肝細(xì)胞癌中RhoE和基質(zhì)金屬蛋白酶-9的表達(dá)及意義

丁 峰 楊 夙 王 巍 白 光

(錦州醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院普外肝膽微創(chuàng)外科，遼寧 錦州 121001)

肝細(xì)胞癌中RhoE和基質(zhì)金屬蛋白酶-9的表達(dá)及意義

丁 峰 楊 夙1王 巍 白 光

(錦州醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院普外肝膽微創(chuàng)外科，遼寧 錦州 121001)

目的 探討肝細(xì)胞癌中RhoE和基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)-9的表達(dá)及其臨床意義。方法 57例肝細(xì)胞癌患者的臨床資料及術(shù)后蠟塊組織作為觀察組，選擇距腫物邊緣>3 cm的正常肝組織32例作為對照組。應(yīng)用免疫組化方法檢測兩組RhoE和MMP-9的表達(dá)。結(jié)果 兩組RhoE和MMP-9的表達(dá)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。觀察組RhoE和MMP-9的表達(dá)與腫瘤的脈管累犯密切相關(guān)，RhoE的表達(dá)與腫瘤數(shù)量密切相關(guān)，MMP-9的表達(dá)與轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。相關(guān)分析顯示觀察組RhoE和MMP-9具有負(fù)相關(guān)性。結(jié)論 肝細(xì)胞癌中RhoE低表達(dá)、MMP-9高表達(dá)對腫瘤的形成和進(jìn)展有一定作用。RhoE和MMP-9可能有一定的協(xié)同作用。

肝細(xì)胞癌；RhoE；基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)-9

肝細(xì)胞癌的病因涉及因素較多，轉(zhuǎn)移相關(guān)基因在腫瘤中常高表達(dá)〔1〕。RhoE為Rnd家族成員之一，參與細(xì)胞調(diào)節(jié)骨架重組、細(xì)胞生長、增殖和轉(zhuǎn)移〔2，3〕。RhoE能夠抑制RhoA下游重要效應(yīng)因子Rho相關(guān)激酶1活性，從而抑制細(xì)胞骨架蛋白重組，影響細(xì)胞的極化和遷移能力〔3〕?；|(zhì)金屬蛋白酶(MMP)-9在惡性腫瘤中常高表達(dá)，尤其在高轉(zhuǎn)移潛能的腫瘤中表達(dá)更高〔4〕。MMP-9高表達(dá)可以引起基底膜的溶解和細(xì)胞外基質(zhì)的降解，使腫瘤轉(zhuǎn)移的屏障消失，引發(fā)腫瘤細(xì)胞遷移〔5〕。本文擬探討肝細(xì)胞癌中RhoE和MMP-9的表達(dá)及其臨床意義。

1 材料與方法

1.1 一般資料 2013年1月至2015年12月我院診斷為肝細(xì)胞癌并行手術(shù)治療的患者57例作為觀察組。術(shù)后均常規(guī)留取蠟塊組織，年齡40～71歲，平均(56.7±6.9)歲，其中男32例，女25例。均按WHO中的標(biāo)準(zhǔn)明確并分型。選擇上述病例中距腫物邊緣>3 cm的正常肝組織32例作為對照組，年齡43～65歲，平均(54.5±5.8)歲，其中男16例，女16例。兩組常規(guī)資料無明顯差異，具有可比性。

1.2 RhoE和MMP-9的檢測 RhoE和MMP-9的檢測均應(yīng)用免疫組化SP法，行二氨基聯(lián)苯胺(DAB)染色，操作均由同一技師完成，嚴(yán)格按實(shí)驗(yàn)步驟進(jìn)行，做好質(zhì)控工作。

1.3 RhoE和MMP-9結(jié)果的判定 RhoE和MMP-9陽性均定位于細(xì)胞質(zhì)中，以染成淺黃色至深棕色為陽性細(xì)胞，先在低倍鏡下選擇上皮細(xì)胞染色集中的區(qū)域(熱點(diǎn)區(qū))，選擇3個400倍視野計(jì)算陽性率，取平均值，以陽性細(xì)胞<10%為陰性，≥10%為陽性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SAS6.12軟件進(jìn)行χ2檢驗(yàn)或線性相關(guān)分析。

2 結(jié) 果

2.1 兩組RhoE和MMP-9陽性率的比較 觀察組和對照組RhoE〔23例(40.35%)、30例(93.75%)〕和MMP-9的陽性率〔35例(61.40%)、1例(3.13%)〕差異顯著(χ2=24.260 8,28.297 0,均P<0.000 1)。

2.2 觀察組中不同臨床特征患者RhoE和MMP-9表達(dá)陽性率的比較 觀察組RhoE和MMP-9的表達(dá)與腫瘤的脈管累犯密切相關(guān)，RhoE的表達(dá)與腫瘤數(shù)量密切相關(guān)，MMP-9的表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。見表1。

表1 觀察組中不同臨床特征患者RhoE和 MMP-9表達(dá)陽性率的比較〔n(%)〕

2.3 觀察組RhoE和MMP-9的相關(guān)性 RhoE和MMP-9呈負(fù)相關(guān)(r=-0.45，P=0.045 1)。

3 討 論

肝細(xì)胞癌常見的病因?qū)W因素包括肝炎病毒的感染。腫瘤形成后其大體特點(diǎn)隨著腫瘤的大小和有無肝硬化而變化〔6〕。多數(shù)與肝硬化有關(guān)的腫瘤趨向于呈膨脹性生長，伴有纖維包膜和腫瘤內(nèi)分隔，而無肝硬化的腫瘤趨向于呈巨塊型和無包膜。不同程度的浸潤性生長、門靜脈瘤栓和肝內(nèi)轉(zhuǎn)移在進(jìn)展期腫瘤很常見。部分情況下，大量的微小腫瘤結(jié)節(jié)廣泛分布于肝。肝細(xì)胞癌的一個特點(diǎn)是侵犯血管，尤其是門靜脈，肝外轉(zhuǎn)移多為血行性的，肺是最常受累的器官，局部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移常見，而遠(yuǎn)處淋巴結(jié)則很少累及。因此探討與轉(zhuǎn)移相關(guān)蛋白的表達(dá)有一定價值〔7〕。MMPs家族是與轉(zhuǎn)移相關(guān)的一組基因和表達(dá)的蛋白，是一組鋅離子依賴性內(nèi)肽酶，其在正常機(jī)體中表達(dá)較少或低表達(dá)，當(dāng)病變發(fā)生時，尤其是進(jìn)展期腫瘤性病變形成時，家族中的部分成員分泌增多，幾乎能降解細(xì)胞外基質(zhì)的所有成分〔8〕。MMP-9作用主要是針對Ⅳ型膠原、層黏連蛋白和彈性硬蛋白等，使細(xì)胞外基質(zhì)的結(jié)構(gòu)和形態(tài)出現(xiàn)明顯變化，使腫瘤轉(zhuǎn)移的屏障受到破壞，腫瘤細(xì)胞易于遷移〔9〕。也有研究認(rèn)為MMP-9的作用可能更加具有多元性，如對細(xì)胞增殖的調(diào)控、對血管生成因子的激活、對間質(zhì)血管生成的促進(jìn)作用等〔10〕。RhoE又稱為Rnd3，是Rho家族的主要成員之一，其分子結(jié)構(gòu)與其他Ras鳥苷酸結(jié)合蛋白相同，只有一條多肽鏈，屬于單體G蛋白，RhoE的氨基酸序列高度保守，但是32、79、81位點(diǎn)的氨基酸序列與傳統(tǒng)的小G蛋白相比發(fā)生突變，并且含有較長的羧基端和氨基端〔11，12〕。近來研究認(rèn)為RhoE可以誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生改變、抑制細(xì)胞的增殖、調(diào)節(jié)細(xì)胞的遷移能力及細(xì)胞凋亡〔13〕。也有研究認(rèn)為RhoE可以調(diào)節(jié)細(xì)胞的分化過程〔14〕。

RhoE在腫瘤中低表達(dá)，起抑癌基因的作用，RhoE可能通過對肝細(xì)胞癌的增殖進(jìn)行抑制而發(fā)揮作用。研究認(rèn)為RhoE雖然可以結(jié)合GTP，卻并沒有GTP 酶活性從而不能水解GTP，這種特性賦予RhoE許多不同于Rho蛋白家族其他成員的獨(dú)特功能〔15〕，例如通過調(diào)控肌動蛋白細(xì)胞骨架重組來增強(qiáng)細(xì)胞的運(yùn)動能力和腫瘤細(xì)胞的遷移及侵襲能力〔16，17〕。而MMP-9高表達(dá)，起癌基因樣的作用，對腫瘤的侵襲有促進(jìn)作用。本文結(jié)果提示RhoE和MMP-9參與腫瘤的脈管侵犯及脈管播散，促進(jìn)腫瘤進(jìn)展。RhoE與腫瘤的播散有關(guān)，尤其是肝內(nèi)的播散及肝內(nèi)的侵襲性生長相關(guān)。MMP-9是轉(zhuǎn)移相關(guān)的促進(jìn)蛋白，促進(jìn)腫瘤進(jìn)展。本文結(jié)果提示RhoE和MMP-9具有一定的協(xié)同作用，也提示RhoE在正常肝組織中高表達(dá)時，可以在一定程度上抑制MMP-9的分泌，當(dāng)腫瘤形成時，RhoE表達(dá)下降或丟失，對MMP-9分泌的抑制作用可能減弱或直接促進(jìn)腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生MMP-9，進(jìn)而使細(xì)胞外基質(zhì)形成降解，腫瘤轉(zhuǎn)移的屏障減弱或消失，細(xì)胞易于遷移，形成轉(zhuǎn)移灶〔18〕。MMP-9高表達(dá)時還可以引起間質(zhì)的血管生成，使腫瘤的血供豐富，腫瘤細(xì)胞繁殖能力增強(qiáng)，腫瘤細(xì)胞生長活躍〔19，20〕。

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〔2015-12-11修回〕

(編輯 杜 娟)

白 光(1959-)，男，教授，主要從事微創(chuàng)肝膽胰脾手術(shù)研究。

丁 峰(1981-)，男，博士在讀，主治醫(yī)師，主要從事微創(chuàng)肝膽胰脾手術(shù)研究。

R735.7

A

1005-9202(2017)04-0916-02；

10.3969/j.issn.1005-9202.2017.04.059

1 心腦血管外科