• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    甘草炮制雷公藤降低其肝毒性作用的初步研究

    2017-03-06 21:31:15趙小梅宮嫚董捷鳴王伽伯肖小河
    中國中藥雜志 2017年1期
    關(guān)鍵詞:炎癥因子雷公藤甘草

    趙小梅+宮嫚+董捷鳴+王伽伯+肖小河+趙奎君+馬致潔

    [摘要]為探討甘草炮制雷公藤降低其肝毒性的作用,動(dòng)物實(shí)驗(yàn)評價(jià)炮制前后雷公藤對肝臟的毒性,觀察空白組、雷公藤組、甘草炮制雷公藤組肝組織病理切片、血清生化指標(biāo)及細(xì)胞炎癥因子的差異。大鼠肝組織病理切片顯示雷公藤組肝組織損傷明顯,炮制后肝組織未見明顯損傷;雷公藤組與空白組比較AST,ALT,CRE升高(P<001),UREA升高(P<005),ALB降低(P<001);甘草炮制雷公藤組與雷公藤組比較AST,ALT,CRE,UREA降低(P<001),ALB升高(P<001)。炎癥因子檢測結(jié)果顯示雷公藤組與空白組比較IL1β, IL6,TNFα顯著升高(P<001);甘草炮制雷公藤組與雷公藤組比較IL1β, IL6,TNFα顯著降低(P<001)。甘草炮制雷公藤可有效降低雷公藤肝毒性,減輕雷公藤導(dǎo)致的肝損傷。該實(shí)驗(yàn)可為雷公藤合理制用提供參考,同時(shí)為甘草炮制雷公藤降低其肝毒性研究提供數(shù)據(jù)支持。

    [關(guān)鍵詞]雷公藤; 甘草; 炮制減毒; 肝毒性; 炎癥因子

    雷公藤Tripterygium wilfordii Hook F為衛(wèi)矛科雷公藤屬一年生藤本植物,最早記載于《神農(nóng)本草經(jīng)》,味苦、辛,性寒,有大毒,歸肝、腎經(jīng)。具有祛風(fēng)除濕、舒筋活絡(luò)、消腫止痛、殺蟲解毒等功效。在臨床上治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、強(qiáng)直性脊柱炎、紅斑狼瘡、腎病綜合征等自身免疫系統(tǒng)疑難病癥有良好的效果,療效獨(dú)特[12],但由于雷公藤毒性較大,臨床應(yīng)用時(shí)不良反應(yīng)時(shí)有發(fā)生,包括腎臟、生殖系統(tǒng)、肝臟、胃腸道、免疫系統(tǒng)及皮膚黏膜等,其中肝臟為其最常見的受累器官之一[34],已嚴(yán)重制約其臨床應(yīng)用。

    歷代文獻(xiàn)對雷公藤炮制減毒方法的記載甚少,現(xiàn)代對其炮制的研究方法有凈制、蒸制、加輔料(羊血)、靈芝雙向發(fā)酵解毒等[57],目前臨床應(yīng)用時(shí),主要是對雷公藤進(jìn)行凈制,取毒性較小的木質(zhì)部作為藥用,但中毒及不良反應(yīng)現(xiàn)象仍很突出。雷公藤加熱炮制和輔料炮制減毒的現(xiàn)代研究也較少,且減毒效果不明顯?,F(xiàn)代研究表明,甘草具有保肝作用,甘草酸是其主要作用成分[8]。文獻(xiàn)記載甘草常用于有毒中藥的配伍及炮制[8],甘草汁炮制是傳統(tǒng)減消中藥毒性的手段,有文獻(xiàn)報(bào)道甘草配伍雷公藤能顯著降低肝毒性,且已優(yōu)化了最佳配伍比例,從化學(xué)角度證實(shí)了雷公藤配伍甘草對毒性成分含量和比例的影響[911]。為此,本研究以肝毒性中藥雷公藤為研究對象,在甘草配伍雷公藤減毒的實(shí)驗(yàn)研究和臨床應(yīng)用基礎(chǔ)上,擬結(jié)合現(xiàn)代研究成果,研究甘草炮制雷公藤減毒的作用及效果,以期為臨床提供安全、有效、便于使用的雷公藤炮制品,同時(shí)為其他肝毒性中藥研究提供參考和數(shù)據(jù)支持。

    1材料

    旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(RE52AA);水循環(huán)真空泵(上海知信實(shí)驗(yàn)儀器技術(shù)有限公司);AL204電子天平(METTLER TOLEDO);Gradient A10 MillQ超純水器(美國Millipore 公司);超聲提取清洗器(KQ5200E);真空冷凍干燥箱;OLYMPUS光學(xué)顯微鏡;冷凍離心機(jī)(Sigma,德國);低速離心機(jī)(SE3614);自動(dòng)生化儀(mindray BS300);酶標(biāo)儀;水浴鍋(AISITE);電磁爐。

    雷公藤T wilfordii生藥材購自福建三明,經(jīng)首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京友誼醫(yī)院趙奎君教授鑒定,為衛(wèi)矛科雷公藤的干燥根;生甘草飲片購自于北京友誼醫(yī)院中藥房,經(jīng)趙奎君教授鑒定為豆科植物脹果甘草的干燥根。

    無水乙醇,純凈水;天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)氨酶檢測試劑盒;丙氨酸氨基轉(zhuǎn)氨酶檢測試劑盒;血清白蛋白檢測試劑盒(南京建成生物工程研究所)。

    大鼠白介素1β酶聯(lián)免疫試劑盒 (rat interleukin 1β ELISA Kit),批號(W07036997);大鼠白介素6酶聯(lián)免疫試劑盒 (rat interleukin 6 ELISA Kit),批號(W09036996);大鼠腫瘤壞死因子α酶聯(lián)免疫試劑盒(TNFα ELISA kit ),批號(U27036998)(Cusabio)。

    2方法

    21樣品制備

    211雷公藤提取物稱取適量雷公藤生藥材,打粉機(jī)打碎成粗顆粒狀,8倍體積60%乙醇超聲提取3次,合并濾液,減壓濃縮回收乙醇,真空干燥得粗提物,雷公藤提取率為762%, 臨用前用去離子水配制成相應(yīng)濃度 (按雷公藤生藥量配制)。

    212甘草汁炮制雷公藤樣品制備稱取適量雷公藤生藥材(打粉機(jī)打碎成粗顆粒狀)及生甘草飲片,雷公藤甘草3∶1。

    8倍體積的純凈水浸泡甘草飲片30 min,煎煮20 min,煎煮液濾出,相同步驟重復(fù)煎煮2次后合并濾液,濃縮至合適體積,甘草汁的量需能完全浸泡雷公藤,備用。

    取制備好的甘草汁浸泡雷公藤生藥材至甘草汁被完全吸收,置鼓風(fēng)干燥箱干燥,取出后按211項(xiàng)提取,減壓濃縮回收乙醇,真空干燥得粗提物,臨用前用去離子水配制成相應(yīng)濃度 (按雷公藤生藥量配制)。

    22動(dòng)物分組

    以下實(shí)驗(yàn)動(dòng)物均由中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供,實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分籠飼養(yǎng)于解放軍第三○二醫(yī)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。每天上午 9∶00—10∶00 灌胃,正常組每天灌以等量生理鹽水。

    221小鼠預(yù)試驗(yàn)(給藥劑量的確定) SPF級雄性小鼠50只,體重(20±2)g,正常飼養(yǎng)5 d,隨機(jī)分成5組(n=10),空白組、低劑量組(3 g·kg-1)、中劑量組(6 g·kg-1)、高劑量組(12 g·kg-1)和超高劑量(24 g·kg-1)(以雷公藤生藥材計(jì)),連續(xù)給藥14 d。

    222甘草汁炮制雷公藤減毒小鼠試驗(yàn)SPF級雄性小鼠30只,體重(20±2) g,正常飼養(yǎng)5 d,隨機(jī)分成3組 (n=10),空白組、雷公藤組(15 g·kg-1)、甘草炮制雷公藤組(15 g·kg-1)(以雷公藤生藥材計(jì)),連續(xù)給藥14 d。

    223甘草汁炮制雷公藤減毒大鼠試驗(yàn)SD大鼠,SPF 級,(180±20)g,30只,正常飼養(yǎng)5 d,隨機(jī)分成3組(n=10),空白組、雷公藤組(15 g·kg-1)、甘草炮制雷公藤組(15 g·kg-1)(以雷公藤生藥材計(jì)),連續(xù)給藥14 d。

    23肝組織病理形態(tài)學(xué)檢查

    取實(shí)驗(yàn)動(dòng)物肝組織 05 cm×1 cm×15 cm,10%甲醛固定,常規(guī)病理切片,HE染色,光鏡下觀察,拍照。

    24動(dòng)物取血及血清處理

    實(shí)驗(yàn)組小鼠及大鼠給藥2周后在灌胃后1 d眼眶取血,冷凍離心(4 ℃,3 500 r·min-1,10 min),取上清,全自動(dòng)生化及酶標(biāo)儀檢測AST,ALT,ALB,Cre,BUN,UREA。炎癥因子IL1β,IL6,TNFα檢測按照試劑盒說明進(jìn)行。

    25數(shù)據(jù)處理

    采用 SPSS 180 軟件統(tǒng)計(jì),各項(xiàng)指標(biāo)結(jié)果以±s描述,進(jìn)行組間數(shù)據(jù)比較,若符合正態(tài)分布用完全隨機(jī)設(shè)計(jì)資料單因素方差分析。兩樣本比較,其中方差齊性者采用LSD法檢驗(yàn),方差不齊者采用 Dulmets 法檢驗(yàn)。

    3結(jié)果

    31不同給藥劑量小鼠存活率

    超高劑量組在第8 天所有實(shí)驗(yàn)小鼠已全部死亡,存活率為0%;高劑量組實(shí)驗(yàn)小鼠2周存活率為90%,中劑量組實(shí)驗(yàn)小鼠2周存活率為90%;低劑量組實(shí)驗(yàn)小鼠2周存活率為90%;空白組實(shí)驗(yàn)小鼠2周存活率為100%;因此實(shí)驗(yàn)組(小鼠實(shí)驗(yàn)及大鼠實(shí)驗(yàn))給藥劑量在高劑量組12 g·kg-1(以雷公藤生藥材計(jì))基礎(chǔ)上提高為15 g·kg-1(以雷公藤生藥材計(jì))給藥,結(jié)果見圖1。

    321小鼠肝組織病理切片(HE染色)空白對照組小鼠肝組織著色均勻、肝小葉結(jié)構(gòu)清晰、肝索排列整齊、肝細(xì)胞形態(tài)完好。雷公藤組肝索排列明顯紊亂,炎細(xì)胞浸潤、結(jié)構(gòu)破壞、 肝細(xì)胞渾濁、伴有大量水腫和脂肪變性,大量片狀萎縮壞死、胞漿內(nèi)有明顯的大小不等的空泡以及數(shù)量不一的肝細(xì)胞凋亡現(xiàn)象;肝組織呈輕微嗜堿性。甘草炮制雷公藤組肝索排列輕度紊亂,肝細(xì)胞伴有少量水腫,肝細(xì)胞輕度退變,肝細(xì)胞形態(tài)完好。提示甘草炮制雷公藤可減輕其肝損傷程度,結(jié)果見圖2。

    322小鼠血清生化指標(biāo)檢測雷公藤組與空白組比較AST,ALT升高(P<005),CRE升高(P<001);ALB降低(P<001),BUN沒有明顯差異;甘草炮制雷公藤組與雷公藤組比較AST,ALT,BUN沒有明顯差異,CRE降低(P<001);ALB升高(P<005);每組實(shí)際檢測的動(dòng)物數(shù)(n=8),結(jié)果見圖3。

    33甘草汁炮制雷公藤減毒大鼠實(shí)驗(yàn)結(jié)果

    331肝組織病理組織形態(tài)學(xué)檢查(HE染色)空白對照組大鼠肝組織著色均勻、肝小葉結(jié)構(gòu)清晰、肝索排列整齊、肝細(xì)胞形態(tài)完好。雷公藤組肝索排列紊亂,肝細(xì)胞腫脹、渾濁、伴有少量水腫和脂肪變性少量壞死,結(jié)構(gòu)破壞、局部區(qū)域出現(xiàn)炎性細(xì)胞浸潤,肝細(xì)胞出現(xiàn)空泡和局灶性炎性。甘草炮制雷公藤組肝組織著色均勻、肝小葉結(jié)構(gòu)清晰、肝索排列整齊、肝細(xì)胞形態(tài)完好,無明顯肝損傷表現(xiàn),結(jié)果見圖4。

    332大鼠生化指標(biāo)檢測雷公藤組與空白組比較AST,ALT,CRE升高(P<001),UREA升高(P<005),ALB降低(P<001); 甘草炮制雷公藤組與雷公藤組比較AST,ALT,CRE,UREA降低(P<001),ALB升高(P<001)。提示甘草炮制雷公藤可顯著降低其肝毒性;每組實(shí)際檢測的動(dòng)物數(shù)(n=8),結(jié)果見圖5。

    333大鼠血清細(xì)胞因子IL1β,IL6,TNFα檢測雷公藤組與空白組比較IL1β,IL6,TNFα顯著升高(P<001);甘草炮制雷公藤組與雷公藤組比較IL1β,IL6,TNFα顯著降低(P<001);每組實(shí)際檢測的動(dòng)物數(shù)(n=8),結(jié)果見圖6。

    4結(jié)論

    本研究首次實(shí)驗(yàn)證實(shí)甘草炮制雷公藤可減輕其導(dǎo)致的肝臟生化指標(biāo)及細(xì)胞因子IL1β,IL6,TNFα升高的癥狀,減輕其肝損傷,為臨床安全、有效、便于使用的雷公藤炮制品的使用提供參考和數(shù)據(jù)支持。雷公藤治療自身免疫性疾病效果顯著,雷公藤在治療自身免疫等難治性疾病(如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、慢性腎炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡等)具有很好的療效[12],但同時(shí)表現(xiàn)出明顯的肝毒性作用,而相應(yīng)的合理用藥措施沒有得到充分重視和研究,嚴(yán)重制約了雷公藤臨床療效的發(fā)揮。甘草是常用解毒中藥,甘草酸具保肝作用,甘草炮制是傳統(tǒng)減消中藥毒性的手段

    并取得了很好的效果;另一方面,研究顯示雷公藤配伍甘草能顯著降低肝毒性,已優(yōu)化了最佳配伍比例[911]。

    基于以上研究本實(shí)驗(yàn)采用甘草炮制雷公藤,觀察炮制前后其肝損傷差異,結(jié)果顯示肝組織病理切片中雷公藤組產(chǎn)生明顯的肝損傷,與空白組比較生化指標(biāo)ALT,AST,ALB,Cre,UREA,細(xì)胞因子IL1β,IL6,TNFα,有顯著性差異,提示雷公藤組產(chǎn)生肝損傷。甘草汁炮制雷公藤組肝組織病理切片沒有產(chǎn)生明顯的肝損傷;且較之雷公藤組生化指標(biāo)ALT,AST,ALB,Cre,UREA,細(xì)胞因子IL1β,IL6,TNFα,有顯著性差異,提示雷公藤炮制后可減輕其肝損傷并減少肝損傷導(dǎo)致的炎癥因子的釋放。實(shí)驗(yàn)中雷公藤組肝損傷表現(xiàn)明顯,血清中細(xì)胞炎癥因子釋放高于其他2組,其可能與HMGB1 遷移有關(guān)[1315]。HMGB1的來源有2種,一是由當(dāng)細(xì)胞的完整性被破環(huán),HMGB1瞬時(shí)被動(dòng)釋放,二是在內(nèi)毒素、IL1和TNF等的刺激下,由巨噬細(xì)胞、單核細(xì)胞活化后主動(dòng)釋放[16]。HMGB1可通過活化細(xì)胞的主動(dòng)分泌和壞死損傷細(xì)胞的被動(dòng)釋放而進(jìn)入細(xì)胞外,其誘導(dǎo)機(jī)體固有免疫啟動(dòng)炎癥反應(yīng),表現(xiàn)出炎癥因子的作用[1721],發(fā)表在Hepatology的研究結(jié)果證明HMGB1是對乙酰氨基酚急性肝損害的關(guān)鍵因子之一[15],雷公藤致肝損傷機(jī)制有待于實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步探討研究及驗(yàn)證。甘草炮制雷公藤組沒有明顯的肝損傷表現(xiàn)其可能的原因是甘草酸對HMGB1的阻斷作用。有文獻(xiàn)報(bào)道甘草中的重要成分之一甘草酸可直接結(jié)合HMGB1,可作為HMGB1的拮抗劑[1315];甘草具有保肝作用,抗炎作用,其主要成分甘草酸對肝臟具有保護(hù)作用[8]。甘草同時(shí)具有保肝和拮抗HMGB1的雙重作用,其是否是降低雷公藤肝毒性的主要機(jī)制有待進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。甘草對HMGB1免疫通路的調(diào)控為炮制雷公藤減毒提供了重要支持,課題組將在后期對其進(jìn)行進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)探討,以期初步探討其可能的減毒機(jī)制。雷公藤主要成分雷公藤紅素和雷公藤甲素既是其有效成分,又是其主要的毒性成分,與肝損傷有一定的相關(guān)性[12,19],有實(shí)驗(yàn)報(bào)道從化學(xué)角度探索甘草配伍雷公藤對其毒性成分含量和比例的影響[9],課題組在后期炮制減毒機(jī)制探討實(shí)驗(yàn)中也將對其進(jìn)行比較,以期為雷公藤臨床合理及甘草炮制雷公藤降低其肝毒性研究提供制用參考和數(shù)據(jù)支持。

    [參考文獻(xiàn)]

    [1]謝艷,郭云鵬 雷公藤治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的作用機(jī)制研究進(jìn)展[J] 風(fēng)濕病與關(guān)節(jié)炎,2013(4):72

    [2]柳士忠復(fù)方甘草酸單銨聯(lián)合雷公藤多苷片治療尋常型銀屑病的臨床觀察[J] 中國現(xiàn)代藥物應(yīng)用,2014,8(1):138

    [3]國家食品藥品監(jiān)督管理局藥品評價(jià)中心 關(guān)注雷公藤制劑的用藥安全[J] 藥品不良反應(yīng)信息通報(bào),2012,46(4):1

    [4]滕光菊,梁慶升,孫穎,等 165例中草藥導(dǎo)致藥物性肝損害臨床特征及病理分析[J] 中華中醫(yī)藥學(xué)刊,2014(4):913

    [5]劉建群,高俊博,舒積成,等微波炮制對雷公藤毒性及其化學(xué)成分的影響研究[J]時(shí)珍國醫(yī)國藥,2014(2):344

    [6]解素花,張廣平,孫桂波,等 附子與甘草不同配伍比例配伍減毒的實(shí)驗(yàn)研究[J] 中國中藥雜志,2012,37(15):2210

    [7]李志華,顏苗,張畢奎,等 基于藥動(dòng)學(xué)的甘草配伍減毒機(jī)制研究進(jìn)展[J] 中草藥,2015(23):3611

    [8]陳云華,萬新,孫建寧,等 甘草酸、甘草苷、異甘草素對醋氨酚人肝細(xì)胞損傷模型的保護(hù)作用比較[J] 中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志,2012(4):245

    [9]馬哲 雷公藤配伍甘草減毒增效研究[D]沈陽:遼寧中醫(yī)藥大學(xué),2011

    [10]周聰,周玲玲,周學(xué)平 中藥配伍雷公藤減肝毒性機(jī)制研究[J] 中華中醫(yī)藥雜志,2014(4):1167

    [11]曹玲娟,顏苗,李煥德,等 雷公藤致肝損傷及與甘草配伍減毒機(jī)制的研究進(jìn)展[J] 中國中藥雜志,2015,40(13):2537

    [12]謝彤,周學(xué)平,林麗麗,等 基于“異類相制”的雷公藤復(fù)方配伍減毒代謝組學(xué)研究[J] 中國中藥雜志,2016,41(6):1124

    [13]柴智,樊慧杰,周文靜,等 逍遙散對雷公藤致急性肝損傷大鼠CD68、腫瘤壞死因子α的影響[J] 中醫(yī)雜志,2014(6):497

    [14]Wang Xuefu, Sun Rui, Wei Haiming, et al Highmobility group box1 (HMGB1)tolllike receptor (TLR)4interleukin (IL)23IL17A axis in druginduced damageassociated lethal hepatitis:interaction of γδ T cells with macrophages[J] Hepatology, 2013, 57:373

    [15]Masatoshi Ohnishi, Hiroshi Katsuki, Chiharu Fukutomi, et al HMGB1 inhibitor glycyrrhizin attenuates intracerebral hemorrhageinduced injury in rats [J] Neuropharmacology, 2011,61:975

    [16]閆戈,楊甲梅 高遷移率族蛋白B1與肝損傷研究進(jìn)展[J] 肝膽外科雜志,2010(5):392

    [17]Wang X, Jiang Z, Cao W, et al Th17/Treg imbalance in triptolideinduced liver injury[J] Fitoterapia, 2014, 93:245

    [18]Xue X, Gong L, Qi X, et al Knockout of hepatic P450 reductase aggravates triptolideinduced toxicity[J] Toxicol Lett, 2011, 205(1):47

    [19]姚金成,劉穎,胡領(lǐng),等雷公藤甲素誘導(dǎo)肝細(xì)胞L02凋亡的機(jī)制[J]中國新藥雜志,2013,22(6):698

    [20]Zhang Y, Jiang Z, Xue M, et al Toxicogenomic analysis of the gene expression changes in rat liver after a 28day oral Tripterygium wilfordii multiglycoside exposure[J] J Ethnopharmacol, 2012, 141(1):170

    [21]Fu Q, Huang X, Shu B, et al Inhibition of mitochondrial respiratory chain is involved in triptolideinduced liver injury[J] Fitoterapia, 2011, 82(8):1241

    [責(zé)任編輯孔晶晶]

    2017年1月 第42卷第1期Vol42, No 1January, 2017

    [收稿日期]20161028

    猜你喜歡
    炎癥因子雷公藤甘草
    Effectiveness and safety of tripterygium glycosides tablet (雷公藤多苷片) for lupus nephritis: a systematic review and Meta-analysis
    竟然是甘草惹的禍
    炙甘草湯,適用于哪些病癥
    中老年保健(2021年9期)2021-08-24 03:51:00
    雷公藤多苷片聯(lián)合甲氨蝶呤治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的療效
    胸腹腔鏡微創(chuàng)手術(shù)與傳統(tǒng)開胸手術(shù)對食管癌患者術(shù)后肺功能、炎癥因子水平的影響
    阿托伐他汀強(qiáng)化降脂對急性腦梗死患者療效與炎癥因子的影響
    血必凈治療重癥肺炎的效果觀察及對炎癥因子和氧化、抗氧化因子的影響
    氨氯地平聯(lián)合阿托伐他汀對高血壓合并高血脂患者內(nèi)皮功能的影響
    關(guān)于召開“第六屆全國雷公藤學(xué)術(shù)會議”的征文通知
    雷公藤紅素通過ROS/JNK途徑誘導(dǎo)Saos-2細(xì)胞發(fā)生caspase依賴的凋亡
    国产成人精品久久久久久| 国产精华一区二区三区| 亚洲熟妇熟女久久| 国产精品福利在线免费观看| 永久网站在线| 欧美绝顶高潮抽搐喷水| 久久久久精品国产欧美久久久| 精品欧美国产一区二区三| 日韩av在线大香蕉| or卡值多少钱| 男女做爰动态图高潮gif福利片| 久久欧美精品欧美久久欧美| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线 | 国产一区亚洲一区在线观看| 久久精品久久久久久噜噜老黄 | 一区二区三区免费毛片| 国产精品女同一区二区软件| 国产精品人妻久久久影院| 日韩制服骚丝袜av| 精品一区二区三区视频在线观看免费| 少妇高潮的动态图| 精品国内亚洲2022精品成人| 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 国产精品一二三区在线看| 国产人妻一区二区三区在| 男女视频在线观看网站免费| 免费大片18禁| 国产精品一区二区三区四区久久| 村上凉子中文字幕在线| 国产精品综合久久久久久久免费| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 亚洲欧美日韩东京热| 少妇的逼水好多| 国产色婷婷99| 高清毛片免费看| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 日韩亚洲欧美综合| 嫩草影院入口| 亚洲国产精品成人综合色| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 长腿黑丝高跟| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看 | 一级av片app| 日本一二三区视频观看| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| 黄色视频,在线免费观看| 久久人人爽人人爽人人片va| 我的女老师完整版在线观看| www日本黄色视频网| 日产精品乱码卡一卡2卡三| 亚洲经典国产精华液单| 日韩精品中文字幕看吧| 国内精品一区二区在线观看| 91狼人影院| 国产在线男女| 国产av麻豆久久久久久久| 欧美一级a爱片免费观看看| 亚洲不卡免费看| 中出人妻视频一区二区| 美女高潮的动态| 少妇人妻精品综合一区二区 | 国产精品av视频在线免费观看| 欧美日韩在线观看h| 免费看a级黄色片| 国产爱豆传媒在线观看| 一区二区三区高清视频在线| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 中文字幕久久专区| 精品一区二区三区av网在线观看| av在线老鸭窝| 乱码一卡2卡4卡精品| 亚洲国产精品国产精品| 亚洲久久久久久中文字幕| 成熟少妇高潮喷水视频| 极品教师在线视频| 一级av片app| 国产v大片淫在线免费观看| 成年免费大片在线观看| 麻豆av噜噜一区二区三区| 秋霞在线观看毛片| 少妇熟女欧美另类| 久久人人爽人人片av| 免费在线观看成人毛片| 麻豆av噜噜一区二区三区| 国产精品一二三区在线看| 久久人人爽人人片av| a级毛色黄片| 成年免费大片在线观看| 久久草成人影院| 晚上一个人看的免费电影| 亚洲精品456在线播放app| 成人无遮挡网站| 国产一区二区三区在线臀色熟女| 国产一区二区激情短视频| 搡女人真爽免费视频火全软件 | 免费在线观看影片大全网站| 三级经典国产精品| 婷婷亚洲欧美| 国产精品一区二区三区四区免费观看 | 亚洲专区国产一区二区| 在线观看66精品国产| .国产精品久久| 日本熟妇午夜| 国产探花极品一区二区| av在线亚洲专区| 在线播放无遮挡| 欧美激情国产日韩精品一区| 欧美+日韩+精品| 欧美+日韩+精品| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 国产精品乱码一区二三区的特点| 黄色一级大片看看| 亚洲av二区三区四区| 国产高清不卡午夜福利| 在线天堂最新版资源| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线 | 看黄色毛片网站| 午夜日韩欧美国产| 欧美高清成人免费视频www| 久久久久免费精品人妻一区二区| 国产精品不卡视频一区二区| 欧美日韩国产亚洲二区| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 成年版毛片免费区| 插逼视频在线观看| 精品一区二区三区视频在线观看免费| 国产极品精品免费视频能看的| 国产女主播在线喷水免费视频网站 | 国产成人影院久久av| 欧美成人a在线观看| 国产成人影院久久av| 亚洲av免费高清在线观看| 简卡轻食公司| 麻豆乱淫一区二区| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 午夜爱爱视频在线播放| 国产日本99.免费观看| 国产亚洲欧美98| 99久国产av精品| 蜜桃亚洲精品一区二区三区| 国产精品永久免费网站| 一本精品99久久精品77| 老师上课跳d突然被开到最大视频| 久久九九热精品免费| 变态另类丝袜制服| 日韩av不卡免费在线播放| 亚洲人成网站在线观看播放| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 国产一区二区三区在线臀色熟女| 欧美日本亚洲视频在线播放| 精品少妇黑人巨大在线播放 | 日韩 亚洲 欧美在线| 精品熟女少妇av免费看| 日韩,欧美,国产一区二区三区 | 免费看日本二区| 18禁在线无遮挡免费观看视频 | 久久久久精品国产欧美久久久| 午夜久久久久精精品| 国产成人a区在线观看| 欧美一级a爱片免费观看看| 日韩一区二区视频免费看| 成人精品一区二区免费| 亚洲成av人片在线播放无| 欧美日韩国产亚洲二区| 免费看光身美女| 小说图片视频综合网站| 亚洲欧美精品自产自拍| 国产高清视频在线播放一区| 久久久午夜欧美精品| 蜜臀久久99精品久久宅男| 亚洲成人中文字幕在线播放| 最新中文字幕久久久久| 精品一区二区免费观看| 亚州av有码| 中文字幕熟女人妻在线| 六月丁香七月| 午夜免费激情av| 老司机影院成人| 久久草成人影院| 国产综合懂色| 青春草视频在线免费观看| 久久久久久久亚洲中文字幕| 真实男女啪啪啪动态图| 成人欧美大片| 欧美人与善性xxx| av天堂中文字幕网| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看| 我的老师免费观看完整版| 午夜福利高清视频| 日本色播在线视频| 免费av毛片视频| 一级毛片电影观看 | 性插视频无遮挡在线免费观看| 亚洲五月天丁香| 久久九九热精品免费| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 精品日产1卡2卡| 尤物成人国产欧美一区二区三区| 99精品在免费线老司机午夜| 国产成人一区二区在线| 成年版毛片免费区| 日本成人三级电影网站| 免费在线观看影片大全网站| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 最新中文字幕久久久久| 黑人高潮一二区| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 一夜夜www| 99久久精品国产国产毛片| 在线看三级毛片| 极品教师在线视频| 国产色婷婷99| 国产精品99久久久久久久久| 亚洲欧美日韩东京热| 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| 国产v大片淫在线免费观看| 春色校园在线视频观看| 日韩强制内射视频| 久久中文看片网| 久久国产乱子免费精品| 1000部很黄的大片| 国产高清不卡午夜福利| 久久亚洲国产成人精品v| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 成熟少妇高潮喷水视频| 少妇人妻精品综合一区二区 | 国产精品人妻久久久久久| 真人做人爱边吃奶动态| 欧美激情久久久久久爽电影| 悠悠久久av| 在线观看一区二区三区| 久久久久久久午夜电影| 国产精品久久视频播放| 简卡轻食公司| 色尼玛亚洲综合影院| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 国内精品一区二区在线观看| 午夜福利高清视频| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 九九热线精品视视频播放| 一边摸一边抽搐一进一小说| 热99re8久久精品国产| 乱码一卡2卡4卡精品| 内射极品少妇av片p| 精品熟女少妇av免费看| 色噜噜av男人的天堂激情| 日韩三级伦理在线观看| 69人妻影院| 欧美色视频一区免费| 欧美高清性xxxxhd video| 91在线观看av| 高清午夜精品一区二区三区 | 干丝袜人妻中文字幕| 成人亚洲精品av一区二区| 国产 一区 欧美 日韩| 亚洲欧美日韩东京热| 国产免费一级a男人的天堂| 精品久久久久久久久亚洲| 亚洲国产欧洲综合997久久,| 观看美女的网站| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 日本三级黄在线观看| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 国产私拍福利视频在线观看| 好男人在线观看高清免费视频| 天美传媒精品一区二区| 插逼视频在线观看| 国产精品福利在线免费观看| 亚洲国产欧洲综合997久久,| 性插视频无遮挡在线免费观看| 久久人人爽人人片av| 欧美最黄视频在线播放免费| 小说图片视频综合网站| 精品人妻偷拍中文字幕| 我的女老师完整版在线观看| 日日干狠狠操夜夜爽| 久久精品国产亚洲网站| 人人妻人人看人人澡| 色哟哟哟哟哟哟| 久久婷婷人人爽人人干人人爱| 免费看美女性在线毛片视频| 成人av在线播放网站| 精品久久久久久久久久久久久| 久久亚洲国产成人精品v| 22中文网久久字幕| 床上黄色一级片| 一本久久中文字幕| 99热这里只有精品一区| 亚洲无线观看免费| 国产成人精品久久久久久| av免费在线看不卡| 卡戴珊不雅视频在线播放| 晚上一个人看的免费电影| 亚洲无线观看免费| 国产精品综合久久久久久久免费| 久久久久久伊人网av| 亚洲av熟女| 99热这里只有是精品在线观看| 国产av麻豆久久久久久久| 亚洲欧美精品自产自拍| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄 | 美女cb高潮喷水在线观看| 亚洲国产精品国产精品| 色综合色国产| 国产精品福利在线免费观看| 淫秽高清视频在线观看| 国产亚洲精品久久久com| 亚洲国产精品久久男人天堂| 久久久久久久久久成人| 日韩精品青青久久久久久| 十八禁网站免费在线| 亚洲高清免费不卡视频| 亚洲av电影不卡..在线观看| 免费看光身美女| 搡老岳熟女国产| 舔av片在线| 韩国av在线不卡| 午夜免费男女啪啪视频观看 | 六月丁香七月| 亚洲国产精品久久男人天堂| 日韩精品中文字幕看吧| 亚洲真实伦在线观看| 亚洲无线在线观看| 热99re8久久精品国产| 欧美最黄视频在线播放免费| 不卡一级毛片| 高清日韩中文字幕在线| 最后的刺客免费高清国语| 老师上课跳d突然被开到最大视频| 三级经典国产精品| 99久久精品热视频| 日日干狠狠操夜夜爽| 老司机午夜福利在线观看视频| 久久久久久久久久成人| www日本黄色视频网| 久久6这里有精品| 免费看日本二区| 国产成人freesex在线 | 1024手机看黄色片| 久久人妻av系列| 亚洲第一区二区三区不卡| 国产私拍福利视频在线观看| 午夜老司机福利剧场| 亚洲国产精品国产精品| 成人亚洲欧美一区二区av| 久久精品国产自在天天线| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| 欧美另类亚洲清纯唯美| 亚洲最大成人中文| 久久精品国产自在天天线| 一个人免费在线观看电影| 国产v大片淫在线免费观看| 成人亚洲精品av一区二区| 国产精品不卡视频一区二区| 99国产极品粉嫩在线观看| av在线天堂中文字幕| 少妇人妻精品综合一区二区 | 2021天堂中文幕一二区在线观| 国产精品久久久久久av不卡| 麻豆一二三区av精品| 97碰自拍视频| 久久人人爽人人爽人人片va| 在线免费十八禁| 麻豆一二三区av精品| 日日啪夜夜撸| 深爱激情五月婷婷| 91精品国产九色| 三级经典国产精品| 久久久久久久久大av| 久久久久国内视频| 亚洲在线自拍视频| 三级国产精品欧美在线观看| 久久人人爽人人爽人人片va| 国产精品美女特级片免费视频播放器| 成人精品一区二区免费| 日韩欧美精品v在线| 欧美zozozo另类| 成年av动漫网址| av天堂中文字幕网| 国产一区亚洲一区在线观看| 最近在线观看免费完整版| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 蜜臀久久99精品久久宅男| 男女之事视频高清在线观看| 午夜精品国产一区二区电影 | 亚洲成人精品中文字幕电影| 一夜夜www| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 亚洲成人av在线免费| 国产私拍福利视频在线观看| 久久久国产成人免费| 97超碰精品成人国产| 91av网一区二区| 六月丁香七月| 国产大屁股一区二区在线视频| 你懂的网址亚洲精品在线观看 | 色av中文字幕| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 精品一区二区免费观看| 亚洲国产色片| 国产欧美日韩精品一区二区| 无遮挡黄片免费观看| 毛片一级片免费看久久久久| 级片在线观看| 欧美一区二区精品小视频在线| 狂野欧美激情性xxxx在线观看| 欧美3d第一页| 精品福利观看| 亚洲av.av天堂| 简卡轻食公司| 国产精品乱码一区二三区的特点| 男人舔女人下体高潮全视频| 午夜老司机福利剧场| 欧美一级a爱片免费观看看| 日韩av不卡免费在线播放| 黄色视频,在线免费观看| 欧美成人免费av一区二区三区| 九九在线视频观看精品| 麻豆国产97在线/欧美| 成年女人毛片免费观看观看9| 在线观看66精品国产| 波多野结衣高清作品| 亚洲人与动物交配视频| 成人永久免费在线观看视频| 亚洲乱码一区二区免费版| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 联通29元200g的流量卡| 午夜福利在线在线| 国产精品久久久久久av不卡| 国产成人a区在线观看| 大型黄色视频在线免费观看| 亚洲av熟女| 欧美一级a爱片免费观看看| 深夜a级毛片| 最近手机中文字幕大全| 赤兔流量卡办理| av国产免费在线观看| 欧美高清性xxxxhd video| 51国产日韩欧美| 搞女人的毛片| 日日撸夜夜添| 韩国av在线不卡| 国产精品1区2区在线观看.| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 欧美3d第一页| 波野结衣二区三区在线| 亚洲熟妇熟女久久| 国产69精品久久久久777片| 国产精品1区2区在线观看.| 长腿黑丝高跟| 啦啦啦啦在线视频资源| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 国产一区二区三区在线臀色熟女| 免费黄网站久久成人精品| 亚洲电影在线观看av| 嫩草影院精品99| 精品久久久久久久久久久久久| 精品人妻偷拍中文字幕| 日本爱情动作片www.在线观看 | 日韩人妻高清精品专区| 亚洲av熟女| 一级毛片aaaaaa免费看小| 无遮挡黄片免费观看| 欧美成人一区二区免费高清观看| 国产精品野战在线观看| 看非洲黑人一级黄片| 日本一二三区视频观看| 国产亚洲精品av在线| 99热网站在线观看| 亚洲国产精品成人久久小说 | 中文字幕av在线有码专区| 深夜a级毛片| 精品欧美国产一区二区三| 欧美+日韩+精品| 97超视频在线观看视频| 老司机福利观看| 国产高清视频在线播放一区| 欧美激情在线99| 联通29元200g的流量卡| avwww免费| 国产黄色视频一区二区在线观看 | 中文在线观看免费www的网站| 久久精品人妻少妇| 久久午夜福利片| 97超碰精品成人国产| 日本 av在线| 桃色一区二区三区在线观看| 免费观看在线日韩| 亚洲七黄色美女视频| 99精品在免费线老司机午夜| 一区福利在线观看| 免费观看的影片在线观看| 搞女人的毛片| 九色成人免费人妻av| 蜜桃亚洲精品一区二区三区| 老熟妇仑乱视频hdxx| 色播亚洲综合网| 中文资源天堂在线| 99热只有精品国产| 99久国产av精品| 99在线人妻在线中文字幕| videossex国产| 久久久久久久亚洲中文字幕| 亚洲专区国产一区二区| 色吧在线观看| 国产精华一区二区三区| 老女人水多毛片| 日本-黄色视频高清免费观看| 亚洲av.av天堂| 日韩高清综合在线| 中文在线观看免费www的网站| 中文亚洲av片在线观看爽| 久久精品国产清高在天天线| 国产精品久久视频播放| 亚洲国产精品国产精品| 婷婷精品国产亚洲av| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄 | 欧美日韩在线观看h| 超碰av人人做人人爽久久| 日本黄色片子视频| 久久久久久久久久成人| 国产精品无大码| 91在线精品国自产拍蜜月| 老司机午夜福利在线观看视频| 日本熟妇午夜| 一a级毛片在线观看| 免费搜索国产男女视频| 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 日日撸夜夜添| 午夜激情福利司机影院| 成人亚洲欧美一区二区av| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 成人一区二区视频在线观看| 国产精品av视频在线免费观看| 一级黄片播放器| 亚洲一区二区三区色噜噜| 欧美成人a在线观看| 久久亚洲国产成人精品v| 哪里可以看免费的av片| 色尼玛亚洲综合影院| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 麻豆国产av国片精品| 成人亚洲欧美一区二区av| 欧美一区二区亚洲| 成人欧美大片| 丰满的人妻完整版| 蜜桃亚洲精品一区二区三区| 午夜福利在线在线| 国内精品宾馆在线| 看十八女毛片水多多多| 午夜亚洲福利在线播放| 国产精品人妻久久久久久| 亚洲av免费在线观看| 国产乱人偷精品视频| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆| 在线看三级毛片| 国产一级毛片七仙女欲春2| 国产成人a∨麻豆精品| 91在线观看av| 床上黄色一级片| 99热这里只有是精品50| 婷婷六月久久综合丁香| 在线看三级毛片| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 最近在线观看免费完整版| 国产精品亚洲一级av第二区| av视频在线观看入口| 国产午夜精品论理片| 国产黄a三级三级三级人| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 精品国产三级普通话版| 免费看av在线观看网站| 22中文网久久字幕| 1024手机看黄色片| 精品一区二区三区视频在线观看免费| 午夜福利在线观看吧| 看十八女毛片水多多多| 久久综合国产亚洲精品| 免费观看精品视频网站| 天堂动漫精品| 精品久久久久久久久久免费视频| 国产精品久久久久久精品电影| 精品久久久久久成人av| 成人三级黄色视频| 国产亚洲欧美98| 大型黄色视频在线免费观看| 精品一区二区三区视频在线| 国产极品精品免费视频能看的| 亚洲va在线va天堂va国产| 在线观看66精品国产| 欧美在线一区亚洲| 久久精品国产亚洲av涩爱 | 99久久精品热视频| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 精华霜和精华液先用哪个| 啦啦啦啦在线视频资源| 97碰自拍视频| 性插视频无遮挡在线免费观看| 国产综合懂色| www日本黄色视频网| 亚洲最大成人手机在线| 中国美白少妇内射xxxbb| 午夜a级毛片| 国产片特级美女逼逼视频| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看| 99久久精品热视频| 日韩 亚洲 欧美在线| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 麻豆国产97在线/欧美| 日本三级黄在线观看| 22中文网久久字幕| 亚洲高清免费不卡视频|