動物檢疫材料的采集原則與分析方法

張龍 鄒鐵柱

（河南省扶溝縣動物衛(wèi)生監(jiān)督所 461300）

動物檢疫是利用多種診斷技術(shù)和方法對動物進行檢查，并采取相應(yīng)措施對動物疫病進行篩查，以減少動物傳染病的擴散和傳播[1]。這項工作是保證動物產(chǎn)品及其制品質(zhì)量安全的重要方法，同時也能促進畜牧業(yè)的健康發(fā)展。在動物檢疫過程中實驗室診斷十分重要，是確診疾病的主要依據(jù)，所以對動物檢疫材料進行正確的采集、處理、運輸、保存和送檢具有重要意義。

1 采集動物檢疫材料的具體原則

1.1 典型原則

在動物檢疫材料采集過程中，要求樣品具有代表性。當進行活體采樣時，要在同群動物中找到典型動物，該動物的臨床癥狀相對典型，沒有經(jīng)過任何藥物治療，尤其是細菌性傳染病，如果經(jīng)過抗生素治療，則采集該樣品很有可能檢測不出傳染病，不能滿足動物檢疫的相關(guān)要求。另外，要采集典型材料，也就是說采集病原體含量最高的材料[2]。如患有呼吸道疾病的動物，在活體采樣時，應(yīng)采集器口鼻分泌物、血液等典型樣品，而患有消化道疾病首選的樣品是糞便，此外，乳汁、局部腫脹處的滲出液、尿液和膿汁等也是在日常樣品采集過程中常見的樣品。

1.2 合理原則

當動物處于群體發(fā)病狀態(tài)時，采集的個體數(shù)量應(yīng)科學、合理，爆發(fā)群體性疾病時至少要選擇5 個典型動物進行樣品采集。采集的樣品種類應(yīng)盡可能地豐富，每種樣品量要足夠，樣品采集量不僅要滿足相應(yīng)的檢疫分析需要，還應(yīng)考慮到備樣數(shù)量。

1.3 適時原則

材料采集應(yīng)適時，采樣時間和季節(jié)也有一定關(guān)系，炎熱的夏季采集病死動物樣品時，應(yīng)不超過死亡后的4h。采集時間過遲可能會造成動物尸體進一步腐爛，組織變形、腐敗，導致無法進行檢疫。而在檢疫病毒性動物傳染病時，應(yīng)在發(fā)病初期、急性期進行材料采集，采集個體最好有體溫升高癥狀，此時動物機體內(nèi)的病毒含量最多，隨著病程的延長，機體會產(chǎn)生相應(yīng)抗體來抵御病原微生物的入侵，病毒含量會逐漸降低，甚至在血液中消失，在組織中少量存在，不易于進行檢疫。

1.4 無菌原則

在進行動物檢疫材料采集過程中應(yīng)全程進行無菌操作，特別是采集后需要進行血清學和生物學檢查的樣品更需要在采集時嚴格無菌操作。采集好的樣品要放置在事先進行滅菌處理的容器中保存和運輸，以免在運輸過程中發(fā)生污染。

1.5 安全原則

由于很多動物疫病都是人畜共患病，病原微生物不僅對動物有一定的威脅，也能侵入人體，影響人類健康。所以在樣品采集過程中，要求采集人員的操作要按照規(guī)范的采樣流程進行，做好個人防護，注意采樣安全，避免感染事故的發(fā)生。一旦有疫情發(fā)生也應(yīng)及時進行匯報，將患病動物進行隔離，防止病原微生物進一步向環(huán)境擴散，造成疫情大面積傳播。當懷疑被檢動物患有炭疽病時不得進行剖檢，可切開頸靜脈皮膚后制作血液涂片后立即送檢[3]。

2 檢疫分析方法

動物檢疫主要包括臨場檢疫、抽樣檢疫、隔離檢疫及實驗室檢疫。在臨場檢疫過程中，最常用到的檢疫分析方法有聽診、觸診、叩診、嗅診、問診和視診，在個體檢疫過程中還要觀察動物的精神狀態(tài)、排泄物性狀是否正常、可視黏膜有無病變、呼吸頻率是否正常及脈搏搏動有無異常等，根據(jù)以上檢疫方法分辨出健康動物和發(fā)病動物，是活體動物產(chǎn)地檢疫的重要方法。

2.1 病理學檢查技術(shù)

當被檢疫動物根據(jù)臨床癥狀且一般檢疫方法無法進行確診、或有病死動物時，應(yīng)進行病理學檢查。

2.1.1 病例剖檢檢查技術(shù)

在剖檢前對尸體表征進行檢查，主要觀察天然孔是否有出血，尸僵是否完全，如果尸僵不全且天然孔出血，則可以懷疑該被檢疫動物患有炭疽等惡性傳染病，不得進行剖檢。尸體表征檢查沒有異常時可以觀察尸體皮膚、被毛及營養(yǎng)狀況，而后進行剖檢，觀察皮下、內(nèi)臟器官、口腔、鼻腔及頸部各器官。

2.1.2 病理組織學檢查技術(shù)

當進行剖檢后無法通過肉眼觀察出所有病理變化時，應(yīng)進行病理組織學檢查，以進一步確認病變性質(zhì)。在實踐中常用的病理組織學檢查技術(shù)有石蠟切片、HE 染色、瑞氏染色、快速冰凍切片等，肉眼觀察結(jié)合病理學組織檢查可以更全面地了解被檢疫動物的健康狀況。在采集病理組織學檢查材料時應(yīng)采用10%的福爾馬林或95%的酒精進行固定，神經(jīng)組織需要在10%的福爾馬林中再加入5%～10%的碳酸鎂。當進行細菌檢查時，要將樣品保存在滅菌液體石蠟或30%的甘油緩沖鹽水、飽和氯化鈉等溶液中。進行病毒檢查時要將樣品保存在50%的甘油緩沖鹽水、包音氏液中。

2.2 病原學檢查技術(shù)

有些傳染性疾病僅能通過病原學檢查技術(shù)進行確診，此時應(yīng)采集相應(yīng)樣品進行病原學檢查。細菌性傳染病檢疫時常用的方法有顯微鏡檢查法、細菌分離培養(yǎng)法、生化試驗法及動物試驗法等方法。病毒性傳染病則需先對病毒進行分離培養(yǎng)，而后進行包涵體檢查、病毒形態(tài)學鑒定、病毒培養(yǎng)性狀觀察及病毒核酸檢測。其中病毒核酸檢測主要應(yīng)用技術(shù)是PCR 技術(shù)，這一技術(shù)所需的樣品數(shù)量較少，且不需要完整的病毒，對難以進行人工培養(yǎng)的病毒檢疫非常重要，又因為PCR 檢疫過程中不需要病毒處于活躍狀態(tài)，降低了病毒污染環(huán)境后引發(fā)的疫情擴散或感染試驗人員的風險，在實踐中起非常重要的作用。對寄生蟲性傳染病而言，需要進行蟲卵檢查或蟲體檢查，其中蟲卵檢查主要應(yīng)用直接涂片鏡檢或集卵法，而蟲體檢查主要是在檢查蠕蟲或原蟲時才使用。

2.3 免疫學檢查技術(shù)

與病原學檢查技術(shù)相比，免疫學檢查技術(shù)更為便捷，且隨著科學技術(shù)的不斷進步，很多常發(fā)的動物傳染病抗原、陽性血清和診斷液都已有成型的商品化產(chǎn)品可供選擇，在進行檢查時采取對應(yīng)的抗原和診斷液進行血清學檢查即可。

血清學診斷方法較多，主要包括直接凝集反應(yīng)、間接凝集反應(yīng)、血凝與血凝抑制試驗、環(huán)狀沉淀反應(yīng)、瓊脂擴散反應(yīng)等方法，也可以通過酶聯(lián)免疫吸附試驗、中和試驗等多種方式進行血清學檢測，其原理都是利用抗原抗體中已知的任何一個去檢測待檢驗樣品中是否含有相對應(yīng)的抗原或抗體。

2.4 變態(tài)反應(yīng)技術(shù)

變態(tài)反應(yīng)技術(shù)主要是指接觸過抗原的機體再第二次接觸同一抗原時，機體會產(chǎn)生免疫損傷，從而引發(fā)疾病，這是一種特異性的免疫應(yīng)答反應(yīng)。這一技術(shù)常被應(yīng)用于結(jié)核病、副結(jié)核病、鼻疽病等疾病的檢疫過程中。

3 結(jié)語

動物檢疫工作是及時發(fā)現(xiàn)各種動物疫病的首要手段，做好動物檢疫工作能在動物傳染性疾病發(fā)生時及時將其遏制，避免疫情進一步發(fā)展和蔓延，降低因動物疫病造成的經(jīng)濟損失，也能有效防止病死畜禽進入市場、端上餐桌，造成對人類健康安全的危害。為了保證動物檢疫的順利進行，保證動物檢疫結(jié)果的有效性和可靠性，在采集動物檢疫材料過程中應(yīng)遵守典型原則、適時原則、合理原則、無菌原則及安全原則，并根據(jù)不同材料選擇相適應(yīng)的檢疫分析方法，在樣品儲存和運輸過程中也要根據(jù)不同情況選擇適合的畜禽容器和固定方法。只有采樣規(guī)范，檢疫方法得當，才能保證動物檢疫的效果。