液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)在中藥成分研究中的應(yīng)用

馬亞娟，王寶春，殷海霞，朱小芳

（江西中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，江西 南昌 330004）

液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)在中藥成分研究中的應(yīng)用

馬亞娟，王寶春，殷海霞，朱小芳

（江西中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，江西 南昌 330004）

液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)將液相色譜的良好分離性與質(zhì)譜選擇靈敏性好結(jié)合起來(lái)，有分析范圍廣，分離能力強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)。本文重點(diǎn)介紹液質(zhì)聯(lián)用的關(guān)鍵技術(shù)-接口技術(shù)，及該技術(shù)在中藥成分研究中的應(yīng)用。

液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)；接口；中藥成分分離；中藥成分鑒定

1 液質(zhì)聯(lián)用接口技術(shù)概述

液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)（LC－MS）是近年發(fā)展起來(lái)的一門(mén)綜合性分析技術(shù)，它將HPLC的高分離效能與MS的強(qiáng)大結(jié)構(gòu)測(cè)定功能組合起來(lái)，使樣品的分離定性及定量成為連續(xù)的過(guò)程[1]。但是曾經(jīng)LC與MS聯(lián)用被認(rèn)為是“不可能的結(jié)合”，傳統(tǒng)的HPLC系統(tǒng)中遇到的高流速和質(zhì)譜儀要求的真空度難以協(xié)調(diào)。為克服上述困難，必須找到合適的接口才能實(shí)現(xiàn)液質(zhì)聯(lián)用。下面將對(duì)液質(zhì)聯(lián)用發(fā)展過(guò)程中的接口技術(shù)進(jìn)行概述。

有以下五中接口技術(shù)[2-4]。（1）直接液體導(dǎo)入（DLI）接口。在真空泵的承受范圍里，以較小的液流直接導(dǎo)入質(zhì)譜。液相的柱后流出物被分流，通過(guò)負(fù)壓的驅(qū)動(dòng)經(jīng)噴射作用流進(jìn)脫溶劑室形成細(xì)小的液滴，然后經(jīng)加熱脫去溶劑。脫溶劑時(shí)沒(méi)有離子產(chǎn)生，其離子化過(guò)程在離子源內(nèi)，是被分析物分子和溶劑作用的結(jié)果。其碎片是靠電子轟擊源的電子轟擊產(chǎn)生。（2）移動(dòng)帶技術(shù)（MB）。在液相柱后增加了速度可變的流出物的傳送帶，柱后流出物滴落在傳送帶上，大部分溶劑經(jīng)紅外加熱被除掉，后進(jìn)入真空室，傳送帶的改變依照流動(dòng)相的組成進(jìn)行，流量高，含水多時(shí)帶的移動(dòng)速度要比較慢。在真空中既能進(jìn)一步脫去溶劑，又能出現(xiàn)分析物分子的揮發(fā)。離子化是以EI或CI進(jìn)行，有的儀器也曾使用FAB。（3）熱噴霧接口（TS/TSP）。熱噴霧接口設(shè)計(jì)中直接進(jìn)樣桿的位置被噴霧探針取代，流動(dòng)相經(jīng)噴霧探針時(shí)被加熱到低于流動(dòng)相完全蒸發(fā)點(diǎn)5～10℃的溫度，體積膨脹后以超聲速?lài)姵鎏结樞纬伸F狀混合物。熱噴霧接口的主要特點(diǎn)是可以適應(yīng)較大的LC流動(dòng)相流速，較強(qiáng)的加熱蒸發(fā)作用可以適應(yīng)高比例水的流動(dòng)相，這是優(yōu)于其他接口的最大特點(diǎn)。（4）粒子束接口（PB）。能夠獲得像氣相色譜一樣且可用圖庫(kù)檢索的EI譜是PB接口的最有價(jià)值的優(yōu)點(diǎn)。帶PB接口的LC-MS已將GC-MS的應(yīng)用擴(kuò)展到了更多極性和較高分子質(zhì)量的化合物。由于兩種離子化方式中的任何一種均屬軟電離，因此只能導(dǎo)致有限的碎裂。為了從TSP-LC-MS分析中獲得特征的碎片譜，常使用串聯(lián)的四極質(zhì)譜儀。（5）常壓離子化技術(shù)（API）。以大氣壓電離源（簡(jiǎn)稱(chēng)API）為接口，包括電噴霧（ESI）和大氣壓化學(xué)電離技術(shù)（APCI），視樣品不同而選用。主要給出分子量信息，一定條件下可提供有限的結(jié)構(gòu)信息。對(duì)于純度高的樣品可做直接進(jìn)樣。

2 液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)在中藥化學(xué)成分研究中的應(yīng)用

中藥成分繁多，不易分離，特別是含量少、無(wú)紫外吸收的化合物，傳統(tǒng)方法很難對(duì)其做出分析檢測(cè)。然而LC-MS技術(shù)可解決上述問(wèn)題，它的前處理簡(jiǎn)便，同時(shí)得到化合物保留時(shí)間、分子量及特征結(jié)構(gòu)碎片等信息。在對(duì)未知成分的研究中，通過(guò)質(zhì)譜檢測(cè)器給出的大量結(jié)構(gòu)信息，結(jié)合同類(lèi)化合物的裂解規(guī)律，即可對(duì)未知成分進(jìn)行分析。下面將對(duì)液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)在中藥成分研究中的應(yīng)用進(jìn)行綜述。

在中藥化學(xué)成分分離中的應(yīng)用。曾茂貴[5]等通過(guò)高效液相色譜—飛行時(shí)間質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)對(duì)藍(lán)花參中化學(xué)成分進(jìn)行分析鑒定，初步推斷出6個(gè)化學(xué)成分均為首次發(fā)現(xiàn)，分別是紫云英苷，蘆丁，槲皮素－7－O－葡萄糖苷，橙皮苷，槲皮素芹菜苷。王兆基[6]等用LC-MS法測(cè)定烏頭屬藥材及有關(guān)中成藥中烏頭類(lèi)生物堿的含量，結(jié)果表明分析樣品中各烏頭堿濃度在0.5～40 mg/L范圍內(nèi)，色譜峰面積與濃度有良好的線(xiàn)性關(guān)系。

在中藥化學(xué)成分鑒定中的應(yīng)用。劉夢(mèng)嬌[7]等采用超高效液相色譜串聯(lián)四極桿飛行時(shí)間質(zhì)譜定性分析復(fù)方三黃片中化學(xué)成分，快速準(zhǔn)確的鑒定了38個(gè)化合物，包括1個(gè)生物堿類(lèi)成分，1個(gè)二蒽酮類(lèi)化合物，6個(gè)鞣質(zhì)類(lèi)成分，7個(gè)蒽醌苷類(lèi)成分，6個(gè)游離蒽醌類(lèi)成分，17個(gè)黃酮類(lèi)成分。張晨曦[8]等應(yīng)用液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)在正負(fù)離子模式下分析連翹中的主要化學(xué)成分，鑒定24個(gè)化合物，有12個(gè)苯乙醇苷類(lèi)成分、7個(gè)木脂素類(lèi)成分、5個(gè)黃酮類(lèi)化合物，其中有5個(gè)化合物：3，4-二羥基苯乙醇苷、2-甲氧基-3，4，5-三羥基苯乙醇苷、β-羥基化連翹酯苷H、6-羥基二氫黃酮、二氫楊梅素為首次從連翹中得到鑒定。

3 展 望

中藥是我國(guó)中醫(yī)藥寶庫(kù)中一朵奇葩，其發(fā)展前景十分廣闊。但是中藥成分復(fù)雜，作用廣泛，這對(duì)其深入研究造成了巨大的困難。液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)將色譜的高分離性能和質(zhì)譜的高鑒別特點(diǎn)能力相結(jié)合，可以實(shí)現(xiàn)對(duì)中藥的物質(zhì)基礎(chǔ)、質(zhì)量控制、藥代動(dòng)力學(xué)等多方面進(jìn)行研究。隨著現(xiàn)代化進(jìn)程的持續(xù)推進(jìn)，液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)將不斷完善，必將在中藥研究領(lǐng)域中發(fā)揮越來(lái)越重要的作用。

[1] 吳定慧,陳關(guān)鍵.液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)在中藥研究中的應(yīng)用概述[J].實(shí)用中醫(yī)藥雜志,2012,28(1):65-66.

[2] Bi H.Hoffman KL.Pace G.et al.Mixed-mechanismionization to enhance sensitivity in atomospheric pressureionization LC/MS[J].J Pharein Biomed Anal,2000,22(5):861.

[3] Niessen WMA.Advances in instrumentation in liquid chromatography mass spectrometry and related liquid-introduction techniques[J].J Chromatogr A,1998,794(122):407.

[4] Yang M,Sun J,Lu Z,et al.Phytochemical analysis of traditional Chinese medicine using liquid chromatography coupled with mass spectrometry[J].J Chromatogr A,2009,1216(11):2045-2062.

[5] 曾茂貴,張 寬,羅 蘭.基于HPLC-DAD-Q-TOF-MS的藍(lán)花參化學(xué)成分定性研究[J].中國(guó)醫(yī)院藥學(xué)雜志,2017,37(11):1023-1027.

[6] 王兆基,何紹基,徐樹(shù)棋.液相色譜/質(zhì)譜/質(zhì)譜聯(lián)用法測(cè)定烏頭屬藥材及中成藥中烏頭類(lèi)生物鹼含量[J].分析化學(xué),2001,(第4期):391-395.

[7] 劉夢(mèng)嬌,王 云,李 玲,等.云三黃片化學(xué)成分的UPLC-Q-TOFMS/MS快速鑒定分析[J].中國(guó)中藥雜志,2017,42(9):1685-1692.

[8] 張晨曦,劉素香,趙艷敏,等.基于液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)的連翹化學(xué)成分分析[J].中草藥,2016,(12):2053-2060.

R927.1

A

ISSN.2095-8242.2017.056.11076.02

本文編輯：吳 衛(wèi)