• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    糞便鈣衛(wèi)蛋白及血清自身抗體聯(lián)合檢測對炎癥性腸病的診斷價值*

    2017-03-29 01:48:34劉國瑞馬巧蓉李玲慧鄭田嚴孝嶺李毅虞偉
    臨床檢驗雜志 2017年1期
    關鍵詞:腸病敏感性特異性

    劉國瑞,馬巧蓉,李玲慧,鄭田,嚴孝嶺,李毅,虞偉

    (1.南京軍區(qū)南京總醫(yī)院 a.解放軍臨床檢驗醫(yī)學研究所,b.解放軍普通外科研究所,南京 210002;2.廣西醫(yī)科大學附屬民族醫(yī)院檢驗科,南寧 530001)

    糞便鈣衛(wèi)蛋白及血清自身抗體聯(lián)合檢測對炎癥性腸病的診斷價值*

    劉國瑞1a,馬巧蓉2,李玲慧1a,鄭田1a,嚴孝嶺1a,李毅1b,虞偉1a

    (1.南京軍區(qū)南京總醫(yī)院 a.解放軍臨床檢驗醫(yī)學研究所,b.解放軍普通外科研究所,南京 210002;2.廣西醫(yī)科大學附屬民族醫(yī)院檢驗科,南寧 530001)

    目的 探討聯(lián)合檢測血清抗胰腺外分泌腺抗體(PAB)、抗釀酒酵母抗體(ASCA)、抗杯狀細胞抗體(GAB)、抗中性粒細胞胞漿抗體(PANCA)及糞便鈣衛(wèi)蛋白(FC)在炎癥性腸病(IBD)診斷和鑒別診斷中的價值。方法 收集確診的克羅恩病(CD)患者107例及潰瘍性結腸炎(UC)患者98例作為IBD組,非IBD腸病疾病患者79例作為疾病對照組,用間接免疫熒光法檢測血清PANCA、ASCA、GAB和PAB,用雙抗體夾心ELISA法檢測FC濃度。對3組血清PANCA、GAB、PAB、ASCA及FC檢測的數(shù)據(jù)進行對比分析。結果 205例IBD患者血清PANCA、GAB、PAB、ASCA的陽性率分別為36.1%、29.8%、38.0%、4.9%;IBD組、CD組與UC組FC濃度均高于疾病對照組,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01),CD組與UC組間比較無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。PANCA在CD和UC組的陽性率分別為8.4%、66.3%;PAB在CD和UC組的陽性率分別為65.4%、8.2%;PAB、PANCA、GAB、ASCA、FC及5項聯(lián)合在鑒別診斷IBD與非IBD腸道疾病中的敏感性和特異性分別為38.0%、36.1%、29.8%、4.9%、54.1%、63.4%和98.7%、96.2%、94.9%、100%、68.4%、93.7%。5項聯(lián)合鑒別診斷IBD與非IBD腸道疾病的ROC曲線下面積為0.819;PANCA用于UC鑒別診斷的ROC曲線下面積為0.816;PAB用于CD鑒別診斷的ROC曲線下面積為0.823。結論 GAB為一種IBD相關自身抗體,可用于IBD的輔助診斷;PAB和PANCA分別為CD和UC重要的血清學標記物,對該類疾病診斷具有高度敏感性和特異性;將FC與自身抗體聯(lián)合對于IBD與非IBD胃腸道疾病的鑒別具有重要意義,但對于區(qū)分CD或UC價值不大。

    炎癥性腸??;克羅恩病;潰瘍性結腸炎;抗體;鈣衛(wèi)蛋白

    炎癥性腸病(inflammatory bowel disease,IBD)是一種發(fā)病機制不明的腸道非特異性炎癥性疾病,包括潰瘍性結腸炎(ulcerative colitis, UC)和克羅恩病(Crohn′s disease, CD)。臨床上鑒別診斷UC和CD主要依賴于臨床和病理學檢查,而且還需排除傳染性疾病和其他類似疾病,有很大局限性。因此,臨床需要方便準確、非侵入性、廉價的檢測指標及方法實現(xiàn)IBD的鑒別診斷、評估分期和療效判定。核周型抗中性粒細胞胞漿抗體(PANCA)、抗杯狀細胞抗體(GAB)、抗胰腺外分泌腺抗體(PAB)和抗釀酒酵母抗體(ASCA)是比較有代表性的相關自身抗體[1-3],在IBD的診斷和鑒別診斷、活動度分期等方面有不同的作用。糞便鈣衛(wèi)蛋白(fecal calprotectin,F(xiàn)C)能夠很好地反映腸道炎癥嚴重程度且檢測方便,取材容易[4]。本文聯(lián)合檢測上述標志物,探討其對IBD診斷和鑒別診斷的價值。

    1 資料與方法

    1.1 一般資料 選取2015年1月至2016年6月解放軍南京軍區(qū)南京總醫(yī)院住院患者,均經臨床表現(xiàn)、影像學檢查、消化道內鏡及病理學檢查,符合“2012年IBD診斷與治療的共識意見”擬定的診斷標準[5]。CD組107例,其中男68例,女39例,年齡(33.1±12.9)歲;UC組98例,其中男58例,女40例,年齡(42.1±15.4)歲;同期其他腸病對照組79例(包括小腸潰瘍31例,小腸炎癥23例,小腸息肉13例,腸結核8例,其他胃腸炎4例),其中男47例,女32例,年齡(42.8±17.1)歲。3組研究對象年齡、性別比差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05),具有可比性。

    1.2 標本采集

    1.2.1 血液樣本 抽取空腹靜脈血2~3 mL,3 500 r/min離心10 min分離血清,置-40 ℃凍存待檢。

    1.2.2 糞便樣本 在腸鏡檢查口服清腸藥前3 d內留取受檢者糞便10~20 g,置-40 ℃凍存待檢。

    1.3 血清PANCA、ASCA、GAB和PAB抗體檢測 采用間接免疫熒光法,生物馬賽克物薄片購自德國歐蒙公司。所有操作嚴格按試劑說明書要求進行。PANCA、GAB 和PAB抗體檢測樣本采用歐蒙PBS稀釋液1∶10稀釋,ASCA抗體檢測樣本做1∶1 000稀釋,熒光顯微鏡下觀察結果。以標準滴度熒光強度為參照,報告4項自身抗體的血清滴度(此即為半定量結果)。根據(jù)試劑盒說明書推薦的陽性判斷標準,確定PANCA、GAB和PAB滴度cut-off 值為10,ASCA滴度cut-off 值為1 000,以上視為陽性。

    1.4 FC檢測 采用雙抗體夾心ELISA法,試劑盒購自瑞士Bühlmann公司。所有操作嚴格按試劑說明書要求進行。用IMARK酶聯(lián)儀(Bio-Rad公司)讀取450 nm波長處吸光度(A)。繪制標準品濃度對相應A值的標準曲線,計算樣本濃度(μg/g)。

    1.5 結果賦值與參數(shù)指標值的歸一化 由于FC為定量結果,血清自身抗體為半定量結果,在繪制ROC曲線時,須先將FC及自身抗體進行量化賦值并歸一化。根據(jù)血清自身抗體滴度量化并分為9個等級(ASCA熒光強度值為100倍結果),見表1。FC檢測結果按試劑說明書標準,以>50 μg/g表示陽性,以實際檢測結果/50進行量化分級。量化值統(tǒng)一是按照單項量化值(x)/單項值總和(sum)取對數(shù)[公式為lg(x/sum×106)]。

    表1 血清PANCA、ASCA、GAB 和PAB 自身抗體結果賦值表

    1.6 統(tǒng)計學分析 用SPSS 19.0軟件進行。由于FC為非正態(tài)分布,故采用中位數(shù)(四分位數(shù))[M(P25,P75)]表示,組間比較采用Mann-WhitneyU檢驗。血清自身抗體陽性率比較采用卡方檢驗,用配對四格表分別計算檢測項目用于鑒別診斷CD、UC、IBD的敏感性、特異性、陽性預測值和陰性預測值。繪制ROC曲線,以約登指數(shù)(敏感性+特異性-1)最大時的檢測值確定為診斷的最佳截斷點。以P<0.05為差異有顯著統(tǒng)計學意義。

    2 結果

    2.1 FC及4種自身抗體檢測結果 IBD組、CD與UC組FC濃度均高于疾病對照組,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01),CD與UC組間比較無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。PAB在CD組中陽性率為65.4%,高于UC組(8.2%)和對照組(1.3%),差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05);PANCA在UC組中的陽性率為66.3%,高于CD組(8.4%)和疾病對照組(3.8%),差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05);GAB在CD、UC和疾病對照組陽性率分別為30.0%、29.6%和5.1%,CD和UC組間差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05),但兩組與對照組比較差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05);ASCA在CD、UC和疾病對照組陽性率分別為4.8%、5.1%和0,3組間比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。見表2。

    表2 各組FC濃度和PAB、GAB、PANCA、ASCA陽性率

    注:與疾病對照組比較,#,P<0.01;a,P<0.05;與UC組比較,b,P<0.05。自身抗體陽性判斷依據(jù):為試劑盒說明書提供的cut-off值。

    2.2 FC、自身抗體單項和聯(lián)合檢測用于IBD鑒別診斷的效果評價 根據(jù)ROC曲線,F(xiàn)C單獨應用于鑒別診斷IBD與非IBD腸道疾病的cut-off值為294.3 μg/g,此時敏感性和特異性分別為54.1%和68.4%。血清PAB、PANCA、GAB、ASCA抗體用于鑒別診斷IBD與非IBD腸道疾病的敏感性和特異性分別為38.0%、36.1%、29.8%、4.9%和98.7%、96.2%、94.9%、100%。聯(lián)合FC與血清自身抗體診斷IBD的敏感性可提高至63.4%,特異性為93.7%,陰性預測值49.7%,陽性預測值96.3%,見表3。ASCA、PANCA、PAB、GAB、FC及聯(lián)合5項指標對IBD鑒別診斷ROC曲線下面積分別0.518、0.663、0.685、0.623、0.663和0.819,見圖1。

    表3 FC、PAB、PANCA、GAB、ASCA及5項聯(lián)合鑒別診斷IBD的效能

    項目敏感性(%)特異性(%)陰性預測值(%)陽性預測值(%)FC*54.168.437.581.6PAB38.098.738.098.7PANCA36.196.236.796.1GAB29.894.934.293.8ASCA4.9100.028.8100.05項聯(lián)合63.493.749.796.3

    注:*,cut-off值為294.3 μg/g。

    2.3 自身抗體檢測及與FC聯(lián)合檢測用于UC、CD鑒別診斷的效果評價 PAB用于CD鑒別診斷的敏感性為65.4%,特異性98.7%,曲線下面積為0.823,5項聯(lián)合對CD鑒別診斷敏感性為67.3%,特異性為89.97%,曲線下面積為0.810;PANCA用于UC鑒別診斷的敏感性為66.3%,特異性為96.2%,曲線下面積為0.816,5項聯(lián)合對UC鑒別診斷的敏感性為67.3%,特異性為93.7%,曲線下面積為0.828。

    圖1 FC、4種抗體單獨及聯(lián)合檢測用于IBD鑒別診斷的ROC曲線分析

    3 討論

    FC是由Fagerhol等[6]首先從中性粒細胞中分離出來的鈣鋅結合蛋白,存在于中性粒細胞和巨噬細胞中,大約占中性粒細胞蛋白質成分的60%[7]。研究表明,F(xiàn)C有抗菌、免疫調節(jié)、抗增殖活性,在炎癥活動的調節(jié)中起著重要作用[8-9]。FC可以抵抗酶的分解,在室溫下可以穩(wěn)定7 d,不受飲食的影響,很容易在糞便中檢測到[10]。

    本研究對205例確診IBD患者及79例非IBD疾病患者血清PANCA、PAB、GAB、ASCA抗體水平及FC進行檢測,發(fā)現(xiàn)PAB在CD中的陽性率為65.4%,其鑒別診斷CD及其他腸道疾病的ROC曲線下面積為0.823,在敏感性為65.4%時,特異性達到98.7%,可用于與UC的鑒別診斷。Joossen等[11]也提出PAB的存在即是CD的標志。GAB在IBD中的陽性率為29.8%,顯著高于對照組的5.1%,其在CD與UC中的陽性率差異無統(tǒng)計學意義,可以認為GAB是一種與IBD相關的自身抗體,可作為IBD的輔助診斷,但不適用于鑒別UC與CD。PANCA在UC中的陽性率為66.3%,其鑒別診斷UC及其他腸道疾病的ROC曲線下面積為0.816,在敏感性為66.3%時,特異性達到96.2%。研究表明,PANCA主要存在于UC患者,文獻報道UC患者PANCA的陽性率為43.4%~70%[12],與本研究一致。可認為PANCA作為UC的血清標志物,可用于UC與其他腸道疾病的鑒別診斷。FC用于鑒別診斷IBD及其他腸道疾病ROC曲線下面積僅為0.663,將FC與幾種自身抗體聯(lián)合應用對CD診斷的價值與單獨PAB檢測相比,敏感性由65.4%提高為67.3%,但特異性卻從98.7%下降至89.97%;因此,5項指標聯(lián)合檢測對鑒別CD或UC診斷的價值提升不大。但FC與血清IBD相關抗體聯(lián)合應用,對于鑒別IBD與非IBD胃腸道疾病的敏感性可提升至63.4%,特異性仍可保持在93.7%,具有重要價值。

    本研究未納入健康人群,也未對不同IBD分期結果進行比較。實際上,聯(lián)合檢測對鑒別IBD與非IBD胃腸道疾病的特異性將會更高。另據(jù)文獻報道,F(xiàn)C有利于對疾病進行動態(tài)監(jiān)測,且FC檢測方便,可以準確地判斷疾病活動度[13-14]。

    根據(jù)本研究結果,ASCA在IBD中的陽性率為4.9%,低于國內外文獻報道水平[1,15],ASCA對IBD的鑒別診斷未見特別價值。分析以上出現(xiàn)差異可能原因為:(1)種族遺傳差異,歐美患者與亞洲人群遺傳背景的不同可能造成彼此血清自身抗體的顯著差異,此可能為主要原因;(2)實驗室和實驗技術手段不同;(3)ASCA檢測試劑盒說明書推薦的cut-off值(1∶1 000)為來自于歐洲人群的參考值,是否適合于中國人群值得思考。另外,本研究檢測的是ASCA-IgG,較ASCA-IgA來說,IgG的陽性率相對更低,聯(lián)合檢測IgG和IgA可能會提高診斷敏感性。由于ASCA 在不同研究機構獲得的數(shù)據(jù)有所不同,故其臨床價值有待于進一步研究證實。

    綜上所述,4種抗體對于IBD診斷的敏感性都不高,不適用對IBD患者進行篩查。GAB是與IBD相關的一種自身抗體,可作為IBD的輔助診斷,但不適用于CD與UC的鑒別診斷; PAB可作為CD的血清標志物,PANCA可作為UC的血清標志物,可分別用于CD和UC的鑒別診斷。將FC與上述4種自身抗體聯(lián)合對于IBD與非IBD胃腸道疾病的鑒別診斷具有重要價值,但對于鑒別診斷CD或UC疾病的價值提升意義不大。

    [1]Kuna AT. Serological markers of inflammatory bowel disease[J]. Biochemia Medica, 2013, 23(1):28-42.

    [2]Nguyen DL, Nguyen ET, Bechtold ML. pANCA positivity predicts lower clinical response to infliximab therapy among patients with IBD[J]. South Med J, 2015, 108(3):139-143.

    [3]Homsak E, Miceti-Turk D, Bozic B. GAB and PAB in inflammatory bowel disease: prevalence, characteristics and diagnostic value[J]. Wien Klin Wochenschr, 2010, 122(Suppl 2):19-25.

    [4]麻婧, 吳開春. 糞鈣衛(wèi)蛋白在炎癥性腸病應用中的優(yōu)勢探討[J]. 胃腸病學和肝病學雜志, 2016, 25(2): 231-234.

    [5]中華醫(yī)學會消化病學會炎癥性腸病學組.炎癥性腸病診斷與治療的共識意見[J].中華消化雜志, 2012, 32(12): 796-813.

    [6]Fagerhol MK, Dale I, Anderson T. Release and quantitation of a leucocyte derived protein[J]. Scand J Haematol, 1980, 24:393-398.

    [7]Olaison G, Smedh K, Sjodahl R. Natural course of Crohn′s disease after ileocolic resection: endoscopically visualised ileal ulcers preceding symptoms[J]. Gut, 1992, 33(3): 331-335.

    [8]Rutgeerts P. Strategies in the prevention of post-operative recurrence in Crohn′s disease[J]. Best Pract Res Clin Gastroenterol, 2003, 17(1): 63-73.

    [9]Rutgeerts P, Geboes K, Vantrappen G, et al. Predictability of the postoperative course of Crohn′s disease[J]. Gastroenterology, 1990, 99(4): 956-963.

    [10]Johne B, Fagerhol MK, Lyberg T,etal. Functional and clinical aspects of the myelomonocyte protein calprotectin[J]. Mol Pathol, 1997, 50(3): 113-123.

    [11]Joossen S,Vermeire S,Van Steen K,etal. Pancreatic autoantibodies in inflammatory bowel disease[J].Inflamm Bowel Dis,2004,10:771-777.

    [12]Zhou F,XiaB,WangF,etal.The prevaience and diagnostic value of perinuclear antineutrophil cytoplasmic antibodies and anti-Saccharomyces cerevisiae antibodies in patients with inflammatory bowel disease in mainland China[J]. Clin Chim Acta, 2010, 411(19-20): 1461-1465.

    [13]Schoepfer AM, Beglinger C, Straumann A,etal. Fecal calprotectin correlates more closely with the Simple Endoscopic Score for Crohn′s disease (SES-CD) than CRP, blood leukocytes, and the CDAI[J]. Am J Gastroenterol, 2010, 105(1): 162-169.

    [14]Schoepfer AM, Beglinger C, Straumann A,etal. Ulcerative colitis: correlation of the Rachmilewitz endoscopic activity index with fecal calprotectin, clinical activity, C-reactive protein and blood leukocytes[J]. Inflamm Bowel Dis, 2009, 15(12): 1851-1858.

    [15]張玲玲, 許鐘, 黃國美, 等. 血清抗體檢測在炎癥性腸病中的臨床應用研究[J]. 中國實用醫(yī)藥, 2016, 26(11): 1-3.

    (本文編輯:劉群)

    Diagnostic value of combined detection of fecal calprotectin and serum autoantibodies in inflammatory bowel diseases

    LIUGuo-rui1a,MAQiao-rong2,LILing-hui1a,ZHENGTian1a,YANXiao-ling1a,LIYi1b,YUWei1a

    (1.a.InstituteofClinicalLaboratoryMedicineofPLA,b.InstituteofGeneralSurgeryofPLA,NanjingGeneralHospitalofNanjingMilitaryCommand,Nanjing210002,Jiangsu; 2.DepartmentofClinicalLaboratory,GuangxiMinzuHospitalAffiliatedtoGuangxiMedicalUniversity,Nanning530001,Guangxi,China)

    Objective To investigate the values of combined detection of serum pancreas autoantibodies(PAB), anti-saccharomyces cerevisiae antibodies(ASCA), goblet cell autoantibodies(GAB) and antineutrophil cytoplasmic antibodies(PANCA) and fecal calprotectin(FC) in the diagnosis and differential diagnosis of inflammatory bowel diseases(IBD). Methods The serum and feces samples from IBD patients, including 107 with definite Crohn′s disease(CD) and 98 with definite ulcerative colitis(UC), and 79 non-IBD patients as the control were collected. Serum PANCA, ASCA, GAB and PAB were detected by an indirect immunofluorescence assay, and FC concentration by double-antibody sandwich ELISA. The results from different patients were compared and analyzed. Results The positive rates of serum PANCA, GAB, PAB and ASCA in 205 IBD patients were 36.1%, 29.8%, 38.0% and 4.9%, respectively. The FC concentrations in IBD, CD and UC patients were significantly higher than that in the control(P<0.01), while there was no statistical difference between CD and UC patients(P>0.05). The positive rates of PANCA in CD and UC patients were 8.4% and 66.3%, respectively, while those of PAB in CD and UC patients were 65.4% and 8.2%, respectively. The sensitivity and specificity of PAB, PANCA, GAB, ASCA, FC and their combination in the differential diagnosis of IBD and non-IBD were 38.0%, 36.1%, 29.8%, 4.9%, 54.1%, 63.4% and 98.7%, 96.2%, 94.9%, 100%, 68.4%, 93.7%, respectively. The area under the ROC of the combination of 5 markers was 0.819 in differentially diagnosing IBD and non-IBD. The area under the ROC of PANCA for the differential diagnosis of UC was 0.816, while that of PAB for the differential diagnosis of CD was 0.823. Conclusion GAB is an autoantibody associated with IBD, which may be helpful for the auxiliary diagnosis of IBD. PAB and PANCA are the important serological markers for the diagnosis of CD and UC, respectively. The combination of FC with PAB, PANCA, GAB and ASCA may be used for the differential diagnosis of IBD and non-IBD, but has little value in distinguishing CD and UC.

    inflammatory bowel disease; Crohn′s disease; ulcerative colitis; antibody; calprotectin

    10.13602/j.cnki.jcls.2017.01.06

    國家自然科學基金(81670471)。

    劉國瑞,1979年生,男,主管技師,主要從事臨床免疫學實驗室診斷工作。

    虞偉,教授,碩士研究生導師,E-mail:yuwei211@126.com。

    2016-11-10)

    猜你喜歡
    腸病敏感性特異性
    炎癥性腸病與肝膽胰病變
    MDT在炎癥性腸病診斷和治療中的重要性
    炎癥性腸病與腸易激綜合征重疊的意義
    釔對Mg-Zn-Y-Zr合金熱裂敏感性影響
    精確制導 特異性溶栓
    BOPIM-dma作為BSA Site Ⅰ特異性探針的研究及其應用
    AH70DB鋼焊接熱影響區(qū)組織及其冷裂敏感性
    焊接(2016年1期)2016-02-27 12:55:37
    重復周圍磁刺激治療慢性非特異性下腰痛的臨床效果
    如何培養(yǎng)和提高新聞敏感性
    新聞傳播(2015年8期)2015-07-18 11:08:24
    兒童非特異性ST-T改變
    高清毛片免费看| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 精华霜和精华液先用哪个| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 一区二区三区四区激情视频| 午夜激情福利司机影院| 新久久久久国产一级毛片| 91精品一卡2卡3卡4卡| 国产有黄有色有爽视频| 久久国产乱子免费精品| 久久久久久久精品精品| 熟女人妻精品中文字幕| tube8黄色片| 亚洲最大成人中文| 五月伊人婷婷丁香| 国产精品女同一区二区软件| 亚洲精品成人av观看孕妇| 成人综合一区亚洲| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 在线观看三级黄色| 亚洲四区av| 99热这里只有精品一区| 成人亚洲精品一区在线观看 | 国产真实伦视频高清在线观看| 国产成人精品婷婷| 国产淫片久久久久久久久| 老女人水多毛片| 99久久九九国产精品国产免费| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 97在线视频观看| 免费观看性生交大片5| 男女国产视频网站| 在线观看美女被高潮喷水网站| 日本免费在线观看一区| 内射极品少妇av片p| 美女高潮的动态| 午夜激情久久久久久久| 国产高清不卡午夜福利| 国产欧美日韩一区二区三区在线 | 国产老妇伦熟女老妇高清| 午夜激情福利司机影院| 国产久久久一区二区三区| 秋霞伦理黄片| 国产成人freesex在线| 丝袜喷水一区| 国产伦精品一区二区三区四那| 校园人妻丝袜中文字幕| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| 五月玫瑰六月丁香| 搡女人真爽免费视频火全软件| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 久久人人爽人人爽人人片va| 舔av片在线| 亚洲国产最新在线播放| 国产美女午夜福利| 欧美3d第一页| 精品人妻一区二区三区麻豆| 国产在线男女| 看十八女毛片水多多多| 天堂中文最新版在线下载 | 狂野欧美激情性xxxx在线观看| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频 | 视频区图区小说| 青青草视频在线视频观看| 秋霞在线观看毛片| 亚洲在久久综合| av播播在线观看一区| 欧美国产精品一级二级三级 | 我的女老师完整版在线观看| 丝袜美腿在线中文| 亚洲成人一二三区av| 亚洲av在线观看美女高潮| 日韩国内少妇激情av| 日韩欧美精品v在线| 国产精品女同一区二区软件| 女人被狂操c到高潮| av在线亚洲专区| 免费高清在线观看视频在线观看| 日本免费在线观看一区| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91 | 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| 在线亚洲精品国产二区图片欧美 | 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 啦啦啦啦在线视频资源| 黄色一级大片看看| 亚洲精品自拍成人| 九色成人免费人妻av| 国产老妇伦熟女老妇高清| 在线观看一区二区三区激情| av网站免费在线观看视频| 少妇的逼好多水| 男人爽女人下面视频在线观看| 熟妇人妻不卡中文字幕| 乱码一卡2卡4卡精品| 成年女人在线观看亚洲视频 | 久久久久久久久大av| 亚洲国产欧美人成| 听说在线观看完整版免费高清| 丰满人妻一区二区三区视频av| 久久久久久九九精品二区国产| 国内精品美女久久久久久| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 久久久成人免费电影| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 欧美一区二区亚洲| 国产亚洲精品久久久com| 免费看日本二区| 午夜精品一区二区三区免费看| 国产欧美日韩精品一区二区| av在线老鸭窝| 亚洲,欧美,日韩| 在线天堂最新版资源| 亚洲自拍偷在线| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 搡老乐熟女国产| 国产在视频线精品| 人妻系列 视频| 日日啪夜夜爽| 国产成人freesex在线| 日本-黄色视频高清免费观看| 国产黄频视频在线观看| 国产精品av视频在线免费观看| 一级片'在线观看视频| 久久久久久久精品精品| 国产精品嫩草影院av在线观看| 久久99热6这里只有精品| 高清在线视频一区二区三区| 欧美日本视频| 人妻一区二区av| 久久久久国产网址| 欧美精品一区二区大全| 大香蕉久久网| 国产探花极品一区二区| 黄色一级大片看看| 欧美日韩精品成人综合77777| 亚洲国产欧美在线一区| 观看美女的网站| 老司机影院成人| 精品人妻一区二区三区麻豆| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 日韩国内少妇激情av| 亚洲精品亚洲一区二区| 五月玫瑰六月丁香| 嫩草影院精品99| 少妇人妻精品综合一区二区| 高清在线视频一区二区三区| 免费看不卡的av| 免费观看在线日韩| 亚洲欧美日韩无卡精品| 97在线视频观看| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 亚洲va在线va天堂va国产| 久久久色成人| 乱码一卡2卡4卡精品| 少妇高潮的动态图| 国产成人精品久久久久久| 国产精品无大码| 国产亚洲午夜精品一区二区久久 | 97在线人人人人妻| 欧美+日韩+精品| 国产女主播在线喷水免费视频网站| 亚洲自拍偷在线| 一级毛片久久久久久久久女| 熟女人妻精品中文字幕| 最近最新中文字幕大全电影3| 精品少妇黑人巨大在线播放| 午夜福利高清视频| 五月玫瑰六月丁香| 色播亚洲综合网| 国产精品一二三区在线看| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 在线播放无遮挡| 亚洲精品aⅴ在线观看| 精华霜和精华液先用哪个| 视频区图区小说| 国产女主播在线喷水免费视频网站| 另类亚洲欧美激情| 国产色爽女视频免费观看| 成年av动漫网址| 国产乱来视频区| 亚洲成人一二三区av| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 国产午夜精品一二区理论片| 高清午夜精品一区二区三区| 国产成人91sexporn| 国产精品一二三区在线看| 亚洲人成网站在线播| 韩国高清视频一区二区三区| 久久久精品免费免费高清| 涩涩av久久男人的天堂| 又爽又黄无遮挡网站| 青春草视频在线免费观看| 黄色一级大片看看| 男女边摸边吃奶| 97超视频在线观看视频| 能在线免费看毛片的网站| 亚洲精品456在线播放app| 黄色欧美视频在线观看| 久久久久久久久久人人人人人人| 亚洲精品自拍成人| 午夜激情久久久久久久| 日韩欧美精品免费久久| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 国产毛片在线视频| 国产极品天堂在线| 欧美另类一区| 男人和女人高潮做爰伦理| 男人添女人高潮全过程视频| 日本黄大片高清| 亚洲欧洲日产国产| 国产淫片久久久久久久久| 精品一区二区三卡| 国产成人freesex在线| 观看美女的网站| 一本久久精品| 午夜精品国产一区二区电影 | www.av在线官网国产| 午夜福利高清视频| 亚洲欧洲国产日韩| 国产综合精华液| av在线播放精品| 国产精品一二三区在线看| 夜夜爽夜夜爽视频| 大陆偷拍与自拍| 日日撸夜夜添| 亚洲精品国产av成人精品| 国产色爽女视频免费观看| 国产熟女欧美一区二区| 高清日韩中文字幕在线| 一本久久精品| 国产淫语在线视频| 22中文网久久字幕| 亚洲国产欧美人成| 免费在线观看成人毛片| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| 国产精品偷伦视频观看了| 久久综合国产亚洲精品| 中文字幕亚洲精品专区| 亚洲av日韩在线播放| 18禁在线播放成人免费| 在线亚洲精品国产二区图片欧美 | 久久97久久精品| 热re99久久精品国产66热6| 91精品一卡2卡3卡4卡| 久久99蜜桃精品久久| av在线播放精品| 高清在线视频一区二区三区| 亚洲经典国产精华液单| 亚洲美女视频黄频| 久久久久九九精品影院| 国产高清三级在线| 人妻夜夜爽99麻豆av| 久久久精品欧美日韩精品| 蜜桃亚洲精品一区二区三区| 久久鲁丝午夜福利片| 日韩中字成人| 一区二区三区免费毛片| 在线观看一区二区三区激情| 亚洲成色77777| 国产av不卡久久| 99热6这里只有精品| 日韩一区二区视频免费看| 亚洲av欧美aⅴ国产| 久久久精品欧美日韩精品| 成人鲁丝片一二三区免费| 黄色一级大片看看| 亚洲综合色惰| 国产精品嫩草影院av在线观看| 少妇的逼水好多| 日韩中字成人| 一本久久精品| 成人欧美大片| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| av国产精品久久久久影院| 国产乱人偷精品视频| 国产有黄有色有爽视频| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91 | 欧美日韩视频精品一区| 精品久久久久久久久av| 国产高清三级在线| 免费av毛片视频| 在现免费观看毛片| 另类亚洲欧美激情| 亚洲欧洲日产国产| 日日啪夜夜爽| 一个人看视频在线观看www免费| av国产免费在线观看| 成年人午夜在线观看视频| .国产精品久久| 黄色怎么调成土黄色| 极品教师在线视频| 波野结衣二区三区在线| 深夜a级毛片| 最近中文字幕高清免费大全6| 人妻系列 视频| 亚洲三级黄色毛片| 人妻夜夜爽99麻豆av| 一级毛片 在线播放| 精品国产三级普通话版| 一本色道久久久久久精品综合| 在线 av 中文字幕| 欧美日本视频| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 亚洲,一卡二卡三卡| 日本黄色片子视频| 久久久久久久久久久免费av| 黄片wwwwww| 国产精品爽爽va在线观看网站| 一级av片app| 亚洲精品一二三| 九色成人免费人妻av| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| 久久久久久久久大av| 国产成人福利小说| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 国内精品宾馆在线| 亚洲欧美日韩东京热| 色吧在线观看| 男插女下体视频免费在线播放| 日韩视频在线欧美| 交换朋友夫妻互换小说| 舔av片在线| 午夜免费鲁丝| 亚洲国产色片| 亚洲精华国产精华液的使用体验| av天堂中文字幕网| 国产av不卡久久| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 成人一区二区视频在线观看| 欧美三级亚洲精品| 国产视频首页在线观看| 日韩一区二区三区影片| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 日韩成人av中文字幕在线观看| 亚洲精品一二三| 国产伦精品一区二区三区视频9| 香蕉精品网在线| 国产精品一区二区在线观看99| 69人妻影院| 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 视频区图区小说| 嘟嘟电影网在线观看| 人体艺术视频欧美日本| 午夜福利视频1000在线观看| 人妻 亚洲 视频| 亚洲综合色惰| 国产 精品1| 三级国产精品欧美在线观看| 久久久色成人| 看免费成人av毛片| 爱豆传媒免费全集在线观看| 成人黄色视频免费在线看| 国产色爽女视频免费观看| 在线天堂最新版资源| 精品久久久久久电影网| av女优亚洲男人天堂| 夜夜爽夜夜爽视频| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 日韩伦理黄色片| .国产精品久久| 肉色欧美久久久久久久蜜桃 | 伦精品一区二区三区| 国产高潮美女av| 丝袜美腿在线中文| 97在线人人人人妻| 亚洲一区二区三区欧美精品 | 韩国高清视频一区二区三区| 日本三级黄在线观看| 天堂中文最新版在线下载 | 亚洲,一卡二卡三卡| 男人和女人高潮做爰伦理| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| 韩国av在线不卡| 一级黄片播放器| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 亚洲国产最新在线播放| 免费观看性生交大片5| 亚洲va在线va天堂va国产| 麻豆乱淫一区二区| 十八禁网站网址无遮挡 | 亚洲色图综合在线观看| tube8黄色片| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 深爱激情五月婷婷| 亚洲av成人精品一区久久| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 超碰97精品在线观看| 亚洲欧美精品专区久久| 美女cb高潮喷水在线观看| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 成人特级av手机在线观看| 国产在线男女| 成人黄色视频免费在线看| 中文乱码字字幕精品一区二区三区| 国产精品.久久久| 亚洲av.av天堂| 我要看日韩黄色一级片| 青春草视频在线免费观看| 国产亚洲午夜精品一区二区久久 | 中文字幕av成人在线电影| 一区二区三区精品91| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 乱系列少妇在线播放| 日本熟妇午夜| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 青春草国产在线视频| 神马国产精品三级电影在线观看| 美女高潮的动态| 成人毛片a级毛片在线播放| 黄色视频在线播放观看不卡| 内射极品少妇av片p| 日日摸夜夜添夜夜爱| 国产亚洲av片在线观看秒播厂| 少妇人妻一区二区三区视频| 亚洲精品中文字幕在线视频 | 亚洲精品aⅴ在线观看| 午夜爱爱视频在线播放| 欧美精品一区二区大全| 最近手机中文字幕大全| 日韩人妻高清精品专区| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 亚洲成人av在线免费| 午夜激情久久久久久久| 熟女av电影| 久久人人爽av亚洲精品天堂 | 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 亚洲av男天堂| 天堂俺去俺来也www色官网| 97超碰精品成人国产| 亚洲av中文av极速乱| 欧美日韩视频精品一区| videossex国产| 国产综合懂色| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 久久久久久久大尺度免费视频| 欧美xxxx性猛交bbbb| 国产探花极品一区二区| 亚洲av免费在线观看| 亚洲精品中文字幕在线视频 | 国产极品天堂在线| 国产亚洲精品久久久com| 久久久精品免费免费高清| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频 | 不卡视频在线观看欧美| 日本色播在线视频| 春色校园在线视频观看| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 亚洲国产欧美在线一区| 91精品一卡2卡3卡4卡| 爱豆传媒免费全集在线观看| 18+在线观看网站| 午夜亚洲福利在线播放| 精品视频人人做人人爽| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 国产乱人偷精品视频| 午夜激情久久久久久久| 97超碰精品成人国产| 大片电影免费在线观看免费| 亚洲欧美成人精品一区二区| 日日摸夜夜添夜夜爱| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 久久精品久久精品一区二区三区| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 丝袜喷水一区| 日韩强制内射视频| 男女无遮挡免费网站观看| 日韩av不卡免费在线播放| 2022亚洲国产成人精品| 免费高清在线观看视频在线观看| 日韩一本色道免费dvd| 精品久久国产蜜桃| 日本黄色片子视频| 成人毛片a级毛片在线播放| av在线播放精品| 亚洲,欧美,日韩| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 如何舔出高潮| 免费观看av网站的网址| videossex国产| 熟女av电影| 综合色av麻豆| 亚洲图色成人| 精品国产乱码久久久久久小说| 亚洲最大成人手机在线| 最近中文字幕2019免费版| 亚洲av男天堂| 国产成人福利小说| 丝袜喷水一区| 亚洲精品,欧美精品| 黄色视频在线播放观看不卡| 久久女婷五月综合色啪小说 | 精品一区在线观看国产| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 高清午夜精品一区二区三区| 欧美日韩国产mv在线观看视频 | 波多野结衣巨乳人妻| 免费播放大片免费观看视频在线观看| 国产精品伦人一区二区| 成人毛片a级毛片在线播放| 在线 av 中文字幕| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 免费观看无遮挡的男女| 大香蕉久久网| 亚洲自偷自拍三级| 日日啪夜夜爽| 哪个播放器可以免费观看大片| 亚洲精品456在线播放app| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 简卡轻食公司| 99久久九九国产精品国产免费| 亚洲色图综合在线观看| 一级毛片aaaaaa免费看小| 久久精品国产自在天天线| 精品久久国产蜜桃| 久久久精品免费免费高清| 日韩在线高清观看一区二区三区| 欧美区成人在线视频| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频 | 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 亚洲伊人久久精品综合| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 亚洲精品乱久久久久久| 熟女人妻精品中文字幕| 男女边摸边吃奶| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| av线在线观看网站| 久久精品国产自在天天线| 国产成人aa在线观看| 五月开心婷婷网| 日韩大片免费观看网站| 黄色视频在线播放观看不卡| 国产av码专区亚洲av| 好男人在线观看高清免费视频| 国产成人freesex在线| av卡一久久| 国产伦理片在线播放av一区| 国产亚洲最大av| 内地一区二区视频在线| 搡女人真爽免费视频火全软件| 一级a做视频免费观看| 日韩在线高清观看一区二区三区| 桃花免费在线播放| 欧美97在线视频| 最近最新中文字幕大全免费视频 | 美女视频免费永久观看网站| 伦理电影大哥的女人| 亚洲精品视频女| 老司机亚洲免费影院| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 又大又爽又粗| 欧美精品av麻豆av| 国产深夜福利视频在线观看| 少妇人妻精品综合一区二区| 免费少妇av软件| 日本91视频免费播放| avwww免费| 99热网站在线观看| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 亚洲av电影在线进入| 久久99热这里只频精品6学生| 男女无遮挡免费网站观看| 最黄视频免费看| 99久久99久久久精品蜜桃| 看十八女毛片水多多多| 国产视频首页在线观看| 日韩欧美一区视频在线观看| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 亚洲精品一二三| 亚洲在久久综合| 精品少妇内射三级| 欧美精品高潮呻吟av久久| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 免费av中文字幕在线| 午夜福利一区二区在线看| 亚洲国产欧美在线一区| 久久毛片免费看一区二区三区| 亚洲国产av影院在线观看| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 日韩av在线免费看完整版不卡| 亚洲欧美清纯卡通| 免费在线观看完整版高清| 青春草亚洲视频在线观看| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 国产成人啪精品午夜网站| 一区福利在线观看| 亚洲熟女精品中文字幕| 熟妇人妻不卡中文字幕| 男女床上黄色一级片免费看| 91aial.com中文字幕在线观看| 久久久久久久精品精品| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 国产一区亚洲一区在线观看| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 91国产中文字幕| 精品福利永久在线观看| 精品一区二区三区av网在线观看 | 91老司机精品| 美女午夜性视频免费| 国产激情久久老熟女| 一二三四在线观看免费中文在| av福利片在线| 精品亚洲成a人片在线观看| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 飞空精品影院首页| 日韩大片免费观看网站| 97在线人人人人妻| 欧美另类一区| 国产亚洲一区二区精品| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 免费看av在线观看网站| 最近中文字幕2019免费版| 97精品久久久久久久久久精品|