暖宮七味丸對實(shí)驗(yàn)性肝郁證大鼠的影響

馮馳今，任常勝，韓雪梅，麻春杰，錢占紅*

（內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010110）

暖宮七味丸對實(shí)驗(yàn)性肝郁證大鼠的影響

馮馳今，任常勝，韓雪梅，麻春杰，錢占紅*

（內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010110）

暖宮七味丸是我國傳統(tǒng)蒙藥，蒙藥名：蘇格木勒-7，其主要成分為白豆蔻、天冬、手掌參、沉香、肉豆蔻、黃精、丁香，是治療心赫依病和腎赫依病常用良方。本文所述為暖宮七味丸對肝郁性大鼠模型進(jìn)行蒙藥肝郁，通過既定方案在實(shí)驗(yàn)過程中收集整理數(shù)據(jù)，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)方法，探討和分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果，從實(shí)驗(yàn)的角度驗(yàn)證暖宮七味丸對實(shí)驗(yàn)性肝郁證大鼠的治療作用。

暖宮七味丸；肝郁證；血液流變學(xué)

1 實(shí)驗(yàn)材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

健康雄性SD大鼠60只，體重（240±30）g，實(shí)驗(yàn)開始前，將大鼠放置動物飼養(yǎng)室適應(yīng)性喂養(yǎng)10d，以不含卵清蛋白的飼料喂養(yǎng)，大鼠自由進(jìn)食飲水。暖宮七味丸：烏蘭浩特中蒙制藥有限公司生產(chǎn)，批號：國藥準(zhǔn)字Z15021785。柴胡舒肝丸：沈陽紅藥制藥有限公司，批號：國藥準(zhǔn)字Z21020535。地西泮注射液：天津金耀藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，批號：國藥準(zhǔn)字H120209570.9%生理鹽注射液：山東科倫藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，批號D140615051。血漿白介素Ⅱ（IL-2）試劑盒，購于呼和浩特市雙志商貿(mào)有限公司肝素鈉注射液：上海第一生化藥業(yè)有限公司，批號：國藥準(zhǔn)字號H31022051，水合氯醛，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司（批號：20150203）

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 實(shí)驗(yàn)動物分組及給藥方法

采用隨機(jī)分組的原則[1]，按體重隨機(jī)分為6組，每組10只。分為A正常組、B模型組、C地西泮組、D柴胡舒肝丸組、E暖宮七味丸高劑量組、F暖宮七味丸低劑量組共6組。A組給予生理鹽水10 ml/kg；

B組給予生理鹽水10 ml/kg；C組地西泮注射液1 mg/kg；D柴胡疏肝丸組，每丸重9 g，每次1 g溶于3 ml蒸餾水中；E高劑量組30 g/kg，用3 ml蒸餾水配制成沖劑，相當(dāng)于1 g生藥；F低劑量組15 g/kg，用3 ml蒸餾水配制成沖劑，相當(dāng)于0.5 g生藥。C組為腹腔注射，每日一次。A、B、D、E、F組均灌胃給藥，每日二次。

1.2.2 肝郁證模型的建立

采用“套枷鎖法”，制成類似枷鎖形的模具，套在大鼠頸部。模具影響大鼠日常理毛撓癢等動作，使其“郁怒而不得發(fā)”。在不影響其正常飲食、飲水的情況下，引起大鼠情志的改變，制造出肝郁證模型。造模大鼠戴模具21天。

1.2.3 動物模型成功確認(rèn)

造模大鼠戴模具21天后，發(fā)現(xiàn)大鼠皮毛枯黃，眼睛瞇小，有眼眵，甚至目赤，糞便干少，食欲不振，消瘦，爪甲青紫，尾部有鱗片出現(xiàn)。而未經(jīng)造模的正常組大鼠毛發(fā)光澤，飲食量多，體重增加，目光有神，無眼眵，爪甲紅潤。

1.2.4 實(shí)驗(yàn)指標(biāo)的測定

1.2.4.1 一般觀察及體重變化

實(shí)驗(yàn)期間，觀察大鼠的行為、情緒、日常狀態(tài)。21天給藥結(jié)束后，用鼠稱稱量各組大鼠體重。

1.2.4.2 糖水消耗實(shí)驗(yàn)

分別于實(shí)驗(yàn)前1天，實(shí)驗(yàn)第7、14、21天，每次實(shí)驗(yàn)的前一天各組大鼠開始禁水，禁水24 h后，給予1%的蔗糖水溶液，測定大鼠在1 h內(nèi)的飲水量（每只大鼠單籠飼養(yǎng)）[2]。蔗糖水消耗實(shí)驗(yàn)可反映大鼠的反應(yīng)性。

1.2.4.3 免疫器官稱重

每只大鼠在處死之前用鼠稱稱其體重，處死大鼠后，立即剝離脾臟、胸腺，用濾紙吸去附帶的血液，稱重并記錄，計(jì)算脾臟、胸腺指數(shù)。脾臟、胸腺指數(shù)的計(jì)算：脾臟指數(shù)=脾臟重量（mg）/大鼠體重（g），胸腺指數(shù)=胸腺重量（mg）/大鼠體重（g）。

1.2.4.4 血漿白細(xì)胞介素2（IL-2）的檢測

以10%水合氯醛（0.3ml/100g）腹腔注射麻醉大鼠后，采用心臟取血法，取血4～5 ml，用離心機(jī)3000 rpm離心，分離血漿，用ELISA檢測試劑盒測定血漿IL-2，具體步驟按試劑盒使用說明書操作。

1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

所有數(shù)據(jù)使用軟件SPSS 13.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料統(tǒng)計(jì)以±s表示，方差分析進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理，設(shè)定P＜0.05為差異有顯著性意義，P＜0.01為差異有非常顯著性意義。

2 結(jié) 果

2.1 一般觀察及體重變化

模型組大鼠造模21天后，與正常組組大鼠相比，模型組大鼠毛發(fā)枯黃，眼睛瞇小，目赤，倦怠食少，體重明顯減輕（P＜0.05）。與模型組相比較，柴胡舒肝丸組可明顯緩解大鼠上述癥狀，體重增加，具有非常明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.01）。地西泮組、暖宮七味丸高、低劑量組同樣可以增加大鼠體重，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05），但暖宮七味丸高劑量組效果優(yōu)于低劑量組、地西泮組，與柴胡舒肝丸組療效相當(dāng)。

2.2 對糖水消耗的影響

第1天模型組與正常組相比較，模型組大鼠糖水消耗量明顯降低，有非常明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.01），其他給藥組與模型組比較，不具有統(tǒng)計(jì)差異（P＞0.05），說明第1天各給藥組大鼠糖水消耗量無明顯改變。第7天、14天、21天模型組與正常組相比，糖水消耗量明顯降低，模型組大鼠對獎賞的反應(yīng)性降低（P＜0.01）。地西泮組、柴胡舒肝丸組、暖宮七味丸高、低劑量組與模型組相比較，均具有非常顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.01），且隨著7天、14天、21天的時(shí)間推移，各組大鼠糖水消耗量明顯升高。

2.3 對免疫指標(biāo)的影響

與正常組相比較，模型組大鼠胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)、以及IL-2均有不同程度降低。與模型組相比，地西泮組胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)均無明顯改善，不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05），對IL-2指標(biāo)具有更明顯改善作用（P＜0.01）。柴胡疏肝丸組與模型組比較，胸腺指數(shù)、IL-2指標(biāo)有明顯改善（P＜0.01），但對脾臟指數(shù)無明顯改善，不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。暖宮七味丸高、低劑量組均可明顯改善大鼠的胸腺、脾臟指數(shù)、以及IL-2指標(biāo)（P＜0.01），且高劑量組效果優(yōu)于低劑量組。

2.4 對血液流變學(xué)的影響

與正常組相比，模型組大鼠血漿粘度、紅細(xì)胞壓積、紅細(xì)胞聚集指數(shù)明顯增高，表明模型組大鼠血液流變學(xué)已經(jīng)產(chǎn)生血瘀證改變。與模型組相比，地西泮組、柴胡疏肝丸組、暖宮七味丸高、低劑量組均可不同程度改善血液流變學(xué)各項(xiàng)指標(biāo)，其中以柴胡疏肝丸組效果最為明顯，血漿粘度、紅細(xì)胞壓積、紅細(xì)胞聚集指數(shù)均有降低（P＜0.01），具有非常明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。此外，暖宮七味丸高劑量組同樣可明顯改善大鼠的血漿粘度、紅細(xì)胞壓積（P＜0.01），對紅細(xì)胞聚集指數(shù)也有明顯改善（P＜0.05），效果與柴胡疏肝丸組最為相近。（見表1）

表1 肝郁證大鼠模型血液流變學(xué)（ ±s,n=10）

表1 肝郁證大鼠模型血液流變學(xué)（ ±s,n=10）

注：各組與模型組比較“*”代表P＜0.05；“**”代表P＜0.01

組別血漿粘度紅細(xì)胞壓積（L/L）紅細(xì)胞聚集指數(shù)正常組1.50±0.139**47.56±4.22**7.40±0.43*模型組1.75±0.17755.42±3.688.31±0.72地西泮組1.53±0.133**49.59±3.53*7.45±0.83*柴胡疏肝丸1.48±0.132**45.64±3.00**7.33±0.38**暖宮七味丸高1.52±0.144**47.92±3.69**7.45±0.72*暖宮七味丸低1.58±0.107*49.82±4.08*7.54±0.57*

3 作用機(jī)制探討

在本實(shí)驗(yàn)中，模型組大鼠由于受到模具的限制，身體不能正?；顒?，產(chǎn)生肝郁證狀態(tài)，故IL-2指標(biāo)明顯下降，反應(yīng)大鼠免疫機(jī)能的降低。而暖宮七味丸可顯著改善IL-2的指標(biāo)，與正常組大鼠指標(biāo)相近，維持IL-2的正常水平，表明暖宮七味丸可提高機(jī)體的免疫能力，從而達(dá)到抗抑郁的目的[3]。胸腺與脾臟是機(jī)體內(nèi)重要的兩個免疫器官， 其功能與免疫密切相關(guān)， 胸腺指數(shù)與脾臟指數(shù)是反映機(jī)體免疫功能的重要指標(biāo)，其指數(shù)的變化可以反映機(jī)體免疫功能的正常與否。在本實(shí)驗(yàn)結(jié)果中可以看出，模型組大鼠脾臟和胸腺的重量明顯減輕，揭示了肝郁證大鼠免疫功能的下降。而暖宮七味丸可明顯對抗上述改變，暖宮七味丸高、低劑量組均可增加肝郁證大鼠的脾臟和胸腺指數(shù)，從而說明暖宮七味丸可拮抗免疫器官重量的減輕，維持免疫機(jī)能的穩(wěn)定。

[1] 蘇秀蘭.醫(yī)學(xué)科研方法[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2013,73.

[2] 嚴(yán)亨秀,任 昉,顧 健.柴胡疏肝散對實(shí)驗(yàn)性肝郁證大鼠的影響[J].中藥藥理與臨床,2006,22(6):5-6.

[3] 李 聰,謝 鳴,趙榮華,等.肝郁-脾虛-肝郁脾虛不同證候模型大鼠血液流變學(xué)變及疏肝健脾方的作用[J].廣州中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),2014,31(2):234-238.

R749.4

A

ISSN.2095-8242.2017.056.11080.02

內(nèi)蒙古科技廳應(yīng)用計(jì)劃項(xiàng)目（編號：kjt2sf15）；內(nèi)蒙古自然科學(xué)基金（編號：2016MS0818）

錢占紅（1969-），女，山東省冠縣人，碩士研究生，教授，研究方向：中蒙醫(yī)經(jīng)方理論、臨床及實(shí)驗(yàn)研究

本文編輯：吳 衛(wèi)