect of essential oil frommurrayatetramerahuangonactionpotentialofsciaticnerveoftoad. Methods: The essential oil frommurrayatetramerahuangwasextractedbysteamdistillation.Theeffectsofessentialoilfrommurrayatetramerahuangonamplitudeandconductionvelocityofcompoundactionpotentialofsciaticnerveoftoadwereobservedinvitro. Results: The essential oil frommurrayatetramerahuangcoulddecreasetheamplitude(P<0.01)andslowdowntheconductionvelocity(P<0.01).Theactionpotentialofsciaticnervevanishedatlast. Conclusion:Murrayatetramerahuangcanblocktheconductionofactionpotentialofnerve.

Essential oil frommurrayatetramerahuang;Sciaticnerveoftoadinvitro;Compoundactionpotential;Blockade

川北醫(yī)學(xué)院2016年大學(xué)生開放性實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目(編號：2016-002)

李旭偉，男，講師，主要從事機(jī)能實(shí)驗(yàn)學(xué)教學(xué)及循證醫(yī)學(xué)研究，Email：lxwhi@qq.com。

2016-9-27)