G實驗在早期診斷深部真菌感染中的臨床意義

劉媛 （綜述），孫良起 （校審）

（中國人民解放軍第150中心醫(yī)院 檢驗科，河南 洛陽 471000）

G實驗在早期診斷深部真菌感染中的臨床意義

劉媛 （綜述），孫良起 （校審）

（中國人民解放軍第150中心醫(yī)院 檢驗科，河南 洛陽 471000）

血漿1,3－β－D－葡聚糖含量的測定 （G實驗）利用了真菌細胞壁特異性成分1,3－β－D葡聚糖，在早期診斷侵襲性真菌感染方面有較高的特異性和準確性，為臨床提供了較好的臨床依據。本文從G實驗的檢測原理、影響因素、臨床價值、預期發(fā)展等方面對其在早期診斷深部真菌感染中的臨床意義進行綜述，為臨床快速、準確診斷深部真菌感染提供依據。

G實驗；1,3-β-D葡聚糖；深部真菌感染

1 前言

深部真菌感染又稱為侵襲性真菌感染 （invasive fungal infection，IFI），是致病性真菌侵犯皮下組織、黏膜、肌肉、內臟器官等而引起的感染性疾病。近年來，隨著廣譜抗菌藥物的濫用，免疫抑制劑、類固醇激素和抗癌藥物的廣泛應用以及氣管插管、導管介入、器官移植手術的廣泛開展，深部真菌感染的發(fā)病率和致死率逐年增高，成為臨床治療的棘手難題。因此，快速準確地早期診斷深部真菌感染意義重大。本研究證實G實驗在早期診斷IFI中有較好的特異性和敏感性。

2 G實驗與深部真菌感染早期診斷的關系

2.1 G實驗的檢測原理 血漿1,3－β－D－葡聚糖 （BG）是真菌細胞壁含量很高的一種多聚糖成分，約占真菌細胞壁干重的50%以上，只存在于除隱球菌和結合菌 （包括毛霉菌、根霉菌等）以外所有深部真菌內，人類細胞和原核性病毒內不含有，理論上保證了抗原的特異性。BG特異性激活鱟變形細胞裂解物種的G因子，引起細胞裂解凝固，故又稱G實驗。當真菌侵入人體組織和血液造成深部感染后，大量吞噬細胞將其吞噬，持續(xù)釋放BG，造成其在血液及體液中的含量明顯升高，而淺部感染真菌和定植真菌時，BG很少能釋放入血，因此，G實驗可用于鑒別侵襲性真菌感染和定植菌［1－2］。由于真菌侵入呼吸道時，氣道分泌物的包裹作用使BG釋放受阻，而產生假陰性。隱球菌有厚壁薄膜，結合菌細胞壁缺乏BG，很難釋放入血產生假陰性，故G實驗不適用于二者的感染監(jiān)測。

2.2 G實驗檢測的影響因素 G實驗為臨床抗真菌治療提供了幫助，但實驗檢測過程中卻易受到干擾因素影響，大部分會導致其假陽性。造成假陽性的主要原因有：①BG污染：使用非廠家提供的采血管、反應試管、無熱源槍頭、手術中使用的紗布等容易受BG污染。②藥品或治療中的BG污染：血液制品和磺胺類及厄他培南等；蘑菇多糖和黃芪多糖、雙黃連等；近期內注射脂肪乳；高免疫球蛋白血癥；使用纖維素膜人工腎的血液透析患者和腹膜透析；腹破損導致食物中的BG或定植的念珠菌經胃腸道進入血液；菌血癥 （銅綠假單胞菌、鏈球菌）；高溶血、高脂血、高膽紅素血。

2.3 G實驗的實驗閾值和準確性 近年來，很多研究均通過對G實驗診斷深部真菌感染的準確性及最佳實驗閾值進行回顧性分析及Meta分析，研究了實驗閾值的確定與結果準確性之間的相關性［3］。2015年，Hou等［4］對4個數據庫內11項研究結果進行Meta分析，該研究共包含1 068例患者，以上研究中分別選用了Fungitell診斷試劑盒 （陽性閾值 80～120 pg／mL）、Fungitell G實驗試劑盒 （陽性閾值20 pg／mL）、Wako BG檢測試劑盒 （陽性閾值7或11 pg／mL）、GKT－25M Set檢測試劑盒（陽性閾值10 pg／mL）規(guī)定的標準，Meta分析結果顯示無論是IFI患者或者非IFI患者，G實驗的敏感性和特異性都平均高達75%和87%，準確性較高，可作為IFI侵襲性真菌感染的早期篩選指標。然而，Alexander等［5］根據 Funglitell試劑盒標準以60 mg／mL作為實驗閾值，對肺移植患者的血清標本進行G實驗檢測，卻得到了較低的陽性預測值；劉耀婷等［6］的研究卻表明，對肝腎移植等患者的血清標本應用GKT－5M Set真菌檢測試劑盒，以10 pg／mL作為陽性閾值，準確性較高。因此，G實驗作為早期篩查深部真菌感染的指標是否準確以及最佳的實驗閾值尚需要更多的臨床研究提供科學依據。

2.4 G實驗在臨床診斷中的價值 深部真菌感染早期病情隱匿，不宜發(fā)現，造成臨床病死率居高不下。其診斷的金標準是真菌培養(yǎng)陽性，但此方法培養(yǎng)周期長 （約7～14天），陽性率低，即使培養(yǎng)陰性也不能排除真菌感染的可能。目前，檢測真菌的抗原、抗體和代謝產物已逐漸成為臨床診斷深部真菌感染的早期有效手段。與傳統真菌培養(yǎng)比較，BG抗原檢測具有特異性高、靈敏度高、快速、簡便等優(yōu)點，歐洲癌癥治療研究組織真菌病研究組已將G試驗連續(xù)兩次陽性作為侵襲性深部真菌疾病感染的陽性標準［7］。2007年中華醫(yī)學會出版的《肺真菌病學診斷治療專家共識》中將血清BG抗原檢測歸為診斷真菌感染的微生物檢查依據［8］。多項研究已證實IFI發(fā)病率在血液?。?］、器官移植［10］、惡性腫瘤［11］、老年性COPD、ICU病房及獲得性免疫缺陷病 （HIV）患者中較高，且研究［12］表明，IFI確診組及診斷組的BG含量較普通細菌感染組及正常對照組均有明顯增加 （P＜0.05），證實G實驗可作為早期 IFI診斷指標。以上重癥疾病導致的肺部念珠菌和曲霉菌感染較常見，HIV患者感染卡氏肺孢子菌和馬爾尼菲青霉菌的病例也有相同的報道。同時，對并發(fā)深部真菌感染的危重新生兒及早產兒血漿BG進行動態(tài)檢測，表明以125 pg／mL作為陽性閾值得到了特異性和敏感性之和最大［13］， 對提高療效意義重大。

2.5 G實驗的預期發(fā)展 Lahmer等［14］于2016年證實了G實驗、GM實驗和真菌培養(yǎng)聯合診斷可明顯提高臨床深部真菌感染的價值，同樣，Chen等［15］的研究也表明BG抗原檢測可以與其他感染指標，如降鈣素原 （PCT）、內毒素等聯合檢測，使老年COPD患者肺部侵襲性真菌感染的診斷陽性率增加。對于針對性疾病，如血液病可聯合曲霉菌PCR聯合檢測，提高檢出率和準確性［16］。制備真菌BG多克隆抗體及建立ELISA競爭法檢測體系也可提高G實驗結果的準確性和特異性［17］。G實驗未來的發(fā)展方向除了進一步提升檢驗技術，還應與相關檢測手段合理聯合應用，提高檢出率。

3 小結

G試驗早期診斷深部真菌感染的準確性和敏感性較高，對指導臨床合理用藥和經驗用藥意義重大。但G實驗易受干擾因素的影響，而且只能定性判斷，不能確定感染的真菌類型。因此，臨床需要進行綜合分析，合理判斷。

[1] Tran T,Beal SG.Application of the 1,3-β-D-glucan(Fungitell)assay in the diagnosis of invasive fungal infections[J].Arch Pathol Lab Med,2016,140(2):181-185.

[2] Damiani C,Le Gal S,Da Costa C,et al.Combined quantification of pulmonary Pneumocystis jirovecii DNA and serum(1-＞3)-β-D-glucan for differential diagnosis of pneumocystis pneumonia and pneumocystis colonization[J].J Clin Microbiol,2013,51(10):3380-3388.

[3] Mikulska M,Furfaro E,Viscoli C.Non-cultural methods for the diagnosis of invasive fungal disease[J].Expert Rev Anti Infect Ther, 2015,13 (1):103-117.

[4] Hou TY,Wang SH,Liang SX,et al.The screening performance of serum 1,3-β-D-glucan in patients with invasive fungal diseases:a meta-analysis of prospective cohort studies[J].PLoS One,2015,10 (7):e0131602.

[5] Alexander DB,Smith PB,Davis RD,et al.The(1,3)β-D-glucan test as an aid to early diagnosis of invasive fungal infections following lung transplantation[J].J Clin Microbiol,2010,48(11):4083-4088.

[6] 劉耀婷,陳險峰,胡海清,等.血漿 (1,3)-β-D葡聚糖檢測對器官移植患者侵襲性真菌感染診斷價值 [J].中國真菌學雜志,2013,8 (3):151-155.

[7] De Pauw B,Walsh TJ,Donnelly JP,et al.Revised definitions of invasive fungal disease from the European Organization for Research and Treatment of Cancer/Invasive Fungal Infections Cooperative Group and the National Institute of Allergy and Infectious Diseases Mycoses Study Group(EORTC/MSG)Consensus Group[J].Clin Infect Dis, 2008,46(12):1813-1821.

[8] 林桂蘭,馬曉波,房麗麗,等.(1,3)-β-D-葡聚糖連續(xù)監(jiān)測在抗真菌藥物治療中的評價 [J].中華醫(yī)院感染學雜志,2016,26(1): 37-39.

[9] Guitard J,Tabone MD,Senghor Y,et al.Detection of β-D-glucan for the diagnosis of invasive fungal infection in children with hematological malignancy[J].J Infect,2016,73(6):607.

[10]Mutschlechner W,Risslegger B,Willinger B,et al.Bronchoalveolar lavage fluid (1,3)β-D-glucan for the diagnosis of invasive fungal infections in solid organ transplantation:a prospective multicenter study [J].Transplantation,2015,99(9):e140-144.

[11]Hoarau G,Kerdraon O,Lagree M,et al.Detection of(1,3)-β-D-glucans in situ in a Candida albicans brain granuloma[J].J Infect, 2013,67(6):622-624.

[12]Esteves F,Lee CH,de Sousa B,et al.(1-3)-β-D-glucan in association with lactate dehydrogenase as biomarkers of Pneumocystis pneumonia(PcP)in HIV-infected patients[J].Eur J Clin Microbiol Infect Dis,2014,33(7):1173-1180.

[13]Goudjil S,Kongolo G,Dusol L,et al.(1-3)-β-D-glucan levels in candidiasis infections in the critically ill neonate[J].J Matern Fetal Neonatal Med,2013,26(1):44-48.

[14] Lahmer T,Neuenhahn M,Held J,et al.Comparison of 1,3 β-d-glucan with galactomannan in serum and bronchoalveolar fluid for the detection of Aspergillus species in immunosuppressed mechanical ventilated critically ill patients[J].J Crit Care,2016,36:259-264.

[15]Chen J,Wang Y,Shen Z,et al.Early diagnostic value of plasma PCT and BG assay for CRBSI after OLT[J].Transplant Proc,2011,43 (5):1777-1779.

[16]Boch T,Spiess B,Cornely OA,et al.Diagnosis of invasive fungal infections in hematological patients by combined use of galactomannan, 1,3-β-D-glucan,Aspergillus PCR,multifungal DNA-microarray and Aspergillus azole resistance PCRs in blood and bronchoalveolar lavage samples-results of a prospective multicenter study[J].Clin Microbiol Infect,2016,22(10):862-868.

[17]Badiee P,Alborzi A,Karimi M,et al.Diagnostic potential of nested PCR,galactomannan EIA,and β-D-glucan for invasive aspergillosis in pediatric patients[J].J Infect Dev Ctries,2012,6(4):352-357.

（責任編輯：肖婷婷）

Clinical Significance of G-Test in Early Diagnosis of Deep Fungal Infection

LIU Yuan(Review),SUN Liangqi(Revision)
(Clinical Laboratory,150 Central Hospital of PLA,Luoyang 471000,China)

G-test has a higher specificity and accuracy in the early diagnosis of deep fungal infection by using 1,3-β-D-glucan,the specific ingredient of fungal cell wall.This paper reviewed the clinical significance of G test in the early diagnosis of deep fungal infection respectively from its testing principle,influence factors,clinical value and future development,in order to provide basis for rapid and accurate clinical diagnosis of deep fungal infection.

G-test;1,3-β-D-glucan;Deep fungal infection

R519

：B

10.3969/j.issn.1674-4659.2017.09.1331

2016－09－27

2017-02-12

劉媛，女，碩士研究生學歷，臨床檢驗技師，研究方向：微生物感染，E-mail：Liuyuan306@126.com。