雞沙門氏菌的分離鑒定及藥敏試驗

強會萍 童江濱 江蘇省揚州市江都區(qū)仙女鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)站 225200

雞沙門氏菌的分離鑒定及藥敏試驗

強會萍 童江濱 江蘇省揚州市江都區(qū)仙女鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)站 225200

為了了解江蘇省揚州地區(qū)雞沙門氏菌的感染和耐藥情況，采取對該地區(qū)5個雞場98份病雞組織進行細菌分離，并進行了藥敏試驗、血凝試驗和致病性試驗。經(jīng)過分離，得到24株沙門氏菌，血凝鑒定表明，有18株呈陽性，其中5株均能使雛雞致死。藥敏試驗結(jié)果表明，這5株沙門氏菌對甲硝唑、青霉素、替米考星和氨芐西林有高耐藥性；對慶大霉素比較敏感。沙門氏菌不僅耐藥性特別嚴重，而且是危害該地禽類養(yǎng)殖場的主要病原菌。

沙門氏菌；分離鑒定；藥敏試驗

沙門氏菌病是一種由沙門氏菌屬細菌引起的一種人畜共患病。而沙門氏菌對于食品安全構成嚴重威脅，我國規(guī)?；B(yǎng)雞產(chǎn)業(yè)不斷發(fā)展，在帶來巨大經(jīng)濟效益的同時，也產(chǎn)生了難以避免的危害?？股氐氖褂?，使得部分細菌產(chǎn)生極強的耐藥性，如沙門氏菌。針對這一要點，有關部門對江蘇省揚州地區(qū)雞沙門氏菌病原進行了分離鑒定和藥敏試驗，希望對今后防治該病提供扎實的理論依據(jù)。

1 材料

（1）病料來源。收集的98份來自江蘇省揚州地區(qū)5個雞場，從2016年3月至2016年5月疑患沙門氏菌病的病料組織。

（2）培養(yǎng)基。三糖鐵瓊脂（TSI）、SS 營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基和HE營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，南京某技術有限公司。

（3）沙門氏菌屬診斷血清。沙門氏菌A～F群“O”多價診斷血清,中國生物技術集團公司江蘇生物制品研究所。

（4）試驗藥物。痢菌凈、替米考星、青霉素、甲硝唑、氨芐西林，江蘇南京動物藥業(yè)有限公司，批號：20150114；慶大霉素、頭孢拉定、頭孢唑啉，蘇州微生物試劑有限公司，批號：20151335[2]。

（5）試驗動物。1日齡健康雛雞,揚州某雞場。

2 方法

（1）病料采集。于發(fā)病地區(qū)采集病雞，臨床癥狀表現(xiàn)為怕冷，減食或廢食，排乳白色稀薄黏膩糞便，肛門周圍污穢，閉目呆立。致死，剖檢取其心、肝、脾、肺和腸于-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

（2）沙門氏菌的分離鑒定。實驗室無菌，將病料組織劃線接種于HE營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基和SS營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，37℃培養(yǎng)18h后觀察，挑取直徑約0.5mm的菌落進行革蘭氏染色，將革蘭氏陰性短桿菌接種于TSI中。

（3）血清型鑒定。挑取TSI中呈陽性的菌落進行沙門氏菌A～F群“O”多價診斷血清玻片凝集試驗，設生理鹽水為對照組。在平板上將瓊脂培養(yǎng)的細菌與少量生理鹽水混勻，再加入1滴沙門氏菌多價“O”抗血清，搖晃，觀察是否凝集。

（4）致病性試驗。取5株沙門氏菌接種于培養(yǎng)液中，37℃恒溫培養(yǎng)24h，取0.5mL菌液滴口于10只雛雞；設對照雞10只，滴口營養(yǎng)培養(yǎng)液。將雛雞隔離飼養(yǎng)，觀察發(fā)病和死亡情況。對死亡雞進行剖檢，觀察其病理變化。

（5）藥敏試驗。用Kirby-Bauer紙片法挑取單個菌落，分別接種在營養(yǎng)培養(yǎng)液中，37℃培養(yǎng)24h。用無菌生理鹽水制成0.5麥氏標準的菌懸液，吸取適量菌液在營養(yǎng)瓊脂平板內(nèi)，表面均勻涂抹，蓋上平板，室溫放置幾分鐘，用小鑷子夾取藥敏紙片，貼于瓊脂表面，倒置，37℃培養(yǎng)16～18h。最后，觀察藥敏紙片周圍有無抑菌圈，并測量直徑（d）大小。結(jié)果判定標準d＞15mm為高度敏感；10.1＜d≤15mm為中度敏感；d≤10mm為耐藥。

3 結(jié)果

（1）病理變化。剖檢病雞的病理變化主要表現(xiàn)為肝臟土黃色、腎臟腫大、纖維素性心包炎和肝周炎。

（2）分離結(jié)果。在SS瓊脂平板上有透明或有黑色中心的菌落，HE瓊脂平板上有灰綠色、圓形、黑色中心的菌落；取單個菌落涂片，革蘭氏染色，在油鏡下觀察，發(fā)現(xiàn)大量單個存在小短、兩端鈍圓的革蘭陰性桿菌；接種于TSI表現(xiàn)為斜面變紅，底層反應呈陽性，產(chǎn)硫化氫和產(chǎn)酸，結(jié)果表明此分離菌疑似為沙門氏菌。玻片凝集試驗結(jié)果：共有18個菌株呈陽性，其中5株呈強陽性，命名為 SH-1、SH-2、SL-3、SL-4 和 SI-5。

（3）致病性試驗結(jié)果。雛雞接種強陽性的5株沙門氏菌，雛雞接種5h后開始死亡。病雞臨床表現(xiàn)為精神萎頓、呆立不動、怕冷、食欲廢絕，最后死亡。剖檢結(jié)果顯示，病雞腸出血，腎腫大，肝呈土黃色。

（4）藥敏試驗結(jié)果。5株沙門氏菌敏試驗的結(jié)果，沙門氏菌菌株對慶大霉素比較敏感；對甲硝唑、青霉素、替米考星和氨芐西林等有較高的耐藥性；而對痢菌凈、頭孢唑啉、頭孢拉定等有不同程度的耐藥性。

4 小結(jié)與討論

（1）此次試驗結(jié)果顯示，經(jīng)過分離鑒定得到的5株沙門氏菌，對大部分抗生素都具有不同程度的耐藥性。而且當?shù)仉u沙門氏菌的耐藥性比較嚴重[3]。

（2）產(chǎn)生耐藥性的原因是長期盲目用藥和喂以抗生素含量高的飼料。鑒于病原菌容易產(chǎn)生耐藥性的這一特點，建議各地養(yǎng)殖場在治療該病時，盡量先進行藥敏試驗。臨床治療沙門氏菌病時應根據(jù)本地區(qū)藥敏結(jié)果合理選用抗生素。為了防止盲目用藥造成的損失，應當先選出敏感藥物再進行適當、有效的治療措施。此外，在使用抗菌藥物來預防治療的基礎上，也要考慮用一些合適的生物制劑。

（3）檢疫并淘汰帶菌雞，建立好無菌雞群，從源頭上阻斷傳染源，斷開其傳播途徑，這些場是徹底凈化該病的科學選擇。

[1]楊曉輝，楊增岐．陜西關中地區(qū)雞白痢現(xiàn)狀調(diào)查［J］．動物醫(yī)學進展，2008,29（9）：103-108．

[2]趙興緒，王雯慧，伏小平等．畜禽疾病診斷指南［M］．北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2010．

[3]中國獸藥典委員會.中華人民共和國獸藥典二部(M).農(nóng)業(yè)出版社，2000：256.