桃核承氣湯對(duì)大鼠糖尿病大血管Toll樣受體表達(dá)的影響

徐 陽(yáng)，王 軍

桃核承氣湯對(duì)大鼠糖尿病大血管Toll樣受體表達(dá)的影響

徐 陽(yáng)，王 軍

目的：觀測(cè)桃核承氣湯早期干預(yù)對(duì)糖尿病鼠大血管病變中TOLL樣受體2（TLR-2）、TOLL樣受體4（TLR-4）及轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子(TGF-β)、胰島素樣生長(zhǎng)因子1(IGF-1)表達(dá)的影響。方法：雄性SD大鼠130只，正常對(duì)照組（A組）30只，其余100只制造糖尿病模型，分為模型對(duì)照組（B組）、中藥早期干預(yù)組（C組）及中藥治療組（D組）。A組不予藥物干預(yù)；B組給予0.9%氯化鈉10 mL·Kg-1·d-1灌胃；C組自造模前予桃核承氣湯水溶液灌胃0.9 g·Kg-1·d-1，造模后繼續(xù)給予桃核承氣湯0.9 g·Kg-1·d-1灌胃；D組造模后給予桃核承氣湯0.9 g·Kg-1·d-1灌胃。藥物干預(yù)第1、12、20周處死，分別取材。免疫組化法檢測(cè)糖尿病大鼠大血管中TLR-2、TLR-4、TGF-β、IGF-1表達(dá)情況。結(jié)果：藥物干預(yù)20周后C組大鼠股動(dòng)脈TLR-2為（3.750±1.282）pg/mL，較B組[（9.333±2.338）pg/mL]明顯降低（P＜0.05），D組與B組大鼠股動(dòng)脈TLR-2表達(dá)無(wú)明顯差異（P＞0.05）。C組及D組大鼠股動(dòng)脈TLR-4表達(dá)為（3.750±1.282）pg/mL、（5.750±1.982）pg/mL，較B組[（10.333±2.658）pg/mL]明顯降低（P＜0.05），且C組對(duì)大鼠股動(dòng)脈TLR-4表達(dá)干預(yù)作用強(qiáng)于D組（P＜0.05）。隨著用藥時(shí)間延長(zhǎng)，C組與D組大鼠股動(dòng)脈TLR-2、TLR-4表達(dá)干預(yù)作用趨于相近（P＞0.05）。大鼠股動(dòng)脈TGF-β C組為(403.438±11.273)pmol/L，D組為(535.313±12.384)pmol/L，均明顯降低（P＜0.05）；IGF-1 C組為(1104.375±55.495)pmol/L，D組為（861.000±28.656），均有明顯升高（P＜0.05），且C組作用較D組強(qiáng)。結(jié)論:中藥桃仁承氣湯可減輕糖尿病大血管纖維化，且早期干預(yù)對(duì)糖尿病大血管纖維化有預(yù)防作用。

大血管纖維化；早期干預(yù)；Toll樣受體；轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β；胰島素樣生長(zhǎng)因子1

糖尿病的發(fā)病率在全球呈快速增長(zhǎng)趨勢(shì)，已經(jīng)成為一大嚴(yán)重影響人類生命質(zhì)量的慢性疾病。糖尿病血管病變是糖尿病的主要并發(fā)癥之一，是致死、致殘的首要原因。大量研究表明，糖尿病大血管病變后可逆性差，故早期干預(yù)預(yù)防大血管病變的發(fā)生發(fā)展對(duì)于本病至關(guān)重要。桃核承氣湯原方出自張仲景《傷寒論》，用于治療中醫(yī)下焦蓄血癥。臨床報(bào)道的蓄血癥的表現(xiàn)涉及病種很繁雜，目前多數(shù)研究認(rèn)為其與血管內(nèi)皮損傷有關(guān)。我們的前期研究證實(shí)，桃核承氣湯可降低糖尿病大鼠大動(dòng)脈TGF-β、結(jié)締組織生長(zhǎng)因子（CTGF）、血小板衍生生長(zhǎng)因子(PDGF)、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）以及膠原蛋白Ⅰ、Ⅲ的表達(dá)，能夠較為有效的抑制糖尿病大血管病變向纖維化發(fā)展[1-2]。本研究通過(guò)對(duì)實(shí)驗(yàn)性糖尿病大血管病變大鼠進(jìn)行早期中藥干預(yù)，探討桃核承氣湯早期干預(yù)預(yù)防大血管病變的可能性。

1 材料與方法

1.1 材料 動(dòng)物：清潔級(jí)雄性SD大鼠130只，2月齡，體質(zhì)量160～200 g，平均（187.46±14.52）g。由天津?qū)嶒?yàn)動(dòng)物中心提供。

藥物：桃核承氣湯(桃仁∶大黃∶桂枝∶甘草∶芒硝= 2∶2∶1∶1∶1)，由天津中醫(yī)藥大學(xué)顆粒劑藥房制作，每克顆粒劑相當(dāng)于生藥10 g。根據(jù)人與大鼠體表面積換算，人桃仁用藥劑量為30 g時(shí)，大鼠的用藥劑量約為0.90 g·kg-1·d-1。0.9%氯化鈉：天津大家制藥有限公司生產(chǎn)。精蛋白鋅胰島素注射液：400 IU/瓶，由江蘇萬(wàn)邦生化醫(yī)藥有限公司生產(chǎn)。

儀器：德國(guó)羅氏活力型血糖儀。穩(wěn)壓電泳儀，六一儀器，北京。高速離心機(jī)，Sigma，美國(guó)。水浴箱，精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司，上海。干燥消毒烤箱(DHG-9246A)，精宏試驗(yàn)設(shè)備有限公司，上海。臺(tái)式離心機(jī)，Eppendorf公司，德國(guó)。轉(zhuǎn)膜儀，六一儀器，北京。灌胃針、注射器(l mL、5 mL、10 mL)、10 mL玻璃瓶、止血鉗、直剪、試管、吸管等。

試劑：TLR-2一抗：Abcam，英國(guó)；TLR-4一抗：Abcam，英國(guó)；RatTGF-βElisa kit：Geneway，美國(guó)；Rat IGF-1Elisa kit Geneway，美國(guó)。

1.2 分組 造模前分為正常對(duì)照組（A組，n=30）、實(shí)驗(yàn)組（n=100）制造糖尿病模型。考慮STZ腹腔注射造糖尿病模型有意外死亡及造模不成功可能，在100只實(shí)驗(yàn)組大鼠中隨機(jī)選取34只作為早期干預(yù)組（C組），造模同時(shí)給予桃核承氣湯0.9 g·Kg-1·d-1灌胃，其余66只隨機(jī)分為模型對(duì)照組（B組）及中藥治療組（D組）。造模意外死亡大鼠3只，另4只大鼠未成模，剔除實(shí)驗(yàn)。最終實(shí)驗(yàn)動(dòng)物數(shù)量：B組31只，C組31只，D組31只。

1.3 干預(yù)方法 所有大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)2周，A組繼續(xù)予普通飼料喂養(yǎng)，B、C、D組高脂高糖喂養(yǎng)，誘導(dǎo)胰島素抵抗。4周后，B、C、D組均采用STZ腹腔注射造糖尿病模型。穩(wěn)定血糖1周，維持非禁食狀態(tài)血糖25.0 mmol/L左右，B、C、D組共93只大鼠成功制成糖尿病模型。

A組不予藥物干預(yù)。B組自造模成功，給予0.9%氯化鈉10 mL·kg-1·d-1灌胃。C組自造模前予桃核承氣湯0.9 g·kg-1·d-1灌胃，造模后繼續(xù)予桃核承氣湯0.9 g·kg-1·d-1灌胃。D組自造模成功給予桃核承氣湯0.9 g·kg-1·d-1灌胃。連續(xù)藥物干預(yù)第1、12、20周，按計(jì)劃處死大鼠。各組分別取材，保存標(biāo)本。

1.4 取材方法 分別于第1、12、20周，每組隨機(jī)選取10只大鼠（若實(shí)驗(yàn)過(guò)程中出現(xiàn)動(dòng)物死亡造成標(biāo)本數(shù)量不足，按實(shí)際情況減少標(biāo)本數(shù)量）。禁食24 h，用10%的水合氯醛0.3 g/100 g麻醉。將大鼠仰臥位固定在大鼠固定板上，用清水濕潤(rùn)股內(nèi)側(cè)及腹股溝區(qū)的鼠毛，再用剪子剪去鼠毛進(jìn)行備皮，常規(guī)消毒。根據(jù)股動(dòng)脈搏動(dòng)情況確定股動(dòng)脈的位置和走行方向，沿股動(dòng)脈走向縱向切開皮膚，用蚊式鉗鈍性分離組織，以暴露股動(dòng)脈鞘。分離時(shí)動(dòng)作要輕柔，不得用刀剪等銳利器械，以防損傷血管和神經(jīng)。股動(dòng)脈鞘內(nèi)有并行的股動(dòng)脈、股靜脈、股神經(jīng)，直徑由粗到細(xì)，其中呈粉紅色且觸之有搏動(dòng)的粗大血管即為股動(dòng)脈。用眼科鑷順著血管走向鈍性分離股動(dòng)脈約4～5 cm，兩端剪斷。PBS(磷酸鹽緩沖液)沖洗，平均分成兩部分，一部分采用4%多聚甲醛進(jìn)行固定，另一部分置于無(wú)菌凍存管中，-80℃冰箱保存。

1.5 標(biāo)本TLR-2、TLR-4免疫組化檢測(cè) 標(biāo)本固定、包埋、切片。用4%多聚甲醛進(jìn)行固定，經(jīng)70%～100%乙醇、二甲苯透明、55℃石蠟、用銅制模具包埋組織塊。將厚度5 μm的組織切片附于經(jīng)多聚賴氨酸附膜的載玻片上，60℃過(guò)夜。脫蠟：組織玻片置于二甲苯中浸泡。后水化、抗原煮沸熱修復(fù)、封閉、一抗孵育、二抗孵育后DAB顯色：按DAB顯色試劑盒操作說(shuō)明顯色，鏡下掌握顯色程度。自來(lái)水沖洗。復(fù)染：蘇木素復(fù)染30 s到1 min，自來(lái)水沖洗。分化：1%鹽酸酒精分化1 s，飽和碳酸鋰溶液返藍(lán)。脫水：梯度乙醇分別浸泡10 min。透明：組織切片置于二甲苯中浸泡10 min，更換二甲苯后再浸泡10 min。封片：滴加1滴中性樹膠，蓋玻片從一端傾斜蓋下，防止氣泡產(chǎn)生。顯微鏡觀察。

鏡觀采相分析：以胞漿中出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽(yáng)性細(xì)胞。定量分析采用HPIAS-1000高清晰度彩色病理圖文分析系統(tǒng)，每張切片在高倍鏡下(×400)隨機(jī)選取10個(gè)視野并攝像保存，采用IMAGE PRO PLUS軟件設(shè)置陽(yáng)性表達(dá)的宏程序。在同一條件下，分析不同組別的TLR-2、TLR-4含量，對(duì)陽(yáng)性表達(dá)率進(jìn)行組間比較。

1.6 標(biāo)本TGF-β、IGF-1酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）檢測(cè) 樣品準(zhǔn)備：取出標(biāo)本置于含有PBS的勻漿器中，放置冰上小心研碎并提取蛋白。Elisa檢測(cè)TGF-β及IGF-1表達(dá)：（1）加樣：分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔?？瞻卓准訕悠废♂屢?00 μL，余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100 μL。（2）棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加生物素標(biāo)記抗體工作液100 μL。（3）溫育60 min，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1～2 min，300 μL/孔，甩干。（4）每孔加準(zhǔn)備好的ABC溶液100 μL。（5）棄去孔內(nèi)液體，甩干。（6）依序每孔加TMB底物溶液90 μL。37℃避光顯色。（7）依序每孔加終止液100 μL，終止反應(yīng)。（8）用酶聯(lián)儀在450 nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的光密度（OD值）。在加終止液后15 min以內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)。

結(jié)果判斷：（1）每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和標(biāo)本的OD值應(yīng)減去零孔的OD值。（2）以標(biāo)準(zhǔn)品濃度作橫坐標(biāo)，OD值作縱坐標(biāo)，以平滑線連接各標(biāo)準(zhǔn)品的坐標(biāo)點(diǎn)。由標(biāo)本的OD值在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出其濃度。（3）計(jì)算濃度時(shí)乘以稀釋倍數(shù)。濃度單位為pg/mL。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 所有統(tǒng)計(jì)計(jì)算均用SAS v9.1.3統(tǒng)計(jì)分析軟件進(jìn)行，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差()表示，采用方差分析，兩兩比較采用LSD檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

實(shí)驗(yàn)過(guò)程中各組死亡大鼠共12只：A組1只，B組5只，C組3只，D組3只。實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)各組實(shí)驗(yàn)大鼠數(shù)量：A組9只，B組6只，C組8只，D組8只。

2.1 大鼠股動(dòng)脈TLR-2免疫組化檢測(cè)分析 實(shí)驗(yàn)第1周第12周，C組大鼠股動(dòng)脈TLR-2表達(dá)較B組明顯降低，D組與B組大鼠股動(dòng)脈TLR-2表達(dá)無(wú)明顯差異。表明早期干預(yù)可減低大鼠股動(dòng)脈TLR-2表達(dá)。實(shí)驗(yàn)第20周，C組大鼠股動(dòng)脈TLR-2與D組無(wú)明顯差異。說(shuō)明隨著用藥時(shí)間延長(zhǎng)，D組與C組對(duì)大鼠股動(dòng)脈TLR-2表達(dá)干預(yù)作用相近（見表1）。

2.2 大鼠股動(dòng)脈TLR-4免疫組化檢測(cè)分析 實(shí)驗(yàn)第1周，C組及D組大鼠股動(dòng)脈TLR-4表達(dá)較B組均明顯降低，C組與D組對(duì)大鼠股動(dòng)脈TLR-4干預(yù)無(wú)明顯差別。實(shí)驗(yàn)第12周，C組及D組大鼠股動(dòng)脈TLR-4表達(dá)較B組均明顯降低，且C組對(duì)大鼠股動(dòng)脈TLR-4表達(dá)干預(yù)作用強(qiáng)于D組。實(shí)驗(yàn)至第20周，D組與C組對(duì)大鼠股動(dòng)脈TLR-4表達(dá)干預(yù)作用趨于相近（見表2）。

2.3 大鼠股動(dòng)脈TGF-β檢測(cè)分析 用藥后，自第1周起C組及D組大鼠股動(dòng)脈TGF-β均有明顯降低，且C組對(duì)大鼠股動(dòng)脈TGF-β降低作用較D組強(qiáng)（見表3）。

2.4 大鼠股動(dòng)脈IGF-1檢測(cè)分析 用藥后，自第1周起C組及D組大鼠股動(dòng)脈IGF-1均有明顯升高，且C組對(duì)大鼠股動(dòng)脈IGF-1升高作用較D組強(qiáng)（見表4）。

表1 鼠股動(dòng)脈TLR-2免疫組化檢測(cè)（）

表1 鼠股動(dòng)脈TLR-2免疫組化檢測(cè)（）

第1周 第12周 第20周A組B組C組D組n 10 10 10 10 1.000±0.667 7.800±1.549a3.400±0.966a、b6.900±2.025a、cn 10 10 10 10 1.300±0.483 8.100±2.025a2.800±1.033a、b4.800±1.398a、cn9 6 8 8 1.333±0.500 9.333±2.338a3.750±1.282a、b4.625±2.560a

注：與A組同時(shí)間比較組比較，aP＜0.05；與B同時(shí)間比較組比較，bP＜0.05；與C組同時(shí)間比較，cP＜0.05

表2 大鼠股動(dòng)脈TLR-4免疫組化檢測(cè)分析（）

表2 大鼠股動(dòng)脈TLR-4免疫組化檢測(cè)分析（）

注：與A組同時(shí)間比較組比較，aP＜0.05；與B同時(shí)間比較組比較，bP＜0.05；與C組同時(shí)間比較，cP＜0.05

第1周 第12周 第20周A組B組C組D組n 10 10 10 10 1.100±0.568 7.500±1.581a3.000±1.054a、b4.500±1.841a、bn 10 10 10 10 1.100±0.568 9.100±2.283a3.400±0.966a、b4.200±1.135a、b、c n9 6 8 8 1.778±1.302 10.333±2.658a3.750±1.282a、b5.750±1.982a

表3 大鼠股動(dòng)脈TGF-β檢測(cè)結(jié)果（pmol/L）（）

表3 大鼠股動(dòng)脈TGF-β檢測(cè)結(jié)果（pmol/L）（）

注：與A組同時(shí)間比較組比較，aP＜0.05；與B同時(shí)間比較組比較，bP＜0.05；與C組同時(shí)間比較，cP＜0.05

第1周 第12周 第20周A組B組C組D組n 10 10 10 10 169.950±5.134 703.750±26.762a435.950±19.783a、b 570.150±15.474a、b、c n 10 10 10 10 165.150±9.716 880.800±15.550a378.750±10.652a、b 535.100±24.479a、b、c n9 6 8 8 282.500±7.084 1049.333±27.424a403.438±11.273a 535.313±12.384a、b、c

表4 大鼠股動(dòng)脈IGF-1檢測(cè)結(jié)果（pmol/L）（）

表4 大鼠股動(dòng)脈IGF-1檢測(cè)結(jié)果（pmol/L）（）

注：與A組同時(shí)間比較組比較，aP＜0.05；與B同時(shí)間比較組比較，bP＜0.05；與C組同時(shí)間比較，cP＜0.05

第1周 第12周 第20周A組B組C組D組n 10 10 10 10 1439.500±70.834 629.400±30.358a925.000±23.650a、b722.300±18.583a、b、c n 10 10 10 10 1458.500±40.478 452.400±49.896a1082.700±47.542a、b785.500±38.659a、b、c n9 6 8 8 1481.667±45.238 378.000±25.822a1104.375±55.495a、b861.000±28.656a、b、c

3 討論

研究發(fā)現(xiàn)，TGF-β1、CTGF、膠原蛋白I、膠原蛋白III均在中、晚期糖尿病大鼠的大血管中顯著增加，提示糖尿病大血管病變可能與纖維化有關(guān)。TLR-2和TLR-4在介導(dǎo)腎[3]、心[4]、肝[5]、肺[6]、皮膚等多種組織器官纖維化進(jìn)程中起十分重要的作用，可能是最主要的致纖維化細(xì)胞因子[7-8]。其在動(dòng)脈纖維化過(guò)程中可能起著“分子開關(guān)”的重要作用[9-10]，是研究器官組織纖維化的熱門因子[11]。TGF-β被認(rèn)為是迄今最強(qiáng)的細(xì)胞外基質(zhì)沉積促進(jìn)劑，是纖維化疾病發(fā)病過(guò)程中起核心作用的細(xì)胞因子。其可使細(xì)胞外基質(zhì)降解受抑制，沉積增加，最終導(dǎo)致血管纖維化[12-13]。IGF是一類多功能細(xì)胞增殖調(diào)控因子，IGF-1具有促細(xì)胞促有絲分裂，促進(jìn)細(xì)胞的增殖與分化，抑制細(xì)胞凋亡的作用。已有充分研究表明，IGF-l對(duì)成纖維細(xì)胞、成骨細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞等有直接的促增殖作用，并能促進(jìn)膠原合成，而且還能作為一種促進(jìn)因子，增強(qiáng)其它與纖維增生有關(guān)的細(xì)胞因子如TGF-β、CTGF、PDGF等的作用[14]。

本研究發(fā)現(xiàn)，用藥后C組大鼠股動(dòng)脈TLR-2表達(dá)較B組明顯降低，D組與B組大鼠股動(dòng)脈TLR-2表達(dá)無(wú)明顯差異，用藥后C組及D組大鼠股動(dòng)脈TLR-4表達(dá)較B組均明顯降低，且C組對(duì)大鼠股動(dòng)脈TLR-4表達(dá)干預(yù)作用強(qiáng)于D組。但隨著用藥時(shí)間延長(zhǎng)，C組與D組大鼠股動(dòng)脈TLR-2、TLR-4表達(dá)干預(yù)作用趨于相近。用藥后C組及D組大鼠股動(dòng)脈TGF-β均有明顯降低，IGF-1均有明顯升高，且C組作用較D組強(qiáng)。結(jié)果表明，中藥桃仁承氣湯可減輕糖尿病大血管纖維化，且早期干預(yù)對(duì)糖尿病大血管纖維化有預(yù)防作用。

“治未病”思想源自《黃帝內(nèi)經(jīng)》，歷代醫(yī)家乃至現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對(duì)“治未病”思想都極為重視。《素問(wèn)·四氣調(diào)神大論》中提出：“是故圣人不治已病治未病，不治已亂治未亂，此之謂也。夫病已成而后藥之，亂已成而后治之，譬猶渴而穿井，斗而鑄錐，不亦晚乎”，就生動(dòng)地指出了“治未病”的重要意義。通過(guò)本實(shí)驗(yàn)可以看出，早期使用中藥干預(yù)對(duì)糖尿病大血管纖維化有明顯的預(yù)防作用，能有效緩解糖尿病血管病變的發(fā)生發(fā)展。其對(duì)于臨床糖尿病大血管病變患者的疾病預(yù)防有較好的指導(dǎo)意義。

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（收稿：2016-06-26 修回：2016-11-22）

（責(zé)任編輯 劉洪斌 屈振亮）

數(shù)字的具體要求

表示特定起點(diǎn)與終點(diǎn)定界的時(shí)間段時(shí)，起點(diǎn)與終點(diǎn)之間以一字線即“—”為分隔符，而不再用波紋線即“～”表示，如2008—2011年(不再用2008～2011年)。除上述時(shí)間段之外的其他計(jì)數(shù)、計(jì)量范圍的表示，仍然用波紋線“～”，如2～6 kg。表示百分?jǐn)?shù)的范圍和偏差時(shí)，前一個(gè)數(shù)字的百分符號(hào)不能省略，如：5%～95%不能寫成5～95%，（50.2±0.6）%不能寫成50.2±0.6%，37℃± 1℃不能寫成37±1℃。附帶尺寸單位的數(shù)值相乘，按下列方式書寫：4 cm×3 cm×5 cm，不能寫成4×3×5 cm3。冪次相同的參數(shù)范圍，前一個(gè)參數(shù)的冪次不能省略，如3×109～5×109不能寫成3～5×109，但可寫成(3～5)×109。數(shù)字的有效位數(shù)一般按標(biāo)準(zhǔn)差的1/3來(lái)確定，如(3.6±0.42)kg，標(biāo)準(zhǔn)差的1/3為0.14，有效位數(shù)在小數(shù)點(diǎn)后1位，故應(yīng)取小數(shù)點(diǎn)后1位，即(3.6±0.4)kg；又如(8.61±0.27)cm，標(biāo)準(zhǔn)差的1/3為0.09，有效位數(shù)在小數(shù)點(diǎn)后2位，故應(yīng)取小數(shù)點(diǎn)后2位，即(8.61±0.27)cm。百分?jǐn)?shù)的有效位數(shù)要以分母確定：分母＜10，不用百分?jǐn)?shù)表示，宜用分?jǐn)?shù)表示，如5/7；分母10～99，百分?jǐn)?shù)到個(gè)位，如57%；分母100～999，百分?jǐn)?shù)到數(shù)點(diǎn)后1位，如57.0%，其余以此類推。

The Effect of Tao-He-Cheng-Qi Decoction on Vascular Expression of Toll-like Receptor 2,Toll-like Receptor 4,Transforming Growth Fator-beta and Insulin-like Growth Fator-1 in Rats with Diabetes

XU Yang,WANG Jun. Department of Surgery,First Affiliated Hospital of Tianjin University of Traditional Chinese Medicine,Tianjin(300193),China

ObjectiveTo observe the effects of Tao-He-Cheng-Qi decoction on rat vascular expression of toll-like receptor-2(TLR-2),TLR-4,transforming growth factor-beta(TGFβ),and insulin-like growth factor-1 (IGF-1)expression.MethodsMale SD rats were divided to a control group(A group,n=30),a model group (B group,n=31),an early-treatment group(C group, n=31)and a regular-treatment group(D group,n= 31).Rats in A group had no drug intervention,but re-ceived 0.9%sodium chloride(10 mL/kg)gavage everyday in rats of B group.Rats in C group were received Tao-He-Cheng-Qi decoction by gavage before and after diabetic modeling.The rats of D group were received Tao-He-Cheng-Qi decoction after diabetes modeling.After 1,12,or 20 weeks of intervention,rats were sacrificed.Immunohistochemical methods were used to detect the expression of TLR-2,TLR-4,TGFβ and IGF-1 in large blood vessel.ResultsTwenty weeks after intervention,the levels of TLR-2 expression were(9.333± 2.338)pg/mL in D group,but significantly decreased in C group(3.750±1.282 pg/mL,P＜0.05).The levels of TLR-2 expression were not different between D and B group.The levels of TL-4 expression were(3.750± 1.282)pg/mL in C group and(5.750±1.982)pg/mL in D group,which was significantly decreased compared to that in B group(10.333±2.658 pg/mL,P＜0.05).The expression levels of TGF-beta was(403.438± 11.273)pmol/L in C group and(535.313±12.384)pmol/L in D group,with significant difference(P＜0.05).The expression levels of IGF-1 were(1104.375±55.495)pmol/L in C group and(861.000±28.656)pmol/L in D group.The difference was significant(P＜0.05).ConclusionTao-He-Cheng-Qi decoction can reduce diabetic vascular fibrosis,and also can prevent diabetic vascular fibrosis when early intervention.

Macrovascular fibrosis;early intervention;toll-like receptor;transforming growth factor-beta; insulin-like growth factor 1

Q95-33；R654.4

A

1007-6948(2017)01-0060-05

10.3969/j.issn.1007-6948.2017.01.017

國(guó)家自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目（81173268）

天津中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院外一科（天津 300193）

王軍，E-mail：tjzywangjun@126.com