QuEChERS-液質(zhì)聯(lián)用檢測(cè)四種水果中的多菌靈

張運(yùn)依，付春艷，陳姣姣

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QuEChERS-液質(zhì)聯(lián)用檢測(cè)四種水果中的多菌靈

張運(yùn)依1，付春艷1，陳姣姣2

（1. 貴州省流通環(huán)節(jié)食品安全檢驗(yàn)中心,貴州 貴陽 550002； 2. 貴州大學(xué)精細(xì)化工研究開發(fā)中心，綠色農(nóng)藥與農(nóng)業(yè)生物工程國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室培育基地和教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，貴州 貴陽 550025）

建立了QuEChERS結(jié)合高效液相質(zhì)譜聯(lián)用儀快速檢測(cè)四種水果中多菌靈的方法，并對(duì)四種水果的基質(zhì)效應(yīng)進(jìn)行分析。在0.2~0.01 mg/L濃度范圍內(nèi)具有良好的線性相關(guān)性，線性相關(guān)系數(shù)大于0.99。最小檢出限為0.10μg/kg，定量限為0.37μg/kg，多菌靈在四種水果中的平均回收率為93.2%~109.3%，RSD為5.0%~9.6%。該方法操作簡單可靠，精密度，準(zhǔn)確度及其靈敏度均滿足農(nóng)藥殘留分析的要求。

高效液相質(zhì)譜聯(lián)用儀；多菌靈；QuEChERS；農(nóng)藥殘留

多菌靈［carbendazim, N-（2-苯并咪唑基）氨基甲酸甲酯]為苯并咪唑類，是一種良好的光譜殺菌劑，廣泛應(yīng)用于蔬菜、水果中真菌的防治，其化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定[1]。雖然多菌靈能有效抑制病原菌的繁殖、生長，但在自然環(huán)境中降解較慢，其化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，能夠持久地殘留在蔬菜、水果中，易在植物體內(nèi)富集，且有一定的毒性。

已有研究表明，多菌靈能夠干擾哺乳動(dòng)物的內(nèi)分泌，并對(duì)精母細(xì)胞的減數(shù)分裂產(chǎn)生影響，影響人體健康[2]。因此研究多菌靈的檢測(cè)方法對(duì)監(jiān)控和加強(qiáng)我國水果的安全狀況具有重要意義，所以必須建立準(zhǔn)確性強(qiáng)且快速測(cè)定的方法。農(nóng)業(yè)部發(fā)布的行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)NY/T 1453-2007，NY/T 1680-2009，國家標(biāo)準(zhǔn)GB/T 20769-2008是檢測(cè)蔬菜、水果中多菌靈殘留量的重要依據(jù)，采用的檢測(cè)方法有紫外分光光度法和液相色譜法，以及高效液相質(zhì)譜法[3-5]。前處理采用的樣品處理方法常為有機(jī)溶劑提取結(jié)合陽離子交換柱凈化，但存在操作繁瑣、消耗時(shí)間長等不足。

本文采用高效液相質(zhì)譜聯(lián)用，QuEChERS樣品前處理技術(shù)。QuEChERS技術(shù)具有快速、高效等優(yōu)點(diǎn)，被廣泛運(yùn)用于農(nóng)藥殘留分析的前處理過程中，能夠縮短時(shí)間，提高準(zhǔn)確率，快速測(cè)定樣品中多菌靈的殘留量[6]。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與設(shè)備

液相色譜-串聯(lián)四極桿質(zhì)譜儀（Agilent 1200-6410），色譜柱Agilent Zorbax -C18柱（3.0×100 mm，2.7μm）；高速離心機(jī)(長沙湘儀離心機(jī)儀器有限公司)；電子天平（精確到0.01 g）；渦旋振蕩器；0.22μm有機(jī)系針孔濾膜過濾器；以及實(shí)驗(yàn)室常規(guī)實(shí)驗(yàn)設(shè)備。

1.2 試劑與材料

多菌靈標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液1 000μg/mL(農(nóng)業(yè)部環(huán)境質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)測(cè)試中心，天津)；超純水；乙腈（德國Merk公司，色譜純）；甲醇（色譜純）；樣品前處理試劑盒和凈化包（C18、PSA（乙二胺-N-丙基硅烷）GCB）（美國Agilent公司）。

1.3 實(shí)驗(yàn)步驟

1.3.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

將多菌靈標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（1 000 μg/mL）用甲醇以及4種水果的空白溶劑分別稀釋至0.2、0.1、0.05、0.02、0.01μg/mL工作溶液，現(xiàn)配現(xiàn)用。

1.3.2 試樣制備

樣品用組織搗碎機(jī)搗成勻漿，與4 ℃冷藏保存。

1.3.3 樣品提取與凈化

準(zhǔn)確稱取樣品15 g（精確至0.01 g）于50 mL離心管中，加入15 mL 0.1%的乙酸乙腈，渦旋振蕩30 s，取出上清液加入萃取試劑盒（6 g MgSO4,1.5 g乙酸鈉）經(jīng)振蕩離心后取2 mL上清液加入帶有50 mg PSA,150 mg MgSO4的離心管中。渦旋離心后過0.22μm有機(jī)系針孔濾膜后，上機(jī)。

1.4 儀器條件

1.4.1 液相色譜條件

流動(dòng)相:乙腈（A相），0.1%甲酸水溶液（B相）；淋洗梯度見表1所示，運(yùn)行時(shí)間：11 min，進(jìn)樣量10 μL，柱溫：40 ℃。

表1 梯度洗脫程序

1.4.2 質(zhì)譜條件

離子檢測(cè)方式為多反應(yīng)離子檢測(cè)（MRM）和子離子掃描，極性為正離子（positive），離子化方式為電噴霧離子化（ESI），毛細(xì)管電壓為：4 000 V，干燥氣溫度為：330 ℃，干燥氣流速為：8.0 L/min，霧化氣壓力為：40 psi，采用的離子對(duì)為m/z:192.2~160.2和192.2~132.2，碰撞能量分別為：15和20，用于定量的離子對(duì)為：192.2~132.2。

2 結(jié)果與分析

2.1 QuEChERS的討論

QuEChERS方法近年來在國際上已經(jīng)廣泛應(yīng)用于農(nóng)藥多殘留分析，此法是一種快速、簡單、有效的樣品前處理方法。步驟簡便使得對(duì)農(nóng)藥的損失減小，試劑的消耗降低。一般水果采用PSA+MgSO4，含色素的水果采用GCB+PSA+MgSO4，GCB能去除水果中色素從而減少色素對(duì)樣品結(jié)果的影響[7]。在QuEChERS樣品前處理階段中，采用0.1%的乙酸乙腈溶液提取，因?yàn)槎嗑`在0.1%的乙酸乙腈溶液中有良好的溶解性和穩(wěn)定性，這是因?yàn)樗械奶?、脂質(zhì)、蛋白質(zhì)物質(zhì)在乙腈難以溶解而多菌靈在堿性條件下容易分解，從而保證前處理的提取率[8]。

2.2 線性范圍和檢出限、定量限

取多菌靈溶液0.2、0.1、0.05、0.02、0.01 mg/L的純?nèi)軇┘安煌瑯悠返幕|(zhì)空白溶劑上機(jī)檢測(cè)，以待測(cè)物濃度為橫坐標(biāo)，待測(cè)物的峰面積為縱坐標(biāo)，繪制線性方程如表2所見。結(jié)果顯示相關(guān)系數(shù)均大于0.996 9，檢出限為0.10~0.15μg·kg-1，定量限為0.37~0.49μg·kg-1，均低于殘留限量。

表2 不同基質(zhì)中多菌靈的線性方程、相關(guān)系數(shù)（R）、檢出限 （LOD）和定量限（LOQ）

2.3 方法回收率和精密度

在四種水果中按40、100μg/kg兩種水平添加標(biāo)準(zhǔn)溶液，每個(gè)水平重復(fù)5次，加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)見表3，平均加標(biāo)回收率在（ 93.2%~109.3% ），提取效果好，穩(wěn)定性高，方法的回收率及精密度均符合檢測(cè)要求。

2.4 基質(zhì)效應(yīng)

基質(zhì)效應(yīng)就是樣品中的干擾物影響目標(biāo)化合物的離子化，使得目標(biāo)化合物在儀器上的響應(yīng)發(fā)生增強(qiáng)或抑制的現(xiàn)象，為提高目標(biāo)化合物測(cè)定的準(zhǔn)確性，需要對(duì)基質(zhì)效應(yīng)作出評(píng)價(jià)，并選擇合適方法消除或減少基質(zhì)效應(yīng)對(duì)測(cè)定結(jié)果的影響。本實(shí)驗(yàn)分別用甲醇溶液、4種不同水果空白基質(zhì)溶液配成一系列的標(biāo)準(zhǔn)溶液，用高效液相質(zhì)譜儀檢測(cè)。結(jié)果表明四種不同水果的基質(zhì)標(biāo)樣峰面積均小于甲醇標(biāo)樣的峰面積，說明這四種水果中基質(zhì)對(duì)多菌靈有抑制作用，本實(shí)驗(yàn)為了消除基質(zhì)效應(yīng)的抑制作用，采用不同水果對(duì)應(yīng)不同的基質(zhì)配制的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算結(jié)果[9-10]。

表3 不同基質(zhì)中多菌靈的線性方程、相關(guān)系數(shù)（R）、檢出限 （LOD）和定量限（LOQ）

3 結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)采用QuEChERS快速檢測(cè)水果中多菌靈的殘留量，用0.1%的乙酸乙腈溶液提取，PSA+MgSO4凈化后直接采用高效液相質(zhì)譜聯(lián)用儀檢測(cè)，省去了復(fù)雜的凈化濃縮的過程，有效提高實(shí)驗(yàn)效率，并且檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確。本方法適用于多種水果中多菌靈的殘留檢測(cè)，具有較好的實(shí)際應(yīng)用價(jià)值，可應(yīng)用于日常的檢測(cè)工作中。

［1］周曉潔,趙良忠,夏湘,等.改良QuEChERS－高效液相色譜法檢測(cè)柑橘中的多菌靈[J].邵陽學(xué)院學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版),2014,11(2):75-76.

［2］曾志杰,李傳勇,劉紅,等.QuEChERS-高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定豆芽與生產(chǎn)環(huán)境水樣中多菌靈殘留及其不確定度評(píng)估[J].食品安全質(zhì)量檢測(cè)學(xué)報(bào),2016,7(2):593-595.

［3］NY/T 1453-2007,蔬菜水果中多菌靈等16中農(nóng)藥殘留測(cè)定液相色譜-質(zhì)譜-質(zhì)譜聯(lián)用法[S].北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社.2007.

［4］NY/T 1680-2009,蔬菜水果中多菌靈等4種苯并咪唑類農(nóng)藥殘留量的測(cè)定高效液相色譜法[S].北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社.2009.

［5］GB/T 20769-2008,水果和蔬菜中450種農(nóng)藥及相關(guān)化學(xué)品殘留量的測(cè)定液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法[S].北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社.2007.

［6］葉倩, 黃健祥, 駱沖, 等. QuEChERS-超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法快速測(cè)定３種葉菜中矮壯素和丙環(huán)唑殘留[J]. 分析科學(xué)學(xué)報(bào), 2017, 33 (3): 343-345.

［7］許欣欣, 毛麗莎, 陳慧玲, 等. 高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用法測(cè)定果汁中的展青霉素、樂果和多菌靈[J]. 實(shí)用預(yù)防醫(yī)學(xué), 2015, 22 (6): 749-750.

［8］楊楠，張琦，權(quán)伍英，谷晶. QuEChERS前處理方法結(jié)合液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)檢測(cè)蔬菜中的多菌靈[J].中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志, 2010, 21 (5): 1096-1097.

［9］李培培, 陳敏, 王軍. QuEChERS-高效液相色譜法檢測(cè)紅葡萄酒中多菌靈和甲霜靈殺菌劑殘留[J]. 食品與發(fā)酵工業(yè), 2015, 41 (1): 203-204.

［10］劉運(yùn)明, 劉華良, 吉文亮, 等. QuEChERS-高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法同時(shí)測(cè)定豆芽中7種植物生長調(diào)節(jié)劑的殘留量[J]. 中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志, 2015, 25 (12): 1882-1883.

Determination of Carbendazim in Four Kinds of Fruit by QuEChERS-High Performance Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry

1,1,2

（1. Guizhou Inspection Center for Food Safety in Circulation, Guizhou Guiyang 550002, China；2. Research and Development Center for Fine Chemicals, State Key Laboratory Breeding Base of Green Pesticide and Agricultural Bioengineering, Key Laboratory of Green Pesticide and Agricultural Bioengineering, Ministry of Education, University , Guizhou Guiyang 550025, China）

A QuEChERS-high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometric method for determination of carbendazim in four kinds of fruit was developed. Meanwhile the matrix effects for the determination of carbendazim in concertrated fruit were investigated in this study. The calibration curve of carbendazim showed good linearity at the range of 0.2~0.01mg/L, the correlation coefficient was more than 0.99.The limits of quantification and determination were 0.37 and 0.10μg/kg,respectively.The recoveries of carbendazim in four kinds of fruit at 2 spiked levels of 40 and 100μg/kg were in the range of 93.2%~109.3%,the relative standard deviation(RSD) was 5.0%~9.6%.The method is simple, reliable, precision, accuracy and sensitivity, so itcan meet the requirements of pesticide residue analysis.

high performance liquid chromatography tandem mass spectrometric; carbendazim; QuEChERS

2017-09-25

張運(yùn)依（1990-），女，土家族，貴州省德江縣人，2013年畢業(yè)于南京農(nóng)業(yè)大學(xué)食品質(zhì)量與安全專業(yè)，研究方向：從事食品檢驗(yàn)。

陳姣姣（1991-），女，碩士，研究方向農(nóng)藥學(xué)。

O 657

A

1004-0935（2017）11-1144-03