液基細胞學技術(shù)在甲狀腺結(jié)節(jié)細針穿刺病理診斷中的應(yīng)用

信芳杰，林東亮，趙 誠，張曉娟，劉 暉

液基細胞學技術(shù)在甲狀腺結(jié)節(jié)細針穿刺病理診斷中的應(yīng)用

信芳杰1，林東亮1，趙 誠2，張曉娟2，劉 暉1

甲狀腺；液基細胞學；細針穿刺

甲狀腺結(jié)節(jié)為臨床常見疾病，隨著高分辨率超聲的普及應(yīng)用，甲狀腺結(jié)節(jié)的檢出率可達20%～76%［1］，其中惡性結(jié)節(jié)占 5%～6.5%［2］。鑒別結(jié)節(jié)的良惡性一直是臨床上的難點，超聲引導下細針穿刺活檢（ultrasonic guidance fine-needle aspiration biopsy，UG-FNAB）是一種簡便、安全、微創(chuàng)的細胞學檢查方法，被國內(nèi)外公認為是診斷甲狀腺結(jié)節(jié)性質(zhì)的首選方法［3－4］。液基薄層細胞學檢查 （thinprep cytologic test，TCT）廣泛應(yīng)用于婦科宮頸脫落細胞學檢測，在非婦科尤其是甲狀腺細針穿刺細胞學檢查中的應(yīng)用報道較少。本實驗對甲狀腺細針穿刺標本進行傳統(tǒng)涂片和液基細胞學制片，比較兩種方法的制片質(zhì)量和診斷陽性率，旨在提高甲狀腺結(jié)節(jié)的早期診斷準確率。

1 材料與方法

1.1 臨床資料收集2014年7月 ～2015年10月青島大學附屬醫(yī)院行 UG-FNAB的患者184例，其中男性 43例，女性141例，年齡24～76歲，平均41歲，對甲狀腺結(jié)節(jié)細針穿刺物分別進行傳統(tǒng)涂片和液基細胞學制片。

1.2 方法

1.2.1 手術(shù)取材 患者取平臥位，墊高肩頸部，充分暴露甲狀腺，常規(guī)消毒鋪巾。使用連接22G針頭的5mL注射器，超聲引導下穿刺入甲狀腺結(jié)節(jié)內(nèi)，不同方向快速來回穿刺 15 ～20次，拔出針頭后囑患者局部壓迫30 min。

1.2.2 細胞學制片方法 （1）傳統(tǒng)涂片：細針穿刺物吹打于清潔載玻片上，置于2張載玻片之間，稍加壓力反向拉開，每個標本拉片2～4張，95%乙醇固定30 min，HE染色購自珠海貝索公司。（2）液基細胞學制片：細針穿刺物直接注入液基細胞保存液中，針管在保存液中反復抽吸 5次，清洗殘留在針管中的細胞，液基制片試劑購自廣州安必平公司。第一次離心：600 g 10 min，棄上清液，置漩渦混合器上振蕩30 s；加入5 mL細胞保存液，用軟吸管將標本混勻后轉(zhuǎn)移至 12 mL離心管中；第二次離心：600 g 5 min，棄上清液，漩渦振蕩30 s；根據(jù)沉淀量，加入1～2 mL緩沖液，漩渦振蕩混勻。使用 LBP液基細胞沉降式自動制片系統(tǒng)，每張涂片取200μL細胞混懸液制片，HE染色。

1.3 結(jié)果判斷滿意標本為涂片中可見至少6個濾泡細胞團，每團有10個以上濾泡上皮細胞［5］。結(jié)果分析采用 Bethesda報告系統(tǒng)，將細胞制片分為以下6類：（1）標本無法診斷或不滿意；（2）良性；（3）意義不明確的濾泡性病變；（4）濾泡性腫瘤或可疑濾泡性腫瘤；（5）可疑惡性腫瘤；（6）惡性腫瘤。惡性腫瘤患者取手術(shù)后病灶組織，行組織病理學檢查并以此作為金標準，所有涂片及組織切片由病理診斷醫(yī)師在顯微鏡下觀察并比較。細胞學陽性診斷率 ＝（惡性腫瘤病例數(shù)／總病例數(shù)）×100%，細胞學標本滿意率 ＝（總病例數(shù) －無法診斷或不滿意病例數(shù)／總病例數(shù)）×100%。

1.4 統(tǒng)計學分析采用 SPSS 19.0軟件進行統(tǒng)計學分析，計數(shù)資料率的比較進行 χ2檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 細胞形態(tài)學比較液基細胞學制片與傳統(tǒng)涂片在背景、細胞量、細胞形態(tài)特點、制片質(zhì)量等方面均有所不同（圖1、2），詳見表1。

表1 兩種制片方法細胞學形態(tài)比較

2.2 診斷率比較184例液基制片及傳統(tǒng)涂片中，無法診斷或不滿意標本分別有 7、16例，標本滿意率分別為96.2% （177／184）和91.3%（168／184）；液基制片及傳統(tǒng)涂片的陽性診斷率分別為51.1%（94／184）和46.2%（85／184），兩種方法陽性診斷率差異無統(tǒng)計學意義（χ2＝0.88，P＞0.05，表2）。惡性腫瘤患者手術(shù)后行組織病理學檢查，術(shù)后診斷均為甲狀腺癌，液基制片及傳統(tǒng)涂片陽性診斷與組織學診斷符合率為100%。

圖1 甲狀腺乳頭狀癌傳統(tǒng)涂片，細胞重疊，背景雜亂，血細胞、膠質(zhì)多 圖2 甲狀腺乳頭狀癌液基制片，細胞單層排列，背景清晰，可見核內(nèi)假包涵體

表2 兩種制片方法診斷結(jié)果比較

3 討論

甲狀腺結(jié)節(jié)臨床發(fā)病率較高，結(jié)節(jié)性質(zhì)的確定對甲狀腺腫瘤的早期診斷、早期手術(shù)十分重要，UG-FNAB是確定甲狀腺結(jié)節(jié)良惡性最可靠、最有價值的診斷方法［3－6］。甲狀腺組織血供豐富，濾泡中膠質(zhì)含量較多，細針穿刺物及其細胞學涂片極易受血細胞、膠質(zhì)等成分的影響。因此，提高細針穿刺的準確性和特異性，獲得良好的穿刺標本和高質(zhì)量的細胞學涂片尤為重要。

1991年美國最先使用 TCT檢測婦科脫落細胞學，近年來逐漸應(yīng)用于痰液、尿液、胸腹水等非婦科標本的檢查，在細針穿刺細胞學方面也取得了良好效果［7］，本實驗也得出相似結(jié)論：TCT利用專門的細胞保存瓶和保存液最大限度的收集細針穿刺細胞，穿刺針頭可在保存液中反復抽吸沖洗，使細胞富集集中，避免傳統(tǒng)涂片穿刺針中大量穿刺物的殘留和丟失。液基細胞學制片過程中，通過反復離心、振蕩、去上清液，利用沉降式制片富集有效的診斷性細胞，全自動制片染色機制片，使細胞單層排列，均勻分布，制成直徑 13 mm的圓形薄片。Frost等［8］表明 TCT涂片1～2張就可以滿足甲狀腺穿刺細胞學的診斷。相比傳統(tǒng)涂片法液基細胞學制片可使診斷細胞更加集中，縮小觀察范圍，提高診斷效率。

鏡下觀察兩種制片細胞學形態(tài)，傳統(tǒng)涂片背景雜亂，細胞成團塊狀或重疊排列，紅細胞、膠質(zhì)等成分混合，診斷性細胞易被遮蓋，且細胞量多少不定、分散分布，易導致假陰性；而液基細胞學制片細胞集中于玻片中央，背景干凈清晰，細胞呈單層排列，紅細胞、膠質(zhì)減少，細胞核更清晰，更易觀察核膜、核溝和核內(nèi)假包涵體，細胞學制片質(zhì)量明顯提高。

液基細胞學制片通過標本的收集、轉(zhuǎn)運、分離提取和自動化制片，降低了涂片不滿意率，本組184例標本中，TCT無法診斷或不滿意標本僅7例，相較于傳統(tǒng)制片16例，標本滿意率由91.3%（168／184）提高到96.2%（177／184）；兩者陽性診斷率分別為51.1%（94／184）和46.2%（85／184），檢出的陽性例數(shù)有所提高，但兩種方法的陽性診斷率差異尚不具有統(tǒng)計學意義，與許映斌等［9］報道的一致。本實驗兩種制片方法的惡性檢出率均高于文獻報道的 5%～6.5%［2］，是由于患者在首次甲狀腺超聲檢查后，超聲醫(yī)師對可疑惡性病例進行篩選，再次行超聲引導下細針穿刺，導致惡性檢出率的提高。

液基細胞學制片與傳統(tǒng)涂片一樣，也有一定的局限性，細針穿刺的結(jié)節(jié)太小或未取到典型病變區(qū)域，或穿刺細胞量少等，均可影響病理診斷。因此，有經(jīng)驗的超聲醫(yī)師和熟練準確的穿刺手法是獲得高質(zhì)量標本的前提。另外，細針穿刺標本無法提供病變組織的整體結(jié)構(gòu)及其與周圍組織的關(guān)系，無法觀察是否浸潤包膜或血管。因此 TCT對濾泡性腫瘤的診斷較為困難。

細針穿刺細胞量對病理診斷有著重要作用，本實驗發(fā)現(xiàn)根據(jù)細針穿刺物的多少，向液基細胞學制片最終離心沉淀物加入1～2 mL的緩沖液，制片時每張玻片吸取200μL細胞混懸液可獲得滿意涂片。液基細胞學制片可以提供良好的背景和清晰的形態(tài)，有利于存儲標本和對同一標本進行多種分析，可進行特殊染色或免疫組化以輔助診斷［10－11］。

本組結(jié)果顯示，TCT技術(shù)應(yīng)用于甲狀腺細針穿刺細胞學診斷中，可改善穿刺細胞丟失率高、涂片不均勻等問題，使制片質(zhì)量明顯提高，且陽性診斷率與傳統(tǒng)涂片相似，具有臨床應(yīng)用價值。

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R 446.8

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1001－7399（2017）01－0107－03

10.13315／j.cnki.cjcep.2017.01.029

接受日期：2016－10－30

青島大學附屬醫(yī)院青年科研基金（No2093）

青島大學附屬醫(yī)院1病理科、2腹部超聲科，青島 266555

信芳杰，女，碩士，主管技師。Tel：（0532）82919350，

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