瑤藥葫蘆鉆的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

屈信成　羅小珍　覃蘭芳　胡琦敏

【摘 要】 目的：建立和完善瑤藥葫蘆鉆的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法：依據(jù)2010年版《中國藥典》附錄相關(guān)方法，對葫蘆鉆藥材進(jìn)行性狀、顯微及薄層色譜鑒別，對水分、總灰分、浸出物進(jìn)行檢查。結(jié)果：確定了葫蘆鉆藥材的性狀、顯微及薄層色譜的特征；水分?jǐn)M訂為不超過15.00%，總灰分限度≤ 15.0% ；浸出物含量不得少于6.0%。結(jié)論：研究結(jié)果可作為制定和完善葫蘆鉆藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的依據(jù)。

【關(guān)鍵詞】 瑤藥；葫蘆鉆；質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

【中圖分類號】R29 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A 【文章編號】1007-8517（2017）03-0036-04

Study on the Quality Standards Of Pothos Chinensis

QU Xincheng1 LUO Xiaozhen1 QIN Lanfang1 HU Qimin2*

1.Guangxi Institute of Traditional Chinese Medicine，Nanning 530022，China2.Guangxi Key Laboratory of Traditional Chinese Medicine Quality Standards，Nanning 530022，China

Abstract：Objective To conduct the Quality Standards of Pothos chinensis.Methods Based on the 2010 edition of the China pharmacopoeia appendix relevant methods， for hoist the Pothos chinensis medicinal properties， microscopic and TLC identification， inspection on moisture， total ash， extract. Results confirmed the Pothos chinensis properties， microscopic and TLC characteristics； Moisture formulates for may not be over 15.00%. The total ash content limit of 15.0% or less； Extract content shall not be less than 6.0%. Conclusion The results can be used as to develop and perfect the basis of Pothos chinensis quality standard.

Keywords：Yao Medicine；Pothos Chinensis；Quality Standards

瑤藥葫蘆鉆為天南星科植物石柑子Pothos chinensis（Raf.）Merr.的干燥全草。為瑤族常用藥物之一，《中國瑤藥學(xué)》、《廣西本草選編》、《中藥大辭典》和《中國現(xiàn)代瑤藥》等均有記載[1-4]。葫蘆鉆俗名石柑子、石葫蘆、巴巖香、青蒲蘆茶、藤桔等，在廣西大部分地區(qū)均有出產(chǎn)，臺灣、湖北、廣東、四川、貴州、云南等地也有分布。葫蘆鉆具有行氣止痛、消積、祛風(fēng)濕、散瘀解毒的功效。臨床主要用于治療心、胃氣痛，疝氣，小兒食積脹滿，血吸蟲晚期肝脾腫大，風(fēng)濕痹痛，腳氣，跌打損傷，骨折，中耳炎，耳瘡，鼻竇炎等[5-6]。研究表明，葫蘆鉆中含有琥珀酸（succinic acid）和香草酸（vanillic acid） [7]；并可能含有苷類、生物堿、黃酮、蒽醌、香豆素、萜類內(nèi)酯、甾體、三萜類、糖類、有機(jī)酸、氨基酸、蛋白質(zhì)、揮發(fā)油和油脂等化合物[8]，其乙酸乙酯和正丁醇部位的提取物在體外對腫瘤細(xì)胞生長具有抑制作用[9]。原植物形態(tài)及生藥學(xué)研究在《中國植物志》等已有記載[10-11]，但葫蘆鉆在質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)方面的研究報道不多，為了完善葫蘆鉆的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)故行此研究。

1 儀器與材料

1.1 材料 葫蘆鉆12個樣品分別于2014年和2015年采于廣西上思和馬山等市縣，經(jīng)廣西中醫(yī)藥研究院賴茂祥教授鑒定均為天南星科植物石柑子Pothos chinensis（Raf.）Merr.。實(shí)驗(yàn)中將所有12批樣品（每批500g）進(jìn)行粉碎處理，并統(tǒng)一過40目篩，備用。實(shí)驗(yàn)用硅膠G薄層板（批號：20121108，青島海洋化工廠），實(shí)驗(yàn)用試劑均為分析純。12批樣品的詳細(xì)信息見下表1。

1.2 儀器 ERMATOKY0416旋轉(zhuǎn)式切片機(jī)（日本）；AK-400A搖擺式粉碎機(jī)（浙江）；Ni-U尼康高級生物顯微鏡及視頻成像裝置（日本）。

2 方法

依據(jù)2010年版《中國藥典》附錄的性狀、顯微、水分、總灰分、浸出物測定法及薄層色譜法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。顯微鑒別實(shí)驗(yàn)取部分藥材莖和葉按石蠟切片法制作切片，取適量藥材粉末按粉末制片法制作粉末片，切片在顯微鏡下觀察并照相。

3 結(jié)果

3.1 性狀鑒別 本品莖呈圓柱形，直徑0.2～0.6cm，長可達(dá)1m；表面灰綠色，具細(xì)縱棱，多分枝，節(jié)明顯，節(jié)上可見不定根，節(jié)間長1～3cm；質(zhì)輕、硬，易折斷，斷面皮部纖維性。葉紙質(zhì)，互生，卵狀橢圓形或披針形，長5～10cm，寬1.5～3cm，先端漸尖，基部無毛；葉柄長l～6cm，具倒卵形的葉狀翅。氣微，味淡。見圖1。

3.2 顯微鑒別

3.2.1 葉橫切面 上表皮細(xì)胞1列，類方形，外被角質(zhì)層；下表皮細(xì)胞明顯比上表皮細(xì)胞小，表皮細(xì)胞內(nèi)易見草酸鈣簇晶，直徑15～30μm。葉肉組織分化明顯，柵欄組織為2～3列類圓形細(xì)胞，通過主脈；海綿組織發(fā)達(dá)，為多層排列疏松的薄壁細(xì)胞。主脈維管束1個，周圍散生數(shù)至10余個小維管束，維管束外韌型，維管束外有明顯木化的厚壁組織包圍。下表皮內(nèi)側(cè)有2～3列厚角組織。葉肉組織細(xì)胞內(nèi)有草酸鈣簇晶和方晶分布，直徑11～36μm。見圖2。

3.2.2 根狀莖橫切面 表皮細(xì)胞一列，排列緊密，外被角質(zhì)層。皮層寬廣，外側(cè)有2～3列類圓形厚壁細(xì)胞，在角隅處更為明顯；皮層內(nèi)散有多數(shù)葉跡維管束，維管束鞘纖維成環(huán)；內(nèi)皮層明顯。中柱鞘纖維3～7列環(huán)狀分布，木化；維管束周木型或有限外韌型，多數(shù)維管束可見一大型導(dǎo)管，維管束和維管束鞘纖維周圍的細(xì)胞中有的含草酸鈣簇晶和方晶，形成晶鞘纖維。見圖3。

3.2.3 粉末 灰綠色。纖維淡黃色，分離或成束，先端鈍尖或平截，直徑16～31μm。葉上表皮細(xì)胞垂周壁較平直，葉下表皮細(xì)胞壁波狀彎曲，氣孔多為環(huán)式氣孔，副位細(xì)胞4個；葉表皮細(xì)胞中有的含草酸鈣簇晶，直徑15～38μm，含晶細(xì)胞周圍可見輻射狀角質(zhì)紋理；草酸鈣方晶多散在或存在于薄壁細(xì)胞中，直徑8～36μm；草酸鈣簇晶少見，直徑13～21μm。導(dǎo)管淡黃色，螺紋或具緣紋孔導(dǎo)管，直徑19～43μm。非腺毛單細(xì)胞，直徑32～56μm，長91～356μm。見圖4。

3.3 薄層色譜鑒別 取本品粉末1g，加甲醇30mL，超聲處理1h，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状?mL使溶解，作為供試品溶液；另取葫蘆鉆對照藥材1g，同法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法（中國藥典2010年版一部附錄Ⅵ B）試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各10～15μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G板上，以石油醚（60～90℃）-乙酸乙酯（8∶1）為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外燈（365 nm）下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。12批樣品按本法檢驗(yàn)，均符合規(guī)定，且薄層色譜分離效果好，斑點(diǎn)圓整清晰，比移值適中，重現(xiàn)性好。見圖5。

耐用性實(shí)驗(yàn)考察：采用點(diǎn)狀點(diǎn)樣①對自制板、預(yù)制板（青島海洋化工廠提供，批號：20121108）的展開效果進(jìn)行考察；②對不同展開溫度：8℃、32℃進(jìn)行考察；③對不同濕度的點(diǎn)樣環(huán)境：50%、90%進(jìn)行考察；結(jié)果均表明本法的耐用性良好。

3.4 檢查 在制定本品檢查指標(biāo)限度時，根據(jù)本品的特點(diǎn)，主要考察每種方法對所測本品的適用性，重點(diǎn)考察了水分、總灰分和浸出物三項(xiàng)指標(biāo)，并根據(jù)多批樣品的實(shí)測數(shù)據(jù)制定限度。

3.4.1 水分 照水分測定法（《中國藥典》2010年版一部附錄Ⅸ H 第一法）測定。共考察測定了12批葫蘆鉆藥材樣品的水分含量。

以上12批葫蘆鉆藥材水分含量試驗(yàn)結(jié)果，最高水分含量為14.66%，最低水分含量為8.88%，因此，將本品水分?jǐn)M定為不超過15.00%。

3.4.2 總灰分 照灰分測定法（《中國藥典》2010年版一部附錄Ⅸ K）測定，共考察測定了12批葫蘆鉆藥材樣品的總灰分含量。測定結(jié)果見表3。

由上表結(jié)果可知，12批樣品的總灰分在15%以下，因此，將本品總灰分?jǐn)M定為不超過15%。

3.4.3 浸出物 迄今，關(guān)于葫蘆鉆化學(xué)成分研究的報道極少，經(jīng)查閱國內(nèi)外文獻(xiàn)[6，8，11]可知，葫蘆鉆含有有機(jī)酸（琥珀酸、香草酸等）、蒽醌、揮發(fā)油，另外可能含有苷類、生物堿、黃酮、香豆素、萜類內(nèi)酯、甾體、三萜類、糖類、氨基酸、蛋白質(zhì)和油脂等類化合物。若用水提取，提取液中的雜質(zhì)較多，而且對極性較小的活性成分溶解性能不佳。而乙醇是最常用的有機(jī)溶劑，具有溶解性能好、穿透力強(qiáng)的特點(diǎn)，大多數(shù)天然活性成分都能在乙醇中溶解。因此，考慮用醇溶性浸出物來考察葫蘆鉆中所含活性成分的多少，而加熱提取一方面有利于化學(xué)成分的溶出，另一方面又節(jié)省了實(shí)驗(yàn)時間，故確定采用熱浸法來進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。曾對比兩種不同濃度的乙醇（50%乙醇、95%乙醇）作為提取溶劑的提取效果，對比實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，50%乙醇的提取效果較95%乙醇的提取效果更優(yōu)（以HLZ-6為供試品，前者浸出物含量為10.4%，后者浸出物含量為5.0%；另一方面，葫蘆鉆以全草入藥，葉在其中占較大部分，用95%乙醇提取時，葉綠素等雜質(zhì)較多），最終確定以50%乙醇為提取溶劑，照醇溶性浸出物測定法項(xiàng)下的熱浸法（附錄XA）測定，本品12批浸出物，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表4。

由上表結(jié)果可知，本品12批樣品的浸出物最高含量為18.8%，最低含量6.3%，均在6.0%以上，因此，制定葫蘆鉆藥材醇溶性浸出物含量時，照醇溶性浸出物測定法（《中國藥典》2010年版一部附錄 X A）項(xiàng)下的熱浸法，本品浸出物含量不得少于6.0%。

4 結(jié)論

研究表明葫蘆鉆在性狀、顯微及薄層色譜方面有明顯的特征，性狀方面如莖具細(xì)縱棱，多分枝，節(jié)明顯，節(jié)上可見不定根；質(zhì)輕、硬，葉紙質(zhì)，互生，葉柄長具倒卵形的葉狀翅。顯微鑒別方面葉橫切面：上表皮細(xì)胞外被角質(zhì)層；表皮細(xì)胞內(nèi)易見草酸鈣簇晶，柵欄組織通過主脈；主脈維管束1個，周圍散生數(shù)至10余個小維管束，維管束外有明顯木化的厚壁組織包圍。葉肉組織細(xì)胞內(nèi)有草酸鈣簇晶和方晶分布，根狀莖橫切面：表皮細(xì)胞外被角質(zhì)層。皮層寬廣，外側(cè)有2～3列厚壁細(xì)胞，在角隅處更為明顯；皮層內(nèi)散有葉跡維管束，維管束鞘纖維成環(huán)；內(nèi)皮層明顯。中柱維管束外韌型，多數(shù)維管束可見一大型導(dǎo)管，維管束和維管束鞘纖維周圍的細(xì)胞中含草酸鈣簇晶和方晶。粉末中葉上表皮細(xì)胞垂周壁較平直，葉下表皮細(xì)胞壁波狀彎曲，氣孔多為環(huán)式，副位細(xì)胞4個；葉表皮細(xì)胞中含草酸鈣簇晶，含晶細(xì)胞周圍可見輻射狀角質(zhì)紋理；草酸鈣方晶多散在或存在于薄壁細(xì)胞中，草酸鈣簇晶少見，非腺毛單細(xì)胞。薄層色譜方面葫蘆鉆供試品色譜與對照藥材色譜在相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。將葫蘆鉆藥材水分?jǐn)M訂為不得過15.00%，總灰分?jǐn)M定為不得過15%，醇溶性（熱浸法）浸出物含量不得少于6.0%。這些結(jié)果可作為制定和完善葫蘆鉆藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的依據(jù)。

參考文獻(xiàn)

[1]覃迅云，羅金裕，高志剛.中國瑤藥學(xué)[M].北京：民族出版社，2002：74-75.

[2]戴斌. 中國現(xiàn)代瑤藥[M]. 南寧：廣西科學(xué)技術(shù)出版社，2009：98-99.

[3]廣西壯族自治區(qū)衛(wèi)生局.廣西本草選編（上冊）[M].南寧：廣西人民出版社，1974：1258-1259.

[4]江蘇新醫(yī)學(xué)院. 中藥大辭典[M].上海：上海人民出版社，1975：605-606.

[5]中國藥科大學(xué).中藥辭海[M].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，1996：1449-1450.

[6]梁啟成.中國壯藥學(xué)[M]. 南寧：廣西民族出版社，2005：307.

[7]曾立等.瑤藥葫蘆鉆化學(xué)成分的初步研究[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2012， 40（3）：287-289.

[8]尹文清，張巖，宋鑫明，等.石柑子總有機(jī)酸的提取工藝與含量測定[J].中藥材，2009，32（1）：124-126.

[9]黃琳蕓.瑤藥葫蘆鉆提取物抗腫瘤作用的實(shí)驗(yàn)研究[J]. 時珍國醫(yī)國藥，2007， l8（7）：1590-1591.

[10]畢曉黎，彭麗詩，許燦新，等.瑤藥石柑子生藥學(xué)研究[J].中國藥業(yè)，2015，24（8）：25-26.

[11]匡可任. 中國植物志（13卷）[M]. 北京：科學(xué)出版社，1979：19.

（收稿日期：2016-11-18 編輯：穆麗華）