實驗室能力驗證技術(shù)要點

能力驗證是指認可機構(gòu)為確保實驗室維持較高的校準和檢測水平而對其能力進行考核、監(jiān)督和確認的一種活動，是評價實驗室檢測結(jié)果真實水平的有效手段，也是實驗室質(zhì)量管理體系持續(xù)改進和不斷提高的有效措施。要做好農(nóng)產(chǎn)品農(nóng)藥殘留能力驗證實驗需要把握好幾個關(guān)鍵點。

一、 能力驗證前的準備工作

1、 標準溶液的配置

對照標準物質(zhì)證書、確認有效期、純度、結(jié)構(gòu)和分子量、根據(jù)標識的純度等內(nèi)容進行換算。選擇合適的標準溶液線性范圍，線性范圍的設(shè)置會影響定量結(jié)果的準確性和線性系數(shù)。通常選擇3-4個濃度點，標準曲線的最低點為檢測限濃度點的二分之一左右，待測樣品的濃度最好在曲線的中間位置，這樣定量會更準確，具體線性范圍則根據(jù)需要檢測的樣品濃度決定。

2、 試劑、器皿的處理

為確保實驗過程中對所用試劑的進行控制，必須做樣品空白實驗，確保試劑空白的峰面積在檢測限以下，否則需要更換試劑，或?qū)⒃噭┲匮艉笫褂?。配置溶液?yīng)使用檢定過的移液管或經(jīng)計量合格后準確無誤的移液槍。使用前將所用的實驗器皿按照要求進行清洗，若按照NY/T 761-2008標準操作實驗，玻璃器皿在清洗后，需要用乙腈溶液進行潤洗，盡量減少引入外來的污染因素，所用到的器皿必須在檢定周期內(nèi)。

3、 儀器條件的優(yōu)化

對實驗過程中涉及的儀器設(shè)備進行核查，確保在檢定或校準有效期內(nèi)，并且滿足實驗要求。特別是要對檢測儀器的精準度和靈敏度進行確認，如達不到檢測要求需對儀器進行調(diào)整。同時將新配置的標準溶液與以前的標準溶液同時上機測定，比較響應(yīng)值，正常情況下響應(yīng)值應(yīng)一致，或有所提高，若新配標準溶液靈敏度不如以前，需要查找原因并優(yōu)化儀器。

4、 樣品前處理方法的確定

重點把握方法的原理和關(guān)鍵點，明確每個步驟的目的，應(yīng)該怎樣進行正確的操作，同時保證操作的穩(wěn)定性和一致性。對檢測限和定量限進行加標測定，準確度和精密度要滿足方法的要求。如未能達到，需對操作的每個步驟進行分解查找原因，是方法問題還是操作問題，該怎樣解決，確保這一環(huán)節(jié)的準確無誤。

在NY/T 761-2008蔬菜水果中有機磷、有機氯、擬除蟲菊酯和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留的測定中要注意一下幾點：1、提取步驟的過濾用的濾紙應(yīng)用定性濾紙。2、提取步驟的靜止時間不能過長，不能超過40分鐘。3、凈化步驟的水浴溫度要嚴格按照方法要求的溫度。4、要控制好凈化步驟的氮吹切記不要吹的太干，吹到潮乎乎為宜。

二、 能力驗證實驗中的質(zhì)量控制

在做實際樣品時同步做質(zhì)控樣品是為了保證檢測結(jié)果的可控性，達到預(yù)定的精確程度，為達到這一預(yù)定的目的所采取的工作步驟都必須是事先規(guī)劃好了的。過程中需要注意兩點：

1、 同步做質(zhì)控樣品

質(zhì)控樣品和待檢樣品必須同時操作，質(zhì)控樣品的添加濃度通常選擇2-5倍定量限的添加水平，濃度水平盡量與所測樣品的濃度保持一致，不能相差過大。質(zhì)控樣品可以選擇在空白樣品的基礎(chǔ)上進行加標，也可以采用已知量值得陽性樣品來進行檢驗。同時確保質(zhì)控樣品和待檢樣品檢測時每個步驟操作的一致性，降低誤差。

2、 雙人負責制

樣品檢測需要按照一人主檢，一人監(jiān)督復(fù)核的模式操作。雙人負責可以避免偶然誤差的發(fā)生。檢驗人員必須為有經(jīng)驗，長期從事農(nóng)產(chǎn)品檢測的技術(shù)人員擔任，熟悉檢驗方法，能把握操作中的關(guān)鍵步驟，對于檢驗過程中的突發(fā)事件能正確應(yīng)對處理。

3、 基質(zhì)效應(yīng)的消除

所謂基質(zhì)，是指樣本中除分析物以外的組成，基質(zhì)常常對分析物的分析過程有顯著的干擾，因為響應(yīng)值的專屬性不強，即響應(yīng)值可能是其他物質(zhì)的響應(yīng)，可能會減少響應(yīng)，也可能會增加響應(yīng)，不可預(yù)測，因此會影響分析結(jié)果的準確性，需要采取方法消除基質(zhì)效應(yīng)。在水產(chǎn)品農(nóng)殘檢測中，通常可以采用標準添加法，也就是通過標準添加法做標準曲線，即在篩選出的空白樣品（基質(zhì)最好與能力驗證樣品一致）中添加3-4濃度的標準溶液，同待測樣品一樣進行前處理，上機測定后作為定量標準曲線使用。

4、 能力驗證樣品的處理

能力驗證樣品到達實驗后，充分解凍，加入內(nèi)標（內(nèi)標最好使用同位素內(nèi)標）后在避光冷藏處放置半小時后再按照規(guī)定的檢測方法操作，保證待測物和內(nèi)標物的一致性。

5、 規(guī)范樣品測定順序

為防止待測液衰減，在前處理結(jié)束后樣品需及時上機操作并處理數(shù)據(jù)。樣品的測定順序按照先測試劑空白和樣品空白，再測低濃度樣品。最后測高濃度樣品的順序，防止高濃度樣品污染儀器，對后續(xù)樣品造成影響。在樣品測定序列穿插標準溶液的測定，根據(jù)標準溶液的響應(yīng)值，可以掌握儀器的工作狀態(tài)。每個樣品需要上機平行測定兩次，可以降低因儀器不穩(wěn)定造成數(shù)據(jù)存在誤差。如果發(fā)現(xiàn)數(shù)據(jù)不正常，需要進幾針試劑或更換離子傳輸管，先進行這些簡單步驟的操作來清潔儀器，若無法恢復(fù)正常，再進一步排查。

三、 數(shù)據(jù)上報前的結(jié)果分析

1、 結(jié)果須取平均值

取平均值的目的是避免偶然誤差，降低操作誤差，提高可信度。在檢測過程中有時會發(fā)現(xiàn)三個能力驗證樣品中有兩個的結(jié)果平行性較好，有一個數(shù)值偏離一些，在我們無法確認哪一個數(shù)值更接近真值時，就必須取數(shù)據(jù)的平均值，減少誤差。忌諱人為剔除平行性差的樣品結(jié)果，將自認為平行性號的樣品重復(fù)測定多次后取平均值上報，這樣操作的后果有時反而將真實結(jié)果排除在外了。

2、 分析質(zhì)控樣品數(shù)據(jù)

根據(jù)質(zhì)控樣品的回收率和精密度數(shù)據(jù)，分析此次檢驗過程的質(zhì)量。必要時對比質(zhì)量控制圖進行分析，明確此次能力驗證檢測結(jié)果的整體水平是偏低還是偏高，對數(shù)據(jù)的把控做到心中有數(shù)。

3、對能力驗證樣品結(jié)果的判別

仔細分析樣品檢測過程，譜圖、計算及結(jié)果數(shù)據(jù)，特別是對于能力驗證樣品中添加濃度含量低的化合物，著重比較試劑空白和樣品空白的譜圖，盡量防止出現(xiàn)漏判、誤判的可能性。