核酸檢測技術(shù)應(yīng)用在無償獻血者血液篩查中的效果

樸大哲

（吉林省延邊州紅十字中心血站，吉林 延邊 133000）

HBV（乙型肝炎病毒）、HIV（人類免疫缺陷病毒）、HCV（丙型肝炎病毒）是當(dāng)前經(jīng)由輸血傳播的主要感染病毒，隨著臨床醫(yī)療技術(shù)的不斷進步，逐步降低了輸血傳播此幾種病毒的感染風(fēng)險，典型的有核酸檢測技術(shù)（NAT），因此，本研究重點探究核酸檢測技術(shù)應(yīng)用在無償獻血者血液篩查中的效果，數(shù)據(jù)結(jié)果歸整如下。

1 資料與方法

1.1 標本資料

本研究選擇2016年5月～2017年5月本血站無償獻血者血液標本7158份作為對象。

1.2 儀器與試劑

儀器：ELISA（酶聯(lián)免疫吸附試驗法）的檢測儀器[1]：EVO150全自動加樣器（瑞士Tecan企業(yè)生產(chǎn)）、FAME24/30全自動酶聯(lián)免疫分析儀（瑞士Hamilton 企業(yè)生產(chǎn)）；ALT試驗檢測儀器：卓越400全自動生化分析儀（科華企業(yè)生產(chǎn)）；核酸檢測的儀器：7500 Real time PCR 儀（美國ABI企業(yè)生產(chǎn)）、ChiTas BSS 1200自動化核酸純化儀。

試劑：ELISA檢測的試劑[2]：抗-HCV、HBV表面抗原、TP抗體、HTLV抗體（單試劑），均使用對應(yīng)的ELISA試劑；ALT試劑：ALT速率法的檢測試劑；核酸檢測試劑：HBV、HCV、HIV（1型）的核酸試劑盒（A、B盒），A盒表示核酸提取試劑、B盒表示核酸的擴增試劑。

1.3 檢測方式

首先，對每位無償獻血者血液標本檢測其HTLV抗體、抗-HIV、抗-HCV、HBV表面抗原、TP抗體，使用ELISA方法檢測，其次，ALT用速率法進行檢測，檢測均用雙試劑，采取兩次檢測法。雙試劑結(jié)果顯示為陰性說明血清學(xué)檢測為合格，最后進行核酸檢測，其檢測方法為：在血清學(xué)檢測結(jié)果合格后，對血液標本使用8人份混合檢測，對混合檢測陽性標本予以拆分后的單人份檢測，機采血小板標本均予以單人份檢測。進行8人份混合檢測時，每份標本均取200 ml并進行匯集，從1600 ml的混合樣本中，抽取1200 ml血漿提取核酸；單人份檢測時，直接在匯集管中放入1300 ml樣本，抽取1200 ml血漿提取核酸。檢測結(jié)果會檢測出病毒擴增產(chǎn)物。

1.4 質(zhì)量控制方式

使用匯集管進行核酸提取前，加入DNA、RNA內(nèi)標IC，將其當(dāng)成有效提取DNA、RNA核酸標識，實驗前都設(shè)置NC（陰性對照）、PC（陽性對照）、QC（室內(nèi)質(zhì)量控制）。

2 結(jié) 果

2.1 血清學(xué)檢測結(jié)果

7158份無償獻血者血液標本的血清學(xué)檢測結(jié)果：對7158份無償獻血者血液標本采取雙試劑血清學(xué)檢測，其合格的標本共7023份，不合格的標本共135份，其血清學(xué)檢測合格率達到98.11%，不合格標本率為1.89%。對合格的標本進行核酸檢測。在不合格的標本中，不合格項中最多的是HBsAg，達79份，占到1.10%；HIV抗體僅1份，占到0.01%；ALT達39份，占到0.53%；HTLV抗體達10份，占到0.14%；TP抗體達25份，占到0.35%；HCV抗體達10份，占到0.56%。從結(jié)果可知該地區(qū)乙型肝炎的高發(fā)區(qū)，HIV、HAV在無償獻血者中的整個攜帶率較低。

2.2 核酸檢測結(jié)果

7023份無償獻血者的標本合格，進行HIV、HCV、HBV聯(lián)合式核酸檢測后其結(jié)果為：共10人的核酸檢測結(jié)果不合格，都是HBV-DNA，其陽性檢出率為0.14%，均未檢出HIV-RNA、HCV-RNA。

3 討 論

輸血是臨床治療過程中常使用的手段，能夠有效搶救患者，但輸血過程也存在較為嚴重的感染、病毒等風(fēng)險，因此，在進行輸血之前，臨床通常采取血清學(xué)方法來檢測病毒，但此種方式的窗口期較長[3]，即病原體在感染機體后至可被檢測試劑檢測出來的總時間較長，且檢測后有較高的殘余風(fēng)險，通過核酸檢測方式后，可有效縮短檢測窗口期，根據(jù)研究結(jié)果可知，單一樣本、8混樣本、16混樣本進行核酸檢測后，3大病毒窗口期分別為：HBV為20.3天、11.4天、17.5天；HIV分別為2.8天、5.6天、6.4天；HCV分別為11.3天、16.4天、20.3天。與傳統(tǒng)方式相比，可有效降低三輸血傳播病毒整體窗口期。同時，核酸檢測還可檢測出隱匿的乙肝病毒感染患者，從而更好防范乙肝等傳染疾病。

綜上所述，將核酸檢測用于無償獻血者患者檢測過程中，能夠有效降低輸血過程殘余風(fēng)險，可推廣。

[1] 黃 丹.獻血者血液樣本核酸檢測降低經(jīng)血傳播感染性疾病風(fēng)險的效果分析[J].泰山醫(yī)學(xué)院學(xué)報,2017,38(9):1043-1044.

[2] 梁浩堅,許結(jié)儀,鄭優(yōu)榮,等.2013-2014年廣州無償獻血者血液核酸檢測無效結(jié)果分析[J].廣東醫(yī)學(xué),2016,37(z2):177-179.

[3] 王 燕.核酸檢測技術(shù)在酶聯(lián)免疫吸附法漏檢HIV和HBV血樣篩查中的應(yīng)用[J].中國農(nóng)村衛(wèi)生,2016,19(6):44-45.