粉防己甲素緩釋微球的制備及其釋放度研究

宋艷博++劉軒++史一杰

【摘要】目的：制備粉防己甲素緩釋微球制劑并探討其釋放特性。方法：以乙基纖維素為載體，分別考察乳化劑濃度，致孔劑用量，藥物-載體質(zhì)量比以及油水體積比對微球質(zhì)量的影響，設(shè)計開發(fā)粉防己甲素緩釋微球。結(jié)果：當乳化劑用量為10%，致孔劑用量2%，藥物-載體質(zhì)量比1∶3，油水體積比為6∶1時，制得的緩釋微球在不同溶出介質(zhì)中6h內(nèi)完全釋放，且無明顯突釋效應(yīng)，具有良好的緩釋作用。結(jié)論：制備的粉防己甲素緩釋微球釋放行為良好，是1種具有工業(yè)前景的緩釋制劑。

【關(guān)鍵詞】粉防己甲素；緩釋微球；單因素考察；釋放度

【中圖分類號】R944【文獻標志碼】 A【文章編號】1007-8517（2017）04-0017-03

Abstract：

Keywords：

粉防己甲素（Tetrandrine， TET） 又名粉防己堿、漢防己甲素，提取自千金藤屬防己科植物粉防己的干燥塊根中，屬雙芐基異喹啉類生物堿，具有抗心肌、腦、腎缺血，抗心律失常、降低門靜脈高壓、抗缺氧性肺動脈高壓、抗腫瘤、抗肝、肺纖維化、抗炎等多種藥理作用。臨床上主要用于肝硬化門脈高壓、矽肺等的治療[1～2]。研究表明[3]，粉防己甲素為低溶解度高跨膜率藥物，其溶解速率影響藥物的吸收速度，且過高濃度會引起多重不良反應(yīng)。將其制備成緩、控釋制劑后，藥物能夠在體液作用下穩(wěn)定溶解并釋放，使得胃腸道中藥物濃度穩(wěn)定且迅速吸收，既增加藥物在體內(nèi)的滯留時間和生物利用度，同時減少藥物因吸收-消除不平衡引起的不良反應(yīng)，有利于增加患者的依從性[4]。既具有廣闊的市場經(jīng)濟前景，同時也具有可觀的社會收益。本研究以乙基纖維素為載體材料，采用單因素考察法優(yōu)化處方，制備出粉防己甲素6h緩釋微球，為開發(fā)粉防己甲素新制劑提供新的思路。

1儀器與材料

11儀器UV-2450紫外可見分光光度計（日本島津公司）；RCZ-8型智能溶試驗儀（上海黃海藥檢儀器有限公司）；透析袋（MV：1000-3000，美國spectrum公司）；FA1004N電子天平（上海精密科學儀器有限公司）；TGL-1613臺式離心機（上海安亭科學儀器廠）；DF-101S恒溫磁力攪拌器（鞏義市予華儀器有限責任公司）；WH-2微型渦旋混合儀（上海滬西分析儀器廠）。

12試藥粉防己甲素（大連富生天然藥物開發(fā)有限公司，批號：20130709）；乙基纖維素（山東聊城阿華制藥有限公司）；氯化鈉（天津市博迪化工有限公司）；Span60（天津市科密歐化學試劑有限公司）；無水乙醇（分析純，天津永晟精細化工有限公司）；戊二醛50%水溶液（分析純，沈陽市華東試劑廠）；磷酸二氫鉀（天津市博迪化工有限公司）；磷酸氫二鉀（天津市博迪化工有限公司）；去離子水（自制）。

2方法

21粉防己甲素標準溶液的配制精密稱取干燥至恒重的粉防己甲素置于50 mL量瓶中，以0l mol/L鹽酸溶液溶解并稀釋，配制成濃度為05 mg/mL的儲備液，4 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

22粉防己甲素測定波長的確定將“21”項下標準溶液稀釋成濃度為20μg/mL的粉防己甲素水溶液，按紫外-可見分光光度法[5]于200～400nm波長范圍內(nèi)進行掃描，結(jié)果見圖1。粉防己甲素具有較強的末端吸收，此外，在279nm處另有最大吸收峰。由于末端吸收處受介質(zhì)或其他雜質(zhì)的紫外吸收影響較大，測定存在干擾，因此將279nm作為粉防己甲素測定波長。

23粉防己甲素標準曲線的建立精密量取05、10、15、20、30、40、50mL粉防己甲素標準溶液置于50mL量瓶中，用0lmol/L鹽酸溶液溶解并稀釋至刻度，制得梯度濃度為5、10、15、20、30、40、50μg/mL的系列標準溶液，以pH68磷酸鹽緩沖液替換鹽酸稀釋液，按上述濃度配制梯度濃度溶液，分別于279nm波長處測定吸光度，以吸光度（A）為縱坐標，濃度（C）為橫坐標分別繪制標準曲線，得回歸方程為（1）01mol/L鹽酸溶液：A=00123C+00159，r=09991。（2）pH68磷酸緩沖溶液：A=00125C-00289，r=09993。由此可見，在50～500 μg/mL范圍內(nèi)，粉防己甲素溶液紫外吸光度（A）與濃度（C）呈良好的線性關(guān)系。

24粉防己甲素緩釋微球的制備將處方量乙基纖維素、粉防己甲素和氯化鈉分散溶解于乙醇中作為水相，將適量乳化劑Span60加入至液體石蠟中，作為油相，將水相注入至油相中，快速攪拌3min形成較為穩(wěn)定的W/O型乳劑，緩慢滴加20%的戊二醛溶液適量，于溫和攪拌下交聯(lián)固化4h，減壓抽濾收集微球初產(chǎn)品，所得微球用無水乙醚洗滌，丙酮脫水揮干，即得粉防己甲素-乙基纖維素微球。

25單因素考察法優(yōu)化粉防己甲素緩釋微球處方以“24”項下制備方法為基礎(chǔ)，確定其他試驗條件不變，分別考察不同乳化劑濃度，致孔劑用量，藥物-載體質(zhì)量比以及油水體積比對微球外觀，分散性及包封率的影響。

26粉防己甲素緩釋微球釋放度測定取自制緩釋微球適量（相當于主藥含量20mg），采用250mL溶出介質(zhì)（01 mol/L HCl，pH68磷酸鹽緩沖溶液）；溫度（37±05）℃；轉(zhuǎn)速50r/min。依法操作，在設(shè)定時間點分別取樣25mL，同時補加同體積溶出介質(zhì)，08μm微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液15mL置于5mL容量瓶中，用釋放介質(zhì)定容至刻度，按紫外分光光度法在279nm處測定吸光度，以外標法計算不同時間樣品濃度，求算藥物的累積釋放百分率。

3結(jié)果

31單因素考察法優(yōu)化粉防己甲素緩釋微球處方

311乳化劑濃度對微球質(zhì)量的影響改變Span60濃度為5%，10%，15%，固定其他工藝參數(shù)和處方用量不變，分別制備粉防己甲素緩釋微球，觀察微球的外觀，分散性，測定其包封率，結(jié)果見表1。

由表1可知，乳化劑濃度為10%和15%時制得的微球外觀基本呈規(guī)則球形，圓整度較好，但用量較少時，因成乳性較差，外觀稍顯不規(guī)則，包封率隨乳化劑用量的增多，先增加后減少。說明乳化劑用量過大形成的乳滴不利于對藥物的包裹，故選擇乳化劑用量為10%。

表1乳化劑濃度對微球質(zhì)量的影響

乳化劑濃度/%外觀分散性包封率/%5形態(tài)不規(guī)則良好521410形態(tài)圓整良好676315形態(tài)較圓整良好4322

312致孔劑用量對微球質(zhì)量的影響改變氯化鈉用量分別為20%、25%、30%，固定其他工藝參數(shù)和處方用量不變，分別制備粉防己甲素緩釋微球，觀察微球的外觀，分散性，測定其包封率，結(jié)果見表2。

由表2可知，微球的包封率隨致孔劑用量的增加而減少，微球的圓整度隨致孔劑用量的增大而不規(guī)則，最終選擇致孔劑用量為20%。

表2致孔劑用量對微球質(zhì)量的影響

致孔劑用量/%外觀分散性包封率/%20形態(tài)圓整良好641225形態(tài)較圓整良好599430形態(tài)不規(guī)則良好5166

313藥物-載體質(zhì)量比對微球質(zhì)量的影響以投藥量20 mg/50 mL乳濁液為基準，改變乙基纖維素的用量，使藥物-載體質(zhì)量比為1∶1，1∶3，1∶5，固定其他工藝參數(shù)和處方用量不變，分別制備粉防己甲素緩釋微球，觀察微球的外觀，分散性，測定其包封率，結(jié)果見表3。

表3藥物-載體質(zhì)量比對微球質(zhì)量的影響

藥物-載體質(zhì)量比外觀分散性包封率/%1∶1形態(tài)不規(guī)則粘連35121∶3形態(tài)較圓整良好63941∶5形態(tài)圓整部分粘連6615

由表3可知，隨著載體質(zhì)量的增加，微球的包封率不斷增大，藥物利用率提高，但當載體用量繼續(xù)增大時，對藥物包封率的影響減弱，因此選擇藥物-載體比為1∶3。

314油水體積比對微球質(zhì)量的影響改變油水體積比為1∶1，3∶1，6∶1，固定其他工藝參數(shù)和處方用量不變，分別制備粉防己甲素緩釋微球，觀察微球的外觀，分散性，測定其包封率，結(jié)果見表4。

由表4可知，隨著油水體積比的增加，微球的包封率不斷增大，外觀形態(tài)更為規(guī)則圓整，因此選擇油水體積比為6∶1。

表4油水體積比對微球質(zhì)量的影響

油水體積比外觀分散性包封率/%1∶1形態(tài)不規(guī)則粘連25363∶1形態(tài)不規(guī)則粘連33876∶1形態(tài)較圓整部分粘連6729

32處方優(yōu)化確證由單因素考察結(jié)果優(yōu)化制得三批微球，并對其進行外觀、分散性，包封率及粒徑的測定，結(jié)果顯示三批微球外觀及分散性良好，三批微球的平均包封率為6312%，粒徑為213μm，含量為1741 mg/100 mg微球，處方優(yōu)化良好。

33粉防己甲素緩釋微球釋放度測定體外釋放度結(jié)果顯示，分別以01 moL/L HCl，pH68磷酸鹽緩沖溶液為釋放介質(zhì)時，藥物粉末釋放速度均快于緩釋微球，受介質(zhì)pH影響，01 moL/L HCl中藥物釋放極快，而粉防己甲素-乙基纖維素微球于6h內(nèi)可緩慢釋放完全，與原料藥相比基本無突釋效應(yīng)。

4討論

通過單因素考察試驗篩選優(yōu)化了粉防己甲素緩釋微球的處方，其粒徑大小主要受形成乳滴的粒徑的影響，根據(jù)優(yōu)選獲得最佳制備條件，制備所得3個批次微球外觀及分散性良好，平均粒徑為213μm，隨后對粉防己甲素緩釋微球在不同介質(zhì)中的體外釋放度進行了考察，釋放行為良好，無明顯突釋效應(yīng)，整個釋放過程中緩釋微球在不同介質(zhì)中均可以緩慢釋放，提示在體內(nèi)條件下可以使藥物在緩釋時間內(nèi)維持穩(wěn)定血藥濃度，起到控制藥物緩慢釋放作用。

由釋放度結(jié)果可知，粉防己甲素在胃部溶解迅速，但多以離子形式存在，因此不利于藥物的吸收，制成緩釋微球后，藥物的釋放速率明顯降低，可以保證大量藥物以原型進入小腸部位釋放并吸收。受小腸部位pH值影響，傳統(tǒng)的治療劑量下，藥物會以固體形式或離子型藥物再結(jié)晶的方式通過小腸段，導(dǎo)致藥物濃度過低不易發(fā)揮治療作用，制成緩釋微球后，藥物可以在整個小腸段緩慢釋放藥物，維持腸道內(nèi)分子型藥物濃度的穩(wěn)定，有利于增加分子型藥物在體內(nèi)的吸收和滯留，從而提高藥物療效，如可以進一步開發(fā)，將成為既具有廣闊的市場經(jīng)濟前景，也具有可觀的社會收益的新一代粉防己甲素制劑。參考文獻

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（收稿日期：2016-12-06編輯：梁志慶）