電針對(duì)人膝骨關(guān)節(jié)炎關(guān)節(jié)液中TGF-β1表達(dá)的影響

熊林波 白 潔 劉 雙

（綿陽市中心醫(yī)院康復(fù)醫(yī)學(xué)科，四川綿陽 646000）

骨關(guān)節(jié)炎（Osteoarthritis，OA），曾被命名為肥大性骨節(jié)炎，萎縮性關(guān)節(jié)炎，骨關(guān)節(jié)病等，后隨著認(rèn)識(shí)的加深又稱其為退化性關(guān)節(jié)炎[1]。引起OA的因素一般認(rèn)為跟年齡，性別，遺傳，發(fā)育，代謝以及一些創(chuàng)傷有關(guān)。老年人群中發(fā)病較多，女性多于男性[2]。OA主要累及滑膜關(guān)節(jié)，臨床以膝關(guān)節(jié)OA多見。細(xì)胞因子作為生理活動(dòng)的直接參與者和調(diào)控者自然成為了研究的熱點(diǎn)，轉(zhuǎn)化生長因子-β1（transforming growth factor-β1，TGF-β1）就是其中備受關(guān)注的細(xì)胞因子之一。本實(shí)驗(yàn)通過對(duì)比治療前后關(guān)節(jié)液中TGF-β1濃度變化探討電針對(duì)膝關(guān)節(jié)OA的治療機(jī)制，結(jié)果如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

40名患者均來自本院康復(fù)針灸門診，其中男17例，女23例，年齡44～68歲，病程最短5個(gè)月，最長8年，平均3.2年。采用隨機(jī)數(shù)字表發(fā)分為對(duì)照組及電針治療組。

1.2 診斷標(biāo)準(zhǔn)

參照1995年美國風(fēng)濕病協(xié)會(huì)骨關(guān)節(jié)炎診斷標(biāo)準(zhǔn)：（1）近1月大多數(shù)時(shí)間有膝關(guān)節(jié)疼痛；（2）X攝片有骨贅形成；（3）關(guān)節(jié)液檢查符合骨關(guān)節(jié)炎；（4）年齡≥38歲；（5）晨僵≤ 30 min；（6）有骨摩擦音。具備（1）（2）或（1）（3）（5）（6）或（1）（4）（5）（6）即可診斷為骨關(guān)節(jié)炎。

1.3 納入標(biāo)準(zhǔn)

符合上述骨關(guān)節(jié)炎診斷標(biāo)準(zhǔn)，患者最近3月內(nèi)未進(jìn)行過膝關(guān)節(jié)針灸治療及其他針對(duì)OA的對(duì)癥治療。

1.4 排除標(biāo)準(zhǔn)

（1）合并有感染或發(fā)熱的患者；（2）關(guān)節(jié)明顯畸形或出現(xiàn)關(guān)節(jié)強(qiáng)直的患者；（3）合并其他關(guān)節(jié)疾病或關(guān)節(jié)損傷的患者；（4）合并嚴(yán)重心腦血管疾病患者；（5）年齡＞70歲，病程＞10年；（6）不能耐受針灸及治療依從性差者；（7）精神異常者。

2 方法

2.1 關(guān)節(jié)液抽取

兩組患者均在入選后即抽取關(guān)節(jié)灌洗液。抽出的關(guān)節(jié)灌洗液分別注入EP管，編號(hào)對(duì)應(yīng)，于-70℃冰凍保存待測(cè)。

2.2 電針治療

電針治療組取“梁丘”、“內(nèi)膝眼”、“血?！薄ⅰ盃俦恰?、“阿是穴”進(jìn)針后，連上電針儀，選擇4 Hz疏波，20 Hz密波，脈沖寬度0.5 ms，1次/d，每次20 min，連續(xù)治療10天。除此之外不行其他治療。對(duì)照組不行任何治療，僅作為療效對(duì)照。10 d治療后，再次行關(guān)節(jié)液沖洗液的抽取。

2.3 TGF-β1的檢測(cè)

本實(shí)驗(yàn)采用雙抗夾心ABC-ELISA法檢測(cè)關(guān)節(jié)液中的TGF-β1濃度。具體實(shí)驗(yàn)步驟按照試劑盒說明標(biāo)準(zhǔn)ELISA進(jìn)行，檢測(cè)記錄吸光值（OD值）

2.4 計(jì)算結(jié)果

所有OD值減除去空白值后再計(jì)算結(jié)果。以標(biāo)準(zhǔn)品2 000、1 000、500、250、125、62.5、31.2、0 pg/mL 為橫 坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，畫出標(biāo)準(zhǔn)曲線。再根據(jù)所測(cè)樣品的OD值在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出相應(yīng)TGF-β1濃度。所得數(shù)據(jù)進(jìn)行組間t檢驗(yàn)。

2.5 數(shù)據(jù)分析

所有數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，用SPSS 17.0對(duì)治療前后兩組患者膝關(guān)節(jié)液中TGF-β1濃度數(shù)據(jù)進(jìn)行t檢驗(yàn)。

3 結(jié)果

對(duì)治療后兩組數(shù)據(jù)進(jìn)行t檢驗(yàn)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），各組治療前后數(shù)據(jù)進(jìn)行t檢驗(yàn)分析，對(duì)照組治療前后TGF-β1含量差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=0.86，P＞0.05）。電針治療組治療前后TGF-β1含量差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=22.70，P＜ 0.05），見表1。

表 1 兩組患者膝關(guān)節(jié)液中TGF-β1濃度比較（x±s）

4 討論與結(jié)論

4.1 骨關(guān)節(jié)炎

OA是機(jī)械性和生物性因素相互作用，使關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞、細(xì)胞外基質(zhì)和軟骨下骨合成與降解的正常進(jìn)行失去平衡的結(jié)果，病理學(xué)上則主要表現(xiàn)為滑膜的炎癥，軟組織的纖維化，軟骨的侵蝕以及軟骨下骨硬化，骨贅形成等[3]。引起OA的因素太多，其中涉及到許多細(xì)胞類型，細(xì)胞外基質(zhì)，細(xì)胞因子，信號(hào)通路，基因表達(dá)的改變，比如受體配體途徑：TGF-β1，WNT3a等；信號(hào)肽分子：轉(zhuǎn)化生長因子-β信號(hào)蛋白（Smads），β-catenin，HIF-2a等；酶類：基質(zhì)金屬蛋白酶13（MMP13），ADAMTS4/5等[4]。有研究指出關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞是OA發(fā)病的主要細(xì)胞介質(zhì)，這也是導(dǎo)致OA關(guān)節(jié)軟骨退化明顯而滑膜炎癥相對(duì)局限的主要原因[5]。

4.2 電針治療對(duì)膝關(guān)節(jié)OA的作用

從生理學(xué)上來看，電針通過低頻脈沖電流刺激穴位，使肌肉一收一縮，起到泵的作用，從而改善局部血液循環(huán)，有利于滲出液的吸收，有利于關(guān)節(jié)面軟骨的修復(fù)[6]。本實(shí)驗(yàn)采用的是G9805-C型低頻電子脈沖治療儀，參數(shù)選擇4 Hz疏波，20 Hz密波，脈沖寬度0.5 ms，每天治療一次，每次20 min，總共治療10 d。這也是目前臨床電針治療各種疼痛性疾病常采用的方案之一。

4.3 TGF-β1表達(dá)的變化

TGF-β1是一種同源二聚體蛋白，分子量約為25 kD，有耐熱，抗酸，堿的特性。在OA關(guān)節(jié)中，滑膜的襯里細(xì)胞分泌的TGF-β1比其他部位要多[7]，在骨贅中，TGF-β1則過度表達(dá)[8]。在生理狀態(tài)下，TGF-β1的表達(dá)很少，在OA中TGF-β1則過度表達(dá)。造成TGF-β1過度表達(dá)的原因很多，一方面是軟骨損傷的生理需求增加，另一方面是OA中的一些炎性細(xì)胞因子能刺激TGF-β1過度表達(dá)。有實(shí)驗(yàn)就證實(shí)IL-1β能通過激活與TGF-β1基因啟動(dòng)子連接的AP-4，AP-1而使TGF-β1過度表達(dá)[9]。

本實(shí)驗(yàn)在治療前對(duì)照組和電針組的TGF-β1表達(dá)無差異，治療后對(duì)照組TGF-β1的表達(dá)與治療前相比未出現(xiàn)明顯變化（P＞0.05）。電針組治療后，與本組治療前及對(duì)照組比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05），說明電針確實(shí)能降低膝OA關(guān)節(jié)液中TGF-β1的異常表達(dá)，達(dá)到了治療目的。

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