“平衡復(fù)位正骨推拿法”對(duì)兔頸源性突發(fā)性耳聾模型血液流變學(xué)指標(biāo)及血漿ET、CGRP的影響*

周 翔 何嘉瑩 高 婷 詹 強(qiáng) 羅華送 徐玉欣 王 睿 田俊松

（浙江省杭州市中醫(yī)院，浙江 杭州 310007）

·研究報(bào)告·

“平衡復(fù)位正骨推拿法”對(duì)兔頸源性突發(fā)性耳聾模型血液流變學(xué)指標(biāo)及血漿ET、CGRP的影響*

周 翔 何嘉瑩 高 婷 詹 強(qiáng) 羅華送 徐玉欣 王 睿 田俊松

（浙江省杭州市中醫(yī)院，浙江 杭州 310007）

目的 觀察“平衡復(fù)位正骨推拿法”對(duì)兔頸源性突發(fā)性耳聾模型血液流變學(xué)指標(biāo)及血漿內(nèi)皮素（ET）和降鈣素基因相關(guān)肽（CGRP）的影響，探討其治療頸源性突發(fā)性耳聾的可能作用機(jī)制。方法 將40只大耳兔隨機(jī)分為空白對(duì)照組、模型組、普通手法組和正骨手法組，每組10只。采用硬化劑注射法進(jìn)行造模，造成頸源性突發(fā)性耳聾模型?？瞻讓?duì)照組和模型組不予治療，普通手法組與正骨手法組均予地塞米松0.47 mg/kg靜滴，每日1次，3 d后減至0.23 mg/kg，再3 d停藥，維生素B14.67 mg/kg、維生素B120.02 mg/kg肌注，每日1次，在此基礎(chǔ)上普通手法組予常規(guī)手法治療，正骨手法組予平衡復(fù)位正骨推拿手法治療，每日1次，連續(xù)干預(yù)14 d。采用全自動(dòng)血流變測(cè)試儀測(cè)定全血黏度、血漿黏度、紅細(xì)胞壓積及血沉，并檢測(cè)血漿ET、CGRP含量。結(jié)果 與空白對(duì)照組比較，模型組全血黏度、血漿黏度、血沉及血漿ET含量均升高，血漿CGRP含量下降（P＜0.05）；與模型組比較，普通手法組及正骨手法組的全血黏度、血漿黏度、血沉及血漿ET含量均下降，血漿CGRP含量均升高（P＜0.05），正骨手法組對(duì)血漿ET、CGRP的改善優(yōu)于普通手法組（P＜0.05），而對(duì)血液流變學(xué)各指標(biāo)的改善與普通手法組效果相當(dāng)（P＞0.05）。結(jié)論 平衡復(fù)位正骨推拿法能改善血液黏稠狀態(tài)，增加血流量，調(diào)節(jié)血管舒縮功能，促進(jìn)聽力恢復(fù)。

耳聾/頸源性/突發(fā)性 平衡復(fù)位正骨推拿法 血液流變學(xué) 血漿內(nèi)皮素 血漿降鈣素基因相關(guān)肽

突發(fā)性耳聾（SHL）指數(shù)分鐘、數(shù)小時(shí)或3 d內(nèi)突然發(fā)生，原因不明的感音神經(jīng)性聽力損失，至少在相連的2個(gè)頻率聽力下降20 dB以上［1］。本病目前尚無公認(rèn)的特效藥物及治療方法。內(nèi)耳供血障礙是其主要發(fā)病機(jī)制之一，各種原因引起的耳蝸微循環(huán)功能障礙都可以造成聽覺器官功能損害，引起聽力下降［2］。研究指出，因頸椎急慢性損傷引起椎體解剖位置改變，可刺激頸交感神經(jīng)或椎動(dòng)脈，發(fā)生椎-基底動(dòng)脈供血不足或迷路動(dòng)脈管反射性痙攣，導(dǎo)致內(nèi)耳血循環(huán)的急慢性障礙［3］。近年，研究發(fā)現(xiàn)推拿可有效改變血液流變學(xué)指標(biāo)，刺激肌肉從而調(diào)節(jié)血管改善微循環(huán)，提高內(nèi)耳神經(jīng)傳導(dǎo)，有效調(diào)節(jié)免疫。課題組前期臨床研究發(fā)現(xiàn)，正骨手法能提高頸源性突發(fā)性耳聾患者平均聽閾，降低NPQ評(píng)分，改善聽力下降，提高總體有效率。本研究旨在觀察“平衡復(fù)位正骨推拿法”對(duì)兔頸源性突發(fā)性耳聾平均血液流變學(xué)指標(biāo)及血漿內(nèi)皮素（ET）、降鈣素基因相關(guān)肽（CGRP）的影響，探討其部分作用機(jī)制，為“平衡復(fù)位正骨推拿法”的臨床運(yùn)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)?，F(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 選取健康新西蘭大耳兔40只，體質(zhì)量（2.6±0.3）kg，雌雄各半，購自中國科學(xué)院上海實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，由浙江中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供及飼養(yǎng)。飼養(yǎng)期間給予動(dòng)物標(biāo)準(zhǔn)顆粒飼養(yǎng)及自由飲水。取10只作為空白對(duì)照組，剩余大耳兔制成椎動(dòng)脈型頸椎病所致突發(fā)性耳聾動(dòng)物模型。

1.2 試藥與儀器 消痔靈注射液（吉林省集安益盛藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)，產(chǎn)品批號(hào)15030601。規(guī)格0.4 g× 5支），氯化鈉注射液（天津金耀集團(tuán)湖北天藥藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)，產(chǎn)品批號(hào)15021615。規(guī)格90 mg×5支），地塞米松注射液（天津藥業(yè)焦作有限公司生產(chǎn)，產(chǎn)品批號(hào)15031012。規(guī)格2 mg×10支），維生素B1注射液［上海現(xiàn)代哈森（商丘）藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，產(chǎn)品批號(hào)14021311。規(guī)格0.1 g×10支］，維生素B12注射液（天津藥業(yè)焦作有限公司生產(chǎn)，產(chǎn)品批號(hào)15030731。規(guī)格0.5 mg×10支）。ZTC-1智能推拿手法參數(shù)測(cè)定系統(tǒng)，由上海康誼醫(yī)學(xué)教學(xué)儀器設(shè)備有限公司提供；ZL6000自動(dòng)血流變測(cè)試儀，由北京眾馳偉業(yè)科技發(fā)展有限公司提供；ET、CGRP試劑盒，由上海雅吉生物科技有限公司提供。

1.3 分組與造模 模型制作，按照朱明雙實(shí)驗(yàn)方法［4］采用注射硬化劑法，制成椎動(dòng)脈型頸椎病所致突發(fā)性耳聾動(dòng)物模型。將消痔靈注射液10 mL注射于大耳朵兔左側(cè)第2～6頸椎橫突附近軟組織，深度約1～1.5 cm，并于第2、3周各重復(fù)1次。造模前及造模后進(jìn)行TCD檢測(cè)，然后隨機(jī)處死4～6只大耳兔進(jìn)行病理組織檢測(cè)，如左右椎動(dòng)脈及基底動(dòng)脈的Vm下降，RI、PI增加，注射區(qū)域的頸部組織出現(xiàn)廣泛的瘢痕化及攣縮，則證明造模成功。動(dòng)物分組及干預(yù)方法，模型制備成功的30只大耳兔隨機(jī)分為模型組、普通手法組和正骨手法組，每組10只。1）空白對(duì)照組。注射氯化鈉注射液10 mL，方法同模型制作，之后常規(guī)飼養(yǎng)，不予干預(yù)。2）模型組。造模成功后常規(guī)飼養(yǎng)，不予干預(yù)。3）普通手法組。造模成功后第4周給予地塞米松0.47 mg/kg靜滴，每日1次，3 d后減至0.23 mg/kg，再3 d停藥，連續(xù)干預(yù)6 d；維生素B14.67 mg/kg、維生素B120.02 mg/kg肌注，每日1次，連續(xù)干預(yù)14 d。同時(shí)開始運(yùn)用普通手法進(jìn)行治療，指按法用拇指按壓，沿耳上及耳后膽經(jīng)循行的部位順序按壓，反復(fù)進(jìn)行，每次3 min。點(diǎn)穴法以拇指尖固定在穴位上，運(yùn)用腕力和指勁下壓，用力強(qiáng)度較大，局部多選用聽宮、風(fēng)池、聽會(huì)、耳門及百會(huì)等穴位。4）正骨手法組。造模成功后給予與普通手法組相同的基礎(chǔ)治療。同時(shí)開始運(yùn)用配合平衡復(fù)位正骨推拿手法進(jìn)行治療。（1）放松手法：雙手在大耳兔頸后外側(cè)作四指揉法5 min。（2）正骨手法：術(shù)者左手托大耳兔枕部，右手托下頜部，將大耳兔頭仰位、向右仰旋重復(fù)活動(dòng)2～3下，當(dāng)右轉(zhuǎn)達(dá)最大限度時(shí)，術(shù)者右手加有限度的右轉(zhuǎn)“閃動(dòng)力”，如法向左方重做一次，復(fù)位時(shí)，多有“咯得”響聲，約3 min。（3）強(qiáng)壯手法：提拿雙頸肩部斜方肌、岡上肌，約3 min。（4）痛區(qū)手法：按摩額頭，分5條線指揉兔頭部，點(diǎn)穴取風(fēng)池、天門（風(fēng)府）、聽宮等穴，約7 min。腧穴定位標(biāo)準(zhǔn)參照《實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)》［5］制定。推拿手法均按操作要求，包括手法方向、強(qiáng)度、頻率的控制。由專人在推拿手法參數(shù)測(cè)定系統(tǒng)上培訓(xùn)，反復(fù)練習(xí)后，再在實(shí)驗(yàn)大耳兔上操作。以上治療時(shí)間均為每日1次，連續(xù)干預(yù)14 d。

1.4 觀察指標(biāo) 血液流變學(xué)指標(biāo)檢測(cè)于第6周治療干預(yù)結(jié)束后24 h采用全自動(dòng)血流變測(cè)試儀測(cè)定全血黏度（高切、中切、低切）、血漿黏度、紅細(xì)胞壓積及血沉。血漿ET、CGRP含量測(cè)定于第6周治療干預(yù)結(jié)束后24 h采用放射免疫法檢測(cè)血漿ET、CGRP含量，嚴(yán)格按試劑盒說明書的要求進(jìn)行操作。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS21.0統(tǒng)計(jì)軟件處理。計(jì)量資料以（±s）表示；數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)采用單因素方差分析。組間析因分析，方差齊性時(shí)用LSD檢驗(yàn)，方差不齊時(shí)用Dunnett-T3檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 各組兔血液流變學(xué)指標(biāo)的比較 見表1。與空白對(duì)照組比較，模型組全血黏度（高切、中切、低切）、血漿黏度及血沉均升高（P＜0.05）；與模型組比較，普通手法組及正骨手法組的全血黏度（高切、中切、低切）、血漿黏度及血沉均下降（P＜0.05），但兩組間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

表1 各組兔血液流變學(xué)指標(biāo)比較（±s）

與模型組比較，*P＜0.05；與空白對(duì)照組比較，△P＜0.05。

全血黏度（mPa·s）組別 n高切 中切 低切空白對(duì)照組 10 3.58±0.345.14±0.47 8.77±1.58 1.32±0.28 0.35±0.04 1.11±0.24血漿黏度（mPa·s）紅細(xì)胞壓積（%）血沉（mm/h）模型組 10普通手法組 10 4.71±0.53△6.65±0.71△10.73±1.42△3.79±0.31*5.43±0.51*9.25±1.34*1.58±0.61△1.41±0.47*0.41±0.03 2.23±0.56△0.36±0.01 1.24±0.49*正骨手法組 103.74±0.32*5.32±0.39*9.07±1.48*1.39±0.48*0.35±0.05 1.15±0.41*

2.2 各組兔血漿ET、CGRP含量的比較 見表2。與空白對(duì)照組比較，模型組血漿ET含量升高，血漿CGRP含量下降（P＜0.05）；與模型組比較，普通手法組及正骨手法組的血漿ET含量均下降，血漿CGRP含量均升高（P＜0.05）；與普通手法組比較，正骨手法組血漿ET含量下降，血漿CGRP含量升高（P＜0.05）。

表2 各組兔血漿ET、CGRP含量比較（±s）

表2 各組兔血漿ET、CGRP含量比較（±s）

與模型組比較，*P＜0.05；與普通手法組比較，#P＜0.05。

組 別 n ET（ng/L） CGRP（ng/mL）空白對(duì)照組 10 127.58±3.47 441.56±143.75模型組 10 179.32±2.83△276.51±101.64△普通手法組 10 165.51±4.17*354.39±114.73*正骨手法組 10 146.57±3.36*#416.61±137.54*#

3 討 論

突發(fā)性耳聾，可歸屬于中醫(yī)學(xué)“暴聾”范疇。其病機(jī)是外邪侵襲，氣滯血瘀，閉阻耳竅，或氣虛不能行血，耳竅失養(yǎng)所致，而氣血瘀阻是耳聾發(fā)病的重要病機(jī)。故治療當(dāng)以疏通經(jīng)絡(luò)、活血通竅為大法?！夺t(yī)心方》云“清旦初起，以兩手叉兩耳，極上下之，二七之，令人耳不聾”，說明運(yùn)用推拿治療耳聾的方法古代早有記載。推拿具有疏經(jīng)通絡(luò)、行氣活血、扶正祛邪、調(diào)和陰陽等作用，是防病治病的重要手段。臨床研究表明，推拿聯(lián)合西藥或電針能緩解突發(fā)性耳聾的臨床癥狀、體征，改善椎-基底動(dòng)脈血流速度及血液流變學(xué)指標(biāo)［6-7］?！夺樉拇蟪伞ぶ巫C總要》曰“耳聾氣閉，聽宮、聽會(huì)、翳風(fēng)”，指出采用經(jīng)絡(luò)腧穴治療本病早有證實(shí)。臨床報(bào)道指出，針刺或電針耳門、聽宮、聽會(huì)、翳風(fēng)、風(fēng)池等穴對(duì)突發(fā)性耳聾有較好的治療作用［8-9］。而本次正骨手法中選擇的聽宮能夠疏通耳絡(luò)、活血通竅，風(fēng)池、風(fēng)府散風(fēng)息風(fēng)、通關(guān)開竅，諸穴合用，有活血通絡(luò)、開竅啟閉的功效，能加強(qiáng)平衡復(fù)位正骨推拿法的臨床療效。

突發(fā)性耳聾的病因病機(jī)尚未十分明確，其發(fā)病與遺傳、病毒、噪聲、變態(tài)反應(yīng)、內(nèi)耳微循環(huán)障礙等因素有關(guān)，其中內(nèi)耳微循環(huán)障礙越來越受到學(xué)者們的認(rèn)可和重視。內(nèi)耳血供主要來自椎-基底動(dòng)脈-迷路動(dòng)脈系統(tǒng)，由于其分支細(xì)小且側(cè)支代償差，在頸椎病變、椎動(dòng)脈受壓及大腦動(dòng)脈環(huán)代償?shù)拖碌日T因下，易發(fā)生內(nèi)耳、腦干的缺血缺氧，誘發(fā)產(chǎn)生大量自由基，當(dāng)自由基超過抗氧化酶清除作用時(shí)，內(nèi)耳毛細(xì)胞發(fā)生壞死退變，產(chǎn)生聽覺損害［10］。正骨手法能夠糾正“骨錯(cuò)縫”，恢復(fù)脊柱的內(nèi)外力學(xué)失衡，調(diào)整由于力學(xué)失衡導(dǎo)致的頸椎關(guān)節(jié)移位，解除其對(duì)周圍神經(jīng)血管組織的卡壓及刺激，并能緩解肌肉的痙攣狀態(tài)，促進(jìn)局部血液循環(huán)，有助于炎癥水腫的吸收和消除［11］。

突發(fā)性耳聾與血液流變學(xué)有著密切的聯(lián)系，隨著聽力損失程度的加重，血液流變學(xué)異常更為明顯，易引起耳蝸局部組織血流減慢或瘀滯，容易形成微血栓，引起微循環(huán)障礙，出現(xiàn)聽力下降或伴耳鳴［12］。突發(fā)性患者血液流變指標(biāo)均高于正常對(duì)照組，血液流變學(xué)指標(biāo)的升高造成血流緩慢，降低了紅細(xì)胞的變形能力，而紅細(xì)胞變形能力是保證小血管微循環(huán)灌注的主要條件，因此易導(dǎo)致突發(fā)性耳聾的發(fā)病，并使治愈困難［13］。本研究表明，普通手法與平衡復(fù)位正骨手法均能改善局部微循環(huán)，促進(jìn)炎癥水腫的吸，為神經(jīng)功能的恢復(fù)提供物質(zhì)基礎(chǔ)。血漿ET具有收縮血管的作用，其含量的增加能夠造成迷路動(dòng)脈強(qiáng)烈收縮而致內(nèi)耳循環(huán)障礙，引起內(nèi)耳毛細(xì)胞變性壞死，導(dǎo)致本病的發(fā)生［14］。張莉等研究指出，突發(fā)性耳聾患者血漿ET含量高于正常健康人，且隨著耳聾程度的加重，血漿ET含量隨之升高［15］。CGRP是已知最強(qiáng)的擴(kuò)血管物質(zhì)，與ET拮抗，且具有濃度低、起效快、作用強(qiáng)、時(shí)間久等特點(diǎn)。研究指出，CGRP可能在感受雙耳聲刺激強(qiáng)度差異及辨別聲源位置和方向中起一定作用，還可能參與耳蝸神經(jīng)刺激誘導(dǎo)的內(nèi)皮依賴性血管擴(kuò)張作用［16-17］。臨床研究指出，突聾患者血清CGRP水平明顯低于健康對(duì)照組，說明CGRP可能參與了耳聾的發(fā)?。?8-19］。本研究表明，普通手法與平衡復(fù)位正骨手法均能降低血漿ET含量，升高血漿CGRP含量，調(diào)節(jié)血管舒縮功能，以拮抗ET對(duì)耳蝸的損害，進(jìn)而起到保護(hù)內(nèi)耳，促進(jìn)聽力恢復(fù)的作用，平衡復(fù)位正骨手法的療效優(yōu)于普通手法。

平衡復(fù)位正骨推拿法能改善血液黏稠狀態(tài)，增加血流量，調(diào)節(jié)血管舒縮功能，保護(hù)內(nèi)耳，促進(jìn)聽力恢復(fù)，是行之有效的治療手段。

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Effects of Bone-setting Manipulation on Hemorheology，ET and CGRP of Cervicogenic Sudden Hearing

ZHOU Xiang，HE Jiaying，GAO Ting，et al. Hangzhou Hospital of Traditional Chinese Medicine，Zhejiang，Hangzhou 310007，China.

Objective：To observe the effects of bone-setting manipulation on hemorheology，ET and CGRP of cervicogenic sudden hearing loss in model rabbits and explore its possible mechanism.Methods：Forty big ear rabbits were randomly divided into the control group，the model group，common massage group and bone-setting manipulation group，ten rabbits in each.Cervicogenic sudden hearing loss model was duplicated with sclerosing agent injection.Rabbits in the control group and the model group received no treatment；rabbits in common massage group and bone-setting manipulation group were treated with dexamethasone intravenous drip of 0.47 mg/kg once a day，and 3 days later，decreased to 0.23 mg/kg once a day，and after 3 days，only with vitamin B1 and vitamin B12 intramuscular injection of 4.67 mg/kg and 0.02 mg/kg once a day.Based on this，the common massage group was treated with conventional massage and the bone-setting manipulation group was treated with bone-setting manipulation continuously for 14 days.Whole blood viscosity，plasma viscosity，hematocrit and ESR were detected with automatic blood rheometer，and the content of ET and CGRP in plasma was detected，too.Results：Compared with the control group，whole blood viscosity，plasma viscosity，ESR and the content of ET all increased in the model group，while the content of CGRP dropped（P＜0.05）.Compared with the model group，whole blood viscosity，plasma viscosity，ESR and the content of ET all dropped in common massage group and bone-setting manipulation group，while the content of CGRP increased（P＜0.05）.The improvement of ET and CGRP in bone-setting manipulation group was better than that of common massage group（P＜0.05）.However，there was no significant difference in the improvement of hemorheology indexes between them（P＞0.05）.Conclusion：The bone-setting manipulation can resist vascular spasm and improve microcirculation and the conduction of the brainstem cochlear path，which can promote hearing recovery.

Epicophosis/cervicogenic/sudden；Bone-setting manipulation；Hemorheology；ET；CGRP

R244.1

A

1004-745X（2017）02-0219-04

10.3969/j.issn.1004-745X.2017.02.010

2016-08-09）

杭州市科技發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目（No.20150733Q55）