大鯢皮明膠提取及其性質(zhì)分析

金文剛，陳德經(jīng)，耿敬章，裴金金

1(陜西理工大學(xué) 生物科學(xué)與工程學(xué)院，陜西省資源生物重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，陜西 漢中，723000)2(大連工業(yè)大學(xué) 國家海洋食品工程技術(shù)研究中心，遼寧 大連， 116034)3(陜西理工大學(xué) 大鯢研究所，陜西 漢中，723000)

大鯢皮明膠提取及其性質(zhì)分析

金文剛1,2,3*，陳德經(jīng)1,3，耿敬章1，裴金金1

1(陜西理工大學(xué) 生物科學(xué)與工程學(xué)院，陜西省資源生物重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，陜西 漢中，723000)2(大連工業(yè)大學(xué) 國家海洋食品工程技術(shù)研究中心，遼寧 大連， 116034)3(陜西理工大學(xué) 大鯢研究所，陜西 漢中，723000)

為有效利用大鯢加工副產(chǎn)物鯢皮，研究了從鯢皮中提取明膠的工藝條件及其部分性質(zhì)。鯢皮經(jīng)堿酸預(yù)處理后，以提取率為指標(biāo)，通過單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn)優(yōu)化了明膠提取的工藝參數(shù)。結(jié)果表明：鯢皮明膠最適提取條件為溫度60 ℃，超聲功率400 W、提取時(shí)間7 h，料液比1∶9(g∶mL)，明膠提取率可達(dá)13.76%。鯢皮明膠中甘氨酸、脯氨酸、谷氨酸和丙氨酸含量相對較高，約占總氨基酸的50%，該明膠在234 nm 處有最大紫外吸收，黏度為3.3 mPa·s，凝凍強(qiáng)度Bloom值為216 g。

大鯢；明膠；紫外光譜；凝凍強(qiáng)度； 氨基酸

大鯢俗稱娃娃魚，是世界上現(xiàn)存最大的兩棲動(dòng)物，被列入我國二級(jí)水生野生保護(hù)動(dòng)物名錄[1]。大鯢是一種食用和藥用價(jià)值極高的動(dòng)物，不但肉質(zhì)細(xì)嫩、味道鮮美、營養(yǎng)價(jià)值高，而且肌肉、內(nèi)臟、骨骼、表皮及分泌物均可入藥[2]。近年來大鯢人工養(yǎng)殖已經(jīng)實(shí)現(xiàn)產(chǎn)業(yè)化，子二代大鯢數(shù)量和產(chǎn)量在我國貴州、湖北、陜西、湖南、廣西、四川等地形成了一定規(guī)模，在部分地區(qū)已發(fā)展成為一項(xiàng)新興產(chǎn)業(yè)，在促進(jìn)產(chǎn)區(qū)農(nóng)民增收等方面發(fā)揮了重要作用。2015年6月，農(nóng)業(yè)部發(fā)布的《養(yǎng)殖大鯢及其標(biāo)識(shí)技術(shù)規(guī)程》正式實(shí)施，標(biāo)志著國家許可養(yǎng)殖大鯢進(jìn)行出售、開發(fā)利用和進(jìn)入市場領(lǐng)域。

隨著大鯢資源深加工及開發(fā)利用日益受到關(guān)注，相關(guān)的研究報(bào)道越來越多。如，王立新等[3]對大鯢肌肉、尾脂常規(guī)營養(yǎng)成分、氨基酸組成和脂肪酸組成進(jìn)行分析，李莉等[4]分析了大鯢肌肉和鯢皮營養(yǎng)成分，研究表明大鯢肉、尾脂和鯢皮具有較高的營養(yǎng)價(jià)值；胡云峰等[5]研究了不同比例氣體成分對氣調(diào)小包裝冷鮮大鯢分割肉品質(zhì)的影響，發(fā)現(xiàn)10% O2+70% CO2+20% N2比例的氣體成分保鮮效果最好，能有效延緩大鯢肉的色澤下降及汁液流失率與揮發(fā)性鹽基氮含量的升高，抑制微生物的生長繁殖，使大鯢肉保持較好的感官品質(zhì)；陳曦等[6]研究了大鯢皮膚黏液藥膏對大鼠皮膚燙傷的治療作用，發(fā)現(xiàn)該藥膏具有促進(jìn)大鼠燙傷創(chuàng)面愈合的效果。王立鋒等[7]從大鯢皮膚分泌物中分離純化到一個(gè)具有較強(qiáng)陽離子特征的堿性肽，對革蘭氏陰性菌、陽性菌和真菌均具有較強(qiáng)的抗菌活性；GUO等[8]和KONG等[9]從大鯢皮膚腺分泌物中分離到了生理活性物質(zhì)(包括活性肽、糖肽等)，徐偉良等[10]從大鯢皮膚黏液提取純化了糖蛋白，發(fā)現(xiàn)該糖蛋白對人肺癌細(xì)胞A549具有明顯的抑制作用；鮑九枝和余可鋒以大鯢肉為原料，采用酶法制備了大鯢肉活性肽，并開發(fā)了運(yùn)動(dòng)飲料[11]。

明膠是一種通過膠原蛋白熱變性、部分水解獲得的高分子質(zhì)量水溶性蛋白，被廣泛應(yīng)用于改善食品結(jié)構(gòu)、提高食品保水性和穩(wěn)定性[12]。明膠作為膠原的衍生產(chǎn)物，主要從動(dòng)物的結(jié)締組織或表皮組織中的膠原經(jīng)變性轉(zhuǎn)化，再經(jīng)適當(dāng)溫度提取出來的水溶性物質(zhì)，它的主要結(jié)構(gòu)與膠原相近。通常人們都是使用豬、牛、的皮和骨提取膠原蛋白和明膠。但隨著瘋牛病、口蹄疫和禽流感等畜禽疾病的爆發(fā)，人們對陸生動(dòng)物膠原制品的安全性產(chǎn)生質(zhì)疑。另外，由于宗教和習(xí)俗等原因，有些人群對畜禽膠原蛋白制品存在禁忌[13]，水產(chǎn)動(dòng)物源明膠制品被認(rèn)為是較為安全的來源之一。

大鯢皮膚厚實(shí)，膠質(zhì)含量豐富，是膠原蛋白及明膠的理想來源。李莉等[14]通過響應(yīng)面優(yōu)化了酶法提取大鯢皮膠原蛋白的工藝條件；顧賽麒等[15]分別提取了大鯢皮酸溶性膠原蛋白和酶溶性膠原蛋白，并對其各項(xiàng)理化性質(zhì)進(jìn)行了研究，得出大鯢皮膠原蛋白為I型膠原蛋白；李林格等[16]以木瓜蛋白酶水解大鯢皮酶溶性膠原蛋白，制備了大鯢皮膠原蛋白肽，發(fā)現(xiàn)該肽具有保護(hù)乙醇誘導(dǎo)小鼠肝損傷的作用。然而從大鯢皮中提取明膠的研究尚未見報(bào)道。為此，本文以養(yǎng)殖大鯢加工副產(chǎn)物鯢皮為原料，經(jīng)預(yù)處理后利用超聲波輔助熱水浸提明膠，以提取率為評價(jià)指標(biāo)，在單因素試驗(yàn)基礎(chǔ)上，采用正交試驗(yàn)優(yōu)化明膠提取工藝參數(shù)，并分析鯢皮明膠的部分理化性質(zhì)，為其后續(xù)應(yīng)用研究提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 原料與試劑

試驗(yàn)原料：養(yǎng)殖大鯢，購自漢中市龍頭山水產(chǎn)養(yǎng)殖開發(fā)有限公司養(yǎng)殖基地。大鯢宰殺后運(yùn)回實(shí)驗(yàn)室，剝下鯢皮，去除皮上的殘肉，沖洗干凈，剪成0.5 cm×0.5 cm小片，瀝干，置于聚乙烯袋后于-18 ℃冰箱中備用。

主要試劑：無水乙酸,NaOH,國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；其余試劑均為國產(chǎn)分析純。

1.2 儀器與設(shè)備

KQ-500DE型臺(tái)式數(shù)控超聲波清洗器，昆山市超聲儀器有限公司；LGJ-10B型冷凍干燥機(jī)，北京四環(huán)儀器有限公司；pHS-3C型精密pH計(jì)，上海雷磁儀器廠；LD4-2A型離心機(jī)，北京雷勃爾離心機(jī)有限公司；HWS-12型電熱恒溫水浴鍋，上海一恒科學(xué)儀器有限公司； L-8900氨基酸自動(dòng)分析儀，日立公司；紫外可見分光光度計(jì)，美國Thermo公司；SNB-2型數(shù)字式黏度計(jì)，上海精科天美儀器有限公司；CT3質(zhì)構(gòu)儀，美國Brookfield公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 鯢皮預(yù)處理

[17]中魚皮預(yù)處理方法，略做調(diào)整。準(zhǔn)確稱取一定質(zhì)量鯢皮，按照1∶10 (g∶mL)浸泡于0.05 mol/L NaOH溶液中，連續(xù)攪拌6 h，每隔2 h更換堿液，去除雜蛋白和色素，之后用流水洗至中性。然后將經(jīng)堿處理過的鯢皮按照1∶10 (g∶mL)浸泡于0.1 mol/L乙酸，于4 ℃連續(xù)攪拌24 h，每隔12 h更換一次酸液，使鯢皮充分溶脹，酸處理后鯢皮在流水下洗至中性，用于明膠提取。

1.3.2 明膠提取

工藝流程：一定質(zhì)量的預(yù)處理鯢皮，加去離子水于燒杯中，置于超聲波清洗器熱水浴中，提取一定的時(shí)間，過濾，收集濾液，4 000 r/min離心10 min，減壓濃縮后冷凍干燥，得到白色物質(zhì)，研磨后即得鯢皮明膠。

明膠提取率參照文獻(xiàn)[18]進(jìn)行計(jì)算：

(1)

1.3.3 單因素試驗(yàn)

準(zhǔn)確稱取一定質(zhì)量預(yù)處理后的鯢皮，分別考察提取溫度(40、50、60、70、80 ℃)、超聲功率(100、200、300、400、 500 W)、時(shí)間(2、4、6、8、10 h)和料液比(1∶4、1∶6、1∶8、1∶10、1∶12)對明膠提取率的影響。

1.3.4 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)

根據(jù)單因素試驗(yàn)結(jié)果，以明膠提取率為指標(biāo)，對提取溫度、超聲功率、提取時(shí)間和料液比4個(gè)因素設(shè)計(jì)L9(34)正交試驗(yàn)，各因素及水平見表1。

表1 正交試驗(yàn)因素水平表

1.3.5 鯢皮明膠紫外光譜

將提取到的明膠樣品溶解于0.5 mol/L乙酸溶液中，配制成1 mg/mL的明膠溶液，用紫外分光光度計(jì)在200～400 nm 近紫外光區(qū)以120 nm/min的速度進(jìn)行掃描。

1.3.6 鯢皮明膠氨基酸組成

準(zhǔn)確稱取一定量的明膠，置于水解管底部，緩慢加入5 mL的6 mol/L鹽酸，抽真空，維持20 min后，在酒精噴燈上封口，110 ℃水解 24 h 后，蒸干鹽酸，用去離子水稀釋，定容到10 mL容量瓶中得水解液，采用氨基酸自動(dòng)分析儀測定。

1.3.7 鯢皮明膠凝凍強(qiáng)度測定

按照AOAC明膠強(qiáng)度的標(biāo)準(zhǔn)測試方法，配制66.7 g/L的明膠溶液，65 ℃水浴加熱20 min攪拌使之充分溶解，然后將樣品轉(zhuǎn)入凍力瓶中，室溫冷卻15 min，10 ℃冷卻16 h，CT3質(zhì)構(gòu)儀測定其凝凍強(qiáng)度。質(zhì)構(gòu)儀參數(shù)設(shè)置如下：測試類型選擇壓縮，負(fù)載單元選擇1 000 g，測試速度0.50 mm/s，返回速度0.50 mm/s，壓縮距離4 mm，觸發(fā)力4.5 g，探頭選擇TA10(圓柱形，直徑12.7 mm，長35 mm)，探頭下壓后最大負(fù)載即為凝凍強(qiáng)度Bloom值。

1.3.8 明膠的黏度

配制66.7 g/L的明膠，60 ℃水浴加熱使之充分溶解，置于SNB-2型數(shù)字式黏度計(jì)轉(zhuǎn)盤之下，采用1號(hào)轉(zhuǎn)子，調(diào)轉(zhuǎn)速為30 r/min，開動(dòng)電機(jī)，待旋轉(zhuǎn)平衡，讀數(shù)顯示穩(wěn)定后讀取黏度值。

2 結(jié)果與分析

2.1 單因素試驗(yàn)結(jié)果

2.1.1 提取溫度對明膠提取率的影響

固定超聲功率300 W, 料液比1∶10和提取時(shí)間6 h，考察不同提取溫度對明膠提取率的影響，結(jié)果見圖1。

圖1 提取溫度對明膠提取率的影響Fig.1 Effect of temperature on yield of extracted gelatin

當(dāng)鯢皮充分溶脹后，升高溫度可以有效斷裂膠原蛋白分子三螺旋結(jié)構(gòu)區(qū)域的次級(jí)鍵，膠原蛋白發(fā)生一定程度的降解后，才能以明膠的形式溶于水中。升高溫度可以加速膠原蛋白的降解，從而促進(jìn)明膠的溶出。但是提取溫度過高可引起明膠的次級(jí)水解，使明膠的黏度和凝膠強(qiáng)度下降[19]。由圖1可看出，在40～60 ℃內(nèi)，隨著溫度升高，明膠提取率逐漸增加，60 ℃明膠提取率最大，而60 ℃以后，明膠提取率趨于穩(wěn)定。因此，選擇60 ℃做為后續(xù)明膠提取溫度。

2.1.2 超聲功率對明膠提取率的影響

固定提取溫度60 ℃, 料液比1∶10和提取時(shí)間6 h，考察不同超聲功率對明膠提取率的影響，結(jié)果見圖2。

圖2 超聲功率對明膠提取率的影響Fig.2 Effect of ultrasonic power on yield of extracted gelatin

超聲波具有機(jī)械和空化效應(yīng)，有利于提取液中溶質(zhì)的溶出。由圖2可看出，在100～300 W內(nèi)，隨著超聲功率的增加，明膠提取率逐漸增大，超聲功率為300 W時(shí)提取率最大，可能由于超聲波的機(jī)械和空化效應(yīng)促使鯢皮中明膠更多的溶出；而超聲功率為300 W以后，明膠提取率趨于穩(wěn)定并略有下降。因此，選擇300 W做為后續(xù)明膠提取的超聲功率。

2.1.3 提取時(shí)間對明膠提取率的影響

固定超聲功率300 W，提取溫度60 ℃和料液比1∶10，考察不同提取時(shí)間對明膠提取率的影響，結(jié)果見圖3。

圖3 提取時(shí)間對明膠提取率的影響Fig.3 Effect of time on yield of extracted gelatin

由圖3可看出，在2～8 h內(nèi)，隨著提取時(shí)間的延長，明膠提取率逐漸增大。提取8 h時(shí)，明膠提取率最大，而8 h以后，明膠提取率略有下降，這與王珊珊等人在提取真鱈魚骨明膠過程中，提取時(shí)間8 h前后的變化趨勢一致[19]。本研究提取4 h后，盡管明膠提取率變化趨勢較平緩，但是8 h時(shí)提取率最大，之后提取率略有下降。綜合考慮，選擇8 h做為后續(xù)明膠的提取時(shí)間。

2.1.4 料液比對明膠提取率的影響

固定提取時(shí)間8 h，超聲功率300 W和提取溫度60 ℃，考察不同料液比對明膠提取率的影響，結(jié)果見圖4。

圖4 料液比對明膠提取率的影響Fig.4 Effect of skin water ratio on yield of extracted gelatin

由圖4可看出，隨著料液比的增加，明膠提取率呈現(xiàn)先增加后趨于穩(wěn)定的趨勢。當(dāng)料液比為1∶8時(shí)，明膠提取率最大，表明提取溶劑的量增加可以提高提取液中明膠的濃度，有利于鯢皮中明膠的溶出，但是使用過多的提取溶劑會(huì)造成后續(xù)濃縮干燥過程中能耗的增加，不利于實(shí)際生產(chǎn)[20]。因此，選擇1∶8做為后續(xù)明膠提取的適宜料液比。

2.2 正交試驗(yàn)結(jié)果

在單因素試驗(yàn)基礎(chǔ)上，以明膠提取率為指標(biāo)，對提取溫度、超聲功率、提取時(shí)間和料液比4個(gè)因素設(shè)計(jì)L9(34)正交試驗(yàn)，結(jié)果見表2。

由表2正交試驗(yàn)極差分析結(jié)果可知，影響大鯢皮明膠提取率的各因素主次關(guān)系為超聲功率B>提取溫度A>料液比D>提取時(shí)間C。超聲功率對明膠得率影響最顯著，提取時(shí)間對明膠得率影響相對最小。從各因素各水平下，提取率的均值K可獲知，鯢皮明膠提取的最佳組合為A2B3C1D3，即提取溫度60 ℃，超聲功率400W，提取時(shí)間7h，料液比1∶9。在此優(yōu)化工藝條件下提取明膠，最終提取率為13.76%。KTARI等[18]提取的斑馬鯰魚皮明膠，提取率為14.8%，較本文提取的鯢皮明膠提取率高一些，可能是原料特性或者預(yù)處理?xiàng)l件造成的，今后可通過其他手段如酶法進(jìn)一步提高明膠得率。

表2 正交試驗(yàn)結(jié)果表

2.3 鯢皮明膠的紫外吸收光譜

通常蛋白質(zhì)在280 nm 處有較強(qiáng)的紫外吸收，因?yàn)榈鞍追肿又泻心芪找欢ㄗ贤獠ㄩL光的紫外生色基團(tuán)，例如苯丙氨酸、色氨酸、酪氨酸等芳香族氨基酸。由圖5 可見，本研究提取的鯢皮明膠，最大吸收波長為234 nm，符合明膠的特征吸收波長范圍，主要是電子的N→л*和N→σ*躍遷所產(chǎn)生[19]。

圖5 鯢皮明膠的紫外吸收光譜Fig.5 UV spectrophotometry of skin gelatin

大鯢皮明膠在280 nm 處吸收較少，說明樣品只含有少量芳香族氨基酸，可以初步判斷所提取的明膠具有較高的純度。顧賽麒等[15]分別提取了大鯢皮酶溶性膠原蛋白和酸溶性膠原蛋白，得到的最大紫外吸收波長分別為232 nm和233 nm。另外，李林格和曲敏[15]的研究結(jié)果表明，大鯢皮膠原蛋白和膠原蛋白肽均在234 nm存在紫外特征吸收峰。由于明膠是一種通過膠原蛋白熱變性、部分水解獲得的高分子質(zhì)量水溶性蛋白，因此上述鯢皮膠原蛋白和膠原肽的紫外光譜研究結(jié)果與本研究鯢皮明膠的紫外吸收特性較為接近。

2.4 明膠的氨基酸組成

明膠的氨基酸組成是其重要的營養(yǎng)指標(biāo)，很多研究對明膠的氨基酸組成進(jìn)行了測定。表3顯示了鯢皮明膠的氨基酸組成。

表3 大鯢皮明膠氨基酸組成分析

從表3中可看出，甘氨酸、脯氨酸、谷氨酸和丙氨酸是鯢皮明膠的主要氨基酸，含量分別為20.17%，12.09%， 8.79%和8.54%，約占到總氨基酸的50%，而鯢皮明膠中胱氨酸和蛋氨酸含量相對較少。顧賽麒等[15]分析了鯢皮膠原蛋白氨基酸組成特點(diǎn)，發(fā)現(xiàn)酸溶性膠原蛋白和酶溶性膠原蛋白中甘氨酸含量最高，其次是谷氨酸、脯氨酸、羥脯氨酸，這與本研究鯢皮明膠氨基酸組成結(jié)果較為類似。一般來講，多數(shù)明膠中甘氨酸是其主要氨基酸，脯氨酸和羥脯氨酸作為膠原的特征氨基酸在明膠中含量也較高[18]，盡管本研究未檢測鯢皮明膠羥脯氨酸含量，但是甘氨酸和脯氨酸含量已經(jīng)占到總氨酸的32.26%。

2.5 明膠黏度和凝凍強(qiáng)度

明膠的黏度和凝膠強(qiáng)度是反映明膠品質(zhì)的重要特性指標(biāo)。食品工業(yè)中使用明膠通常都要求其具有一定的黏度和凝凍強(qiáng)度，用途不同，對其要求會(huì)有所差別。本文對提取的鯢皮明膠的黏度和凝凍強(qiáng)度也進(jìn)行了測定，并和國家標(biāo)準(zhǔn)GB6783—2014《食品添加劑 明膠》凝凍強(qiáng)度值進(jìn)行了對比，結(jié)果如表4所示。

表4 大鯢皮明膠的黏度和凝凍強(qiáng)度

研究表明，不同來源明膠的凝凍強(qiáng)度會(huì)有一定差異，總體可分為低Bloom值(<150)、中等Bloom值(150～220)和高Bloom值(>220)，造成明膠黏度和凝凍強(qiáng)度差異的原因，除取決于原料及處理方式外，更多的受到提取條件的影響[18, 21]。本研究中大鯢皮明膠黏度值為3.3 mPa·s，大于魚糜加工副產(chǎn)物提取的明膠黏度值(1.9 mPa·s)[21]和非洲胡子鯰魚皮明膠黏度值(2.05～2.85 mPa·s)[22]，但是低于斑馬鯰魚皮明膠黏度值(4.8 mPa·s)[18]；大鯢皮明膠凝凍強(qiáng)度Bloom值為216 g，大于魚糜加工副產(chǎn)物明膠的Bloom值(62.9 g)[21]和斑馬鯰魚皮明膠Bloom值(170 g)[18]，但是小于非洲胡子鯰魚皮明膠Bloom值(234 g)[22]。本研究提取的鯢皮明膠，其黏度和凝凍強(qiáng)度介于中等范圍，今后可通過適當(dāng)改性、修飾和復(fù)配來改善明膠性能，以滿足不同的工業(yè)需要。

3 結(jié)論

在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，采用正交試驗(yàn)確定了大鯢皮提取明膠的最佳工藝條件:提取溫度60 ℃，超聲功率400 W，提取時(shí)間7 h，料液比1∶9，明膠提取率可達(dá)13.76%。經(jīng)紫外光譜掃描，該明膠在234 nm 處有最大吸收，明膠中甘氨酸、脯氨酸、谷氨酸和丙氨酸含量相對較高。鯢皮明膠黏度值為3.3 mPa·s,凝凍強(qiáng)度Bloom值為216 g，達(dá)到食用明膠的基本要求。

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Study on extraction and property of skin gelatin from giant salamander

JIN Wen-gang1,2,3*, CHEN De-jing1,3, GENG Jing-zhang1, PEI Jin-jin1

1(Key Laboratory of Bio-resources of Shaanxi Province, School of Bioscience and Engineering,Shaanxi Sci-Tech University, Hanzhong 723000,China)2(National Engineering Research Center of Seafood, Dalian Polytechnic University, Dalian 116034,China)3(Institute of Giant Salamander, Shaanxi Sci-Tech University, Hanzhong 723000,China)

In order to utilize the by-products skin of giant salamander during processing, the skin gelatin extraction process and its properties were investigated. Skin was first treated by alkaline-acid pre-treatment, then using yield as the index, extraction process parameters were optimized by single-factor experiment and orthogonal experiment. Results showed that the optimum conditions for gelatin from the skin were as follows: the extraction temperature 70 ℃, ultrasonic power 400 W, extraction time 7 h, and the ratio of skin to water 1∶9, with a maximum gelain yield of 13.76%. The skin gelatin of giant salamander contained relatively high content of glycine, proline, glutamic acid and alanine, which are about 50% of the total amino acids. The skin gelatin exhibited the maximum UV absorbance at 234 nm, viscosity of 3.3 mPa·s and gel strength bloom value of 216 g.

giant salamander; gelatin; ultraviolet spectrum; gel strength; amino acid

10.13995/j.cnki.11-1802/ts.201702029

博士，講師(本文通訊作者，E-mail:jinwengang@nwafu.edu.cn)。

陜西省教育廳重點(diǎn)項(xiàng)目(15JS020)；陜西省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室后補(bǔ)助項(xiàng)目(2015SZS-15-01)

2016-06-12，改回日期：2016-07-18