參梅健胃膠囊制備工藝研究

陳衍斌 張曉紅 劉 峰

(1 陜西國(guó)際商貿(mào)學(xué)院，咸陽(yáng)，712000； 2 陜西步長(zhǎng)制藥有限公司，西安，710075)

參梅健胃膠囊制備工藝研究

陳衍斌1,2張曉紅2劉 峰1,2

(1 陜西國(guó)際商貿(mào)學(xué)院，咸陽(yáng)，712000； 2 陜西步長(zhǎng)制藥有限公司，西安，710075)

目的：對(duì)參梅健胃膠囊制備工藝進(jìn)行研究。方法：采用水蒸汽蒸餾法提取揮發(fā)油，以揮發(fā)油收率為指標(biāo)，考察浸泡時(shí)間、加水量、蒸餾時(shí)間對(duì)提取工藝的影響。采用L9(34)正交試驗(yàn)，以出膏率、柚皮苷含量為考察指標(biāo)，對(duì)水煎提取工藝的主要因素—加水量、煎煮次數(shù)、提取時(shí)間進(jìn)行考察。結(jié)果：藥材加水5倍，浸泡4 h，蒸餾7 h提取揮發(fā)油；水煎工藝為煎煮2次，加水量分別為6倍、4倍，時(shí)間為2 h。結(jié)論：研究結(jié)果能夠作為參梅健胃膠囊的制備工藝，并可以應(yīng)用于產(chǎn)業(yè)化中。

參梅健胃膠囊；制備工藝；正交試驗(yàn)

慢性胃炎是臨床最常見的疾病之一，也是中醫(yī)治療的優(yōu)勢(shì)病種[1-3]。中醫(yī)辨證多為胃脘痛，可見于任何年齡段，該病不但危害人類身體健康，更嚴(yán)重影響了患者的生活質(zhì)量。胃脘痛屬于慢性疾病，反復(fù)發(fā)作，以肝胃不和以及脾胃氣虛、胃陰不足最具代表性[4-7]。參梅健胃膠囊由黨參、白芍、肉桂、枳殼等14味中藥組成，功能主治為健脾益氣，溫中和胃，行氣止痛，臨床上主要用于慢性淺表性胃炎(胃脘痛脾胃虛寒證)。該方為中國(guó)中醫(yī)研究院名老中醫(yī)經(jīng)驗(yàn)方，臨床應(yīng)用治療胃脘痛數(shù)十年，療效顯著。為更廣泛地在臨床應(yīng)用，經(jīng)過系統(tǒng)研究，將其開發(fā)為便于服用的膠囊制劑，為廣大胃脘痛患者提供安全有效治療藥物。

本方由14味中藥組成，根據(jù)各藥材中所含的成分與功能選擇不同的工藝，并選定不同的考核指標(biāo)[8]。其中白芍等3味藥材以細(xì)粉入藥，肉桂等8味藥材均含有揮發(fā)油，需要提取揮發(fā)油后與黨參等3味藥材進(jìn)行合并煎煮提取。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)處方 由黨參、白芍、肉桂、枳殼等14味中藥，均購(gòu)自安徽海鑫藥業(yè)有限公司，經(jīng)檢驗(yàn)，所有藥材均符合《中華人民共和國(guó)藥典》2010年版的各項(xiàng)規(guī)定。

1.2 實(shí)驗(yàn)儀器 粉碎機(jī)(FW135，天津市泰斯特儀器有限公司)；電子分析天平(AR1140、DV215CD，梅特勒-奧豪斯)；電子調(diào)溫電熱套(MH-1000，北京科偉永興儀器有限公司)；高效液相色譜儀(2010AHT，日本島津)；超聲波清洗機(jī)(KQ-250V，江蘇昆山市超聲儀器有限公司)；電熱恒溫水浴鍋(HH-6，上海浦東物理光學(xué)儀器廠)；電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱(101-1BS，上海博泰)。

1.3 受試藥物 柚皮苷對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定研究院，110722-200610，含量測(cè)定用，純度100%)；乙腈(色譜純)；水(自制，高純水)；甲醇(分析純)；磷酸(分析純)；聚酰胺(分析純)。

1.4 試驗(yàn)方法

1.4.1 揮發(fā)油提取工藝考察 參梅健胃方中肉桂等八味藥材均含有揮發(fā)油類成分，采用水蒸汽蒸餾法進(jìn)行提取，考察浸泡時(shí)間、加水量、蒸餾時(shí)間3個(gè)影響揮發(fā)油提取率的主要因素，確定最佳提取工藝。

1.4.2 浸泡時(shí)間考察 按照處方比例稱取肉桂等八味藥材15份，每份780 g。根據(jù)經(jīng)驗(yàn)加入7倍量水，浸泡時(shí)間分別為0 h、2 h、4 h、6 h、8 h，分別蒸餾提取揮發(fā)油，測(cè)定揮發(fā)油量。

1.4.3 加水量考察 按照處方比例稱取肉桂等八味藥材12份，每份780 g。加水浸泡4 h后，按3倍、5倍、7倍和10倍加水量操作并蒸餾10 h，測(cè)定揮發(fā)油量。

1.4.4 蒸餾時(shí)間考察 按照處方比例稱取肉桂等八味藥材30份，每份780 g。每份加水5倍量，浸泡4 h后，提取揮發(fā)油，考察加熱至沸騰后2～12 h所得揮發(fā)油量。

1.5 柚皮苷測(cè)定方法

1.5.1 色譜條件及適應(yīng)性 參照《中國(guó)藥典》2010年版一部枳殼項(xiàng)下測(cè)定方法[9]。色譜柱C18(5 μm，4.0 mm×250 mm)，流動(dòng)相：乙腈∶水(21∶79)，并以磷酸調(diào)pH至3。檢測(cè)波長(zhǎng)：283 nm；柱溫25 ℃；流速：1.0 mL/min，理論塔板數(shù)不低于3 500。在此條件下，柚皮苷對(duì)照品與樣品均可得到良好分離，缺枳殼空白樣品在柚皮苷峰處無(wú)吸收。

1.5.2 對(duì)照品溶液制備 精密稱取柚皮苷對(duì)照品15.5 mg，加甲醇溶解并定容至100 mL容量瓶中，得柚皮苷對(duì)照品溶液(濃度為0.155 mg/mL)。

1.5.3 供試品溶液制備[10-12]精密吸取提取液3 mL，加于已處理好的聚酰胺柱(4 g，內(nèi)徑1.9 cm，濕法裝柱)，先以80 mL水洗脫，棄去水液后，再用100 mL甲醇洗脫，收集甲醇洗脫液，濃縮并定容于25 mL量瓶中，離心，濾過，作為供試品溶液。

1.5.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線 分別精密吸取對(duì)照品溶液3、5、10、15和20 μL，注入高效液相色譜儀，記錄峰面積，結(jié)果見表1，以峰面積值為縱坐標(biāo)(Y)，柚皮苷量為橫坐標(biāo)(X)，計(jì)算回歸方程為：Y=1 584 222X+68 102(r=0.999 7)，標(biāo)準(zhǔn)曲線見圖1，柚皮苷在0.465 μg～3.10 μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

表1 線性關(guān)系考察結(jié)果

圖1 標(biāo)準(zhǔn)曲線

1.5.5 精密度試驗(yàn) 精密吸取對(duì)照品溶液10 μL，注入液相色譜儀，記錄峰面積，結(jié)果平均峰面積2 547 657，RSD為1.6%(n=5)，表明方法的精密度良好。

1.5.6 重復(fù)性試驗(yàn) 精密吸取正交試驗(yàn)中試驗(yàn)號(hào)為5的提取液5份，按供試品溶液制備方法制備，進(jìn)樣10 μL，測(cè)定，計(jì)算含量，結(jié)果柚皮苷平均含量為1.12 mg/mL，RSD為0.69%(n=5)，表明重復(fù)性良好。

1.5.7 回收率試驗(yàn) 取5號(hào)試驗(yàn)的提取液1.5 mL，加入適量的對(duì)照品，按供試品溶液制備方法制備，測(cè)定含量，計(jì)算回收率，結(jié)果見表2，平均回收率為97.36%，RSD為0.98%，表明回收率良好。

表2 回收率試驗(yàn)結(jié)果(n=5，%)

回收率(%)=(測(cè)的總量-樣品含量)/對(duì)照品加入量×100%

1.6 水煎煮提取工藝考察 黨參等3味藥材與肉桂等八味藥材合并煎煮，以出膏率、枳殼中柚皮苷含量為考察指標(biāo)，采用L9(34)正交試驗(yàn)，對(duì)影響水煎提取工藝的主要因素——加水量、煎煮次數(shù)、提取時(shí)間進(jìn)行考察。

1.6.1 浸泡時(shí)間考察 按照處方比例稱取藥材并加入多量水，每隔30 min觀察一次，至全部藥材浸透后。結(jié)果浸泡4 h后全部藥材浸透，因此浸泡時(shí)間確定為4 h。

1.6.2 吸水量考察 按照處方比例稱取藥材并加入多量水，至全部藥材浸泡透心后，過濾，至不再瀝水為止，然后稱重，以增加的重量為吸水量。結(jié)果藥材吸水率為192%，故水煎工藝中首次提取時(shí)需多加2倍量水。

1.6.3 最佳提取工藝考察[13-14]重點(diǎn)考察影響水煎提取工藝的主要因素——加水量(A)、煎煮次數(shù)(B)、提取時(shí)間(C)，采用L9(34)正交試驗(yàn)對(duì)這3個(gè)因素進(jìn)行考察，因素水平表見表3，以出膏率(干膏)、柚皮苷含量為考察指標(biāo)。

表3 L9(34)煎煮正交試驗(yàn)因素水平表

注：首次多加水2倍；肉桂等八味藥材在揮發(fā)油提取后加入。

按比例稱取1/10處方量藥材，共9份，按表6正交試驗(yàn)方案進(jìn)行煎煮，最后將1-9號(hào)試驗(yàn)所得的提取液濃縮并定容至250 mL量瓶中，搖勻，備用。測(cè)定9份樣品的出膏率及柚皮苷含量并進(jìn)行分析。

2 結(jié)果

2.1 揮發(fā)油提取工藝考察

2.2 浸泡時(shí)間考察 結(jié)果見表4。結(jié)果表明，浸泡時(shí)間對(duì)揮發(fā)油的收率有一定影響，隨浸泡時(shí)間的延長(zhǎng)，揮發(fā)油收率在增加，但浸泡4 h同6 h、8 h相比較，揮發(fā)油的收率差別不大，因此確定揮發(fā)油提取前以浸泡4 h為宜。

表4 浸泡時(shí)間對(duì)揮發(fā)油提取的影響(n=3)

2.3 加水量考察 結(jié)果見表5。結(jié)果表明，加水量對(duì)揮發(fā)油的收率有一定影響，隨著加水量的增加，揮發(fā)油的收率也在增加，但5倍加水量同7倍、10倍相比較，揮發(fā)油的收率差別不大，因此確定揮發(fā)油提取時(shí)以加水5倍量為宜。

表5 加水量對(duì)揮發(fā)油提取的影響(n=3)

2.4 蒸餾時(shí)間考察 結(jié)果見表6。結(jié)果表明，蒸餾時(shí)間對(duì)揮發(fā)油的收率有明顯的影響，隨著蒸餾時(shí)間的延長(zhǎng)，揮發(fā)油的收率也在增加，但蒸餾7 h同8～12 h相比較，所得的揮發(fā)油量差別不大；12 h所提取的揮發(fā)油按100%計(jì)，7 h所提取的揮發(fā)油量已達(dá)到95%，藥材中的揮發(fā)油已基本提取完全；同時(shí)，考慮到大生產(chǎn)及產(chǎn)品成本等因素，確定揮發(fā)油提取蒸餾時(shí)間以7 h為最佳。

表6 蒸餾時(shí)間對(duì)揮發(fā)油提取的影響(n=3)

2.5 水煎煮提取工藝考察 最佳提取工藝考察水煎提取工藝的正交試驗(yàn)結(jié)果見表7，表8。從表7直觀分析，各因素對(duì)出膏率的影響以C>B>A，其中：因素A以K3>K1>K2，因素B以K2>K3>K1，因素C以K3>K2>K1，直觀分析水煎提取工藝的最佳條件為A3B2C3組合；各因素對(duì)柚皮苷的影響以C>A>B，其中：因素A以K3>K2>K1，因素B以K3>K2>K1，因素C以K3>K2>K1，直觀分析可知水煎提取工藝的最佳條件為A3B3C3組合。

從表8方差分析，因素C對(duì)出膏率、柚皮苷含量均有顯著性影響，選擇該因素最好水平C3；因素A對(duì)出膏率、柚皮苷含量均無(wú)顯著影響，本著節(jié)約水源、降低成本的原則選擇A1；因素B對(duì)出膏率、柚皮苷含量均無(wú)顯著影響，但綜合直觀分析結(jié)果，出膏率結(jié)果B2為最佳水平，柚皮苷含量各水平無(wú)差異，在提取效率最佳的同時(shí)兼顧節(jié)約成本，選擇B2為最佳工藝。綜合考慮各種影響因素，我們選擇水煎提取工藝的最佳條件應(yīng)為A1B2C3組合；同時(shí)為了考察上述最佳工藝A3B3C3和A1B2C3的差異，我們對(duì)其進(jìn)行了對(duì)比試驗(yàn)，結(jié)果見表9。

表7 L9(34)正交試驗(yàn)方案及結(jié)果

表8 方差分析結(jié)果

注：F0.05(2，2)=19.00;F0.01(2，2)=19.00。

表9 2種最佳水煎工藝的對(duì)比試驗(yàn)結(jié)果

注：同A3B3C3比較，P>0.05。

對(duì)比試驗(yàn)結(jié)果表明，2種水煎工藝在出膏率、柚皮苷含量、柚皮苷轉(zhuǎn)移率方面差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，表明選擇最佳水煎工藝為A1B2C3是合理的。確定水煎工藝為水煎2次，加水量分別為6、4倍(首次已多加2倍量水、浸泡4 h)，煎煮時(shí)間為2 h。

3 討論

通過本實(shí)驗(yàn)研究確定揮發(fā)油和煎煮的最佳提取工藝，又對(duì)煎煮液的分離、濃縮、干燥工藝以及制劑的成型工藝進(jìn)行了研究，最終建立了參梅健胃膠囊制備工藝。參梅健胃膠囊的制備工藝為：14味中藥凈選、炮制；白芍等3味粉碎成細(xì)粉，過篩，混勻，備用；肉桂等8味加水5倍，浸泡4 h后，蒸餾提取揮發(fā)油7 h，濾過，分取揮發(fā)油，加入等量乙醇制成揮發(fā)油溶液，濾液和藥渣分別另器收集，備用；藥渣與其余黨參等3味加水煎煮3次，第1次加水6倍，浸泡4 h，煎煮2 h，第2次加水4倍，煎煮2 h，濾過，濾液與上述濾液合并，濾液減壓濃縮至相對(duì)密度為1.10～1.15(70 ℃)的清膏，噴霧干燥，細(xì)粉加入白芍等3味藥材細(xì)粉，混勻，制粒，過篩，低溫干燥，整粒，噴入揮發(fā)油溶液，密封放置2 h，裝入0號(hào)空心膠囊，制成1 000粒，既得。

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(2016-03-28收稿 責(zé)任編輯：張文婷)

Preparation Research on Shenmei Jianwei Capsule

Chen Yanbin1,2, Zhang Xiaohong2, Liu feng1,2

(1ShaanxiInstituteofInternationalTrade,Xianyang712000,China; 2ShaanxiBuchangPharmaceuticalco.,LTD.,Xi′an710075,China)

Objective:To study Shenmei Jianwei capsule preparation technology. Methods:The volatile oils were extracted by steam distillation. The volatile oil yield was taken as examining index to investigate the influence of soak time, additive quantity of water and distillation time on extraction process. In order to extract rate and the content of naringin as examining index, main factors of water decoction extraction process, water content, decoction time and extraction time were examined By L9 (34) orthogonal test. Results:Add 5 times of water than herbs, then soak the herbs for 4 hours and distillate them 7 hours to extract the volatile oil. Water extraction 2 times, add water 6 times and 4 times higher than the amount of herbs respectively. Extraction lasts 2 hours. Conclusion:The results can be used in preparing Shenmei Jianwei capsule, and can be applied to production.

Shenmei Jianwei capsule; Preparation process; Orthogonal experiment

陜西省科技計(jì)劃社發(fā)攻關(guān)項(xiàng)目(編號(hào)：2014K14-03-05)；陜西省創(chuàng)新人才推進(jìn)計(jì)劃(編號(hào)：2015KCT-19)；陜西省創(chuàng)新藥物研究中心(編號(hào)：2015SF2-09)

陳衍斌(1980.12—)，男，碩士，主管藥師，研究方向：從事中藥大品種技術(shù)升級(jí)及二次開發(fā)研究，E-mail：50713751@qq.com

劉峰(1968.09—)，男，博士，主任藥師、教授，碩士研究生導(dǎo)師，中藥制劑專業(yè)，研究方向：從事中藥新藥研究、大品種技術(shù)升級(jí)及二次開發(fā)研究，E-mail：cybbjm@163.com

R284.2

A

10.3969/j.issn.1673-7202.2017.01.042