嗜酸性粒細胞趨化因子-1、類風濕因子和抗環(huán)瓜氨酸肽抗體與類風濕關節(jié)炎活動度的相關性分析

李傳利，王延群，郭淼

(1.淄博礦業(yè)集團有限責任公司中心醫(yī)院檢驗科，山東淄博 255120；2.濟南軍區(qū)總醫(yī)院實驗診斷科，濟南 250000；3.錦州醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院檢驗科，遼寧錦州 121001)

嗜酸性粒細胞趨化因子-1、類風濕因子和抗環(huán)瓜氨酸肽抗體與類風濕關節(jié)炎活動度的相關性分析

李傳利1，王延群2，郭淼3

(1.淄博礦業(yè)集團有限責任公司中心醫(yī)院檢驗科，山東淄博 255120；2.濟南軍區(qū)總醫(yī)院實驗診斷科，濟南 250000；3.錦州醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院檢驗科，遼寧錦州 121001)

目的 研究嗜酸性粒細胞趨化因子-1(Eotaxin-1)、類風濕因子(RF)和抗環(huán)瓜氨酸肽(CCP)抗體與類風濕關節(jié)炎活動度的相關性。方法 將淄博礦業(yè)集團中心醫(yī)院2014年12月至2015年12月就診的早期類風濕關節(jié)炎患者58名，同時期非類風濕關節(jié)炎患者46名，健康人對照者53名納入本研究。收集其腫脹關節(jié)計數(shù)、壓痛關節(jié)計數(shù)和DAS28評分評價RA的活動度。免疫透射比濁法檢測其血清RF水平，ELISA檢測Eotaxin-1和抗CCP抗體的水平，不同組間因子水平的比較采用方差分析，其水平與臨床評分的相關性采用Spearman相關分析。結果 RA組Eotaxin-1、RF和抗CCP抗體的水平分別為(96.02±21.07) pg/mL、(183.42±87.45) U/mL、(119.09±62.30) RU/mL，較非RA組和健康人對照組均高，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。RA患者血清Eotaxin-1水平與其腫脹關節(jié)計數(shù)、壓痛關節(jié)計數(shù)和DAS28評分有顯著相關性(P<0.01)；抗CCP抗體的水平與其壓痛關節(jié)計數(shù)和DAS28評分有相關性；RF僅與DAS28評分有相關性。結論 RA患者血清Eotaxin-1和抗CCP抗體的水平與患者的疾病活動度相關，有望發(fā)展成為監(jiān)測RA疾病活動度的新的血清學指標。

類風濕關節(jié)炎；嗜酸性粒細胞趨化因子-1；抗環(huán)瓜氨酸肽抗體；腫脹關節(jié)計數(shù)；壓痛關節(jié)計數(shù)

類風濕關節(jié)炎(rheumatoid arthritis, RA)主要表現(xiàn)為慢性持續(xù)的關節(jié)炎癥，發(fā)病早期即可出現(xiàn)關節(jié)侵害和骨侵蝕，并伴有高水平的自身抗體和系統(tǒng)性炎癥[1-2]。近年來，雖然RA的治療手段有了一系列進展，但其病因及病理過程仍不清楚，RA一旦發(fā)生，疾病進展迅速,影響患者的生存質量。因此，對于RA 的疾病進展的監(jiān)測，對其治療和預后有著重要意義。嗜酸性粒細胞趨化因子-1(Eotaxin-1)作為趨化因子家族的一員，被發(fā)現(xiàn)在RA患者血清中水平升高。本研究采用腫脹關節(jié)計數(shù)(swollen joint count,SJC)、壓痛關節(jié)計數(shù)(tender joint count,TJC)和DAS28評分評價RA的活動度，通過分析RA患者血清Eotaxin-1、類風濕因子(rheumatoid factor, RF)和抗環(huán)瓜氨酸肽(cyclic citrullinated peptide, CCP)抗體與以上臨床評分的相關性，探究這3個指標對RA的疾病活動度的監(jiān)測作用。

1 資料與方法

1.1 一般資料 將2014年12月至2015年12月于淄博礦業(yè)集團中心醫(yī)院就診的58名早期類風濕關節(jié)炎患者(RA組)、46名非類風濕關節(jié)炎患者(非RA組)以及53名體檢健康者(健康人對照組)納入本研究。RA組所有患者均符合2010年美國風濕病學會(ACR)/歐洲抗風濕病聯(lián)盟(EULAR)分類診斷標準，且根據(jù)EULAR 2003年會議，以病程2年內為RA早期。其中，女性42名，男性16名，年齡(47.6±11.7)歲，病程為(11.3±7.5)個月。非RA組患者包括反應性關節(jié)炎15例，腰椎間盤突出6例，非RA彌漫性結締組織病16例，骨關節(jié)炎9例。非RA組女性34名，男性12名，年齡(44.2±10.3)歲。健康人對照組女性40名，男性13名，年齡(48.1±12.5)歲。3組人群性別和年齡比差異無統(tǒng)計學意義，對于參加本研究項目均知情同意。

1.2 疾病活動程度評分方法 由同一名風濕免疫科醫(yī)生按照簡化的28個關節(jié)部位(雙肩、肘、腕、膝、掌指、近端指間關節(jié))進行輕壓觸診，分別記錄有腫脹和壓痛的關節(jié)個數(shù)。根據(jù)SJC、TJC和血沉(ESR)數(shù)值計算出DAS28，以DAS28評分評價疾病的活動程度。

1.3 標本采集 空腹采集靜脈血2～4 mL，1 h內分離血清，2 h內完成RF的檢測。剩余血清分裝至EP管中，每管120 μL，-80 ℃凍存，用于Eotaxin-1和抗CCP抗體的檢測。

1.4 主要儀器和試劑 RF檢測試劑盒(日本和光純藥工業(yè)株式會社),Eotaxin-1檢測試劑盒(美國R&D公司)，抗CCP抗體試劑盒(上?？菩律锕?；7600-110全自動生化分析儀(日本日立公司)，酶聯(lián)儀(美國Thermo Fisher Scientific公司)。

1.5 方法 RF采用免疫透射比濁法檢測，RF≥20 U/mL判為陽性。血清Eotaxin-1和抗CCP抗體的濃度用ELISA檢測，均嚴格按照說明書操作，設置標準曲線孔、陰性對照孔和空白孔。根據(jù)每板的標準曲線計算樣本濃度。抗CCP抗體≥25 RU/mL判為陽性。

1.6 統(tǒng)計學分析 用SPSS 13.0軟件進行。3組計量資料比較采用方差分析，組間兩兩比較采用LSD法，各指標間進行Spearman相關分析。以P<0.05為差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 不同人群血清Eotaxin-1、RF和抗CCP抗體水平 RA組患者血清Eotaxin-1、RF和抗CCP抗體水平均高于非RA組和健康人對照組，且差異具有統(tǒng)計學意義。見表1。

表1 不同人群血清Eotaxin-1、RF和抗CCP抗體水平

注：*，與對應非RA組及健康人對照組數(shù)據(jù)比較，P均<0.01；△，與對應健康人對照組比較，P均<0.01。

2.2 RA患者血清Eotaxin-1、RF和抗CCP抗體與臨床SJC、TJC和DAS28評分的相關性 RA患者SJC、TJC和DAS28評分的中位數(shù)分別為6.35、9.77、3.12。其血清Eotaxin-1的濃度與其SJC、TJC和DAS28評分呈顯著相關。RF水平僅與DAS28評分相關。抗CCP抗體與TJC和DAS28評分均相關。見表2。

表2 RA患者血清Eotaxin-1、RF和抗CCP抗體水平與臨床腫脹關節(jié)計數(shù)、壓痛關節(jié)計數(shù)和DAS28評分的相關性

項目SJCrPTJCrPDAS28評分rPEotaxin-1(pg/mL)0.482<0.010.508<0.010.806<0.01RF(U/mL)0.0290.8130.1240.3550.2680.042抗CCP抗體(RU/mL)0.1070.4250.2630.0460.486<0.01

3 討論

Eotaxin-1又稱CCL11，是嗜酸性粒細胞趨化因子家族中的一員，由成纖維細胞、淋巴細胞、嗜酸性粒細胞、單核/巨噬細胞等一系列組織和炎癥細胞分泌產(chǎn)生，對嗜酸性粒細胞有較強的趨化作用[3]。其受體為CCR3，廣泛表達在T淋巴細胞、嗜酸性粒細胞、嗜堿性粒細胞、樹突狀細胞表面。

Zhebrun等[4]發(fā)現(xiàn)，在RA的病理過程中血清Eotaxin-1濃度升高，這與本研究結果一致。其原因很可能是IL-1β對血清Eotaxin-1的調節(jié)作用。目前，IL-1β參與到RA的病理過程已被廣泛接受[5]，而成纖維細胞是Eotaxin-1重要的細胞來源[6]。研究發(fā)現(xiàn)IL-1β可以促進RA的病理過程中的成纖維細胞釋放Eotaxin-1[7]。

上調的Eotaxin-1結合關節(jié)組織細胞的CCR3受體，產(chǎn)生一系列的促炎癥反應。作為具有較高特異性的嗜酸性粒細胞的趨化因子，Eotaxin-1誘導嗜酸性粒細胞移行、浸潤到關節(jié)組織內并活化，釋放大量的炎性因子，引發(fā)關節(jié)的滲出增加、腫脹、疼痛等臨床癥狀。此外，Eotaxin-1還可以活化肥大細胞、嗜堿性粒細胞和T淋巴細胞[8]，釋放的白三烯、花生四烯酸等炎性介質會進一步損傷關節(jié)組織細胞，加重關節(jié)的炎癥反應。

最新的研究表明，在RA患者的血清和病變的關節(jié)滑膜液中，Eotaxin-1的濃度均升高，且升高的Eotaxin-1會進一步上調關節(jié)內成纖維樣滑膜細胞的Eotaxin-1受體CCR3的表達，而這無疑放大了Eotaxin-1/CCR3系統(tǒng)在RA中的促炎效應[7]。此外，近年來發(fā)現(xiàn)在破骨細胞表面也表達CCR3受體[9-10]，Eotaxin-1很可能通過結合其表面的CCR3受體而激活破骨細胞，從而進一步促進RA的疾病活動。

目前，國外有研究已經(jīng)關注到升高的血清Eotaxin-1水平對RA發(fā)作和活動度的提示作用。瑞典學者Kokkonen等[11]研究發(fā)現(xiàn)，在RA患者表現(xiàn)出臨床癥狀之前，其血清Eotaxin-1水平已經(jīng)開始升高，且這種升高對其風險評估有可靠的預測作用。此外，隨著疾病的進展，血清Eotaxin-1水平會進一步升高[11]。此結果提示Eotaxin-1水平很可能對RA的疾病活動度有預測作用，與本文得出的結果一致。

抗CCP抗體作為RA診斷的血清學指標已廣泛應用于臨床，目前大部分研究認為，其水平與RA的疾病活動不存在相關性。然而，也有研究表明，抗CCP抗體的水平與RA中的諸多炎性因子(如IL-1β、IL-4、IL-17等)的水平相關，而這些炎性因子直接或間接發(fā)揮著促炎性作用，參與到RA的疾病發(fā)展中[11]。本研究發(fā)現(xiàn)抗CCP抗體水平與TJC和DAS28評分有相關性。要得出確切結論還需要大量的基礎和臨床研究。

綜上所述，血清Eotaxin-1水平與RA的疾病活動度存在相關性。因此，RA患者的血清Eotaxin-1水平很可能作為監(jiān)測RA活動度的新的血清學指標，為RA的診療提供新的研究視角和實踐方向。

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(本文編輯：劉群)

Correlations of Eotaxin-1, rheumatoid factor and anti-cyclic citrullinated peptide antibody with the activity of rheumatoid arthritis

LIChuan-li1,WANGYan-qun2,GUOMiao3

(1.DepartmentofLaboratoryMedicine,ZiboMiningGroupCo.,LTD.CentralHospital,Zibo255120,Shandong; 2.DepartmentofLaboratoryMedicine,JinanMilitaryGeneralHospital,Jinan250000,Shandong; 3.DepartmentofLaboratoryMedicine,theFirstAffiliatedHospitalofJinzhouMedicalUniversity,Jinzhou121001,Liaoning,China)

Objective To investigate the correlations of Eotaxin-1, rheumatoid factor (RF) and anti-cyclic citrullinated peptide (CCP) antibody with the activity of rheumatoid arthritis (RA). Methods A total of 58 patients with early RA, 46 patients without RA and 53 healthy controls from our hospital during December 2014 and December 2015 were enrolled in our study. The activity of RA was evaluated by the swollen joint count (SJC), tender joint count (TJC) and DAS28 score. The levels of serum Eotaxin-1 and anti-CCP antibody were detected by ELISA and serum RF levels were determined by the immunological turbidimetry. The comparisons of serum Eotaxin-1, anti-CCP antibody and RF levels between different groups were performed with ANOVA and their correlations with SJC, TJC and DAS28 score were analyzed by Spearman rank correlation. Results The levels of Eotaxin-1, anti-CCP antibody and RF in RA patients were (96.02±21.07) pg/mL, (183.42±87.45) U/mL and (119.09±62.30) RU/mL, respectively, which were significantly higher than those in the patients without RA and healthy controls (P<0.01). The levels of serum Eotaxin-1 in RA patients were significantly related to TJC, SJC and DAS28 score (P<0.01), while the levels of anti-CCP antibody were related to TJC and DAS28 score. The levels of RF were only related to DAS28 score. Conclusion The levels of serum Eotaxin-1 and anti-CCP antibody in RA patients are significantly correlated with the activity of RA, which may be new serum markers to monitor the activity of RA.

rheumatoid arthritis; Eotaxin-1; anti-cyclic citrullinated peptide antibody; swollen joint count; tender joint count

10.13602/j.cnki.jcls.2017.01.07

李傳利，1985年生，男，主管技師，大學本科，從事免疫學檢驗工作，E-mail:lichuanli972@126.com。

R446.6

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2016-10-21)