藏藥綠蘿花水提物對(duì)成纖維細(xì)胞線粒體抗氧化作用的研究

韓金潭，孫翠翠，丁淑梅，顧員印，劉 群*

(1.西南民族大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，四川成都 610041；2.四川金科藥業(yè)有限公司，四川成都 610100)

藏藥綠蘿花水提物對(duì)成纖維細(xì)胞線粒體抗氧化作用的研究

韓金潭1,2，孫翠翠1，丁淑梅1，顧員印1，劉 群1*

(1.西南民族大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，四川成都 610041；2.四川金科藥業(yè)有限公司，四川成都 610100)

為探討不同濃度的綠蘿花制劑對(duì)線粒體的抗氧化作用及毒理作用，以小鼠胚胎成纖維細(xì)胞及其線粒體為研究對(duì)象，在最大無毒作用濃度(TC0)的基礎(chǔ)上設(shè)計(jì)3個(gè)濃度藥物組，在TC0下設(shè)計(jì)6個(gè)濃度藥物組，以成纖維細(xì)胞線粒體膜電位(MMP)和線粒體總活性氧含量(ROS)為檢測(cè)指標(biāo)，在4個(gè)不同作用時(shí)間點(diǎn)，研究綠蘿花對(duì)成纖維細(xì)胞線粒體的影響。結(jié)果表明，綠蘿花制劑對(duì)鼠胚成纖維細(xì)胞(MEF)的TC0為0.25 g/mL，但ROS已急劇上升，MMP下降；綠蘿花濃度為0.03 g/mL時(shí)，抗氧化能力最強(qiáng)，隨著濃度的上升(0.03 g/mL～0.25 g/mL)，線粒體抗氧化能力減弱或消失；隨著給藥濃度的升高，細(xì)胞凋亡現(xiàn)象出現(xiàn)趨勢(shì)明顯，濃度高于TC0時(shí)，表現(xiàn)出毒性作用，濃度升高，毒性增大。綠蘿花干膏制劑0.03 g/mL(以生藥含量計(jì)算)具有抵抗由H2O2引起的MEF線粒體MMP下降和ROS的升高的功能，表現(xiàn)出一定的抗氧化能力和阻滯細(xì)胞凋亡發(fā)生的作用；TC0及之上濃度具有細(xì)胞毒性作用。

綠蘿花；成纖維細(xì)胞；線粒體；膜電位；活性氧

藏藥綠蘿花為天南星科喜林芋屬植物綠蘿花的干燥花蕾，為西藏特有的二級(jí)保護(hù)珍貴藥材，民間習(xí)以泡水飲用，用以糖尿病、高血壓、高血脂、冠心病及各種血管脈管炎癥等的防治。目前關(guān)于綠蘿花的研究報(bào)道較少，僅局限于幾種化學(xué)成分提取工藝研究[1]；藥理研究表明綠蘿花具有增強(qiáng)機(jī)體對(duì)糖的耐受能力、抑制機(jī)體對(duì)葡萄糖的吸收[2-3]；降低糖尿病大鼠血糖含量，改善高血糖脂模型大鼠血糖、血清總膽固醇、低密度脂蛋白、動(dòng)脈粥樣硬化指數(shù)的異常，降低空腹血糖指標(biāo)、升高胰島素含量等作用[4-5]；增強(qiáng)機(jī)體免疫功能和抗腫瘤生長的作用[6]；增強(qiáng)機(jī)體組織器官抗氧化能力的作用[7-10]。本研究以小鼠胚胎成纖維細(xì)胞及其線粒體為研究對(duì)象，在最大無毒濃度基礎(chǔ)上下設(shè)計(jì)不同濃度藥物組，以成纖維細(xì)胞線粒體膜電位(MMP)和線粒體總活性氧含量(ROS)為檢測(cè)指標(biāo)，在不同作用時(shí)間點(diǎn)，研究綠蘿花對(duì)成纖維細(xì)胞線粒體的影響。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 懷孕母鼠(由成都達(dá)碩生物科技有限公司提供，批號(hào)：0014312)。

1.1.2 試驗(yàn)藥材 綠蘿花(Scindapsusaureus)干燥花蕾，由四川宇妥藏藥藥業(yè)有限責(zé)任公司提供，由西南大學(xué)園藝園林學(xué)院鑒定(鑒定人:李先源)，室溫密封干燥保存。

1.1.3 試劑與儀器 細(xì)胞存活率、線粒體膜電位檢測(cè)試劑盒,上海碧云天生物科技有限公司產(chǎn)品產(chǎn)品；BB15型CO2培養(yǎng)箱，THERMO公司產(chǎn)品；IX71型倒置顯微鏡，OLYMPUS公司產(chǎn)品；DU800型熒光分光光度計(jì)，BECKMAN公司產(chǎn)品。

1.2 方法

1.2.1 綠蘿花干膏制劑的制備 參照康蓮蓮[11]等水提工藝制備綠蘿花干膏制劑：浸泡0.5 h、20倍加水量、1 h煎煮時(shí)間、煎煮3次，制備干膏劑，干膏得率23.2 %，4℃冰箱保存。PBS緩沖液制成相當(dāng)于生藥100%濃度的綠蘿花干膏制劑溶液，現(xiàn)配現(xiàn)用。

1.2.2 TC0測(cè)定 先進(jìn)行鼠胚成纖維細(xì)胞(MEF)的制備及培養(yǎng)，當(dāng)MEF傳代培養(yǎng)3次后進(jìn)行計(jì)數(shù)并稀釋到細(xì)胞量約為4×106個(gè)/mL～6×106個(gè)/mL，分于25 cm細(xì)胞培養(yǎng)瓶中，37℃恒溫箱中培養(yǎng)；將單層的細(xì)胞消化下來并接入96孔細(xì)胞培養(yǎng)板內(nèi)培養(yǎng)，長滿單層后，分為試驗(yàn)組和對(duì)照組。試驗(yàn)組：棄原培養(yǎng)液，分別加入生藥含量濃度為100%、50%、25%、12.5%、6.25%綠蘿花藥液100 μL，每濃度復(fù)6孔。對(duì)照組：不進(jìn)行任何處理。置37℃、5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3 d后，鏡下觀察，與對(duì)照組細(xì)胞相比無退變、變形和脫落的藥物稀釋度為綠蘿花對(duì)MEF的TC0。

1.2.3 TC0以下不同濃度綠蘿花制劑對(duì)MEF的影響 陽性對(duì)照組：無菌條件下，將不同濃度藥物培養(yǎng)液(以TC0為1個(gè)濃度，向下作2倍梯度稀釋成6個(gè)不同濃度)接入已長滿單層細(xì)胞的25 cm細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，每瓶約1 mL，以鋪滿瓶底為宜，每濃度重復(fù)7瓶，37℃孵育2 h后，棄含藥培養(yǎng)液，20% H2O2作用5 min；陰性對(duì)照組：不進(jìn)行任何處理。同時(shí)消化收集陰性、陽性對(duì)照組細(xì)胞，離心，棄上清，PBS洗1次，進(jìn)行膜電位及ROS的測(cè)定。

1.2.3.1 MMP的測(cè)定 陽性對(duì)照組：加入凋亡誘導(dǎo)劑0.1 mmol/L纈氨霉素，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡；陰性對(duì)照組：不做處理。陰性、陽性對(duì)照組同時(shí)進(jìn)行染色處理，按照線粒體膜電位檢測(cè)試劑盒操作步驟，用熒光分光光度計(jì)檢測(cè)分析。

1.2.3.2 ROS的測(cè)定 參考總活性氧檢測(cè)試劑盒操作步驟，收集不同濃度藥物作用后的細(xì)胞及陰性、陽性對(duì)照細(xì)胞，用熒光分光光度計(jì)(熒光酶標(biāo)儀)定量檢測(cè)各組細(xì)胞熒光強(qiáng)度(DCFH-DA熒光探針激發(fā)波長488 nm，發(fā)射波長525 nm)。

1.2.4 TC0以上不同濃度綠蘿花對(duì)MEF的影響 以TC0為1個(gè)濃度，向上設(shè)3個(gè)2倍濃度梯度的綠蘿花藥液濃度。誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡處理方法、MMP及ROS的測(cè)定方法同1.2.4。

1.2.5 不同作用時(shí)間下綠蘿花對(duì)MEF的影響 綠蘿花干膏用細(xì)胞維持液(PBS)溶解稀釋為2TC0、1TC0、1/2TC0三個(gè)濃度，參照1.2.4的處理方法，37℃分別孵育0.5、1、1.5、2 h后，棄含藥培養(yǎng)液，消化、清洗、收集細(xì)胞(連上清一起收集)，進(jìn)行MMP及ROS的測(cè)定。

2 結(jié)果

2.1 TC0測(cè)定結(jié)果

綠蘿花干膏對(duì)MEF的最大無毒作用濃度為25%，即TC0=0.25 g/mL。

2.2 TC0下濃度對(duì)MEF的影響

TC0下不同濃度綠蘿花對(duì)MEF的MMP、ROS影響的統(tǒng)計(jì)結(jié)果見表1。

表1表明，小鼠成纖維細(xì)胞線粒體膜電位(MMP)在H2O2作用下急劇下降，極顯著低于陰性對(duì)照組和各藥物組(P<0.01)，各藥物組的MMP雖然低于正常細(xì)胞的MMP，但卻極顯著高于陽性對(duì)照組(P<0.01)；2-2～2-5的藥物組MMP無顯著性差異(P>0.05)，但其中2-3藥物組的MMP顯著高于2-1(P<0.05)，極顯著高于20藥物組(P<0.01)。

表1 TC0下不同濃度綠蘿花對(duì)MEF的影響相關(guān)指標(biāo)

注:同列數(shù)據(jù)肩上標(biāo)有相同小寫字母表示差異不顯著(P>0.05)，標(biāo)有不同小寫字母表示差異顯著(0.01

Note:Values with same small letters in the same column mean no significant difference(P>0.05),with different small letters mean significant difference(0.01

表1表明，小鼠成纖維細(xì)胞線粒體總活性氧(ROS)在H2O2作用下急劇上升，極顯著高于陰性對(duì)照組和各藥物組(P<0.01)，各藥物組的ROS雖然高于正常細(xì)胞的SOR，但卻極顯著低于陽性對(duì)照組(P<0.01)；2-2～2-4的藥物組ROS無顯著性差異(P>0.05)，但其中2-3藥物組的ROS極顯著低于20和2-1(P<0.01)和極顯著低于2-4和2-5藥物組(P<0.01)。

2.3 TC0上濃度對(duì)MEF的影響

TC0上不同濃度綠蘿花對(duì)MEF線粒體MMP、ROS影響的統(tǒng)計(jì)結(jié)果見表2。

表2表明，小鼠成纖維細(xì)胞線粒體膜電位(MMP)在H2O2作用下急劇下降，極顯著低于陰性對(duì)照組(P<0.01)，3個(gè)高濃度藥物組的MMP雖無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，但隨著藥物濃度的加大，MMP呈下降趨勢(shì)(23濃度低于22，22濃度低于21的MMP)，且明顯低于陰性對(duì)照組(P<0.01)；雖然22和23濃度的MMP平均值高于陽性對(duì)照組，但與陽性對(duì)組比較無顯著性差異(P>0.05)，結(jié)合表1，TC0上3個(gè)不同濃度的線粒體MMP極顯著低于TC0下6個(gè)不同濃度的MMP。小鼠成纖維細(xì)胞線粒體活性氧(ROS)含量在H2O2作用下急劇上升，極顯著高于陰性對(duì)照組(P<0.01)，3個(gè)高濃度藥物組的ROS隨著藥物濃度的加大，ROS呈急劇上升趨勢(shì)：23濃度高于22(P<0.01)，22濃度高于21的ROS(P<0.01)，雖然明顯低于陽性對(duì)照組(P<0.01)，但有達(dá)到陽性對(duì)照組的趨勢(shì)，結(jié)合表1和圖2，TC0上3個(gè)不同濃度的線粒體ROS極顯著高于TC0下6個(gè)不同濃度的ROS。

2.4 不同作用時(shí)間對(duì)MEF的影響

不同作用時(shí)間下綠蘿花對(duì)MEF線粒體MMP、ROS影響的統(tǒng)計(jì)結(jié)果見表3。

表3表明，20TC0(1TC0)濃度作用0.5、1.0、1.5、2.0 h，小鼠成纖維細(xì)胞線粒體MMP有下降趨勢(shì)，但變化不大，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)(線粒體膜電位隨作用時(shí)間增長逐漸降低)；2-1TC0(1/2TC0)濃度作用0.5 h～2.0 h，小鼠成纖維細(xì)胞線粒體MMP有先呈下降后上升趨勢(shì)，但差異不顯著(P>0.05)；21TC0(2TC0)濃度作用0.5 h～2.0 h，小鼠成纖維細(xì)胞線粒體MMP有呈下降趨勢(shì)，且作用2 h的MMP明顯低于0.5 h的MMP(P<0.05)；3個(gè)濃度藥物分別作用0.5 h～2.0 h的4個(gè)檢測(cè)點(diǎn)，盡管小鼠成纖維細(xì)胞線粒體MMP無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，但2 TC0的MMP絕對(duì)平均值均低于1 TC0、1/2 TC0的MMP。試驗(yàn)結(jié)果表明，在最大無毒濃度之上，綠蘿花能引起小鼠成纖維細(xì)胞線粒體膜電位的下降并隨著作用時(shí)間的延長而呈下降趨勢(shì)。

表2 TC0上不同濃度綠蘿花對(duì)MEF的影響相關(guān)指標(biāo)

注:同列數(shù)據(jù)肩上標(biāo)有相同小寫字母表示差異不顯著(P>0.05)，標(biāo)有不同小寫字母表示差異顯著(0.01

Note:Values with same small letters in the same column mean no significant difference(P>0.05),with different small letters mean significant difference(0.01

表3 不同作用時(shí)間下綠蘿花對(duì)MEF線粒體膜電位的影響±SD,n=7)

注:同列、行數(shù)據(jù)肩上標(biāo)有相同小寫字母表示差異不顯著(P>0.05)，標(biāo)有不同小寫字母表示差異顯著(0.01

Note:Values with same small letters in the same column and row mean no significant difference(P>0.05),with different small letters mean significant difference(0.01

表4 不同作用時(shí)間下綠蘿花對(duì)MEF線粒體總活性氧含量的影響±SD,n=7)

注:同列、行數(shù)據(jù)肩上標(biāo)有相同小寫字母表示差異不顯著(P>0.05)，標(biāo)有不同小寫字母表示差異顯著(0.01

Note:Values with same small letters in the same column and row mean no significant difference(P>0.05),with different small letters mean significant difference(0.01

表4表明，2-1TC0(1/2TC0)濃度作用0.5 h～2.0 h的4個(gè)檢測(cè)點(diǎn)小鼠成纖維細(xì)胞線粒體總活性氧(ROS)含量變化不大，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；20TC0(1TC0)濃度作用0.5 h～2.0 h，ROS呈上升趨勢(shì)，作用1.5 h的ROS顯著高于作用0.5 h(P<0.05)，作用2.0 h的ROS顯著高于作用1.0 h(P<0.05)、極顯著高于0.5 h的ROS(P<0.01)；21TC0(2TC0)濃度作用1.0 h～2.0 h的ROS極顯著高于作用0.5 h的ROS，作用2.0 h，其ROS極顯著高于作用0.5 h～1.5 h的ROS(P<0.05)；3個(gè)濃度藥物分別作用0.5 h～2.0 h的4個(gè)檢測(cè)點(diǎn)，21TC0(2TC0)的ROS均極顯著高于20TC0(1TC0)的ROS(P<0.01)，20TC0(1TC0)的ROS均極顯著高于2-1TC0(1/2TC0)的ROS(P<0.01)。試驗(yàn)結(jié)果表明，在最大無毒濃度作用下，小鼠成纖維細(xì)胞線粒體總活性氧含量已急劇上升并隨著作用時(shí)間的延長而呈上升趨熱，超過最大無毒濃度，作用更加明顯。

3 討論

3.1 綠蘿花對(duì)小鼠胚胎成纖維細(xì)胞線粒體的影響

細(xì)胞凋亡是機(jī)體在多種調(diào)控因子相互作用下產(chǎn)生的一種可控性的細(xì)胞死亡。目前細(xì)胞凋亡通路研究資料表明[12]，線粒體跨膜電位其崩壞被定為細(xì)胞凋亡最早階段，膜電位劇變，細(xì)胞凋亡不可逆轉(zhuǎn)，因此MMP降低是細(xì)胞凋亡先期的一個(gè)重要指征，是藥物細(xì)胞毒性靈敏指標(biāo)[13-15]。線粒體是細(xì)胞內(nèi)ROS產(chǎn)生的主要細(xì)胞器，活性氧嚴(yán)重增加造成細(xì)胞廣泛性氧化損傷，如激活MPTP的開放、線粒體呼吸鏈斷裂、細(xì)胞色素C釋放等從而啟動(dòng)細(xì)胞凋亡程序，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡產(chǎn)生。

本研究在倒置相差顯微鏡下觀察小鼠胚胎成纖維細(xì)胞貼壁生長，以細(xì)胞體積大小均勻、細(xì)胞膜完整無發(fā)泡現(xiàn)象、貼壁細(xì)胞無皺縮變圓脫落等為判定指標(biāo)，獲得綠蘿花對(duì)細(xì)胞的最大無毒作用濃度(TC0)為25%。研究結(jié)果表明，20%的H2O2能引起小鼠成纖維細(xì)胞線粒體MMP急劇下降和ROS含量急劇上升從而誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的發(fā)生；綠蘿花干膏制劑濃度在20～2-5TC0時(shí)均能增強(qiáng)線粒體抵抗H2O2引起的膜電位下降和活性氧升高的作用從而阻止細(xì)胞凋亡進(jìn)程的發(fā)生，隨著綠蘿花濃度降低至2-3TC0，線粒體MMP逐步升高，ROS含量逐步下降，之后隨著綠蘿花濃度再次下降，線粒體MMP又逐步下降，ROS含量逐步升高，即綠蘿花濃度在3.13%～25%時(shí)，表現(xiàn)出一定的抗氧化能力，濃度為3.13%時(shí)，抗氧化能力最強(qiáng)，低于3.13%時(shí)則抗氧化能力下降并消失；綠蘿花干膏制劑濃度在21～23TC0時(shí)均能引起線粒體膜電位的下降和活性氧的升高，且隨著藥物濃度的增加其作用接近20%的H2O2引起的誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡發(fā)生作用，即在TC0上，隨著給藥濃度的升高，細(xì)胞凋亡現(xiàn)象的出現(xiàn)越趨明顯，濃度高于25%時(shí)，表現(xiàn)出一定的毒性作用，濃度升高，毒性作用增大；在TC0及之上濃度作用下，隨著作用時(shí)間延長，小鼠胚胎成纖維細(xì)胞線粒體膜電位下降，總活性氧含量上升，并隨著作用時(shí)間的延長，這種作用更加明顯(活性氧指標(biāo)變化優(yōu)于膜電位指標(biāo))，說明綠蘿花在最大無毒作用濃度之上對(duì)線粒體膜電位和活性氧含量的影響已表現(xiàn)出細(xì)胞毒性作用，值得注意的是，綠蘿花在最大無毒作用濃度(25%)下，雖未發(fā)現(xiàn)成纖維細(xì)胞變形、體積變小、細(xì)胞膜發(fā)泡狀態(tài)和凋亡小體的現(xiàn)象出現(xiàn)，但已出現(xiàn)膜電位下降和活性氧上升，已對(duì)細(xì)胞表現(xiàn)出一定的毒性作用。本研究結(jié)果表明，綠蘿花干膏制劑3.13%(以生藥含量計(jì)算)具有抵抗由H2O2引起的小鼠胚胎成纖維細(xì)胞線粒體膜電位下降和總活性氧的升高，表現(xiàn)出一定的抗氧化能力和阻滯細(xì)胞凋亡發(fā)生的作用，但隨著作用濃度的增加這種作用減弱或消失，膜電位下降，活性氧含量上升，在最大無毒作用(25%)及之上濃度更為明顯，表現(xiàn)出一定的細(xì)胞毒性作用并隨著作用的間的延長，其毒性作用增強(qiáng)。

3.2 關(guān)于中藥最大無毒作用濃度的討論

本研究的目的是探討綠蘿花在對(duì)細(xì)胞最大無毒作用濃度下作用于小鼠胚胎成纖維細(xì)胞線粒體的抗氧化作用和在最大無毒作用濃度之上對(duì)線粒體的毒性作用。研究結(jié)果表明，20% H2O2作用于成纖維細(xì)胞5 min可使線粒體膜電位急劇下降和總活性氧急劇上升，隨著綠蘿花濃度從25%下降至3.13%，線粒體抗氧化作用增強(qiáng)，3.13%的綠蘿花濃度作用細(xì)胞2 h，線粒體抗氧化作用最強(qiáng)，隨后減弱或消失；隨著綠蘿花濃度從25%上升到50%，線粒體膜電位下降，活性氧含量上升，表現(xiàn)為毒性作用，即使是在最大無毒作用劑量下，盡管膜電位指標(biāo)下降不明顯，但活性氧極顯著高于2-1TC0濃度的活性氧含量，說明中藥對(duì)細(xì)胞在最大無毒作用濃度下，成纖維細(xì)胞雖無表現(xiàn)的直接變化，但線粒體的功能已受影響，而線粒體在調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡過程中發(fā)揮著關(guān)鍵作用，其膜電位與總活性氧含量指標(biāo)變化是先于細(xì)胞凋亡的敏感指標(biāo)。隨著科學(xué)技術(shù)和認(rèn)識(shí)水平的提高，有關(guān)對(duì)中藥最大無毒作用及中藥對(duì)機(jī)體不良反應(yīng)、毒性反應(yīng)的認(rèn)識(shí)有待于進(jìn)一步提高。

[1] 李文茂. 藏藥材綠蘿花主要活性成分的提取與研究[D].青海師范大學(xué),2013

[2] 韓金潭,劉 群,王 賽,等.藏藥綠蘿花對(duì)正常小鼠糖耐量影響的試驗(yàn)研究[J].西南民族大學(xué)學(xué)報(bào):自然科學(xué)版,2014,40(4):518-522.

[3] 張曉英,張致英,王鵬翔,等.綠蘿花提取物對(duì)α-葡萄糖苷酶的抑制及降血糖作用[J].中藥藥理與臨床,2014,30(3):107-111.

[4] 羅小文,顧 健,張 娥,等.藏藥綠蘿花不同活性部位降血糖實(shí)驗(yàn)研究[J].中藥材,2012,35(4):612-614.

[5] 王 賽,劉 群,韓金潭,等.藏藥綠蘿花對(duì)高血糖小鼠模型的治療試驗(yàn)[J].動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展,2015,36(4):67-72.

[6] 楊 榮,劉 群,康蓮蓮,等.藏藥綠蘿花體外抑制腫瘤細(xì)胞生長的實(shí)驗(yàn)研究[J].中成藥,2015,37(9):2061-2065.

[7] 太志剛.四種花卉的化學(xué)成分及其抗氧化活性研究[D].云南昆明:云南大學(xué),2011.

[8] 竺 琴,張 焜,杜志云,等.西藏綠蘿花提取物對(duì)α-葡萄糖苷酶的抑制及抗氧化作用[J].中藥材,2009,32(1):89-92.

[9] 孫翠翠,康蓮蓮,王 賽,等.藏藥綠蘿花抗氧化作用實(shí)驗(yàn)研究[J].中獸醫(yī)醫(yī)藥雜志，2015(5):18-22.

[10] 韓金潭,劉 群,孫翠翠,等.不同劑量綠蘿花對(duì)組織器官抗氧化能力的影響[J].黑龍江畜牧獸醫(yī)，2015(11):24-28.

[11] 康蓮蓮,劉 群,王 賽,等.藏藥綠蘿花總化學(xué)成分水提工藝試驗(yàn)[J].中國獸醫(yī)雜志,2015,51(2):84-86.

[12] 張廣智,胡長敏,陳穎鈺,等.細(xì)胞凋亡的主要檢測(cè)方法研究進(jìn)展[J].動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展,2011,32(8):89-92.

[13] 劉 亮,左連富,王 靜.青蒿琥酯對(duì)食管癌Ec9706細(xì)胞線粒體膜電位及凋亡的影響[J].解放軍醫(yī)學(xué)雜志,2014,39(1):25-29.

[14] 黃小平,劉曉丹,鄧常清.黃芪和三七主要有效成分配伍對(duì)氧化損傷所致的PC12細(xì)胞凋亡及其活性氧、線粒體膜電位的影響[J].中西醫(yī)結(jié)合學(xué)報(bào),2012,10(10):1127-1134.

[15] 魏 燕,辛?xí)匝?活性氧調(diào)控的細(xì)胞凋亡信號(hào)[J].現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué),2011,19(2):371-373.

Effect of Water Extract of Tibetan MedicineScindapsusaureuson Mitochondrial Antioxidant Effect of Fibroblasts

HAN Jin-tan1,2,SUN Cui-cui1,DING Shu-mei1,GU Yuan-yin1,LIU Qun1

(CollegeofLifeScienceandTechnology,SouthwestUniversityforNationalities,ChengduSichuan610041,China)

In order to explore the effects of water extracts ofScindapsusaureasin different concentrations on the antioxidant and toxicological effects of mitochondria of mouse embryonic fibroblasts(MEF),three group concentrations of water extracts ofScindapsusaureaswerewere set up based on above maximam non-toxic concentration(TC0),and six group concentrations of water extracts ofScindapsusaureaswere set up based on undex TC0.The effects ofScindapsusaureason the mitochondria of MEF were studied based on the mitochondrial membrane potential(MMP) of MEF and mitochondrial total reactive oxygen species(ROS) at four different time points.The results showed the TC0of water extracts ofScindapsusaureasto MEF was 0.25 g/mL,but ROS rose sharply,MMP decreased.The maximum antioxidant capacity reached when the extract concentration is 0.03 g/mL,the antioxidant capacity decreased or disappeared along with the rising the extract concentrations,and cell apoptosis appeared.The cytotoxicity appeared when the concentration was higher than TC0,the higher the concentration,the more the toxicity.The preparation of 0.03 g/mL water extracts ofScindapsusaureascan prevent MMP of MEF from decline and ROS from rise induced by H2O2.This antioxidant capacity can block the cell apoptosis,but it may cause the cytotoxicity when the extract concentration is above TC0.

Scindapsusaureus; fibroblast; mitochondria; membrane potential; reactive oxygen species

2016-06-05

“十二五”國家科技支撐計(jì)劃項(xiàng)目(2011BAD34B02-4)；西南民族大學(xué)研究生創(chuàng)新型科研項(xiàng)目(CX2015SZ090)

韓金潭(1990-)，女，河北衡水人，碩士研究生，主要從事中藥藥理學(xué)研究。*通訊作者

S859.7

A

1007-5038(2017)02-0055-05