氫質(zhì)子磁共振頻譜活體檢測(cè)結(jié)腸癌耐藥性的初步探討＊

1.廣州醫(yī)科大學(xué)附屬?gòu)V州市第一人民醫(yī)院南沙醫(yī)院醫(yī)學(xué)影像科2.廣州醫(yī)科大學(xué)附屬?gòu)V州市第一人民醫(yī)院南沙醫(yī)院總院病理科3.廣州醫(yī)科大學(xué)附屬?gòu)V州市第一人民醫(yī)院南沙醫(yī)院總院分子實(shí)驗(yàn)室(廣東 廣州 511457)4.中山大學(xué)腫瘤防治中心病理科(廣東 廣州 510060)

謝 琦1 楊逸銘1 吳敏儀1張鼎旋1 雷正賢1 張 靜4許 進(jìn)2 鐘維德3

氫質(zhì)子磁共振頻譜活體檢測(cè)結(jié)腸癌耐藥性的初步探討＊

1.廣州醫(yī)科大學(xué)附屬?gòu)V州市第一人民醫(yī)院南沙醫(yī)院醫(yī)學(xué)影像科2.廣州醫(yī)科大學(xué)附屬?gòu)V州市第一人民醫(yī)院南沙醫(yī)院總院病理科3.廣州醫(yī)科大學(xué)附屬?gòu)V州市第一人民醫(yī)院南沙醫(yī)院總院分子實(shí)驗(yàn)室(廣東 廣州 511457)4.中山大學(xué)腫瘤防治中心病理科(廣東 廣州 510060)

謝 琦1楊逸銘1吳敏儀1張鼎旋1雷正賢1張 靜4許 進(jìn)2鐘維德3

目的探索1H-MRS活體檢測(cè)結(jié)腸癌耐藥性的可能性。方法5只耐藥(耐5-FU)與5只不耐藥人類結(jié)腸癌SW480荷瘤裸鼠于腫瘤直徑大于1.5cm時(shí)行1H-MRS檢查，隨后處死荷瘤鼠，切下腫瘤檢測(cè)其PKC、P-gp、MRP1蛋白表達(dá)(Western Blot)，觀察腫瘤凋亡(TUNNEL法)。分析結(jié)腸癌耐藥性與1H-MRS檢測(cè)代謝物、腫瘤耐藥基因表達(dá)、腫瘤凋亡的相關(guān)性。結(jié)果不耐藥組人類結(jié)腸癌SW480裸鼠腫瘤的cho、lac、Lip及mI峰/cr面積比較耐藥組人類結(jié)腸癌SW480/5-FU裸鼠增加，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)。耐藥組PKC、P-gp、MRP1蛋白表達(dá)明顯高于不耐藥組，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)。在TUNNEL檢測(cè)切片上，兩組腫瘤組織均可見(jiàn)腫瘤細(xì)胞凋亡，兩者差別無(wú)統(tǒng)計(jì)意義(P＞0.05)。腫瘤代謝物cho、Lac、Lip、mI/ cr與腫瘤耐藥性呈正相關(guān)性；cho面積與腫瘤PKC表達(dá)光密度呈正相關(guān)，與腫瘤P-gp表達(dá)光密度呈正相關(guān)。結(jié)論腫瘤代謝物cho、lac、Lip的改變有可能有助于利用1H-MRS活體檢測(cè)結(jié)腸癌耐藥性改變。

氫質(zhì)子磁共振頻譜分析；結(jié)腸癌；多藥耐藥；荷瘤鼠模型

不同耐藥狀態(tài)的腫瘤細(xì)胞的增值狀態(tài)有差別，導(dǎo)致其代謝物的含量不同。本研究對(duì)耐藥、不耐藥的結(jié)腸癌荷瘤鼠進(jìn)行1H-MRS檢測(cè)，初步探討磁共振功能影像活體檢測(cè)結(jié)腸癌耐藥性的可能。

1 材料與方法

1.1 耐藥與不耐藥結(jié)腸癌荷瘤鼠模型制作

1.1.1 人類結(jié)腸癌SW480對(duì)5-FU耐藥細(xì)胞細(xì)胞系SW480/5-FU的制作：人類結(jié)腸癌SW480細(xì)胞系購(gòu)自中山大學(xué)細(xì)胞庫(kù)，用RPMI-1640培養(yǎng)液(含10%胎牛血清/杭州四季青公司、100U/ml青霉素和100μg/ml鏈霉素的培養(yǎng)基)置37℃，5%CO2孵箱中培養(yǎng)。采用5-FU持續(xù)接觸、濃度遞增誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞耐藥，連續(xù)培養(yǎng)5個(gè)月，至結(jié)腸癌細(xì)胞能在6μg/ml的5-FU培養(yǎng)液中穩(wěn)定生長(zhǎng)，制成耐藥腫瘤細(xì)胞株，即SW480/5-FU。

1.1.2 荷瘤鼠模型制作：參照前期研究的結(jié)腸癌荷瘤鼠模型組織塊移植方法[1-3]。

先行種瘤鼠制作，在麻醉狀態(tài)下取出種瘤鼠上的腫瘤快，在含慶大霉素的無(wú)菌生理鹽水中分離出腫瘤非壞死部分，切成1～2mm3左右碎塊，再分別移植到外表健康裸鼠雙側(cè)大腿根部皮下(5只，右側(cè)SW450，左側(cè)SW480/5-Fu)，模型鼠養(yǎng)殖于SPF級(jí)實(shí)驗(yàn)室。

1.2 荷瘤鼠的MR成像 荷瘤鼠腫瘤長(zhǎng)至1.5cm以上時(shí)，在SIEMENSVerio-3.0T超導(dǎo)型磁共振成像系統(tǒng)上用配套腕關(guān)節(jié)專用正交線圈進(jìn)行以下序列及1H-MRS數(shù)據(jù)采集。

(1)T 2 W I快速自旋回波(TSE)脂肪抑制(SPIR)序列：TR/TE=4500ms/82ms，層厚=2mm，間隔=0，F(xiàn)OV=128mm，NAS=4，SENSE加速因子=2，采集矩陣=128×128，重建矩陣=512×512，行軸位成像。

(2)1H-MRS：采用以下三種模式采集，均采用PRESS序列，譜線帶寬＝1 0 0 0 H z，翻轉(zhuǎn)角=90°，采集MRS數(shù)據(jù)前均手動(dòng)勻場(chǎng)、抑水。多體素三維容積采集(3-demensional multi voxel，3DMV)：TR/TE=1700ms/135ms，層厚=2mm(根據(jù)腫瘤大小調(diào)整)，間隔=0，F(xiàn)OV=60mm，VOI=30mm，采集體素邊長(zhǎng)＝10mm，NAS=8，采集矩陣=128×128，重建矩陣=512×512。

采集的1H-MRS數(shù)據(jù)使用相同工作站的專用軟件處理，生成腫瘤的MRS譜線圖，自動(dòng)計(jì)算出所測(cè)代謝物的峰高、波峰下面積及其與肌酸(Cr)的峰高比值及峰下面積比值。被檢測(cè)的代謝物有膽堿、肌酸、谷氨酸、脂質(zhì)、乳酸、肌醇。

1.3 腫瘤標(biāo)本的實(shí)驗(yàn)研究荷瘤鼠完成上述MR成像后腹腔注射過(guò)量水合氯醛處死，完整取出腫瘤，測(cè)量大小，一分為二，一半放入緩沖甲醛液固定、石臘包埋并且片(TUNNEL研究)，另一半低溫(-300C以下)保存(耐藥蛋白檢測(cè))。

1.3.1 腫瘤細(xì)胞凋亡檢測(cè)：TUNEL細(xì)胞凋亡原位檢測(cè)試劑盒(南京凱基生物科技發(fā)展有限公司)檢測(cè)腫瘤組織切片的腫瘤細(xì)胞凋亡。

TUNNEL結(jié)果分析：病理切片由兩位病理科醫(yī)師分別按同一標(biāo)準(zhǔn)在顯微鏡下閱片分析，取兩位醫(yī)師所采集的均值為病理的檢測(cè)最終結(jié)果數(shù)值。TUNNEL檢測(cè)陽(yáng)性細(xì)胞為細(xì)胞核呈棕黃色，在×100視野下觀察并估算切片內(nèi)TUNNEL染色陽(yáng)性細(xì)胞與形態(tài)為死亡細(xì)胞的腫瘤細(xì)胞面積的百分比為腫瘤凋亡范圍。

1.3.2 耐藥蛋白表達(dá)：用Western blot檢測(cè)。Phototope? -HRP Western blot檢測(cè)試劑盒購(gòu)自Cell Signaling technology公司，鼠抗β－actin：BM0627購(gòu)自Baster公司，鼠抗SC-6243購(gòu)自Santa Crag Bictech 公司，鼠抗PKC、MDR1、MRP1抗體購(gòu)自Bioss公司。

最終膠體的顯影結(jié)果經(jīng)掃描儀掃入電腦以JPGF格式保存，用Imagepro-plus 6.0版自動(dòng)圖像分析系統(tǒng)處理自動(dòng)計(jì)算每組樣本每個(gè)條帶光密度(IOD)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 所采集的數(shù)據(jù)采用SPSS13.0版統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理，數(shù)據(jù)用 數(shù)據(jù)用表示，數(shù)據(jù)符合正態(tài)分布兩組之間比較用t檢驗(yàn)，數(shù)據(jù)符合正態(tài)分布相關(guān)性分析采用Pearson相關(guān)檢驗(yàn)，(P＜0.05)示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

表1 耐藥組與不耐藥組腫瘤1H-MRS檢測(cè)面積定量結(jié)果（±s）

表1 耐藥組與不耐藥組腫瘤1H-MRS檢測(cè)面積定量結(jié)果（±s）

組別（n=5） cho lac Lip mI/cr耐藥組 3.39±1.75 1.31±0.96 1.41±0.82 2.77±0.19不耐藥組 1.12±0.47 0.37±0.28 0.41±0.25 1.26±0.18 t 3.537 4.090 5.053 -2.323 P 0.002 0.001 0.002 0.032

表2 不同組腫瘤凋亡情況比較（±s）

表2 不同組腫瘤凋亡情況比較（±s）

組別 凋亡范圍SW480組 0.285±0.026 SW480/5-FU組 0.295±0.015 t 1.091 P 0.325

表3 耐藥組與不耐藥組耐藥蛋白表達(dá)RIOD值的比較（±s）

表3 耐藥組與不耐藥組耐藥蛋白表達(dá)RIOD值的比較（±s）

組別 p-gp MRP1 PKC SW480 0.513±0.077 0.835±0.058 0.807±0.088 SW480/5-FU 1.211±0.158 1.155±0.150 1.078±0.102 t -7.078 -3.814 -7.331 P 0.002 0.019 0.002

2 結(jié) 果

2.11H-MRS對(duì)耐藥及不耐藥腫瘤的評(píng)價(jià) 不耐藥組cho、lac、Lip峰面積及mI峰/cr面積比明顯小于耐藥組，兩者差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05，表1)。

2.2 耐藥組與不耐藥組腫瘤凋亡TUNNEL評(píng)價(jià) 耐藥組與不耐藥組裸鼠腫瘤組織均見(jiàn)凋亡細(xì)胞(圖1-2)，兩組腫瘤組織細(xì)胞凋亡范圍的差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(表2，P＞0.05)。

2.3 Western Blot檢測(cè)耐藥組與不耐藥組中P-gp、MRP1、PKC蛋白表達(dá) 免疫印跡檢測(cè)耐藥組與不耐藥組PKC、P-gp、MRP1表達(dá)量均較不耐藥組增加(圖3)，兩者差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05，表3)。

2.4 不同評(píng)價(jià)方法的相關(guān)性分析(Pearson相關(guān)分析)

2.4.1 耐藥蛋白表達(dá)與腫瘤耐藥性相關(guān)性：腫瘤耐藥性與腫瘤PKC、P-gp、MRP1蛋白表達(dá)光密度正相關(guān)性(r、P：0.870,0.001)、(r、P：0.801,0.005)、(r、P：0.870,0.001)。

2.4.21H-MRS檢測(cè)代謝物與腫瘤耐藥性及相關(guān)蛋白表達(dá)相關(guān)性分析：代謝物cho、Lac、Lip、mI/cr與腫瘤耐藥性呈正相關(guān)性(r、P：0.870,0.001)；cho面積與腫瘤PKC表達(dá)量呈正相關(guān)(r、P：0.745,0.013)，與腫瘤P-gp表達(dá)量呈正相關(guān)(r、P：0.782，0.008)。

圖1-2 SW480/5-FU組腫瘤細(xì)胞凋亡（圖1）與SW480組腫瘤細(xì)胞凋亡（圖2）。圖3 耐藥組與不耐藥組PKC、P- gp、MRP1表達(dá)（Western Blot）。

3 討 論

目前能確定參與腫瘤耐藥機(jī)制調(diào)節(jié)的蛋白有p糖蛋白(P-glycoprotein，P-gp)、多藥耐藥相關(guān)蛋白1(multidrug r e s i s t a n c e-a s s o c i a t e d protein，MRP1)、蛋白激酶C(protein kinase C，PKC)。腫瘤組織產(chǎn)生耐藥前后，組織內(nèi)代謝物的變化對(duì)耐藥檢測(cè)可能起到一定的作用。但生物學(xué)方法的檢測(cè)需要腫瘤組織離體標(biāo)本，腫瘤組織斷血及相應(yīng)的生物學(xué)處理過(guò)程，已使腫瘤本身的代謝產(chǎn)生巨大變化，代謝物的成份已不能真實(shí)反應(yīng)腫瘤耐藥狀態(tài)。因此，在活體狀態(tài)下檢測(cè)腫瘤耐藥前后代謝物變化尚可合理反應(yīng)腫瘤的生物學(xué)改變，也可能為耐藥性判斷提供有價(jià)值的生物學(xué)信息。

磁共振頻譜(MRS)具有選擇性，非創(chuàng)傷性，且無(wú)破壞地確定一些化合物是否存在及相對(duì)、絕對(duì)含量，因此MRS對(duì)于檢查組織和器官的細(xì)胞代謝物是一種非常重要的方法[4]。組織功能紊亂或疾病可引起代謝物變化，利用MRS可檢測(cè)到這種變化，可探索耐藥腫瘤、不耐藥腫瘤組織的代謝物差別。課題組前期研究成功使用臨床醫(yī)用磁共振對(duì)結(jié)腸癌荷瘤鼠腫瘤進(jìn)行活體1H-MRS檢測(cè)[1-2]。

本研究采用5-FU持續(xù)接觸、濃度遞增誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞耐藥，所獲得的能在5-FU濃度為6μg/ml的培養(yǎng)液中穩(wěn)定生長(zhǎng)的人類結(jié)腸癌耐藥細(xì)胞株SW480/5-FU，同時(shí)將SW480/5-FU、親本SW480分別種植于同一只裸鼠大腿根部左右兩側(cè)，建立相應(yīng)的耐藥、不耐藥同體結(jié)腸癌荷瘤鼠模型，兩種腫瘤組織對(duì)比，兩者腫瘤細(xì)胞凋亡范圍無(wú)差別，耐藥腫瘤組織P-gp、MRP1、PKC的表達(dá)明顯增高，說(shuō)明這三種耐藥蛋白是SW480對(duì)5-Fu耐藥形成的參與者。

1H-MRS檢測(cè)顯示，SW480/5-FU荷瘤鼠組腫瘤組織cho、lac、Lip峰面積及mI峰/cr面積比明顯高于SW480組(P＜0.05)。

Cho峰位于3.21ppm，活體1HMRS的膽堿(Choline,Cho)峰由磷酸膽堿、葡萄糖膽堿、葡萄糖磷酸乙醇胺、磷酸乙醇胺和自由膽堿組成，反映的是細(xì)胞膜合成有關(guān)的磷酸化的信息，其參數(shù)改變是細(xì)胞增殖狀態(tài)的一指標(biāo)。磷酸膽堿的含量可反映腫瘤抑制中起重要作用的信號(hào)通路的改變[5]。本研究結(jié)果顯示cho面積與腫瘤PKC表達(dá)及腫瘤膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白P-gp表達(dá)呈正相關(guān)。推測(cè)耐藥腫瘤細(xì)胞代謝可能進(jìn)一步加快，細(xì)胞膜合成與分解加速，兩者均可造成Cho含量增加。

乳酸(Lac)峰位于1.33ppm處，在低氧、炎癥、酵解增加等可產(chǎn)生大量的乳酸產(chǎn)物的情況下出現(xiàn)。腫瘤的Warburg效應(yīng)使腫瘤細(xì)胞即使在供氧充足的條件下，糖酵解代謝也明顯活躍[6]，而糖酵解的最終代謝產(chǎn)物是乳酸。腫瘤細(xì)胞酸性代謝產(chǎn)物增加，細(xì)胞外的Ph(PHe)和細(xì)胞內(nèi)酸性囊泡內(nèi)的PH值(PHv)明顯低于正常細(xì)胞[7]，腫瘤細(xì)胞外的酸性有效阻斷藥物進(jìn)入細(xì)胞或中和藥物，以及將藥物隔絕在酸性的細(xì)胞囊泡中以阻止到達(dá)它們的細(xì)胞作用靶點(diǎn)，改變藥物在細(xì)胞內(nèi)外的分布[8]，從而降低其對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷作用。本研究結(jié)果顯示SW480/5-FU組織中的Lac含量明顯高于不耐藥的SW480，因此，活體1H-MRS檢測(cè)的Lac變化可從活體組織酸堿度的層面作為腫瘤耐藥性監(jiān)測(cè)的分子標(biāo)記物。

Lip峰位于1.3和0.9ppm處，磁共振頻譜檢測(cè)出的Lip是游離的脂質(zhì)分子，主要是由細(xì)胞膜破壞引起細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)分子流出所致。許多細(xì)胞過(guò)程如增殖、炎癥、惡變、壞死、生長(zhǎng)抑制、凋亡與MRS所見(jiàn)的脂肪水平改變有關(guān)，細(xì)胞內(nèi)的脂質(zhì)體是引起上述改變最重要的因素；飽和脂質(zhì)共振峰與壞死有關(guān)[9]，而膠質(zhì)瘤中多聚不飽和脂肪酸(PUFA)共振峰在凋亡期間增高[10]，提示細(xì)胞死亡機(jī)制對(duì)MRS探測(cè)細(xì)胞脂質(zhì)有不同的影響。本研究發(fā)現(xiàn)SW480/5-FU組織中的Lip含量明顯高于不耐藥的SW480，但兩者腫瘤凋亡范圍差別不明顯。其原因需進(jìn)一步探討。

Cr峰分別存在于3.02ppm和3.94ppm處，由肌酸、磷酸肌酸以及較低水平的r-氨基丁酸、賴氨酸、谷胱甘肽組成，總肌酸可以作為細(xì)胞完整性的可靠標(biāo)志，所有與貯存能量有關(guān)的各種代謝物中均可存在，反映細(xì)胞代謝與能量平衡。因其含量在各種病理狀態(tài)下均較穩(wěn)定，波峰比較穩(wěn)定，因此Cr常常作為內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)比較各種代謝產(chǎn)物的增高或降低[11]。肌醇(mI)由磷脂酰肌醇和二磷酸磷脂酰肌醇的前體物組成，波峰位于3.56ppm處。磷脂酰肌醇是G蛋白偶聯(lián)受體的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中的一種途徑，參與對(duì)激素敏感的神經(jīng)傳導(dǎo)和PKC的調(diào)節(jié)。肌醇與膽堿一樣對(duì)脂肪有親和性，肌醇和膽堿結(jié)合形成卵磷脂，有助于細(xì)胞膜轉(zhuǎn)運(yùn)功能[12]。本研究提示SW480/5-FU組織中mI/Cr較不耐藥的SW480高，也可能為活體檢測(cè)腫瘤耐藥性的分子標(biāo)記物。

本研究主要探討1H-MRS活體檢測(cè)腫瘤耐藥性的可能，僅選取三個(gè)經(jīng)典的耐藥基因表達(dá)蛋白作為SW480/5-Fu為耐藥細(xì)胞的佐證, P-gp、PKC與MRP1與Cho、Lac、LIP、mI/Cr的升高之間的調(diào)節(jié)機(jī)制尚需進(jìn)一步研究。

總之，本研究誘導(dǎo)的對(duì)5-Fu耐藥的結(jié)腸癌的PKC、P-gp、MRP1等耐藥基因蛋白較親本不耐藥結(jié)腸癌明顯高表達(dá)，1H-MRS活體觀察到cho、lac、Lip及mI峰/cr面積比耐藥較不耐藥腫瘤組織明顯升高，因此，1H-MRS檢測(cè)的代謝物變化有可能有助于利用1H-MRS活體檢測(cè)結(jié)腸癌耐藥性改變。

[1]謝琦,江新青,陳明旺,等.人類結(jié)腸癌裸鼠移植瘤模型制作及臨床1.5TMR成像儀的1H-MRS研究[J].中國(guó)CT和MRI雜志,2008,16(1):1-5.

[2]謝琦,張鼎旋,梁碧玲,等.1H-MRS活體檢測(cè)rAd/P53治療人類結(jié)腸癌荷瘤裸鼠腫瘤代謝物變化[J].臨床醫(yī)學(xué)工程,2012,19(9):1460-1462.

[3]Xie Q,Bi-Ling Liang,Yan-Heng Wu, et al. Synergistic anticancer effect of rAd/P53 combined with 5-fluorouracil or iodized oil in the early therapeutic response of human colon cancer in vivo[J]. GENE,2012,499(2):303-308.

[4]吳國(guó)昌,李偉,胡茂清,等.1H-MRS在乳腺腫瘤中的應(yīng)用研究[J].中國(guó)CT和MRI雜志,2012,10(4):47-49.

[5]Beloueche-Babari M, Arunan V, Troy H, et al. Histone d e a c e t y l a s e i n h i b i t i o n increases levels of choline kinase α and phosphocholine facilitating noninvasive imaging in human cancers[J]. Cancer Res,2012,72(4):990-1000.

[6]Vaitheesvaran B, Xu J, Yee J, et al. The Warburg effect: a balance of flux analysis[J]. Metabolomics,2015,11(4):787-796.

[7]Riemann A,Ihling A, Schneider B, et al. Impact of extracellular acidosis on intracellular pH control and cell signaling in tumor cells[J].Adv Exp Med Biol,2013,789:221-8.

[8]Elf S E, Chen J. Targeting g l u c o s e m e t a b o l i s m i n patients with cancer[J]. Cancer,2014,120(6):774-780.

[9] Zoula S, Herigault G, Ziegler A, et al. Correlation between the occurrence of 1H-MAS lipid signal, necrosis and lipid droplets during C6 rat gliomas development[J]. NMR Biomed, 2003,15(4):199-212.

[10]Griffin JL, Lehtimaki KK, Valonen PK, et al. Assignment of 1H NMR visible polyunsaturated fatty acids in BT4C gliomas undergoing canciclovir-thymidine kinase gene therapy-induced programmed cell death[J].Cancer Res,2003, 63(12):3195-3201.

[11]Kousi E, Tsougos I, Tsolaki E, et al. Spectroscopic evaluation of glioma grading at 3T: the combined role of short and long TE[J].Scientific World Journal. 2012,2012(4):5461-5471.

[12]Goldman SM, Nunes TF, Melo HJ, et al. Glutamine/ glutamate metabolism studied with magnetic resonance spectroscopic imaging for the characterization of adrenal nodules and masses[J]. Biomed Res Int,2013(3):2013:835385-835385.

(本文編輯: 張嘉瑜)

In Vivo Detection of the Drug resistance of Human Colon Cancer in Mice with Magnetic Resonance Spectrum*

XIE Qi, YANG Yi-ming, WU Min-yi, et al．
Department of Medical Imaging, Nan Sha Center Hospital, Guangzhou Municipal First People's Hospital, Guangzhou Medical College, Guangzhou 511457, Guangdong Province, China

ObjectiveTo exploration the feasibility to detect the drug resistance of human colon cancer in mice with magnetic resonance spectrum in vivo．MethodsNude mice with human colon cancer SW480(drug response) and 5 nude mice with SW480/5-Fu(5-Fu resistance) were given1H-MRS examinations when the diameters of tumor were over 1．5 centimeters． Then these mouse models were sacrificed． Their tumors were removed and detected the protein expression of PKC, P-gp and MPR1 (Western blot), apoptosis (TUNNEL)． The correlation between metabolites detected with1H-MRS and tumor drug resistance and the protein expression of PKC, P-gp and MPR1 (Western blot), tumor apoptosis were analyized．ResultsThe the area of cho, lac and Lip of tumors in SW480 group were significantly higher than that in SW480/5-Fu group (P＜0．05)． The protein expression of PKC, P-gp and MPR1 in SW480/5-Fu group were significantly higher than that of SW480 group (P＜0．05)． In the TUNNEL section, apoptotic cell were observed in two groups, and there is no significant difference between two groups (P＞0．05)． The area of cho, lac and Lip of tumors was positively correlated with drug resistance (r, P:0．870,0．001)． The the area of cho has a positive correlation with the protein expression of PKC (r, P:0．745,0．013), P-gp (r, P:0．782,0．008)．ConclusionThe change of metabolites cho, lac and Lip detected with1H - MRS has the potential to help detection of colon cancer drug resistance with MR in vivo．

1H-Magnetic Resonance Spectrum; Human Colon Cancer; Multiple Drug Resistance; Xenograft Model

R445.2; R735.3+5

A

廣東省自然科學(xué)基金，2015A03013732

10.3969/j.issn.1672-5131.2017.02.030

2016-12-27

謝 琦