CQ復(fù)方對癌侵襲鏡像痛模型小鼠的鎮(zhèn)痛作用及其中樞機(jī)制探討

姜宇懋+孫丹丹+王志國+李濤+趙小亮+焦玥+劉洋+李玉娟+歐陽竟鋒+王丹巧

[摘要] 該研究旨在了解CQ復(fù)方對癌侵襲鏡像痛（cancer invasion induced mirror image pain，CIIMIP）模型小鼠的鎮(zhèn)痛作用及其相關(guān)中樞機(jī)制。將雄性BALB/c小鼠隨機(jī)分為正常組、操作對照組（注射0.2 mL滅活的S180肉瘤細(xì)胞液）、模型組（于右腿股骨大轉(zhuǎn)子處注射0.2 mL S180肉瘤細(xì)胞液）、CQ復(fù)方低劑量組（模型+100 mg·kg-1，ip）、CQ復(fù)方中劑量組（模型+150 mg·kg-1，ip）、CQ復(fù)方高劑量組（模型+200 mg·kg-1，ip），造模前及術(shù)后用Von Frey纖維絲測定鏡像側(cè)后足的機(jī)械縮足閾值（mechanical withdrawal threshold，MWT）；采用高效液相-熒光法（HPLC-FLD）檢測脊髓L3～L5節(jié)段內(nèi)谷氨酸（Glu）、γ-氨基丁酸（GABA）、甘氨酸（Gly）、?；撬幔═au）濃度；采用AimPlex流式高通量多因子檢測技術(shù)檢測L3～L5節(jié)段脊髓組織內(nèi)調(diào)節(jié)激活T細(xì)胞表達(dá)與分泌因子（RANTES）、單核細(xì)胞趨化蛋白（MCP-3）的含量；并觀察GABAa受體拮抗劑（荷包牡丹堿）對CQ復(fù)方鎮(zhèn)痛作用的影響。研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，CQ復(fù)方能夠顯著提高模型小鼠的MWT（P<0.01，P<0.05），降低L3～L5節(jié)段脊髓組織內(nèi)興奮性氨基酸Glu的含量（P<0.01，P<0.05），提高抑制性氨基酸GABA，Gly，Tau的含量（P<0.01，P<0.05），降低Glu/GABA比值（P<0.01，P<0.05），降低RANTES，MCP-3水平（P<0.05）。GABAa受體拮抗劑在2個時間點(diǎn)有意義地降低了CQ復(fù)方引起的MWT升高（P<0.05）。該研究結(jié)果表明，CQ復(fù)方對CIIMIP模型小鼠有顯著的鎮(zhèn)痛作用，其機(jī)制與調(diào)節(jié)中樞神經(jīng)系統(tǒng)興奮性氨基酸（EAA）/抑制性氨基酸（IAA）遞質(zhì)的平衡，部分激活GABAa受體，以及減少脊髓組織內(nèi)促炎性細(xì)胞因子RANTES，MCP-3的釋放有關(guān)。

[關(guān)鍵詞] 癌侵襲鏡像痛； CQ復(fù)方； 神經(jīng)遞質(zhì)； GABAa受體； 促炎性細(xì)胞因子

[Abstract] This study aimed to analyze the analgesic effect and related central mechanisms of CQ prescription on cancer invasion induced mirror image pain （CIIMIP）in model mice.In the study， male BALB/c mice were randomly divided into normal group， operation control group （injected with 0.2 mL inactivated S180 sarcoma cell sap）， model group （injected with 0.2 mL S180 sarcoma cell sap on the right leg near the greater trochanter of femur） and CQ prescription low dose group （intraperitoneally injected with CQ prescription 100 mg·kg-1 on the basis of model mice）， CQ prescription middle dose group （intraperitoneally injected with CQ prescription 150 mg·kg-1 on the basis of model mice）， and CQ prescription high dose group （intraperitoneally injected with CQ prescription 200 mg·kg-1 on the basis of model mice）. Mechanical withdraw threshold （MWT） of the mirror image lateral hind paws were evaluated by Von Frey hairs before modeling and after surgery. The levels of glutamate （Glu）， gamma aminobutyric acid （GABA）， glycine （Gly）， and taurine （Tau） in the L3-L5 spinal cord were measured by the high performance liquid chromatography-fluorescence detector （HPLC-FLD）； AimPlex detection technology with multiple factors was used to detect the levels of regulated on activation in normal T-cell expressed and secreted （RANTES）， monocyte chemoattractant protein （MCP-3） in the L3-L5 spinal cord. Then we observed the influence of GABAa receptor antagonist （Bicuculline） on analgesic effect of CQ prescription.The results indicated that CQ prescription could remarkably increase MWT of model mice（P<0.01， P<0.05）， decrease the level of Glu（P<0.01， P<0.05）， improve the levels of GABA， Gly， Tau（P<0.01， P<0.05）， lower the ratio of Glu/GABA（P<0.01， P<0.05）， and reduce the levels of RANTES， MCP-3（P<0.05） in the L3-L5 spinal cord， and GABAa receptor antagonist significantly blocked the analgesic effect of CQ prescription at two time points（P<0.05）.This study showed that CQ prescription had significant analgesic effect on CIIMIP model mice， and its mechanism was associated with regulating the balance between excitability amino acid（EAA） and inhibitory amino acid （IAA） transmitters in central nervous system， partially activating GABAa receptor， and reducing the release of RANTES and MCP-3 in the spinal cord.

[Key words] cancer invasion induced mirror image pain； CQ prescription； neurotransmitters； GABAa receptor； proinflammatory cytokine

鏡像痛是指當(dāng)軀體某一部位損傷后，除了損傷部位出現(xiàn)自發(fā)性疼痛或痛敏，有時還可導(dǎo)致身體對側(cè)相同區(qū)域出現(xiàn)自發(fā)性疼痛或痛敏[1]。大量的臨床和動物實(shí)驗(yàn)研究表明鏡像痛是一個非常普遍的現(xiàn)象。在臨床上，可觀察到復(fù)雜區(qū)域疼痛綜合征患者雙側(cè)肢體出現(xiàn)明顯的異常疼痛現(xiàn)象[2]。在諸多實(shí)驗(yàn)動物模型上，如慢性壓迫性損傷模型[3]，脊神經(jīng)結(jié)扎模型[4]，實(shí)驗(yàn)性關(guān)節(jié)炎模型[5]，癌癥疼痛模型[6-7]等都發(fā)現(xiàn)了鏡像痛現(xiàn)象。然而，鏡像痛的發(fā)生、發(fā)展和維持的機(jī)制尚不十分清楚，至今治療效果仍不理想。其中，癌癥疼痛出現(xiàn)的鏡像痛既嚴(yán)重影響患者的生存質(zhì)量又干擾癌癥的治療，在臨床上是非常棘手的問題。

本課題組前期已證實(shí)CQ復(fù)方對于三叉神經(jīng)痛模型大鼠具有明顯的鎮(zhèn)痛作用，且其作用機(jī)制與降低高級痛覺中樞紋狀體內(nèi)興奮性氨基酸Glu的水平有關(guān)[8]。另外，也發(fā)現(xiàn)脊髓組織內(nèi)Glu和GABA含量的平衡在癌侵襲鏡像痛這種疼痛的傳遞機(jī)制中發(fā)揮著重要的作用[7]。因此，本文擬建立小鼠CIIMIP模型，觀察CQ復(fù)方對模型小鼠MWT的影響；采用高效液相-熒光法、AimPlex流式高通量多因子檢測等技術(shù)，測定L3～L5節(jié)段脊髓組織內(nèi)Glu，GABA，Gly，Tau，RANTES，MCP-3的含量；研究GABAa受體抑制劑對CQ復(fù)方鎮(zhèn)痛作用的影響。明確CQ復(fù)方對于癌侵襲鏡像痛是否同樣具有鎮(zhèn)痛作用，并進(jìn)一步深入探討其可能的鎮(zhèn)痛作用機(jī)制。為腫瘤侵襲引起的鏡像痛的機(jī)制研究及臨床治療藥物的開發(fā)提供參考。

1 材料

1.1 動物 SPF級BALB/c雄性小鼠，體重18～20 g，購于中國食品藥品檢定研究院，許可證號SCXK（京）2014-0013。

1.2 瘤株、藥品及試劑 S180肉瘤細(xì)胞系由中國中醫(yī)科學(xué)院中藥研究所惠贈；CQ復(fù)方自制，由川芎提取物和青風(fēng)藤提取物組成，其主要成分鹽酸川芎嗪和鹽酸青藤堿的質(zhì)量比例為4∶5。Glu，GABA，Gly，Tau，硼酸，乙酸鈉（Sigma公司）；甲醇、四氫呋喃（Fisher Chemicals公司）；鄰苯甲醛（Aldrich公司）；β-巰基乙醇（Amresco公司）；荷包牡丹堿（Bicuculline，Bic）（Selleck公司）；Aimplex Muose Custom 8-plex kit多因子檢測試劑盒（北京曠博生物技術(shù)有限公司）。

1.3 儀器 51000-20C Von Frey hairs 疼痛測試包（Danmic公司）；組織研磨儀（IKA，T10 basic ULTRA-TURRAX）；HPLC檢測系統(tǒng)（Sykam S-2100，G1321 A熒光檢測器，Agilent ZORBAX Eclipse AAA 色譜柱及化學(xué)工作站）；NovoCyte D1040 流式細(xì)胞儀（艾森生物有限公司）；臺式高速離心機(jī)（Eppendorf，5417R）。

2 方法

2.1 分組、造模、行為學(xué)評價及藥效觀察 將凍存的S180肉瘤細(xì)胞注射于健康小鼠腹腔，使其產(chǎn)生癌性腹水，收取后分裝凍存。凍存的腹水瘤細(xì)胞復(fù)蘇后，臺盼藍(lán)染色計(jì)數(shù)，調(diào)整活細(xì)胞數(shù)為1×107個/mL，置于冰盒內(nèi)備用。將上述小鼠連續(xù)3 d進(jìn)行預(yù)刺激（0.16 g纖維絲刺激小鼠雙側(cè)的后足），第4天將右后足MWT ≥0.4 g的小鼠隨機(jī)分為正常組（Native組，n=13）、假手術(shù)組（Sham組，n=11）、手術(shù)組（Surgery組，n=52）。Surgery組小鼠于右腿股骨大轉(zhuǎn)子（相當(dāng)于坐骨神經(jīng)分支部位上方）注射0.2 mL瘤細(xì)胞液，Sham組于相同部位注射同等體積相同濃度滅活的瘤細(xì)胞液。瘤細(xì)胞滅活方法：沸水中煮沸15 min，經(jīng)臺盼藍(lán)染色確定無活細(xì)胞。Native組不作任何操作。

采用機(jī)械觸痛法測定小鼠的MWT[7，9]。術(shù)后第2，3，4，5，6，7天測評小鼠手術(shù)部位及對側(cè)（鏡像側(cè)）后足的MWT，將術(shù)后5 ～ 7 d連續(xù)3 d MWT≤0.07 g視為造模成功，成模小鼠隨機(jī)分為模型組（Model，n=12），CQ復(fù)方低劑量組（L-CQ，100 mg·kg-1，n=11）、CQ復(fù)方中劑量組（M-CQ，150 mg·kg-1，n=11）、CQ復(fù)方高劑量組（H-CQ，200 mg·kg-1，n=12）。各給藥組于術(shù)后第8，9，10天腹腔注射相應(yīng)劑量的藥物，每天1次，Model，Sham及Native組腹腔注射等量的生理鹽水。并于第10天給藥前（即0 min）及給藥后30，60，90，120，180，240 min這7個時間點(diǎn)測評癌侵襲鏡像側(cè)后足的MWT。

2.2 脊髓組織內(nèi)氨基酸水平的檢測 連續(xù)給藥第3天，測得癌侵襲鏡像側(cè)后足的MWT后，將小鼠脫頸椎處死，置于冰塊上，取L3～L5節(jié)段脊髓組織，稱重。加入1 mL冰生理鹽水，組織勻漿儀充分勻漿，后經(jīng)去蛋白及微粒等前處理得到脊髓勻漿處理液，使用超純水稀釋至適當(dāng)倍數(shù)待測。采用HPLC-FLD法檢測稀釋后的脊髓勻漿處理液中Glu，GABA，Gly，Tau這4種氨基酸的含量，并按脊髓組織質(zhì)量折算為每1 mg組織內(nèi)氨基酸的含量。具體檢測方法如下：流動相為A液（緩沖液-甲醇-四氫呋喃400∶95∶5）及B液（緩沖液-甲醇120∶380），流速為0.8 mL·min-1，柱溫30 ℃，進(jìn)樣體積20 μL。洗脫梯度：0～10 min為0%～63%B液；10～12 min為63%B液；12～17 min為100%B液；17～18 min為100%～0%B液；18～21 min為0%B液。衍生液于柱前自動衍生，激發(fā)波長為340 nm，發(fā)射波長為455 nm。

2.3 GABAa受體拮抗劑對CQ復(fù)方鎮(zhèn)痛作用的影響 按2.1項(xiàng)方法進(jìn)行動物模型的制備，術(shù)后第2～7 d測評小鼠癌侵襲鏡像側(cè)后足的MWT，并將后3 d MWT均≤0.07 g的成模小鼠分為模型組，GABAa受體拮抗劑（Bic）+CQ組及單用CQ復(fù)方組（n=11）。Bic+CQ組在給予CQ復(fù)方前15 min，經(jīng)尾靜脈注射Bic 2 mg·kg-1，以阻斷GABAa受體。CQ復(fù)方經(jīng)腹腔注射給藥200 mg·kg-1。于Bic給藥前（即-15 min）、CQ復(fù)方給藥前（即0 min）及給藥后30，60，90，120，180，240 min，測評小鼠癌侵襲鏡像側(cè)后足的MWT，觀察GABAa受體阻斷對CQ復(fù)方鎮(zhèn)痛作用的影響。

2.4 脊髓組織內(nèi)促炎性細(xì)胞因子含量的檢測 采用AimPlex流式高通量多因子檢測技術(shù)檢測脊髓組織內(nèi)RANTES，MCP-3的含量，脊髓組織內(nèi)細(xì)胞因子的含量需進(jìn)一步按脊髓組織質(zhì)量折算為每1 mg組織內(nèi)的含量。連續(xù)給藥第3天，測得小鼠癌侵襲鏡像側(cè)后足的MWT后，取L3～L5段脊髓組織，稱重。按照相關(guān)試劑盒操作說明，制備樣品，將反應(yīng)好的樣品通過流式細(xì)胞儀配備的488 nm激發(fā)光的PE通道進(jìn)行熒光檢測上機(jī)讀數(shù)。結(jié)合抗原標(biāo)準(zhǔn)品的標(biāo)準(zhǔn)曲線，對脊髓組織內(nèi)RANTES，MCP-3進(jìn)行定量檢測。

2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS 21.0軟件，正態(tài)計(jì)量數(shù)據(jù)以±s表示，重復(fù)測量的MWT資料在具體某一時間點(diǎn)的組間比較采用多因素方差分析；對于檢測指標(biāo)的數(shù)據(jù)采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)；以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 CIIMIP模型小鼠鏡像側(cè)后足的MWT變化 術(shù)后2～7 d連續(xù)評價Native組、Sham組及Surgery組小鼠癌侵襲鏡像側(cè)的MWT，發(fā)現(xiàn)Surgery組小鼠MWT在術(shù)后第2天下降，第4～7天均穩(wěn)定維持在（0.042±0.013）～（0.072±0.037）g，顯著低于Sham組和Native組（P<0.01），見圖1，且Surgery組小鼠癌侵襲側(cè)存在明顯的痛敏現(xiàn)象。術(shù)后第11天解剖，發(fā)現(xiàn)Surgery組小鼠腿部腫瘤位于坐骨神經(jīng)分支處，腫瘤生長進(jìn)行性地壓迫或侵襲坐骨神經(jīng)，且該組小鼠左前肢和腹部在術(shù)前及術(shù)后16 d內(nèi)均未見明顯疼痛表現(xiàn)，表明S180肉瘤細(xì)胞所致的癌侵襲痛模型小鼠存在鏡像痛現(xiàn)象。

3.2 CQ復(fù)方對CIIMIP模型小鼠鏡像側(cè)后足MWT的影響 連續(xù)第3天給藥前后各組小鼠后足MWT測評結(jié)果見表1。CIIMIP模型小鼠鏡像側(cè)的MWT在所有時間點(diǎn)與Native和Sham組比較均顯著降低（P<0.01）。H-CQ組的MWT在所有時間點(diǎn)與Model組比較均明顯提高（P<0.01，P<0.05），M-CQ組的MWT從給藥60 min開始與Model組比較均存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），結(jié)果表明CQ復(fù)方對CIIMIP模型小鼠具有明顯鎮(zhèn)痛作用。

3.3 CIIMIP模型小鼠脊髓組織內(nèi)EAA，IAA的含量以及CQ復(fù)方對其的影響 與Native組比較，Model組小鼠L3～L5段脊髓組織內(nèi)興奮性氨基酸Glu的含量明顯升高（P<0.05），且CQ復(fù)方高、中、低劑量組能夠顯著降低模型小鼠脊髓組織內(nèi)Glu的含量（P<0.01，P<0.05），并存在量效依賴關(guān)系，見表2。此外，與Native及Sham組比較，Model組小鼠脊髓組織內(nèi)抑制性氨基酸GABA的含量均顯著降低（P<0.01），且CQ復(fù)方高劑量組能夠顯著提高模型小鼠脊髓組織內(nèi)GABA的含量（P<0.01）；與Native及Sham組比較，Model組小鼠脊髓組織內(nèi)抑制性氨基酸 Tau的含量均顯著降低（P<0.01），Model組小鼠脊髓組織內(nèi)抑制性氨基酸Gly的水平明顯低于Sham組（P<0.05），且CQ復(fù)方高劑量組能夠顯著提高脊髓組織內(nèi)Gly，Tau的含量（P<0.01），CQ復(fù)方中劑量組能夠明顯提高脊髓組織內(nèi)Tau的含量（P<0.05），見表2。經(jīng)統(tǒng)計(jì)，與Native及Sham組比較，Model組小鼠脊髓組織內(nèi)Glu/GABA的比值顯著升高（P<0.01），且CQ復(fù)方高、中、低劑量組能夠顯著降低Glu/GABA的比值（P<0.01，P<0.05），見表2。

3.4 GABAa受體拮抗劑對CQ復(fù)方鎮(zhèn)痛作用的影響 Bic是GABAa受體競爭性拮抗劑。預(yù)先靜脈注射Bic，阻斷GABAa受體，在CQ復(fù)方給藥后180，240 min 2個時間點(diǎn)有意義地降低了CQ復(fù)方引起的MWT升高，與CQ組比較P<0.05，結(jié)果見圖2。提示CQ復(fù)方可能部分通過激活GABAa受體而發(fā)揮鎮(zhèn)痛作用。

4 討論

CQ復(fù)方具有活血行氣，祛風(fēng)除濕，通絡(luò)止痛的功效，其主要成分為青藤堿和川芎嗪。青藤堿是中藥青風(fēng)藤的主要成分之一，具有鎮(zhèn)痛、抑制免疫、抗炎等作用[10-11]。川芎嗪是中藥川芎的主要成分之一，具有鎮(zhèn)靜鎮(zhèn)痛、神經(jīng)保護(hù)、抗血栓等活性[12]。本課題組前期已證實(shí)CQ復(fù)方對于三叉神經(jīng)痛模型大鼠具有明顯的鎮(zhèn)痛效應(yīng)[8]。而本文通過對MWT的測評，進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)CQ復(fù)方對于CIIMIP模型小鼠同樣具有顯著的鎮(zhèn)痛作用（P<0.01，P<0.05），為了更清楚地認(rèn)識CQ復(fù)方對其的鎮(zhèn)痛活性，檢測了相關(guān)氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)、促炎性細(xì)胞因子在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中脊髓組織內(nèi)的水平變化，并探討了其可能的作用靶點(diǎn)。

目前，被廣泛接受的鏡像痛形成機(jī)制主要有三大假說，分別是膠質(zhì)細(xì)胞學(xué)說、神經(jīng)學(xué)說、體液學(xué)說。其中，中樞神經(jīng)系統(tǒng)膠質(zhì)細(xì)胞激活，通過縫隙連接、鈣波及促炎性細(xì)胞因子的釋放參與鏡像痛發(fā)生的膠質(zhì)細(xì)胞學(xué)說在鏡像痛發(fā)生機(jī)制中受到越來越多的關(guān)注[13-16]。

中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)廣泛分布的氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)主要分為2類，一類是興奮性氨基酸包括Glu等，另一類是抑制性氨基酸包括GABA，Gly，Tau等。研究表明，在疼痛狀態(tài)下，過量的興奮性氨基酸Glu由初級傳入神經(jīng)纖維末端釋放，激活脊髓背角神經(jīng)元細(xì)胞膜上的NMDA受體，引起大量Ca2+內(nèi)流，并以這種鈣波的形式，促使神經(jīng)元發(fā)生去極化，產(chǎn)生痛覺過敏[17]。另有文獻(xiàn)報道，抑制性氨基酸GABA，Gly能夠與其相應(yīng)受體結(jié)合，通過增加Cl離子向細(xì)胞內(nèi)的流動，抑制脊髓背角介導(dǎo)的神經(jīng)元興奮性反應(yīng)以及疼痛信號的輸出[18]。此外，抑制性氨基酸Tau還可以通過直接作用于三叉神經(jīng)脊束核尾側(cè)亞核膠狀質(zhì)的突觸后神經(jīng)元，活化GABA，Gly受體調(diào)節(jié)口面部疼痛[19]。作者檢測了CIIMIP模型小鼠L3～L5段脊髓組織內(nèi)相關(guān)興奮性氨基酸和抑制性氨基酸神經(jīng)遞質(zhì)的含量，發(fā)現(xiàn)該模型小鼠脊髓組織內(nèi)Glu的水平明顯升高（P<0.05），GABA，Gly，Tau的水平則顯著降低（P<0.01，P<0.05），而CQ復(fù)方可以逆轉(zhuǎn)上述情況的發(fā)生，顯著降低Glu/GABA比值（P<0.01，P<0.05），與上述研究的結(jié)果一致，提示了興奮性和抑制性氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)均參與CIIMIP的發(fā)生機(jī)制，CQ復(fù)方則可能通過對其的調(diào)控，調(diào)節(jié)中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)EAA/IAA的平衡，發(fā)揮鎮(zhèn)痛作用。進(jìn)一步通過觀察GABAa受體拮抗劑對CQ復(fù)方鎮(zhèn)痛作用的影響，發(fā)現(xiàn)預(yù)先使用GABAa受體拮抗劑一定程度地降低了CQ復(fù)方的鎮(zhèn)痛作用，表明CQ復(fù)方不僅在脊髓興奮性和抑制性氨基酸遞質(zhì)水平發(fā)揮作用，而且可能部分通過激活GABAa受體介導(dǎo)其鎮(zhèn)痛作用的發(fā)揮。然而，CQ復(fù)方是否作用于GABA受體的其它亞型？是否作用于Glu受體以及具體作用于哪種亞型？尚需進(jìn)一步深入研究。

促炎性細(xì)胞因子RANTES，MCP-3均屬于趨化因子中CC家族成員。文獻(xiàn)報道，敲除RANTES基因能減輕坐骨神經(jīng)部分結(jié)扎誘導(dǎo)的痛覺過敏，抑制損傷神經(jīng)中巨噬細(xì)胞浸潤，增加白細(xì)胞介素-4（IL-4），IL-10等抗炎因子的表達(dá)，從而參與神經(jīng)病理性疼痛的調(diào)控[20]。另有報道，坐骨神經(jīng)部分結(jié)扎可誘導(dǎo)脊髓星形膠質(zhì)細(xì)胞MCP-3的表達(dá)提高，從而通過CC家族受體2（CCR2）參與痛覺傳遞[21]。本研究發(fā)現(xiàn)，CQ復(fù)方可以明顯降低模型小鼠脊髓組織內(nèi)RANTES，MCP-3的水平（P<0.05）。提示CQ復(fù)方通過降低中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)相關(guān)促炎性細(xì)胞因子的釋放，抑制疼痛信號的傳遞，這可能作為另一種途徑參與其鎮(zhèn)痛作用的機(jī)制。

本實(shí)驗(yàn)中CQ復(fù)方對CIIMIP模型小鼠顯示了明顯的鎮(zhèn)痛作用及良好的量效依賴性，但對脊髓L3～L5節(jié)段內(nèi)相關(guān)氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)和炎性細(xì)胞因子水平的影響，量效關(guān)系只出現(xiàn)了一定趨勢，線性不十分良好。其原因可能與實(shí)驗(yàn)動物間的個體差異有關(guān)，也可能與實(shí)驗(yàn)用藥為多成分藥物，其作用機(jī)制亦可能為多途徑、多環(huán)節(jié)、多靶點(diǎn)有關(guān)。故對上述檢測指標(biāo)的相關(guān)因素及其更詳盡、深入的機(jī)制研究尚待開展。

綜上所述，本文通過建立CIIMIP小鼠模型，明確了CQ復(fù)方對CIIMIP的鎮(zhèn)痛作用，并觀察到此作用可能與調(diào)節(jié)中樞神經(jīng)系統(tǒng)中脊髓組織內(nèi)相關(guān)興奮性/抑制性氨基酸遞質(zhì)的平衡，部分激活GABAa受體有關(guān)。同時，抑制相關(guān)促炎性細(xì)胞因子的釋放也是CQ復(fù)方發(fā)揮鎮(zhèn)痛作用的相關(guān)機(jī)制之一。該研究為CIIMIP相關(guān)發(fā)生機(jī)制的深入研究提供了參考，也為CQ復(fù)方應(yīng)用于臨床治療癌癥侵襲鏡像痛提供了一定的藥理學(xué)依據(jù)。

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