免疫接種和復(fù)方中藥超微粉聯(lián)用預(yù)防肉雞呼吸道疾病的觀察

王巧紅，呂朝輝，胡丹，顧建明

(1．啟東市動物疫病預(yù)防控制中心，江蘇啟東226200;2．海門泰森禽業(yè)發(fā)展有限公司，江蘇海門226151)

免疫接種和復(fù)方中藥超微粉聯(lián)用預(yù)防肉雞呼吸道疾病的觀察

王巧紅1，呂朝輝2，胡丹1，顧建明1

(1．啟東市動物疫病預(yù)防控制中心，江蘇啟東226200;2．海門泰森禽業(yè)發(fā)展有限公司，江蘇海門226151)

為研究免疫接種和復(fù)方中藥超微粉聯(lián)用預(yù)防肉雞呼吸道疾病的機制。本研究選擇1日齡Cobb500肉雞1 000羽，隨機分為5個試驗組，:試驗組1和試驗組2在基礎(chǔ)日糧基礎(chǔ)上添加0．5%中藥超微粉，試驗組3和試驗組4按照每公斤體重0．5 g添加10%阿莫西林可溶性粉，試驗組5不添加任何藥物。試驗組1和試驗組3在基礎(chǔ)免疫基礎(chǔ)上加免雞傳染性支氣管炎疫苗和新流二聯(lián)疫苗，試驗組2、試驗組4和試驗組5僅進行基礎(chǔ)免疫。分別于14日齡、28日齡、42日齡測定血清中IL-1β、IL-2、TNF和INF-γ含量，ND和AI(H5亞型Re-6和Re-7)抗體。結(jié)果表明，免疫接種和中藥超微粉聯(lián)用可保護肉雞消化道、呼吸道，促進免疫器官發(fā)育，能顯著提高血清中的抗體水平和細胞因子的含量。表明二者聯(lián)用通過調(diào)節(jié)機體的細胞免疫和體液免疫，從而對機體產(chǎn)生保護作用，以達到對肉雞呼吸道疾病的防控效果。

免疫;接種;中藥超微粉;呼吸道疾病;肉雞呼吸道疾病

隨著人們生活水平的提高，對肉、奶、蛋的需求量也日益增多，同時對產(chǎn)品質(zhì)量和安全提出了更嚴(yán)格的要求，但動物疫病防控日益復(fù)雜化，呼吸道疾病是制約肉雞健康發(fā)展的重要因素。引起呼吸道疾病的病原種類繁多，同時加上雞特殊的呼吸道結(jié)構(gòu)，氣囊多且分布廣，易感染且治療困難。病毒性疾病一旦發(fā)生很難控制，免疫接種是最直接和有效的防控手段。近年來抗生素在動物疫病防控方面的長期、大量使用及濫用，導(dǎo)致細菌耐藥性產(chǎn)生、藥物殘留和二次污染等問題日益突出。因此探討有效的防控措施是勢在必行，本試驗通過給肉雞進行免疫接種，同時在日糧中添加復(fù)方中藥超微粉，觀察肉雞呼吸道疾病發(fā)生情況，對血清中抗體水平和細胞因子含量的影響，為肉雞呼吸道疾病的防控提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1．1 疫苗、藥品疫苗:雞新城疫活疫苗，遼寧益康生物股份有限公司生產(chǎn)，批號201203;傳染性支氣管炎活疫苗，山東信得科技股份有限公司生產(chǎn)，批號201207001;雞新城疫、禽流感(H9亞型)二聯(lián)滅活疫苗(Lassota株+F株)，梅里亞公司生產(chǎn)，批號12102695;禽流感滅活疫苗(H5，Re-6+Re-7株)梅里亞公司生產(chǎn)，批號12112707。

藥品:復(fù)方中藥超微粉:黃芪150 g、麥芽300 g、穿心蓮100 g、黨參200 g、女貞子250 g，合計1 000 g，進行超微粉粉碎。10%阿莫西林可溶性粉(批號2014060102)，河南省康星藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)。

1．2 試驗動物及試驗設(shè)計1日齡健康Cobb500雛雞1000只，隨機分為5個試驗組，每組10個重復(fù)，每個重復(fù)20只雞。分組情況如下:試驗組1和試驗組2在基礎(chǔ)日糧基礎(chǔ)上添加0．5%中藥超微粉，試驗組3和試驗組4按照每公斤體重0．5 g添加10%阿莫西林可溶性粉，試驗組5不添加任何藥物。中藥組1～7日齡連續(xù)用藥7 d，間隔15 d，23～27日齡再連續(xù)用藥5 d，西藥組1～4日齡飲水用藥，21～24日齡再飲水用藥，連續(xù)用藥4 d。試驗組1和試驗組3的免疫程序為9日齡新城疫疫苗和雞傳染性支氣管炎疫苗混合，滴鼻或點眼，0．06 mL/羽，禽流感疫苗和新流二聯(lián)疫苗混合，皮下注射，0．5 mL/羽;試驗組2、試驗組4和試驗組5的免疫程序為9日齡新城疫疫苗，滴鼻或點眼，0．03 mL/羽，禽流感疫苗皮下注射，0．25 mL/羽。飼養(yǎng)期間雞群自由采食和飲水。

1．3 檢測項目和方法

1．3．1 在整個試驗期觀察各試驗組肉雞的臨床癥狀、剖檢變化。

1．3．2 分別在14、28日齡和42日齡檢測各試驗組肉雞血清中IL-1β、IL-2、INF-γ和TNF的含量，采用放射免疫法;抗體效價檢測:采用血凝試驗和血凝抑制試驗。

1．4 主要儀器JY2002型電子天平，上海分析儀器廠生產(chǎn);TGL-16G-C型高速離心機:上海安亭科學(xué)儀器廠。

1．5 統(tǒng)計學(xué)分析采用SAS6．0統(tǒng)計學(xué)軟件與Excel對試驗數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。

2 結(jié)果與分析

2．1 臨床癥狀及剖檢變化在整個試驗期，試驗組1雞群精神正常，羽毛光亮，糞便正常且未見明顯的呼吸道癥狀，腸壁和氣管、支氣管、氣囊均未見異常，其他試驗組均有不同程度的損傷。在剖檢時發(fā)現(xiàn)試驗組1免疫器官均較其他試驗組大。

2．2 對血清中IL-1β和IL-2含量的影響見表1。

表1 對血清中IL-1β和IL-2含量的影響(ng/mL)

由表1可知，血清中IL-1β和IL-2含量，在14日齡時，除試驗組1與試驗組2、試驗組3與試驗組4之間差異不顯著(P＞0．05)，試驗組3、試驗組4與試驗組5之間差異顯著(P＜0．05)外，其余各試驗組間差異均極顯著(P＜0．01);在28日齡和42日齡時，除試驗組1與試驗組2、試驗組3與試驗組4之間差異不顯著(P＞0．05)外，其余各試驗組之間差異均極顯著(P＜0．01);。隨著試驗期延長，血清中IL-1β和IL-2含量也升高，試驗組1、2含量均高于其他試驗組，以試驗組1含量最高。

2．3 對血清中TNF和IFN-γ含量的影響見表2。

表2 對血清中TNF和IFN-γ含量的影響(ng/mL)

表3 對血清中ND抗體水平的影響

由表2可知，血清中TNF含量，在14、28日齡和42日齡，除了試驗組1與試驗組2、試驗組3、試驗組4與試驗組5之間差異不顯著(P＞0．05)外，其余各試驗組差異均極顯著(P＜0．01)。血清中IFN-γ含量，除了試驗組1與試驗組2、試驗組3與試驗組4之間差異不顯著(P＞0．05)外，其余各試驗組之間差異均極顯著(P＜0．01)。隨著試驗期延長，血清中TNF和IFN-γ含量也升高，試驗組1、2含量均高于其他試驗組，以試驗組1含量最高。

2．4 對血清中ND抗體水平的影響見表3。

由表3可知，14日齡時，除試驗組1和試驗組3試驗組2、4、5之間差異不顯著(P＞0．05)外，其余試驗組之間差異均極顯著(P＜0．01);28日齡時，除試驗組1和試驗組3、試驗組4和試驗組5之間差

異不顯著外其余各試驗組之間的差異均極顯著(P＜0．01);在42日齡時，除試驗組2與試驗組3、試驗組4與試驗組5之間差異不顯著(P＞0．05)外，其余各試驗組之間的差異均極顯著(P＜0．01)。

2．5 對血清中禽流感H5亞型Re-6抗體和Re-7抗體的影響見表4。

表4 對血清中禽流感H5亞型Re-6抗體和Re-7抗體的影響

由表4可知，Re-6和Re-7抗體，在14日齡時，各試驗組之間差異均不顯著(P＞0．05);在28日齡時，除試驗組1與試驗組3、試驗組4與試驗組5之間差異不顯著(P＞0．05)外，其余各試驗組之間差異均極顯著(P＜0．01);在42日齡時，除試驗組2與試驗組3、試驗組4與試驗組5之間差異不顯著(P＞0．05)外，其余各試驗組之間差異均極顯著(P＜0．01);在28日齡時，各試驗組抗體水平均在有效抗體保護范圍內(nèi)，在42日齡時，只有試驗組1處于有效抗體保護范圍內(nèi)。

3 討論

3．1 免疫接種和中藥超微粉聯(lián)用對肉雞血清中細胞因子的影響細胞因子是具有很強功能的蛋白介質(zhì)，由免疫細胞分泌并參與機體免疫應(yīng)答，細胞分化、調(diào)控造血，腫瘤免疫等多種生理和病理過程。主要包括:白細胞介素(IL)、腫瘤壞死因子(TNF)、干擾素(IFN)等。IL-1是一組主要起免疫調(diào)節(jié)作用的激素樣肽類物質(zhì)。IL-2是T細胞的自分泌或旁分泌因子，其主要生理功能是促進T淋巴細胞的增殖和分化。TNF主要由激活的單核巨噬細胞分泌產(chǎn)生，T細胞、B細胞及神經(jīng)細胞也是其分泌細胞［1］。TNF具有雙重作用，在正常情況下，其具有抗腫瘤、抗感染和促進組織修復(fù)等重要作用，對機體有利，若持續(xù)釋放，則會引起機體發(fā)熱、休克、惡病質(zhì)和組織損傷［2］。TNF可以選擇性溶解感染病毒的細胞以限制病毒增殖［3］，IFN具有抗病毒、抗增殖活性、能保護細胞免受病毒感染，對正常細胞具有重要的抗增生活性［4］。王萌等［5］采用自擬中藥方劑防治雞傳染性支氣管炎，結(jié)果表明，中藥方劑可持續(xù)誘生IFN-γ和TNF-β，發(fā)揮了免疫調(diào)節(jié)機能，從而對機體產(chǎn)生免疫保護，達到對雞傳染性支氣管炎的防治效果。鋼強等［6］用三葉青提取物對小鼠進行灌胃，結(jié)果表明，三葉青能明顯提高小鼠免疫功能和TNF-α、IFN-γ指標(biāo)。陳培榮等［7］研究的蛇附子對肉雞免疫功能的影響，結(jié)果顯示，蛇附子可以提高雞的細胞因子水平和免疫器官指數(shù)，具有免疫增強作用。本試驗結(jié)果顯示，通過給肉雞進行免疫注射和飼喂復(fù)方中藥超微粉，呼吸道病發(fā)生率降低，腸道和呼吸道結(jié)構(gòu)正常，免疫器官增大，血清中IL-1β、IL-2、INF-γ和TNF的含量均高于其他試驗組。與上述結(jié)果一致。

3．2 免疫接種和中藥超微粉聯(lián)用對肉雞抗體水平的影響動物機體抗體水平的高低是反映機體對抗病源保護能力的重要指標(biāo)，也是評價免疫效果的重要手段。司昌德等［8］研究表明，黃芪可提高肉雞血清中ND抗體水平。顧建明等［9］采用復(fù)方中藥超微粉飼喂肉雞結(jié)果顯示，0．5%中藥超微粉能顯著提高肉雞的臟器系數(shù)，提高血清ND、Re-6、Re-7抗體水平。本試驗結(jié)果顯示，通過給肉雞免疫接種和飼喂復(fù)方中藥超微粉能提高血清中抗體水平，而且均高于其他試驗組，與以上結(jié)果一致。

綜上所述，通過給肉雞進行免疫接種和飼喂復(fù)方中藥超微粉，可保護腸道和呼吸道結(jié)構(gòu)的完整性，促進免疫器官發(fā)育，進而促進機體持續(xù)釋放細胞因子，發(fā)揮細胞免疫調(diào)節(jié)作用，同時，促進機體抗體產(chǎn)生和延長維持時間，體液免疫和細胞免疫雙重保護進而達到對肉雞呼吸道疾病的防控效果。

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S858．31

B

0529-6005(2017)01-0060-03

2016-04-07

2014年江蘇省農(nóng)業(yè)三新工程項目〔SXGC(2014)112〕

王巧紅(1982-)，女，獸醫(yī)師，碩士，研究方向為中草藥飼料添加劑在動物疫病預(yù)防中的作用，E-mail:wqhwch@163．com